分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)

1、1、分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)：是以核酸或蛋白質(zhì)為分析材料，通過分析基因的結(jié)構(gòu)、表達(dá)的變化和由此而導(dǎo)致的基因功能的改變，為疾病的研究和診斷提供更準(zhǔn)確、更科學(xué)的信息和依據(jù)的一門學(xué)科。2、請(qǐng)說明分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)在臨床試驗(yàn)診斷中的應(yīng)用。（1）感染性微生物的檢測(cè)。如：用PCR技術(shù)進(jìn)行甲型肝炎病毒的檢測(cè)、乙型肝炎病毒的檢測(cè)和解脲脲原體的檢測(cè)等。（2）基因突變的檢測(cè)。如：用PCR一限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（RFLP)技術(shù)檢測(cè)地中海貧血基因突變。（3）法醫(yī)學(xué)檢測(cè)。如：用PCR微衛(wèi)星檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行親子關(guān)系的鑒定和個(gè)體識(shí)別。（4）基因異常表達(dá)的檢測(cè)。如：用cDNA表達(dá)的芯片技術(shù)進(jìn)行基因異常表達(dá)的檢測(cè)。（5）基因定位。如：用

2、原位雜交技術(shù)進(jìn)行組織與細(xì)胞中基因表達(dá)的定位。3、基因組：是一個(gè)細(xì)胞或一種生物體的整套遺傳物質(zhì)。4、基因：是基因組中一個(gè)功能單位，是貯存有功能的蛋白質(zhì)多肽鏈信息或RNA序列信息及表達(dá)這些信息所必需的全部核苷酸序列。5、原核生物：是細(xì)菌、支原體、衣原體、立克次體、螺旋體、放線菌和藍(lán)綠藻等原始生物的總稱，是最簡(jiǎn)單的細(xì)胞生物體。6、操縱子結(jié)構(gòu)：是原核生物基因組的功能單位。7、質(zhì)粒：是指細(xì)菌細(xì)胞染色體外，能獨(dú)立復(fù)制并穩(wěn)定遺傳的共價(jià)閉合環(huán)狀分子。8、轉(zhuǎn)座因子：又稱為轉(zhuǎn)座元件，是一類在細(xì)菌染色體、質(zhì)粒和噬菌體之間自行移動(dòng)并具有轉(zhuǎn)位特性的獨(dú)立的DNA序列。9、原核生物基因組的結(jié)構(gòu)特征：（1）原核生物基因組通常

3、僅由一個(gè)DNA分子構(gòu)成，基因組中只有一個(gè)復(fù)制起點(diǎn)，具有類核結(jié)構(gòu)。（2）具有操縱子結(jié)構(gòu)，模板mRNA為多順反子mRNA。編碼區(qū)遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于真核生物基因組，但又遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于病毒基因組。在基因組中存在多功能的識(shí)別區(qū)域，如復(fù)制起始區(qū)、轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)區(qū)和終止區(qū)等，這些區(qū)域常常含有反向重復(fù)序列。（3）結(jié)構(gòu)基因通常為單拷貝基因，編碼順序一般不重疊。（4）具有編碼同工酶的基因。（5)含有可移動(dòng)的DNA序列。10、病毒基因組的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：（1）與細(xì)菌和真核生物基因組相比，病毒基因組結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，基因數(shù)少，所含信息量也少。（2）病毒基因組的核酸類型較多，有雙鏈DNA、單鏈DNA、雙鏈RNA和單鏈RNA；有環(huán)狀分子，也有線性分子。但無

