農(nóng)藥登記毒理學(xué)細(xì)菌回復(fù)突變

1、農(nóng)藥登記毒理學(xué)細(xì)菌回復(fù)突變1范圍GB/T15670的本局部規(guī)定了細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)的根本原那么、方法和要求.本局部適用于為農(nóng)藥登記而進(jìn)行的細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn).2術(shù)語(yǔ)和定義以下術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件.2. 1回復(fù)突變?cè)囼?yàn)reversemutationtest利用一組鼠傷寒沙門(mén)氏菌和/或大腸桿菌檢測(cè)引起細(xì)菌堿基置換或移碼突變的化學(xué)物質(zhì)所誘發(fā)的需要某種經(jīng)基酸的菌株分別為組氨酸或色氨酸成為不需要外源性供給皴基酸的菌株的突變,即是由營(yíng)養(yǎng)缺陷型回變到野生型.2.2堿基置換型致突變物basepairsubstitutionmutagens引起DNA分子中一個(gè)或多個(gè)堿基對(duì)置換的物質(zhì).在回復(fù)突變?cè)囼?yàn),此改變可能發(fā)生

2、在細(xì)菌基因組的原突變部位或另一個(gè)部位.2.3移碼型致突變物frameshiftmutagens引起DNA分子增加或喪失一個(gè)或多個(gè)堿基對(duì)的物質(zhì).3試驗(yàn)?zāi)康臋z測(cè)受試物的誘變性,預(yù)測(cè)其遺傳危害和潛在致癌作用的可能性.4試驗(yàn)概述細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)利用鼠傷寒沙門(mén)氏菌和大腸桿菌來(lái)檢測(cè)點(diǎn)突變,涉及DNA的一個(gè)或幾個(gè)堿基對(duì)的置換、插入或缺失.原理是通過(guò)觀察試驗(yàn)菌株在缺乏所需要氨基酸的培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)情況,檢測(cè)試驗(yàn)菌株是否恢復(fù)合成必需朝基酸的水平,評(píng)價(jià)受試物誘發(fā)突變的水平.5培養(yǎng)基和試劑注：培養(yǎng)基成分或試劑至少應(yīng)是化學(xué)純,無(wú)誘變性.防止重曳高溫處理,選擇適巧保存溫度和期限,如肉湯保存于4'C不超過(guò)6個(gè)月,其

3、他詳見(jiàn)下述各培養(yǎng)基及溶液說(shuō)明.1.1 營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基牛肉浸膏5g氯化鈉5g胰陳10g磷酸氫二鉀K2HPO43H2O2.6g加蒸飾水至1000mL加熱溶解,調(diào)節(jié)pH至7.4,分裝后0.103Mpa,20min滅菌,保存期不超過(guò)6個(gè)月,1.2 營(yíng)養(yǎng)肉湯瓊脂培養(yǎng)基瓊脂粉1.5g加營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基至100mL加熱溶解,調(diào)節(jié)pH至74,0.103Mpa,20min滅菌.1.3 底層培養(yǎng)基即最低營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基5. 3.1Vogel-Bonner(V-B)培養(yǎng)基檸檬酸(C6HQ7H2O)2.0g磷酸氫二鉀(K2HPO4)10.0g磷酸氫鉉鈉(NaNH4HPO4-4H2O)3.5g硫酸鎂(MgSOQHq)0.2g加

4、蒸播水至200mL逐個(gè)將化學(xué)物在少量蒸鐳水中單獨(dú)溶解后,硫酸鎂水溶液在最后緩慢參加,加蒸用水至200mLo0.103MPa,20min滅菌,4c保存?zhèn)溆?6. 3.220%葡萄糖溶液葡萄糖20.0g加蒸馀水至100mL,0.055MPa,20min滅菌.7. 3.31.5%底層瓊脂培養(yǎng)基瓊脂粉15g加蒸飾水至700mLV-B培養(yǎng)基200mL20%簡(jiǎn)萄糖溶液100mL配制：首先將前兩種成分于0.103MPa下高壓滅菌20min后,再參加后兩種成分,充分混勻倒底層平板.按每皿25mL相對(duì)于90mm平皿制備平板,冷凝固化后倒置于37c培養(yǎng)箱中24h,備用.5.4頂層培養(yǎng)基5.4.1頂層瓊脂瓊脂粉3.

