在乳腺癌種的應(yīng)用資料

1、【概念及原理】   熒光原位雜交技術(shù)是一門(mén)新興的分子細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)，其原理是采用熒光標(biāo)記的DNA探針，利用探針與被檢測(cè)樣本中DNA堿基對(duì)的互補(bǔ)性，在探針與樣本的DNA雜交后，通過(guò)熒光顯微鏡檢測(cè)熒光信號(hào)而得出結(jié)果，從而檢測(cè)細(xì)胞、組織樣本中的染色體或基因異常。 【原理圖】 【技術(shù)特點(diǎn)】 1.操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)快速、結(jié)果易于觀察  2.重復(fù)性好、空間定位精準(zhǔn)  3.靈敏度和特異性高乳腺癌Her-2基因檢測(cè)相關(guān)資料介紹預(yù)覽         

2、;       HER-2基因擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒1. 乳腺癌的流行病學(xué)：乳癌是女性常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，歐美為高發(fā)地區(qū)，流調(diào)學(xué)顯示歐美的發(fā)病率在6080/10萬(wàn)左右，位列女性惡性腫瘤發(fā)生的第一位，且發(fā)病率在逐年上升。而乳癌的死亡率大約占女性惡性腫瘤死亡的15左右，僅次于肺癌（25）。我國(guó)的乳癌發(fā)病率在20/10萬(wàn)左右，在女性惡性腫瘤中位列第三位，而且發(fā)病率也成逐年上升的趨勢(shì)。在一些大城市如上海，1999年的調(diào)查顯示，乳癌的發(fā)病率已經(jīng)達(dá)到52.9/10萬(wàn)。因此，乳癌是威脅女性健康的重要惡性疾病 12 。2. Her-2與乳腺癌：在最近的20年

3、中，乳癌的治療療效發(fā)生了根本性的變化。一些研究顯示，盡管乳癌的發(fā)生率仍在上升，但在一些地區(qū)已經(jīng)可以觀察到乳癌患者的死亡率在逐年下降3。這與新的治療理念如劑量強(qiáng)度和劑量密度以及新的治療藥物如紫杉在臨床上的應(yīng)用是密切相關(guān)的。這都使得患者的遠(yuǎn)期生存較以前得到了明顯的改善4。不僅如此，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，人們認(rèn)識(shí)到一些信號(hào)傳導(dǎo)通路在乳癌的發(fā)生發(fā)展以及對(duì)治療療效的影響中也起著重要的作用。這其中最主要的就是EGFR家族。EGFR是表達(dá)在上皮來(lái)源組織細(xì)胞表面的一種受體，家族中共有4位成員，分別位Her1、Her2、Her3和Her4，屬于酪氨酸激酶受體家族?；A(chǔ)研究顯示，這些受體通過(guò)同源二聚或異源二聚的方

4、式發(fā)生偶聯(lián)，使受體胞內(nèi)部分的酪氨酸激酶激活，導(dǎo)致下游的蛋白發(fā)生磷酸化，從而發(fā)揮調(diào)控細(xì)胞增殖以及血管生成等作用。而在部分乳癌患者中，上述蛋白表達(dá)是明顯增加。其結(jié)果就使得該信號(hào)傳導(dǎo)通路被明顯激活，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。 3. 檢測(cè)HER-2的臨床意義：3.1 HER-2擴(kuò)增的患者預(yù)后更差：Her2基因的過(guò)表達(dá)除了與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)外，還是一個(gè)重要的臨床預(yù)后指標(biāo)5。有研究顯示，具有Her2基因過(guò)表達(dá)的患者OS和DFS較短，而且這部分患者就診時(shí)的腫瘤負(fù)荷更大，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的幾率更高，激素受體陰性的比例更高，組織學(xué)分級(jí)更差，腫瘤的增殖指數(shù)更高，復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)更高6。3.2正確判斷Her-2狀態(tài)可以