4、論是哪種核酸類型，一種病毒顆粒中核酸成分只能為一種，或DNA，或RNA。（3）基因組中有基因重疊現(xiàn)象，這種結(jié)構(gòu)的意義在于使較小的基因組能攜帶較多的遺傳信息。（4）基因組中具有操縱子結(jié)構(gòu)。（5）病毒基因可連續(xù)也可間斷。（6）基因組中重復(fù)序列少。（7）基因組中非編碼區(qū)少。（8）病毒基因組是單倍體。（9）病毒基因組核酸序列中功能相關(guān)的蛋白質(zhì)基因往往叢集在基因組的一個(gè)或幾個(gè)特定部位，形成一個(gè)功能單位或轉(zhuǎn)錄單元。（10）病毒基因組含有不規(guī)則的結(jié)構(gòu)基因。11、真核生物基因組的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：（1)真核生物基本上不存在操縱子結(jié)構(gòu)，一個(gè)結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄生成一條mRNA，即mRNA是單順反子，許多蛋白是由相同或不同的亞基

5、構(gòu)成，因此涉及多個(gè)基因的協(xié)調(diào)表達(dá)。（2）基因組中非編碼的區(qū)域多于編碼區(qū)域，并且，編碼蛋白質(zhì)的基因一般是不連續(xù)的斷裂基因，即有外顯子和內(nèi)含子，在轉(zhuǎn)錄后經(jīng)剪切成成熟mRNA后，才能翻譯成蛋白質(zhì)。（3）基因組DNA有重度、中度和低度三種重復(fù)序列。（4）基因組DNA具有多基因家族與假基因。（5）基因組DNA結(jié)構(gòu)存在不同程度的差異，即基因多態(tài)性。（6）基因組DNA也有基因重疊現(xiàn)象。（7）真核細(xì)胞的染色體末端存在一種由DNA片段和蛋白質(zhì)組成的獨(dú)特結(jié)構(gòu)，即端粒。它能維持染色體的穩(wěn)定性。12、乙型肝炎病毒（HBV）基因組的結(jié)構(gòu)：HBV基因組的長(zhǎng)度為3.2kb，是帶有部分單鏈區(qū)的環(huán)狀雙鏈DNA分子，是目前已知感

6、染人類最小的DNA病毒。HBV的兩條鏈長(zhǎng)度不等，長(zhǎng)的鏈為負(fù)鏈，用“L（-）”表示，其長(zhǎng)度是固定的，攜帶有病毒全部的編碼信息；短的為正鏈，用“S(+)”表示，正鏈在不同的分子中長(zhǎng)度不等，一般長(zhǎng)約1.6-2.8kb,大約是負(fù)鏈的50%-100%，并且短鏈的5端位置是固定的，而3端的位置是可變的。在負(fù)鏈的5端有一低分子量的蛋白質(zhì)，在正鏈的末端則有一段短RNA，它們是引導(dǎo)DNA合成的引物。兩條鏈的5端有約250-300bp可互補(bǔ)結(jié)合，所以也稱為黏性末端，這種互補(bǔ)結(jié)合是DNA保持雙鏈環(huán)狀的基礎(chǔ)。此外，這部分核苷酸序列也是HBV最常整合到肝細(xì)胞染色體DNA中得序列。在黏性末端的兩側(cè)還各有11個(gè)核苷酸構(gòu)成的

7、順向重復(fù)序列，分別稱為DR1和DR2，DR1在負(fù)鏈5端，DR2在正鏈5端，中間相隔223個(gè)核苷酸。DR區(qū)域是DNA成環(huán)及病毒復(fù)制的關(guān)鍵區(qū)域。HBV基因組已經(jīng)確定在負(fù)鏈DNA核苷酸序列為模板轉(zhuǎn)錄的RNA上含有4個(gè)公認(rèn)的開放閱讀框，分別成為S、C、P、X區(qū)。13、丙型肝炎病毒基因組（HCV)的結(jié)構(gòu)：呈球形顆粒，直徑約50nm，有一脂質(zhì)包膜?；蚪M為單鏈正鏈RNA病毒，鏈長(zhǎng)約9.5kb,整個(gè)基因組只有一個(gè)ORF，編碼3011或3010個(gè)氨基酸。5端和3端分別有短的非編碼區(qū)（UTR) 。5端UTR由324-341個(gè)核苷酸組成，可能在病毒的復(fù)制和翻譯過程中起重要的調(diào)節(jié)作用。5端UTR的核苷酸序列保守性強(qiáng)

