C反應蛋白測定試劑盒注冊技術臨床要求-臨床試驗

1、C 反應蛋白測定試劑盒注冊技術臨床要求（一）臨床評價資料1.研究方法選擇境內已批準上市、臨床普遍認為質量較好的同類產(chǎn)品作為參比試劑，采用擬申報產(chǎn)品（以下稱考核試劑）與之進行對比試驗研究， 證明本品與已上市產(chǎn)品等效或優(yōu)于已上市產(chǎn)品。建議企業(yè)盡量選擇方法學相同、 線性范圍及精密度等性能接近的同類試劑作為參比試劑。 同時應充分了解所選擇產(chǎn)品的技術信息，包括方法學、臨床預期用途、主要性能指標、校準品的溯源情況、推薦的陽性判斷值或參考區(qū)間等，以便對試驗結果進行科學的分析。且臨床試驗必須符合赫爾辛基宣言的倫理學準則， 必須獲得臨床試驗機構倫理委員會的同意。2.臨床研究單位的選擇申請人應當選定不少于 2 家

2、（含 2 家）獲得國家食品藥品監(jiān)督管理總局資質認可的臨床試驗機構， 按照有關規(guī)定開展臨床試驗。申請人應根據(jù)產(chǎn)品特點及其預期用途，綜合不同地區(qū)人種、流行病學背景、 病原微生物的特性等因素選擇臨床試驗機構。 臨床試驗機構必須具有與試驗用體外診斷試劑相適應的專業(yè)技術人員及儀器設備，并能夠確保該項試驗的實施。申請人應當在臨床試驗前制定文件明確各方的職責分工，與1各臨床試驗機構協(xié)商制定統(tǒng)一的臨床試驗方案， 按照臨床試驗方案組織制定標準操作規(guī)程， 并組織對參加試驗的所有研究者進行臨床試驗方案和試驗用體外診斷試劑使用的培訓，以確保臨床試驗方案和試驗用體外診斷試劑操作的一致性，并在臨床試驗過程中促進各研究者之

3、間的溝通。在臨床試驗開始前， 申請人應與臨床試驗工作人員進行臨床試驗的預試驗， 使其熟悉并掌握該產(chǎn)品所適用的儀器、操作方法、技術性能等，以最大限度地控制試驗誤差。在臨床試驗過程中，申請人應考慮吸收流行病學、統(tǒng)計學、臨床醫(yī)學、檢驗醫(yī)學等方面專業(yè)人員（或知識），以保證臨床試驗科學、合理地開展。臨床研究單位應有能力提供臨床評價所需的各類樣本，實驗操作人員有足夠的時間熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（儀器、 試劑、質控及操作程序等） ，熟悉評價方案。在整個實驗中，考核試劑和參比試劑都應處于有效的質量控制下，定期對儀器進行校準，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準確性及可重復性。不同的臨床單位應使用同一批考核試劑進行臨床試驗，

4、以便對數(shù)據(jù)進行科學客觀的統(tǒng)計分析。3.臨床試驗方案臨床試驗實施前，研究人員應從流行病學、統(tǒng)計學、 臨床醫(yī)學、檢驗醫(yī)學等多方面考慮，設計科學合理的臨床研究方案。各2臨床研究機構的方案設置應基本一致， 且保證在整個臨床試驗過程中遵循預定的方案實施， 不可隨意改動。 整個試驗過程應在臨床研究機構的實驗室內并由本實驗室的技術人員操作完成， 申報單位的技術人員除進行必要的技術指導外， 不得隨意干涉實驗進程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。試驗方案中應確定嚴格的病例納入/排除標準，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應記錄在案并明確說明原因。 在試驗操作過程中和判定試驗結果時應采用盲法及樣本隨機分配以保證試驗結果的