5、輔助臨床選擇更適合病人的內(nèi)分泌治療藥物，以及選擇療效最佳的輔助化療藥物，做到合理用藥：研究顯示，相對(duì)于無(wú)Her-2基因擴(kuò)增的乳癌患者而言，具有Her-2基因擴(kuò)增的患者應(yīng)用受他莫昔芬(TAM)治療后的死亡風(fēng)險(xiǎn)明顯增高。提示具有Her-2基因擴(kuò)增的患者可能不適合應(yīng)用TAM作為內(nèi)分泌治療的選擇10。對(duì)ER陽(yáng)性的絕經(jīng)后患者, HER-2陽(yáng)性者,來(lái)曲唑的療效明顯高于TAM。來(lái)曲唑?qū)ER-2陽(yáng)性患者的療效優(yōu)于陰性患者; TAM則相反,對(duì)HER-2陰性患者的療效明顯高于陽(yáng)性患者10。HER-2 /neu擴(kuò)增的乳腺癌患者對(duì)CMF化療方案的反應(yīng)性降低；對(duì)HER-2/neu擴(kuò)增的患者,宜采用高劑量強(qiáng)度的蒽環(huán)類(lèi)藥

6、物方案；HER-2陽(yáng)性的乳腺癌患者對(duì)紫杉醇化療的反應(yīng)性明顯高出HER-2陰性的患者7。3.3  Her-2擴(kuò)增的患者能明顯受益于靶向治療藥物Hercepetin：2002年美國(guó)FDA批準(zhǔn)了一種全新的藥物Herceptin。到目前為止，已經(jīng)有多篇關(guān)于該藥物臨床應(yīng)用的期隨機(jī)對(duì)照研究。結(jié)果表明，無(wú)論是與常規(guī)化療聯(lián)合用于乳癌患者的輔助治療，還是用于輔助治療后的維持治療，以及用于晚期乳癌患者的單藥或聯(lián)合治療，都能肯定的改善Her-2過(guò)表達(dá)患者的生存，使乳癌患者在上述常規(guī)治療進(jìn)步的基礎(chǔ)上進(jìn)一步獲益89。在該藥物的臨床應(yīng)用過(guò)程中，對(duì)Her-2基因的檢測(cè)是至關(guān)重要的。因?yàn)樵撍幬飳?duì)那些具有基因擴(kuò)增的患

7、者具有良好的治療效果，而對(duì)于低度擴(kuò)增或者是不擴(kuò)增的患者療效不理想。3.4  FISH技術(shù)檢測(cè)Her-2狀態(tài)結(jié)果客觀準(zhǔn)確，為檢測(cè)Her-2狀態(tài)的金標(biāo)準(zhǔn)：17號(hào)染色體非整體性即每個(gè)細(xì)胞中17號(hào)染色體數(shù)多于(多體性)或少于(單體性或亞二性)2個(gè)，是乳腺癌的遺傳學(xué)特征之一 。而這種非整體形會(huì)造成一部分的病人免疫組化檢測(cè)（IHC）的假陽(yáng)性結(jié)果，這樣的病人在使用Herceptin時(shí)效果并不理想。FISH檢測(cè)技術(shù)加入了17號(hào)染色體著絲粒探針作為對(duì)照探針，因此能明確檢測(cè)出患者腫瘤細(xì)胞的倍體性，避免了Her-2擴(kuò)增是由于17號(hào)染色體非整體性造成的假陽(yáng)性結(jié)果11。4. 結(jié)語(yǔ)：綜上所述，Her2在乳癌患者

8、的診療過(guò)程中起著重要的作用，它不僅可以用于估計(jì)患者的遠(yuǎn)期預(yù)后，還可以指導(dǎo)乳癌治療的藥物選擇。因此，目前對(duì)于就診的乳癌患者都常規(guī)行Her2基因或其表達(dá)蛋白的檢測(cè)。國(guó)外的資料顯示，在乳癌患者中，大約有2530的患者會(huì)有Her2蛋白的高表達(dá)，而這其中9095的蛋白高表達(dá)是由于Her2/neu基因的擴(kuò)增引起的。因此，臨床上無(wú)論是檢測(cè)腫瘤細(xì)胞表面的蛋白表達(dá)，還是檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)基因的擴(kuò)增，理論上都是可以指導(dǎo)臨床的。TOP2A 基因擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒（熒光原位雜交法）疾病名稱(chēng)檢測(cè)探針標(biāo)記顏色探針定位探針名稱(chēng)乳腺癌GLP TOP2A/CSP 17紅/綠TOP2A：17q21.1TOP2A 基因擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒（熒光原位