8、，可用于基因檢測(cè)診斷。3端UTR由27-55個(gè)核苷酸組成，其長(zhǎng)度取決于病毒的來源，由病毒固有順序與各種長(zhǎng)度的“多U序列”組成，是HCV的獨(dú)特結(jié)構(gòu)。HCV基因產(chǎn)物均來自一個(gè)大的多蛋白前體，經(jīng)宿主與病毒編碼的蛋白酶的聯(lián)合作用，在翻譯中或翻譯后被加工成為結(jié)構(gòu)蛋白及非結(jié)構(gòu)蛋白。結(jié)構(gòu)蛋白包括兩種：核心蛋白和包膜糖蛋白。非結(jié)構(gòu)蛋白包括四種：NS2、NS3、NS4、NS5。14、人類免疫缺陷病毒基因組（HIV）的結(jié)構(gòu)：（主要有兩型：HIV-1和HIV-2。兩型病毒的核苷酸序列差異超過40%，世界范圍的AIDS大多由HIV-1所致，HIV-2只在西非呈地區(qū)性流行。）HIV基因組由2條相同的正鏈RNA在5端通過

9、氫鍵互相連接在一起形成二聚體，其單鏈RNA含有9749個(gè)核苷酸。HIV基因組共有9個(gè)基因，其中3個(gè)是結(jié)構(gòu)基因，6個(gè)是調(diào)控基因。在病毒基因組的5端和3端各有相同的一段核苷酸序列，稱為長(zhǎng)末端重復(fù)序列（LTR)。LTR中含有啟動(dòng)子、增強(qiáng)TATA序列等，它們對(duì)病毒基因組轉(zhuǎn)錄的調(diào)控起關(guān)鍵作用。15、質(zhì)粒的一般性質(zhì)：質(zhì)粒作為一個(gè)完整的復(fù)制子，在轉(zhuǎn)化菌細(xì)胞后能自主復(fù)制，并對(duì)細(xì)菌的一些代謝活動(dòng)和抗藥性表現(xiàn)具有一定的作用。在質(zhì)粒只有在宿主細(xì)胞內(nèi)才能完成自我復(fù)制，一旦離開宿主細(xì)胞就無法復(fù)制和擴(kuò)增，相反，宿主細(xì)胞失去了質(zhì)粒依舊能存活。質(zhì)粒也是一種游離基因，既可整合到細(xì)菌染色體中，又可在游離出來。質(zhì)粒具有不相容性。1

10、6、基因結(jié)構(gòu)異常：廣義上是指染色體畸變和基因突變，狹義上一般是指基因突變。17、基因結(jié)構(gòu)異常的類型：通常分為單基因病和多基因病。單基因病包括：三聯(lián)體重復(fù)、血紅蛋白病、苯丙酮尿癥和遺傳性原發(fā)痛風(fēng)。多基因病包括：原發(fā)性高血壓、糖尿病和實(shí)體瘤。18、端粒：真核細(xì)胞染色體末端存在著一種由DNA片段和蛋白質(zhì)組成的獨(dú)特結(jié)構(gòu)，即為端粒。它對(duì)維持染色體的穩(wěn)定性具有重要作用。19、端粒的主要作用：（1）維持染色體的穩(wěn)定性，防止染色體重組及末端被降解。（2）保證細(xì)胞在有絲分裂時(shí)染色體準(zhǔn)確的分離，在減數(shù)分裂是保證染色體的成對(duì)及運(yùn)動(dòng)。（3）端粒在細(xì)胞生長(zhǎng)中有很大的作用，其與腫瘤和衰老有關(guān)。20、人類基因組：包括細(xì)胞核