5、客觀性。對于新試劑的動態(tài)監(jiān)測研究，應在方案中明確前后兩次濃度變化有臨床意義的標準。 臨床試驗中所涉及的樣本類型應與產(chǎn)品說明書一致， 且每種樣本類型例數(shù)的選擇應符合基本的統(tǒng)計學要求。 各研究單位選用的參比試劑及所用機型應一致，以便進行合理的統(tǒng)計學分析。開展體外診斷試劑臨床試驗， 申請人應當按照試驗用體外診斷試劑的類別、風險、預期用途等特性，組織制定科學、合理的臨床試驗方案。一般應當包括以下內容：（ 1）一般信息（包括產(chǎn)品信息、臨床試驗開展的時間和人員等相關信息、申請人相關信息等） ；（ 2）臨床試驗的背景資料；（ 3）試驗目的；（ 4）試驗設計；（ 5）評價方法；3（ 6）統(tǒng)計方法；（ 7）對臨

6、床試驗方案修正的規(guī)定；（ 8）臨床試驗涉及的倫理問題和說明、 知情同意書 文本（如有）；（ 9）數(shù)據(jù)處理與記錄保存 ;（ 10）其他需要說明的內容。4.研究對象的選擇（ 1）臨床試驗樣本量的確定：申請人或臨床研究者應根據(jù)產(chǎn)品臨床使用目的， 與該改產(chǎn)品相關疾病的臨床發(fā)生率確定臨床研究的樣本量。 在符合指導原則有關最低樣本要求的前提下， 還應符合統(tǒng)計學要求。 臨床研究的總樣本數(shù)至少為200 例。 應考慮樣本量的分布。樣本量的選擇應符合統(tǒng)計學及相關指導原則的要求。 樣本濃度應覆蓋考核試劑檢測范圍，盡可能均勻分布。 盡可能使 40%樣本的測定值處于參考區(qū)間以外，但在測量范圍內。（ 2）變更事項相關的臨

7、床試驗 :涉及產(chǎn)品檢測條件優(yōu)化、增加與原樣本類型具有可比性的其他樣本類型等變更事項， 產(chǎn)品臨床試驗總樣本數(shù)至少為 100 例,并在至少 2 家 (含 2 家 )臨床試驗機構開展臨床試驗；變更抗原、 抗體等主要原材料的供應商、 陽性判斷值或參考區(qū)間的變化及增加臨床適應癥等變更事項， 應根據(jù)產(chǎn)品具體變更情況，酌情增加臨床試驗總樣本數(shù)。4（ 3）建議在臨床試驗中選擇部分含干擾物質的標本進行對比研究，包括高脂、溶血、黃疸的樣本、類風濕因子陽性樣本，易共存的其他急性炎癥時相因子同時升高的患者標本， 以從臨床角度驗證試劑的特異性。5.統(tǒng)計學分析對臨床試驗結果的統(tǒng)計應選擇合適的統(tǒng)計方法，如相關分析、線性回歸

8、、受試者工作特征（ROC）曲線分析等。對于對比實驗的等效性研究， 最常用是對考核試劑和參比試劑兩組檢測結果的相關及線性回歸分析，應重點觀察相關系數(shù)（r 值）或判定系數(shù)（ R2）、回歸擬合方程（斜率和y 軸截距）等指標。結合臨床試驗數(shù)據(jù)的正/偏態(tài)分布情況，建議統(tǒng)計學負責人選擇合理的統(tǒng)計學方法進行分析，統(tǒng)計分析應可以證明兩種方法的檢測結果無明顯統(tǒng)計學差異。在臨床研究方案中應明確統(tǒng)計檢驗假設，即評價考核試劑與參比試劑是否等效的標準。6.結果差異樣本的驗證對于比較研究試驗中測定結果不符的樣本，應采用 “金標準 ”或其他合理的方法進行復核，以便對臨床試驗結果進行分析。如無需復核，應詳細說明理由。7.臨床

9、試驗總結報告撰寫根據(jù)關于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則的通告（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014 年第 16 號）的要求，5臨床試驗報告應該對試驗的整體設計及各個關鍵點給予清晰、完整的闡述，應該對整個臨床試驗實施過程、結果分析、 結論等進行條理分明的描述，并應包括必要的基礎數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法。建議在臨床總結報告中對以下內容進行詳述。申請人或臨床試驗牽頭單位應對各臨床試驗機構的報告進行匯總，并完成臨床試驗總結報告。臨床試驗報告的格式及內容如下：7.1 首篇首篇是每份臨床試驗報告的第一部分，所有臨床試驗報告均應包含該部分內容。封面標題包括試驗用體外診斷試劑的通用名稱、 試驗開始日期、 試驗