5、0g氯化鈉2.5g加蒸飾水至500mL0.103MPa,20min高壓滅菌.D-生物素分子量24412.2mgL-組氨酸分子量1557.8mg或L-鹽酸組緘酸分子量1929.6mg加蒸儲(chǔ)水至100mL,貯于4c冰箱中.5.4.3頂層培養(yǎng)基制備加熱融化頂層瓊脂,臨用時(shí)每100mL頂層瓊脂中加10mL0.5mmol/L組經(jīng)酸-生物素溶液大腸桿菌那么需配制0.5mmol/L色包酸-組級(jí)酸-生物素溶液,分裝在三角燒瓶中,0.103MPa,20min滅菌.用時(shí)融化分裝小試管,每管2mL,在45c水浴中保溫.5.5 S9輔助因子混合液試劑的配制5.5.1 1鹽溶液1.65mol/L氯化鉀KC1+0.4mo

6、l/L氯化鎂MgCh氯化鉀KC16.15g氯化鎂MgCb6H2.4.07g蒸鐳水50mL0.103MPa,20min高壓滅菌或?yàn)V菌.5.5.2 0.2mol/L磷酸鹽緩沖液pH7.4磷酸氫二鈉NazHPOJ14.2g/500mL440mL磷酸二氫鈉NaHzPOHzO13.8g/500mL60mL0.103MPa,20min高壓滅菌或?yàn)V菌.5.5.3 輔酶-H氧化型溶液準(zhǔn)確稱(chēng)取輔酶-0,用無(wú)菌蒸儲(chǔ)水溶解配制成0.025mol/L溶液,低溫保存-20C以下.5.5.4 葡萄糖-6-磷酸鈉鹽溶液稱(chēng)取鋼萄糖-6-磷酸鈉鹽,用無(wú)菌蒸儲(chǔ)水溶解配制成0.05mol/L,低溫保存-20以下.5.6 10%S9

7、混合液配制每10mL由以下成分組成,臨用時(shí)配制.磷酸鹽緩沖液0.2mol/L,pH7.46.0mLMgCL-KCl鹽溶液0.2mL葡萄糖6磷酸鈉鹽溶液0.05mol/L1.0mL輔酶-II溶液0.025mol/L1.6mL肝S91.0mL無(wú)菌蒸馀水0.2mL混勻,置冰浴中待用.5.7 活化系統(tǒng)大鼠肝S9的誘導(dǎo)和制備選健康雄性成年SD大鼠或Wistar大鼠,體重200g左右.將多氯聯(lián)苯Aroclo254或國(guó)產(chǎn)PCB-五氯溶于玉米油中,按500mg/kg體重一次腹腔注射,5d后處死動(dòng)物,處死前12h禁食,但可自由飲水.苯巴比妥鈉和.-蔡黃酮結(jié)合也可做為誘導(dǎo)劑,健康雄性大鼠體重200g左右,經(jīng)口或腹

8、腔注射80mg/kg體重苯巴比妥鈉和80mg/kg體重0-荼黃酮,連續(xù)3d.處死前16h停止飲食,但可自由飲水.由于化學(xué)物質(zhì)經(jīng)腹腔注射,容易引起肝臟形成外膜,不易剝離,推薦使用經(jīng)口濯胃的方式.處死動(dòng)物后取出肝臟稱(chēng)重,用新鮮冰浴的0.15mol/L氯化鉀溶液連續(xù)沖洗肝臟數(shù)次,以去除抑制微粒體酶活性的血紅蛋白.每克肝濕重加0.15mol/L氯化鉀溶液3mL,連同燒杯移入冰浴中,用消毒剪刀剪碎肝臟,在玻璃勻漿器低于4000i7n】in,往復(fù)1min2min或組織勾漿器20000r/min,1min中制成肝勻漿.以上操作需注意無(wú)菌和局部冷環(huán)境.將制成的肝勻漿在低溫04高速離心機(jī)上,以9000g離心10