11、內(nèi)的核基因組和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的線粒體基因組。核基因組由3.16×10bp組成，線粒體基因組由16569bp組成。21、核酸：是以核苷酸為基本組成單位的生物信息大分子。（天然存在的核酸有兩類，即DNA和RNA。）22、核酸分離純化應(yīng)遵循的原則：一是保證核酸一級(jí)結(jié)構(gòu)的完整性，因?yàn)橥暾囊患?jí)結(jié)構(gòu)是核酸結(jié)構(gòu)和功能研究的基本要求；二是盡量排除其他分子的污染，保證核酸樣品的純度。23、簡(jiǎn)述核酸分離純化技術(shù)路線的設(shè)計(jì)：（1）核酸的釋放：細(xì)胞破碎方法中機(jī)械剪切法不能用于基因組DNA的提??；非機(jī)械法常用化學(xué)試劑或酶細(xì)胞溶解法。（2）核酸的分離與純化：除去蛋白質(zhì)、多糖、脂類等大分子物質(zhì)；除去非目的核酸組分；除

12、去實(shí)驗(yàn)溶液和試劑。（3）核酸的濃縮、沉淀于洗滌：濃縮：提高樣品濃度；沉淀：常用的濃縮方法，如醋酸鈉、醋酸銨等；洗滌：除去共沉淀的鹽，常用70%-75%的乙醇。24、簡(jiǎn)述酚抽提法分離純化基因組DNA的方法，并繪制出流程示意圖：（1）將分散好的真核生物組織、細(xì)胞在含EDTA、SDS及無DNA酶裂解緩沖溶液裂解細(xì)胞，破壞細(xì)胞膜、核膜，EDTA能抑制細(xì)胞中DNA酶的活性，使DNA分子完整地以可溶形式存在于溶液中。SDS主要引起細(xì)胞膜的降解并能乳化脂質(zhì)和蛋白質(zhì)，并使它們沉淀，同時(shí)還有降解DNA酶的作用。再經(jīng)蛋白酶K處理后，用PH8.0的Tris飽和酚抽提DNA，重復(fù)抽提至一定純度后，得到的DNA溶液經(jīng)乙

13、醇沉淀進(jìn)一步純化，此法可獲得100-200kb的DNA片段。（2）書本82頁25、簡(jiǎn)述低熔點(diǎn)瓊脂糖凝膠挖塊回收法如何回收基因組DNA，有何優(yōu)點(diǎn)：本方法是從低熔點(diǎn)瓊脂糖凝膠中切出含待回收的DNA凝膠塊，利用其純度高、熔點(diǎn)低及凝固溫度低的特點(diǎn)，對(duì)DNA片段回收的方法。該法對(duì)高分子量的DNA特別有用，也能有效的分離小分子量的DNA片段。26、質(zhì)粒DNA純化的主要方法與原理：（1）cscl-EB法：是一種沉降平衡離心法。經(jīng)超速離心，離心介質(zhì)cscl形成一連續(xù)的密度梯度，在過量EB存在的條件下，各種不同密度的物質(zhì)經(jīng)離心平衡后得以分開。該法主要用于純化容易出現(xiàn)切口的極大質(zhì)粒DNA和具有某些特殊用途的閉環(huán)質(zhì)

14、粒DNA。（2）聚乙二醇沉淀法：是一種分級(jí)沉淀法。質(zhì)粒DNA的粗制品首先用LiCl沉淀大分子RNA，并用RNase消化小分子RNA，然后在高鹽條件下，用PEG選擇性地沉淀大的質(zhì)粒DNA，沉淀的質(zhì)粒DNA進(jìn)一步用酚/氯仿抽提和乙醇沉淀。PEG沉淀法簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)、試用廣泛，尤其對(duì)堿裂解法提取的質(zhì)粒純化效果好，適用于分子克隆中所有常規(guī)的酶學(xué)反應(yīng)，也能用于高效的哺乳動(dòng)物細(xì)胞學(xué)的轉(zhuǎn)染。但不能有效分離帶切口的環(huán)狀質(zhì)粒DNA與閉環(huán)質(zhì)粒DNA。（3）柱層析法：柱層析法純化質(zhì)粒DNA的關(guān)鍵是用于填充層析柱的樹脂。樹脂可分兩類：一類是利用疏水的相互作用純化質(zhì)粒DNA樣品；另一類是通過離子交換與吸附的相互作用進(jìn)行純化