10、完成日期、主要研究者（簽名） 、臨床試驗機構（蓋章） 、統(tǒng)計學負責人簽名及單位蓋章、申請人（蓋章） 、申請人的聯(lián)系人及聯(lián)系方式、報告日期、原始資料保存地點。目錄列出整個臨床試驗報告的內容目錄和對應頁碼。研究摘要對臨床試驗情況進行簡單的介紹。試驗研究人員列出臨床試驗主要研究人員的姓名、單位、在研究中的職責6及其簡歷（列于附件中），主要研究人員包括主要研究者及各單位的主要參加人員、統(tǒng)計學負責人、臨床試驗報告的撰寫人?？s略語臨床試驗報告中所用的縮略語的全稱。7.2 正文內容和報告格式基本內容引言。介紹與臨床試驗產(chǎn)品有關的背景情況：包括（1）被測物的來源、生物及理化性質； （ 2）臨床預期使用目的，所

11、針對的目標適應癥人群， 目前針對該適應癥所采用的臨床或實驗室診斷方法等；（ 3）所采用的方法、原理、技術要求等；（ 4）國內外已批準上市產(chǎn)品的應用現(xiàn)狀等。說明申請人和臨床試驗機構間的合作關系。研究目的。說明本臨床試驗所要達到的目的。試驗管理。對試驗管理結構的描述。管理結構包括主要研究者、主要參加人員、 實驗室質量控制情況、統(tǒng)計 /數(shù)據(jù)管理情況以及試驗中發(fā)生的問題及其處理措施等。試驗設計。7試驗總體設計及方案的描述。試驗的總體設計和方案的描述應清晰、簡潔，必要時采用圖表等直觀的方式。 試驗進行時方案修改的情況和任何方案以外的信息來源也應詳細敘述。應包括：（ 1）臨床試驗的整體管理情況、臨床研究單

12、位選擇、臨床主要研究人員簡介等基本情況介紹；（ 2）病例納入 /排除標準、不同年齡段人群的預期選擇例數(shù)及標準；（ 3）樣本類型，樣本的收集、處理及保存等；（ 4）統(tǒng)計學方法、統(tǒng)計軟件、評價統(tǒng)計結果的標準試驗設計及試驗方法選擇。試驗設計中應包括以下內容：（ 1）樣本量及樣本量確定的依據(jù)。（ 2）樣本選擇依據(jù)、入選標準、排除標準和剔除標準。（ 3）樣本采集、保存、運輸方法等。（ 4）對比試劑的確立。（ 5）臨床試驗用所有產(chǎn)品的名稱、規(guī)格、來源、批號、效期及保存條件， 對比試劑的注冊情況。 考核試劑和參比試劑的名稱、批號、有效期及所用機型等信息。（ 6）質量控制方法。對質量控制方法進行簡要的闡述。試

13、驗人員培訓、儀器日常維護、儀器校準、質控品運行情況，對檢8測精密度、質控品回收（或測量值）、抽查結果評估；（ 7）臨床試驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析方法。對各研究單位的病例數(shù)、病種分布情況進行總合， 建議以列表或圖示方式給出具體例數(shù)及百分比。 數(shù)據(jù)預處理、 差異數(shù)據(jù)的重新檢測或第三方驗證以及是否納入最終數(shù)據(jù)統(tǒng)計、 對異常值或缺失值的處理、 研究過程中是否涉及對方案的修改。 定量值相關性和一致性分析用回歸分析驗證兩種試劑結果的相關性，以y=a+bx 和 R2的形式給出回歸分析的擬合方程，其中：y是考核試劑結果， x是參比試劑結果，同時應給出 b 的顯統(tǒng)計學差異。b 是方程斜率， a 是 y 軸截距， R2