9、雜交法）臨床意義乳腺癌是婦女中常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，在西方國(guó)家其發(fā)病率和病死率居腫瘤之首。近年來(lái)，在我國(guó)發(fā)病率也呈直線上升的趨勢(shì)。研究表明，對(duì)于her-2擴(kuò)增陽(yáng)性的乳腺癌患者，使用赫賽汀后會(huì)得到更好的預(yù)后效果，并且，使用大劑量蒽環(huán)類(lèi)藥物的治療效果要優(yōu)于常規(guī)劑量的治療效果。由于TOP2A基因也定位與17q染色體，并且與Her-2基因相隔很近，而且，TOP2A基因所編碼的蛋白拓?fù)洚悩?gòu)酶 II 是蒽環(huán)類(lèi)抗生素的靶酶，因此有推斷稱(chēng)使用TOP2A基因狀態(tài)來(lái)預(yù)測(cè)患者對(duì)含蒽環(huán)類(lèi)藥物治療方案，更為準(zhǔn)確2。在對(duì)晚期乳腺癌的研究中發(fā)現(xiàn),Topo 的基因表達(dá)和腫瘤細(xì)胞對(duì)拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑的敏感性明顯相關(guān)10 TOP2A

10、 基因異常的病人可以明顯受益于含有拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑的輔助化療方案。TOP2A擴(kuò)增的病人使用CEF方案進(jìn)行治療可以降低61%的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)和51%的死亡風(fēng)險(xiǎn)，而沒(méi)有TOP2A擴(kuò)增的患者使用CEF方案只能降低6%的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)和10%的死亡風(fēng)險(xiǎn)11。而且，且TOP2A基因異常的病人預(yù)示著更短的無(wú)復(fù)發(fā)生存期（recurrence-free survival ，RFS）但總生存期并無(wú)改變，TOP2A缺失的病人預(yù)后更差11。因此，檢測(cè)乳腺癌患者腫瘤組織中TOP2A基因狀況可以：2  對(duì)患者預(yù)后風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行判斷。TOP2A基因異常的病人預(yù)示著更短的無(wú)復(fù)發(fā)生存期（recurrence-free surviva

11、l ，RFS），TOP2A缺失的病人預(yù)后更差11。2  指導(dǎo)臨床使用含蒽環(huán)類(lèi)的輔助化療藥物，存在TOP2A基因異常（缺失或擴(kuò)增）的患者，使用蒽環(huán)類(lèi)治療方案效果要好于使用非蒽環(huán)類(lèi)治療方案一、背景介紹：1. 流行病學(xué)介紹：乳腺癌(mammary carcinoma)是人類(lèi)最常見(jiàn)的一種惡性腫瘤，也是女性主要惡性腫瘤之一。各國(guó)因地理環(huán)境、生活習(xí)慣的不同，乳腺癌的發(fā)病率有很大差異。北美和北歐大多數(shù)國(guó)家是女性乳腺癌的高發(fā)區(qū)，南美和南歐一些國(guó)家為中等，而亞洲、拉丁美洲和非洲的大部分地區(qū)為低發(fā)區(qū)。在北美、兩歐等發(fā)達(dá)國(guó)家，女性乳腺癌的發(fā)病率居女性惡性腫瘤發(fā)病率的首位。據(jù)美國(guó)癌癥協(xié)會(huì)估計(jì)，美國(guó)每年有12