15、。以硅基質(zhì)作為填充材料的柱層析作用原理是：在多鹽條件下，依靠DNA與硅基質(zhì)的可逆性結(jié)合進(jìn)行純化。多鹽造成磷酸二酯骨架的脫水，通過暴露的磷酸鹽殘基，是DNA吸附到硅基質(zhì)上。以50%的乙醇溶液洗去RNA和糖類等生物大分子后，加入TE緩沖液或水溶液使DNA分子重新水合，并通過離心洗脫出來。DNA與硅基質(zhì)的吸附作用與DNA的堿基組成和拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)無關(guān)，因此可用于環(huán)形質(zhì)粒DNA和線性DNA的純化。由于100-200bp的DNA分子與硅基質(zhì)的吸附力很弱，因此柱層析不能用于小分子DNA片段的純化。27、簡(jiǎn)述RNA提取的關(guān)鍵步驟：91頁28、DNA重組：不同來源的DNA通過磷酸二酯鍵連接而重新組合成新的DNA分子

16、的過程，稱為DNA重組。29、DNA重組技術(shù)（分子克隆或基因工程）：用人工手段對(duì)DNA進(jìn)行改造和重新組合的技術(shù)。包括對(duì)DNA分子的精細(xì)切割、部分序列的去除、新序列的加入和連接、DNA分子擴(kuò)增、轉(zhuǎn)入細(xì)胞的復(fù)制繁殖、篩選、克隆、鑒定和序列測(cè)定等等，是基因工程技術(shù)的核心。 30、克?。簛碜酝皇甲娴南嗤北净蚩截惖募?。31、DNA克?。菏侵笐?yīng)用DNA重組技術(shù)，在體外對(duì)DNA進(jìn)行重組，構(gòu)建成具有自主復(fù)制能力的重組DNA分子，再導(dǎo)入宿主細(xì)胞，然后從單個(gè)細(xì)胞開始大量擴(kuò)增，最終獲得大量同一的DNA分子。32、限制性內(nèi)切酶：是存在于細(xì)菌體內(nèi)，能識(shí)別和水解雙鏈DNA分子內(nèi)特定序列的核苷酸水解酶類。33、DNA

17、連接酶：催化雙鏈DNA或RNA中并列的5-磷酸和3-羥基之間形成磷酸二酯鍵的酶。34、載體：時(shí)攜帶靶DNA（目的DNA）片段進(jìn)入宿主細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增和表達(dá)的運(yùn)載工具。35、作為載體應(yīng)具備的條件：在宿主細(xì)胞中具有自主復(fù)制能力或能整合到宿主染色體上與染色體基因組一同復(fù)制的能力；有合適的限制性酶切位點(diǎn)供外源DNA片段插入；分子量不宜過大，以便于容納較大的外源DNA片段并獲得較高的拷貝數(shù)，也有利于體外重組操作；具有合適的篩選標(biāo)記，以便于區(qū)分陽性重組體和陰性重組體，常用的篩選標(biāo)記有抗藥性、酶基因、營(yíng)養(yǎng)缺陷型或形成噬菌斑的能力等；配備與宿主相適應(yīng)的調(diào)控元件，如啟動(dòng)子、增強(qiáng)子和前導(dǎo)序列等。36、用作克隆載體的理