14、是判定系數(shù)，95%（或 99%）置信區(qū)間，定量值結果應無明（ 8）具體試驗過程，樣本檢測、數(shù)據(jù)收集、樣本長期保存、結果不一致樣本的校驗等。（ 9）試驗過程中方案的修改。一般情況下， 臨床試驗方案不宜更改。 試驗過程中對方案的任何修改均應說明， 對更改的時間、 理由、更改過程及有無備案進行詳細闡述并論證其對整個研究結果評價的影響。臨床試驗結果及分析。討論和結論。 對總體結果進行總結性描述并簡要分析9試驗結果， 對本次臨床研究有無特別說明，最后得出臨床試驗結論。有關臨床試驗中特別情況的說明附件臨床試驗中所采用的其他試驗方法或其他診斷試劑產(chǎn)品的基本信息，如試驗方法、 診斷試劑產(chǎn)品來源、 產(chǎn)品說明書及

15、注冊批準情況。臨床試驗中的所有試驗數(shù)據(jù)，需由臨床試驗操作者、復核者簽字，臨床試驗機構蓋章（封面蓋章和騎縫章）。主要參考文獻。主要研究者簡歷。申請人需要說明的其他情況等。（二）產(chǎn)品風險分析資料對體外診斷試劑產(chǎn)品壽命周期的各個環(huán)節(jié),從預期用途、可能的使用錯誤、 與安全性有關的特征、已知和可預見的危害等方面的判定以及對患者風險的估計進行風險分析、風險評價和相應的風險控制基礎上，形成風險管理報告。應當符合相關行業(yè)標準的要求。（三）產(chǎn)品技術要求擬定產(chǎn)品技術要求應符合體外診斷試劑注冊管理辦法、體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式、關于10發(fā)布醫(yī)療器械產(chǎn)品技術要求編寫指導原則的通告（國家食品藥品監(jiān)

16、督管理總局通告2014 年第 9 號）的相關規(guī)定。作為定量檢測試劑盒， C 反應蛋白產(chǎn)品的注冊檢測應主要包括以下性能指標：外觀檢查、物理檢查、準確度、線性范圍、分析靈敏度/檢出限（空白限）、精密度（批間、重復性） 、校準品溯源性、質控品測量準確度及均一性、生物安全性（如適用）等。如果擬申報試劑已有相應的專用國家/行業(yè)標準或相應方法學的通用標準要求發(fā)布，則企業(yè)標準的要求不得低于上述標準要求。1.產(chǎn)品性能指標詳述以下性能指標：注 1：由于 C 反應蛋白目前尚無國家參考品，故選用國際約定、行業(yè)參考品或企業(yè)內部參考品，以后國家參考品若建立，采用國家參考品。注 2：對線性范圍、分析靈敏度等的最低要求見表

17、1。1.1外觀應根據(jù)產(chǎn)品的包裝特點規(guī)定適當?shù)耐庥^要求。一般應有試劑盒各組份組成、性狀；內、外包裝、標簽清晰等的要求。試劑盒應組分齊全，內外包裝均應完整，標簽清晰；液體試劑無滲漏， 凍干組分呈疏松體，復溶后液體均勻（無肉眼可見顆粒、無沉淀）。1.2試劑空白吸光度適用時，生產(chǎn)企業(yè)應規(guī)定試劑空白吸光度，并符合相應要求。111.3分析靈敏度常規(guī) C反應蛋白定量檢測試劑盒、全量程 C反應蛋白定量檢測試劑盒，在生產(chǎn)企業(yè)規(guī)定波長（光徑1cm ），對應于濃度為 40mg/L 的 CRP所引起的吸光度差值（A ）的絕對值應在0.05 0.50的范圍內。超敏（高敏） C反應蛋白定量檢測試劑盒 ,在生產(chǎn)企業(yè)規(guī)定波長