12、萬(wàn)乳腺癌新發(fā)病例，發(fā)病率為72210萬(wàn)，。乳腺癌在我國(guó)各地區(qū)的發(fā)病率也不相同，在世界上我國(guó)雖屬女性乳腺癌的低發(fā)國(guó)。但近年來(lái)乳腺癌的發(fā)病率明顯增高。尤其滬、京、津及沿海地區(qū)是我國(guó)乳腺癌的高發(fā)地區(qū)。美國(guó)癌癥協(xié)會(huì)估計(jì)，2004年美國(guó)新診斷乳腺癌患者病例約217440例，有近40580患者將死于該病。在美國(guó)乳腺癌是最常見(jiàn)的婦女惡性腫瘤，在癌癥死因中僅次于肺癌，居第二位。 過(guò)去幾十年里，美國(guó)乳腺癌的發(fā)生率穩(wěn)步增長(zhǎng)，但其死亡率卻逐步下降。這得益于對(duì)乳癌的早期發(fā)現(xiàn)和更有效的治療。乳腺癌是婦女中常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，在西方國(guó)家其發(fā)病率和病死率居腫瘤之首。近年來(lái)，在我國(guó)發(fā)病率也呈直線上升的趨勢(shì)。目前浸潤(rùn)性乳腺癌已

13、被視為全身性疾病。其預(yù)后的判斷及與預(yù)后相關(guān)的生物學(xué)標(biāo)志物備受關(guān)注。由于許多患者存在著亞臨床轉(zhuǎn)移灶，以及化療耐藥的出現(xiàn)，導(dǎo)致患者無(wú)瘤生存期縮短，所以檢測(cè)有關(guān)乳腺癌耐藥相關(guān)基因，對(duì)指導(dǎo)規(guī)范化治療尤為重要1。2. 乳腺癌的臨床分級(jí)：根據(jù)治療方法，乳腺癌可分為：1）單純非浸潤(rùn)性癌：包括導(dǎo)管原位癌（DCIS）和小葉原位癌（LCIS）（0期）；2）可手術(shù)治療的局部浸潤(rùn)性癌（臨床I、II期和部分IIIA期腫瘤）；3）不能手術(shù)治療的局部浸潤(rùn)性癌（臨床IIIB、IIIC期和部分IIIA期腫瘤）；4）轉(zhuǎn)移性或復(fù)發(fā)性腫瘤（IV期）。3. 乳腺癌的治療：概括地說(shuō)，乳腺癌的治療手段包括對(duì)局部病灶進(jìn)行手術(shù)治療、放射治療，

14、或兩者聯(lián)合，以及對(duì)全身性疾病進(jìn)行細(xì)胞毒化療、內(nèi)分泌治療、生物治療或以上手段的聯(lián)合應(yīng)用。對(duì)各種全身和局部治療手段的需求和選擇要依據(jù)多種預(yù)后和預(yù)測(cè)因素來(lái)判斷。這些因素包括腫瘤組織學(xué)特征、原發(fā)腫瘤的臨床和病理學(xué)特征、腋窩淋巴結(jié)狀況、腫瘤激素受體水平和HER-2狀態(tài)、有無(wú)可檢測(cè)到的轉(zhuǎn)移病灶、合并癥情況、患者的年齡以及絕經(jīng)狀態(tài)。研究表明，對(duì)于her-2擴(kuò)增陽(yáng)性的乳腺癌患者，使用赫賽汀后會(huì)得到更好的預(yù)后效果，并且，使用大劑量蒽環(huán)類(lèi)藥物的治療效果要優(yōu)于常規(guī)劑量的治療效果。由于TOP2A基因也定位與17q染色體，并且與Her-2基因相隔很近，而且，拓?fù)洚悩?gòu)酶 II 是蒽環(huán)類(lèi)抗生素的靶酶，因此有推斷稱(chēng)使用TOP