18、想質(zhì)粒應(yīng)具備的特點(diǎn)：具有松弛復(fù)制子，復(fù)制子是質(zhì)粒自我增殖所必不可少的基本條件，并可協(xié)助維持使每個(gè)細(xì)胞含有一定數(shù)量的質(zhì)?？截?；在復(fù)制子外存在數(shù)個(gè)單一的酶切位點(diǎn)，以便目的DNA片段插入；具有插入失活的篩選標(biāo)志，理想的質(zhì)粒載體應(yīng)具有兩種抗生素抗性標(biāo)志；分子量相對(duì)較小和較高的拷貝數(shù)。*37、重組DNA的步驟：獲得目的基因；與克隆載體連接，形成新的重組DNA分子；用重組DNA分子轉(zhuǎn)化或感染宿主細(xì)胞，并能在宿主細(xì)胞中復(fù)制和遺傳；對(duì)重組子的篩選和鑒定；DNA序列測(cè)定。38、原核生物表達(dá)體系對(duì)外源目的基因的要求：要求真核生物的目的基因不應(yīng)具有5端非編碼區(qū)以及內(nèi)含子結(jié)構(gòu)。39、原核生物表達(dá)載體的特點(diǎn)：含大腸桿菌

19、適宜的選擇標(biāo)志；具有能調(diào)控轉(zhuǎn)錄、生產(chǎn)大量mRNA的啟動(dòng)子；含適當(dāng)?shù)姆g調(diào)控序列；含合理設(shè)計(jì)的多接頭克隆位點(diǎn)，以確保目的基因按一定的方向與載體正確連接。40、真核生物基因在原核細(xì)胞中的表達(dá)類型：包括融合型表達(dá)蛋白、非融合型表達(dá)蛋白和分泌型表達(dá)蛋白。41、酵母重組表達(dá)蛋白的分離與純化：包括酵母細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的蛋白和分泌型蛋白的分離與與純化。（1）酵母細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的重組蛋白的分離與純化：這種蛋白質(zhì)的分離與純化過程比較簡(jiǎn)單，以-蛋白酶抑制劑的純化為例：收集酵母細(xì)胞玻璃珠破碎離心取上清液DEAE Sepharose柱層析梯度洗脫收集活性部分濃縮葡聚糖凝膠G75柱層析收集、濃縮SDS-PAGE純度鑒定。（2）酵

20、母表達(dá)分泌型重組蛋白的分離與純化：以酵母表達(dá)干擾素純化為例：發(fā)酵液用0.45um孔徑濾膜過濾濃縮DEAE-Trisacryl柱層析梯度洗脫收集干擾素部分SephadexG75柱層析洗脫收集干擾素稀釋層析聚焦緩沖液洗脫電泳鑒定。42、RNAi（小干擾RNA）的作用機(jī)制與設(shè)計(jì)原則：（1）作用機(jī)制：起始階段：外源的DsRNA通過導(dǎo)入或者轉(zhuǎn)基因、病毒感染、轉(zhuǎn)座子活化及特異重復(fù)序列或其他未知方式進(jìn)入細(xì)胞，被Dicer酶識(shí)別并將dsRNA切割成21-23個(gè)核苷酸的由正反義鏈組成的小分子干擾RNA（siRNA)；效應(yīng)階段：siRNAs的雙鏈結(jié)構(gòu)需被解螺旋后組裝到RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合物中，該復(fù)合物中解旋酶活性

21、將siRNA雙鏈解開，并定位到siRNA的反義鏈互補(bǔ)的靶mRNA轉(zhuǎn)錄本上，在距離siRNA312個(gè)堿基的位置切割mRNA；倍增階段：僅需少量siRNA即可引起強(qiáng)烈的同源基因表達(dá)抑制。（2）設(shè)計(jì)原則：siRNA中G+C堿基含量：一般為30%-70%，50%時(shí)siRNA產(chǎn)生的沉默效應(yīng)較高，但過高的G+C堿基含量會(huì)降低沉默活性；siRNA的作用位點(diǎn)：一般選擇2-4個(gè)不同序列針對(duì)目的DNA，3端非編碼區(qū)域可以作為目的序列，避免選擇起始密碼下游500-100個(gè)堿基處、終止密碼上游100堿基處及5端非編碼區(qū)域，因?yàn)榇藚^(qū)域中含有阻止靶向識(shí)別的蛋白質(zhì)結(jié)合位點(diǎn)； siRNA序列：避免連續(xù)四個(gè)以上腺嘌呤及3個(gè)鳥嘌