9、min,吸出上清液為S9組分,分裝于無(wú)菌冷凍管或安瓶中,每安甑2mL左右,最好用液氮或干冰速凍后置-80C低溫保存.上述全部操作均在冰水浴中和無(wú)菌條件下進(jìn)行.制備肝S9所用一切手術(shù)器械、器皿等,均經(jīng)滅菌消毒.S9制備后,其活力需經(jīng)診斷性誘變劑進(jìn)行鑒定.S9制成后,經(jīng)無(wú)菌檢查,蛋白含量測(cè)定Lowry法,每亳升蛋白含量應(yīng)不超過(guò)40mg,因過(guò)量蛋白將會(huì)抑制回復(fù)突變率,并經(jīng)間接致癌物誘變劑鑒定其生物活性合格后貯存于深低溫或冰凍枯燥,保存期不超過(guò)一年.5.8特殊試劑和培養(yǎng)基的配制5.8.1氨羊青露素溶液8mg/mL：稱(chēng)取三羥氨芾青霸素80mg,參加0.02mol/L氫氧化鈉溶液10mL,無(wú)菌配制,保存于

10、4C冰箱.5.8.20.1%結(jié)晶紫溶液：稱(chēng)取結(jié)晶紫10mg,加10mL無(wú)菌水.5.8.3四環(huán)素溶液8mg/mL：稱(chēng)取四環(huán)素40mg,參加0.02mol/L鹽酸溶液5mL,保存于4冰箱,用于四環(huán)素抗性試驗(yàn)和氨茉青霉素-四環(huán)素平板.5.8.4L-組氨酸溶液和0.5mmol/LD-生物素溶液：稱(chēng)取L-組包酸404.3mg和D-生物素12.2mg,分別溶于100mL蒸儲(chǔ)水,0.103Mpa,20min滅菌,保存于4冰箱.5.8.5亞假設(shè)青霸素平板用作TA97、TA98、TA100菌株的主平板和疆葦青霉素-四環(huán)素平板用作TA102菌株的主平板,每1000mL由以下成分組成：底層培養(yǎng)基980mL組氨酸水溶

11、液10mL0.5mmol/L生物素6mL0.8%氨茉青霉素溶液3.15mL0.8%四環(huán)素溶液0.25mL四環(huán)素僅在使用對(duì)四環(huán)素有抗性的TA102時(shí)參加c以上成分均已分別滅菌或無(wú)菌制備.5.8,6組刎酸-生物素平板組氨酸試驗(yàn)用,每1000mL由以下成分組成：底層培養(yǎng)基984mL組緞酸水溶液10mL0.5mmol/L生物素6mL以上成分均已分別滅菌.5.8.7二甲基亞碉DMSO：0.103Mpa,20min滅菌.6菌株及其鑒定與保存6.1.1 推薦使用鼠傷寒沙門(mén)氏菌突變型菌株TA97、TA98、TA100.TA102作為四株標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試菌株.TA97和TA98可以檢測(cè)各種移碼型致突變物：TA100可檢

12、測(cè)堿基置換型致突變物：TA102能檢測(cè)出其他測(cè)試菌株不能檢出或極少檢出的某些誘變劑,如甲醛、各種過(guò)氧化氫化合物和絲裂蠹素C等交聯(lián)劑.一般用來(lái)測(cè)試受試物誘變性時(shí),應(yīng)通過(guò)上述四個(gè)菌株的檢測(cè).必要時(shí)可增加TA1535、TA1537、TA97a、大腸桿菌WP2uvrA或大腸桿菌WP2uvrAPKM101任一菌株.試驗(yàn)菌株的基因型和檢測(cè)類(lèi)型見(jiàn)附錄A.lo6.1.2 也可采用以下的菌株組合：鼠傷寒沙門(mén)氏菌TA97、TA98、TA100.TA102和TA1535,洪中TA97可用TA97a或TA1537替換,TA102可用大腸桿菌WP2uvrAPKM101或WP2uvrA替換.6.2菌株的鑒定6. 2.1應(yīng)