18、（光徑 1 cm ），對應于濃度為 5mg/L 的CRP所引起的吸光度差值（ A ）的絕對值應在 0.050.50的范圍內。注：僅適用于免疫透射比濁法1.4檢出限生產(chǎn)企業(yè)應提供CRP試劑（盒）的檢出限，常規(guī)C反應蛋白定量檢測試劑盒檢出限不高于5mg/L ，超敏（高敏）C反應蛋白定量檢測試劑盒、全量程C反應蛋白定量檢測試劑盒檢出限不高于 0.5mg/L 。1.5準確度準確度應符合如下要求之一：相對偏差：用可用于評價常規(guī)方法的有證參考物質(CRM) 作為樣本進行檢測，其測量結果的相對偏差應不超過15%。企業(yè)參考品測試：對具有溯源性的企業(yè)參考品進行檢測，其測量結果的相對偏差應不超過10%。121.6

19、線性生產(chǎn)企業(yè)應規(guī)定CRP試劑（盒）的線性區(qū)間,線性區(qū)間內，線性相關系數(shù)|r|應不小于 0.990；超敏 C反應蛋白定量檢測試劑（盒）線性區(qū)間不窄于0.5 ，10 mg/L ；常規(guī) C反應蛋白定量檢測試劑（盒）線性區(qū)間不窄于5,80 mg/L ；全量程 C 反應蛋白定量檢測試劑盒線性區(qū)間不窄于0.5,80 mg/L 。應規(guī)定線性區(qū)間內的線性偏差，可根據(jù)實際情況，在線性區(qū)間的不同分段以相對偏差或絕對偏差表達。1.7重復性在線性區(qū)間范圍內， 選擇 2 3個不同濃度水平的樣本， 濃度選擇可參考醫(yī)學決定水平， 代表正常值和異常值水平。 各重復檢測 10次，其變異系數(shù) (CV) 應不大于 10%。1.8批

20、間差用三個批號試劑盒分別選擇2 3個不同濃度水平的樣本，則三個批號試劑盒之間的批間相對極差應不大于15%。1.9穩(wěn)定性可對效期穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性進行驗證。效期穩(wěn)定性13生產(chǎn)企業(yè)應規(guī)定試劑（盒）的有效期。取效期末的試劑盒檢測其試劑空白吸光度、分析靈敏度、檢出限、準確度、線性和重復性等符合相應指標的要求；熱穩(wěn)定性試驗（如適用）取有效期內的試劑盒在37放置一定時間， 檢測其試劑空白吸光度、分析靈敏度、檢出限、準確度、線性和重復性等，應符合相應指標的要求。注 1：熱穩(wěn)定性試驗不能用于推導產(chǎn)品有效期，除非是采用基于大量的穩(wěn)定性研究數(shù)據(jù)建立的推導公式；注 2：一般地，效期為 1年時選擇不超過 1個月的產(chǎn)品，

21、效期為半年時選擇不超過半個月的產(chǎn)品， 以此類推。 但如超過規(guī)定時間，產(chǎn)品符合要求時也可以接受；注 3：根據(jù)產(chǎn)品特性可選擇上述方法的任意組合，但所選用方法宜能驗證產(chǎn)品的穩(wěn)定性，以保證在效期內產(chǎn)品性能符合要求。1.10 質控品性能要求（如有）定值質控品測量準確度均一性1.11 生物安全性（如適用）2.檢驗方法檢驗方法的制定應與相應的性能指標相適應。應優(yōu)先考慮采14用公認的或已頒布的標準檢驗方法。檢驗方法的制定需保證具有可重現(xiàn)性和可操作性，需要時明確樣品的制備方法，必要時可附相應圖示進行說明，文本較大的可以附錄形式提供。對于體外診斷試劑類產(chǎn)品，檢驗方法中還應明確說明采用的參考品 /標準品、樣本制備方

22、法、使用的試劑批次和數(shù)量、試驗次數(shù)、計算方法。3.附錄應提供所用 CRP校準品的來源、 賦值過程的詳細溯源性報告以及測量不確定度等內容。（四）產(chǎn)品注冊檢驗報告根據(jù)體外診斷試劑注冊管理辦法 要求，首次申請注冊的第二類產(chǎn)品應該在具有相應醫(yī)療器械檢驗資質和承檢范圍的醫(yī)療器械檢測機構進行注冊檢測。 注冊檢驗時優(yōu)先使用有證參考物質，若無法獲取可以使用企業(yè)參考品。（五）產(chǎn)品說明書說明書承載了產(chǎn)品預期用途、標本采集及處理、實驗方法、檢測結果解釋以及注意事項等重要信息， 是指導實驗室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗結果給出合理醫(yī)學解釋的重要依據(jù)，因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。產(chǎn)品說