22、呤或胞嘧啶核苷酸的序列；siRNA堿基數(shù)：選擇以A或G開始的21-23堿基大小的目的mRNA；環(huán)堿基數(shù)：一般為9個(gè)堿基，其序列為TTCAAGAGA；對(duì)照系統(tǒng)：將以設(shè)計(jì)的siRNA堿基序列隨機(jī)排列，以保證與其他基因無同源性，才可作為實(shí)驗(yàn)的對(duì)照系統(tǒng)。43、核酸分子技術(shù)雜交：?jiǎn)捂湹暮怂岱肿釉诤线m的條件下，與具有堿基互補(bǔ)序列的異源核酸形成雙鏈雜交體的過程稱作核酸分子雜交。44、探針：是用放射性核素或非放射性物質(zhì)標(biāo)記的一段單鏈或雙鏈核苷酸，可依堿基配對(duì)規(guī)律與具有互補(bǔ)序列的待測(cè)核酸進(jìn)行雜交，以探測(cè)它們的同源程度。45、變性：在一定條件下，雙螺旋之間氫鍵斷裂，雙螺旋解開，DNA分子成為單鏈，形成無規(guī)則線團(tuán)，

23、這一過程稱作變性。46、融解溫度：DNA的變性會(huì)在一個(gè)狹窄的溫度范圍內(nèi)發(fā)生，這一溫度范圍的中點(diǎn)被稱為溶解溫度。47、復(fù)性：變性DNA只要消除變性條件，具有堿基互補(bǔ)區(qū)域的單鏈又可以重新結(jié)合形成雙鏈，這一過程稱之為復(fù)性。48、雜交：將一種核酸單鏈標(biāo)記成為探針，再與另一種核酸單鏈進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)，可以形成異源核酸分子的雙鏈結(jié)構(gòu)，這一過程稱作雜交。49、核酸分子雜交原理：互補(bǔ)的DNA單鏈能夠在一定條件下結(jié)合成雙鏈，即能夠進(jìn)行雜交。這種結(jié)合是特異的，即嚴(yán)格按照堿基互補(bǔ)的原則進(jìn)行，它不僅能在DNA和DNA之間進(jìn)行，也能在DNA和RNA之間進(jìn)行。因此，當(dāng)用一段已知基因的核酸序列作出探針，與變性后的單鏈基因組

24、DNA接觸時(shí)，如果兩者的堿基完全配對(duì)，它們即互補(bǔ)地結(jié)合成雙鏈，從而表明被測(cè)基因組DNA中含有已知的基因序列。50、雜交核酸分子的種類：液相雜交、固相雜交、原位雜交和基因芯片技術(shù)。51、原位雜交：是應(yīng)用核酸探針與組織或細(xì)胞中的核酸按堿基互補(bǔ)配對(duì)原則進(jìn)行特異性結(jié)合形成雜交體，然后應(yīng)用組織化學(xué)或免疫組織化學(xué)法在顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)定位的檢測(cè)技術(shù)。52、試述Southern印記雜交的基本操作步驟：149頁53、簡(jiǎn)述核酸分子雜交過程：包括核酸分子與固相介質(zhì)的結(jié)合、雜交和雜交后信號(hào)的檢測(cè)3個(gè)過程。而雜交又可分為預(yù)雜交、雜交和洗脫三個(gè)步驟。54、聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）： 一種在體外特異性地復(fù)制已知序列的DNA片段的重要技術(shù)。55、PCR反應(yīng)原理及反應(yīng)過程：（1）原理：PCR技術(shù)的基