13、進(jìn)行菌株鑒定的情況菌株特性應(yīng)符合細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)的要求,見(jiàn)附錄A.2.突變型菌株的某些特性易喪失或變異,遇到以下情況應(yīng)鑒定菌株的基因型：a在收到培養(yǎng)菌株后；b當(dāng)制備一套新的冷凍保存株或冷凍枯燥菌株時(shí)；c當(dāng)每皿自發(fā)回變數(shù)不在正常范圍時(shí)；d當(dāng)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)誘變劑喪失敏感性時(shí)；e初次投入使用前.7. 2.2增菌培養(yǎng)在營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中接種貯存菌株培養(yǎng)物,于37振蕩100次/min培養(yǎng)10h或靜置培養(yǎng)16h備用.8. 2.3組氨酸缺陷型和色氨酸缺陷型的鑒定6.2.3.1加熱融化底層培養(yǎng)基兩瓶一瓶不加組疑酸,一瓶加組經(jīng)酸,不加組氨酸者每100mL培養(yǎng)基中加0.5nunol/LD-生物素0.6niL：加組氨酸者每1

14、00mL培養(yǎng)基中參加L-組級(jí)酸每100mL中含404.3mg1mL和0.5mmol/LD-生物素0.6mL,冷卻至50c左右,各倒兩個(gè)平皿.6.2,3.2接種：取有組疑酸和無(wú)組經(jīng)酸培養(yǎng)基各一皿,按菌株號(hào)順序各取一白金耳菌液劃線(xiàn)直線(xiàn),接種在培養(yǎng)基表而,37'C培養(yǎng)48h.6.2.3.3結(jié)果：所有菌株TA97.TA97a、TA98、TA100、TA102.TA1535.TA1537在有組氨酸培養(yǎng)基平皿外表各長(zhǎng)出一條菌膜,無(wú)組級(jí)酸培養(yǎng)基上除自發(fā)回變菌落外無(wú)菌膜,說(shuō)明受試菌株確為組氨酸缺陷型.6.2.3.4色緘酸缺陷型的鑒定：在培養(yǎng)基上,倒上含有大腸桿菌WP2uvrA、大腸桿菌WP2uvrAP

15、KM101的頂層培養(yǎng)基,再加極微量的結(jié)晶-L色氨酸,置37c培養(yǎng)12h241】后觀察結(jié)果.在加色氨酸的區(qū)域生長(zhǎng),可見(jiàn)一白色圓形菌苔,說(shuō)明其對(duì)色叁酸的依賴(lài).6.2.4脂多糖屏障缺陷型的鑒定6.2.4.1加熱營(yíng)養(yǎng)肉湯瓊脂培養(yǎng)基.6.2,4.2接種：取菌液0.1mL移入平皿,迅速將營(yíng)養(yǎng)肉湯瓊脂培養(yǎng)基50適量倒入平皿,混勻,平放凝固.將無(wú)菌濾紙一片放入已凝固的培養(yǎng)基平皿中央,用移液器在濾紙片上滴加0.1%結(jié)晶紫溶液10pL,37c培養(yǎng)24h,每菌做一個(gè)平皿.6.2.4.3結(jié)果：陽(yáng)性者在濾紙周?chē)霈F(xiàn)一個(gè)透明的抑制帶,說(shuō)明存在rfa深粗型突變.這種變化引起某些大分子物質(zhì)進(jìn)入細(xì)菌體內(nèi)并抑制其生長(zhǎng).TA97、

16、TA97a>TA98、TA100、TA102.TA1535和TA1537均有抑制帶,野生型鼠傷寒沙門(mén)氏菌沒(méi)有抑制帶.6.2.5.1加熱營(yíng)養(yǎng)肉湯瓊脂培養(yǎng)基,冷卻至50C左右,適量倒入平皿中,平放凝固,用移液器吸0.8%氨茉青蠹素10UL,在凝固的培養(yǎng)基外表沿中線(xiàn)涂成一條帶,待紈芾青霉素溶液干后,用接種環(huán)與額假設(shè)青街素帶相交叉劃線(xiàn)接種要鑒定的菌株,并且接種一個(gè)不具有R因子的菌株作為氨葦青露素抗性的對(duì)照一個(gè)平皿可同時(shí)鑒定幾個(gè)菌株,37培養(yǎng)24h.6.2.5.2結(jié)果：菌株TA97、TA97a.TA98、TA100.TA102和大腸桿菌WP2uvrAPKM101經(jīng)過(guò)24h培養(yǎng),在皴茉青零素帶的周?chē)?/p>