15、2A基因狀態(tài)來(lái)預(yù)測(cè)患者對(duì)含蒽環(huán)類(lèi)藥物治療方案，更為準(zhǔn)確2。4. DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶的結(jié)構(gòu)、分布及功能在生物體的整個(gè)生命過(guò)程中，細(xì)胞遺傳物質(zhì)DNA起著十分重要的作用。但是，DNA的超長(zhǎng)度和雙螺旋性質(zhì)使其在復(fù)制和重組期間經(jīng)常纏繞，阻礙DNA的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和重組等。DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶(DNA topoisomerase)是生物體內(nèi)廣泛存在的一類(lèi)重要的核酶，是核基質(zhì)成分之一，在核內(nèi)發(fā)揮作用。它可催化單鏈或雙鏈DNA斷開(kāi)和結(jié)合的偶聯(lián)反應(yīng)，從而改變DNA的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)。DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶的生物學(xué)作用可以?xún)煞N方式體現(xiàn)：一是調(diào)節(jié)控制DNA的超螺旋狀態(tài)及打結(jié)或解結(jié)DNA的環(huán)連體狀態(tài)，從而間接地影響細(xì)胞內(nèi)核酸代謝過(guò)程。二是直

16、接參與那些需打斷并重新連接DNA分子鏈的細(xì)胞過(guò)程，DNA的重組、修復(fù)、轉(zhuǎn)錄及復(fù)制過(guò)程。此外拓?fù)涿高€參與轉(zhuǎn)導(dǎo)、姊妹染色體互換、分離等生物過(guò)程3、4。DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶不僅對(duì)細(xì)胞的正常生命活動(dòng)至關(guān)重要，而且在腫瘤發(fā)生、發(fā)展以及療效等方面均扮演重要角色。腫瘤細(xì)胞內(nèi)Topo的過(guò)表達(dá)與化學(xué)藥物的選擇也密切相關(guān)，因此為了提高化學(xué)治療效果，人們對(duì)它的研究十分重視5。根據(jù)DNA鏈斷裂反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生斷口性質(zhì)的不同，DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶可分為兩類(lèi)：I類(lèi)DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶(Topo I)引起DNA糖磷酸骨架上的單鏈DNA的斷裂；而類(lèi)DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶(Topo II),主要引起雙鏈DNA的斷裂。其中Topo包含 、 2個(gè)亞單

17、位4。在基因和蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)方面，Topo、兩種同功酶基本相似。Topo基因（TOP2A）由36kb堿基對(duì)構(gòu)成，有35個(gè)外顯子；Topo由49kb堿基對(duì)，含36個(gè)外顯子。Topo 在染色體上的定位及其物理圖譜詳見(jiàn)下圖： 5TOP2A與Her-2/neu基因的相關(guān)性TOP2A和Her-2/neu原癌基因在染色體上的位置非常鄰近，均定位于17q11.2-22區(qū)域。研究證實(shí)，在乳腺癌中TOP2A和Her-2/neu這兩種基因的擴(kuò)增或缺失有一定的相關(guān)性。Her-2/neu是人類(lèi)腫瘤中發(fā)生改變頻率最高的癌基因之一。其與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切，約在2030的乳腺癌組織中可以檢測(cè)到該基因的擴(kuò)增和過(guò)表達(dá)。在乳腺癌中，Her-2/neu基因擴(kuò)增又與其鄰近位點(diǎn)上的 TOP2A基因改變呈正相關(guān)。當(dāng)Her-2/neu基因在乳腺癌中過(guò)度表達(dá)時(shí)，通過(guò)多種途徑參與跨膜信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)及促進(jìn)細(xì)胞的增殖，這可能是TOP2A基因擴(kuò)增的原因。研究表明，對(duì)于her-2擴(kuò)增陽(yáng)性的乳腺癌患者，使用赫賽汀后會(huì)得到更好的預(yù)后效果，并且，使用大劑量蒽環(huán)類(lèi)藥物的治療效果要優(yōu)于常規(guī)劑量的治療效果6。由于TOP2A基因也定位與17q染色體，并且與Her-2基因相隔很近，而且，拓?fù)洚悩?gòu)酶 II 是蒽環(huán)類(lèi)抗生素的靶酶，因此有推斷稱(chēng)使用TOP2A基因狀態(tài)