23、明書的格式應符合 關于發(fā)布體外診斷試劑說明書編寫指導原則的通告（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014 年第1517 號）的要求，境外試劑的中文說明書除格式要求外，其內容應盡量保持與原文說明書的一致性， 翻譯力求準確且符合中文表達習慣。產(chǎn)品說明書的所有內容均應與申請人提交的注冊申報資料中的相關研究結果保持一致， 如某些內容引用自參考文獻， 則應以規(guī)范格式對此內容進行標注，并單獨列明文獻的相關信息。結合體外診斷試劑說明書編寫指導原則的要求， 下面對C 反應蛋白定量檢測試劑盒說明書的重點內容進行詳細說明，以指導注冊申報人員更合理地完成說明書編制。1.【預期用途】C 反應蛋白定量檢測試劑盒用于體外定量

24、檢測血清、血漿、全血中的 C 反應蛋白濃度，適用的樣本類型應結合實際的臨床研究情況進行確認。第二段應闡述與該注冊產(chǎn)品預期用途相關的臨床適應癥及詳細背景資料。注： C 反應蛋白包括常規(guī) C 反應蛋白（ CRP）、超敏 CRP（ hsCRP），全程 C 反應蛋白，具體根據(jù)臨床試驗核定。2.【主要組成成分】（ 1）說明試劑包含主要組分及所用原材料的名稱、數(shù)量、比例或濃度等信息。（ 2）試劑中不包含但對該項檢測必須的組分，申請人應列出相關試劑 /耗材的名稱、貨號及其他相關信息。16（ 3）試劑盒中不包含質控品、校準品或其他耗材，應說明經(jīng)驗證后推薦配合使用的商品化質控品、 校準品或其他耗材的制造商、產(chǎn)品

25、名稱以及產(chǎn)品貨號等詳細信息；如包含校準品和/或質控品， 應說明其主要組成成分及其生物學來源，校準品應注明其定值及溯源性，質控品應有合適的檢測范圍。（ 4）應注明不同批號試劑盒中各組分可否互換。3.【儲存條件及有效期】試劑的效期穩(wěn)定性、開封穩(wěn)定性、 運輸穩(wěn)定性等信息作詳細介紹。并對開封后未使用產(chǎn)品允許暴露于空氣中的溫度、 濕度及效期等條件予以明確。注：保存條件不應有模糊表述，如 “室溫 ”，應明確貯存溫度，如 2 8 ，有效期 12 個月。穩(wěn)定期限應以月或日或小時為單位。4.【樣本要求】重點明確以下內容：（ 1）樣本采集：采集時間點是否受臨床癥狀、用藥及進食情況等因素的影響， 具體采集部位及類型

26、， 詳述具體的操作方法或列出相關操作指南文件以指導使用者（最好能夠給出具體圖示），盡量減少由于樣本采集或處理不當對實驗造成的影響。（ 2）樣本處理及保存：樣本的保存條件及期限（短期、長期）、運輸條件等。冷藏 /冷凍樣本檢測前是否須恢復室溫，凍融次數(shù)限制。17（ 3）樣本的最大可稀釋倍數(shù)。（ 4）樣本適用的抗凝劑類型及實驗反應溫度。5.【適用機型】所有適用的儀器型號，并提供與儀器有關的重要信息以指導用戶操作。6.【檢驗方法】詳細說明實驗操作的各個步驟，包括：（ 1）實驗條件：實驗環(huán)境的溫度、濕度等注意事項，檢驗試劑及樣本復溫、試劑孵育溫度及試劑空白等要求。（ 2）試劑使用方法（手工 /半自動 /全自動）、注意事項。（ 3）詳述待測樣品的預處理方法、步驟及注意事項。（ 4）明確樣本滿足臨床檢測需要的加樣量及觀察時間。（ 5）質量控制程序：質控品的使用、質量控制方法。（ 6）校準程序：校準品的準備和使用， 校準曲