17、依然生長(zhǎng)不受抑制,即有抗氨羊青蠹素效應(yīng),證實(shí)它們帶有R因子.6.2.6四環(huán)素抗性的鑒定6.2.6.1用移液器各吸5HL10hLO.8%四環(huán)素溶液和0.8%氨芾青霉素溶液,在營(yíng)養(yǎng)肉湯瓊脂培養(yǎng)基平皿外表依中線(xiàn)涂成一條帶,待四環(huán)素和亞羊青露素干后,用接種環(huán)與四環(huán)素和緞茉青霉素帶相交叉劃線(xiàn)接種TA102和一種有R因子的菌株作四環(huán)素抗性的對(duì)照,37c培養(yǎng)241】.6.2,6.2結(jié)果：TA102菌株生長(zhǎng)不受抑制,對(duì)照菌株有一段生長(zhǎng)抑制區(qū),說(shuō)明TA102菌株有抗四環(huán)素效應(yīng),其他菌株均無(wú)四環(huán)素抗性.6.2.7uvrB修復(fù)缺陷型的鑒定6.2.7.1在營(yíng)養(yǎng)肉湯瓊脂培養(yǎng)基外表用接種環(huán)劃線(xiàn)接種需要的菌株.6.2,7.

18、2接種后的平皿一半用黑紙覆蓋,在距15W紫外線(xiàn)滅菌燈33cm處照射8s,37培養(yǎng)24h°6.2.7.3結(jié)果：對(duì)紫外線(xiàn)敏感的菌株TA97、TA97a、TA98、TA100、TA1535.TA1537和WP2uvrA僅在沒(méi)有照射的一半生長(zhǎng),具有野生型切除修復(fù)酶的菌株TA102仍能生長(zhǎng).6.2.8自發(fā)回變率的測(cè)定6.2.8.1準(zhǔn)備底層培養(yǎng)基平皿.6.2.8.2融化頂層培養(yǎng)基,每管2mL,在45c水浴中保溫.6.2.8.3在每管頂層培養(yǎng)基中分別參加待鑒定的測(cè)試菌株的菌液0.1mL,每株兩份,輕輕搖勻,迅速將此試管中的內(nèi)容物傾入已固化的底層培養(yǎng)平皿中,轉(zhuǎn)動(dòng)平皿,使頂層培養(yǎng)基均勻分布,平放固化,

19、37培養(yǎng)48h計(jì)數(shù)菌落數(shù).6. 2.8.4結(jié)果：每一株的自發(fā)回變率應(yīng)落在正常范圍內(nèi).6.3菌株保存鑒定合格的菌種應(yīng)保存在深低溫如-80C或參加9%色譜級(jí)二甲基亞碉作為冷凍保護(hù)劑,液氮條件下-196C,或者冷凍枯燥制成干粉,4保存.除液氮條件外,一般不超過(guò)兩年,主平板貯存在4,二個(gè)月后丟棄,TA102主平板兩周應(yīng)該丟棄.7試驗(yàn)方法7.1受試物配制受試物的溶劑首選無(wú)菌雙蒸水,不溶于水的或水溶性低的受試物,首選二甲基亞颯每平皿參加二甲基亞碉的量不得超過(guò)0.4mL,選用其他溶劑須說(shuō)明理由.7.2劑量與分組對(duì)可溶性無(wú)細(xì)菌毒性的受試物,推薦的最高試驗(yàn)劑量是5mg/皿或5卜工/皿：否那么,受試物最高劑量應(yīng)為

20、細(xì)菌毒性的劑量或出現(xiàn)沉淀,沉淀不應(yīng)干擾菌落計(jì)數(shù)c最低劑量可考慮為0Ng/皿.評(píng)價(jià)含有潛在致突變雜質(zhì)的受試物時(shí),試驗(yàn)劑量可高于5mg/皿或5HL/皿.每一受試物至少設(shè)5個(gè)劑量組,可按0.55000卜電/皿劑量設(shè)定,也可根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果按等比組距設(shè)定需要的濃度范圍.7. 2.2對(duì)照組設(shè)定7. 2.2.1每次試驗(yàn)都應(yīng)包括同時(shí)進(jìn)行的有或無(wú)代謝活化的菌株特異性陽(yáng)性對(duì)照和陰性溶劑對(duì)照組.陽(yáng)性對(duì)照應(yīng)選擇適當(dāng)?shù)膭┝?以證實(shí)每次試驗(yàn)的有效性.7. 2.2,2陽(yáng)性對(duì)照物根據(jù)菌株的類(lèi)型選擇,見(jiàn)附錄B.7. 2.2.3試驗(yàn)應(yīng)包括陰性溶劑對(duì)照組,陰性對(duì)照組的處理方法除無(wú)受試物外其他處理與劑量組相同.試驗(yàn)也應(yīng)包括空白對(duì)照組

21、,除非歷史資料證實(shí)所選擇的溶劑無(wú)毒性或無(wú)致突變作用.7.3試驗(yàn)方法7. 3.1平板摻入法增菌培養(yǎng)：將主平板或冷凍保存的菌株培養(yǎng)物接種于營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基內(nèi),37c振蕩100次/min培養(yǎng)10h至對(duì)數(shù)增長(zhǎng)期,每亳升不少于1x109個(gè)活菌數(shù),培養(yǎng)瓶可用黑紙包裹,以防光線(xiàn)照射細(xì)菌.底層培養(yǎng)基平皿,每個(gè)劑量加S9及不加S9均做3皿.融化頂層培養(yǎng)基分裝于無(wú)菌小試管,每管2mL,在45c水浴中保溫.在保溫的頂層培養(yǎng)基中依次參加測(cè)試菌株新鮮增菌液0.1mL,然后加0.1mL受試物和0.5mL火菌緩沖液需活化時(shí)那么參加10%S9混合液0.5mL,再混勻,迅速傾入底層培養(yǎng)基上,轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使頂層培養(yǎng)基均勻分布在底層上,

22、平放固化,37培養(yǎng)48h觀察結(jié)果.8. 3.2預(yù)培養(yǎng)平板摻入法預(yù)培養(yǎng)對(duì)某些受試物可取得較好效果,因此可根據(jù)情況確定是否進(jìn)行預(yù)培養(yǎng).在參加頂層瓊脂前,先進(jìn)行以下預(yù)培養(yǎng)步驟：在試驗(yàn)中,將受試物0.1mL需活化時(shí)另參加10%S9混合液0.5mL和菌液0.1mL,在37培養(yǎng)20】m11,或在30c中培養(yǎng)30min,然后再加2mL頂層瓊脂,其他同上述平板摻入法.9. 3.3點(diǎn)試法增菌培養(yǎng)：將主平板或冷凍保存的菌株培養(yǎng)物接種于營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基內(nèi),37c振蕩100次/min培養(yǎng)10h至對(duì)數(shù)增長(zhǎng)期,每亳升不少于1x109個(gè)活菌數(shù),培養(yǎng)瓶可用黑紙包裹,以防光線(xiàn)照射細(xì)菌.底層培養(yǎng)基平皿,每個(gè)劑量加S9及不加S9均做

23、3皿.融化頂層培養(yǎng)基分裝于無(wú)菌小試管,每管2mL,在45c水浴中保溫.在水浴中保溫的頂層培養(yǎng)基中參加測(cè)試菌株增菌液0.1mL需活化時(shí)另參加10%S9混合液0.5mL,混勻,迅速傾入底層培養(yǎng)基上,轉(zhuǎn)動(dòng)平皿,使頂層培養(yǎng)基在底層上均勻分布.平放固化后取無(wú)菌濾紙圓片直徑6mm,小心放在已固化的頂層培養(yǎng)基的適當(dāng)位置上,用移液器取適量受試物如10.L點(diǎn)在紙片上,或?qū)⑸倭抗腆w受試物結(jié)晶加到紙片或瓊脂表而,37C培養(yǎng)48h觀察結(jié)果.8試驗(yàn)結(jié)果和評(píng)價(jià)8.1 試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)報(bào)告受試物各劑量組、陽(yáng)性對(duì)照組、陰性溶劑對(duì)照組、空白對(duì)照組的各個(gè)平板回變菌落數(shù),均數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)差.8.2 試驗(yàn)結(jié)果的評(píng)價(jià)8.2.1以直接計(jì)數(shù)培養(yǎng)基上回變菌落數(shù)的多少而定.如在背景生長(zhǎng)良好條件下,測(cè)試菌株TA1535、TA1537及大腸桿菌的受試物組回變菌落數(shù)等于或大于陰性對(duì)照組的平均數(shù)值的3倍,其他測(cè)試菌株的受試物組回變菌落數(shù)等于或大于2倍