-腫瘤免疫治療臨床應(yīng)用及進展ppt課件

1、 腫瘤免疫治療臨床應(yīng)用及進展腫瘤免疫治療臨床應(yīng)用及進展 - -腫瘤生物治療學(xué)基礎(chǔ)與臨床腫瘤生物治療學(xué)基礎(chǔ)與臨床1教學(xué)目的與要求教學(xué)目的與要求熟悉腫瘤免疫治療的策略和方法熟悉腫瘤免疫治療的策略和方法認識免疫治療在腫瘤綜合治療中的認識免疫治療在腫瘤綜合治療中的地位和作用地位和作用了解腫瘤免疫治療的最新進展了解腫瘤免疫治療的最新進展2一、腫瘤的免疫治療一、腫瘤的免疫治療 基本原理基本原理： 提高腫瘤抗原免疫原性，激發(fā)和增強機體抗腫瘤免疫應(yīng)答，提高腫瘤對抗瘤免疫效應(yīng)的敏感性，在體內(nèi)外誘生腫瘤特異性效應(yīng)細胞和分子等。 抗腫瘤免疫治療包括主動免疫治療、被動免疫治療。31 1、干擾素、干擾素1）I型干擾素：

2、由單核巨噬細胞、病毒誘導(dǎo)的成纖維細胞、轉(zhuǎn)化的B細胞產(chǎn)生 種類：IFN-、IFN-、IFN-、IFN-等 作用：抑制腫瘤細胞周期、誘導(dǎo)細胞凋亡 調(diào)節(jié)免疫反應(yīng) 感染腫瘤血管生成 其它作用：抗病毒2）II型干擾素：由活化的T細胞、原始的Th0細胞和NK細胞產(chǎn)生 種類：IFN- 作用: 激活巨噬細胞、NK細胞等直接殺傷癌細胞 延長細胞周期、抑制腫瘤細胞的生長和增殖 促進MHC-I、II類分子和抗原遞呈細胞尚共刺激分子的表達 在干擾素的調(diào)節(jié)下，IFN-可誘導(dǎo)Th0向Th1分化，抑制向Th2分化，增強細胞免疫和CTL的殺傷活性臨床藥物：基因工程產(chǎn)品，已國產(chǎn)化。 干擾靈、賽若金 、因特芬、派羅欣。 （一）細

3、胞因子治療（一）細胞因子治療4適應(yīng)癥適應(yīng)癥：干擾素主要用于治療晚期毛細胞白血病、腎癌、黑色素瘤、kaposi肉瘤、慢性粒細胞性白血病和中低度惡性非霍奇金淋巴瘤，其他曾用于骨肉瘤、乳腺癌、多發(fā)性骨髓瘤、頭頸部癌和膀胱癌等。對慢性乙、丙型肝炎也有效。用法用法：第1周300萬單位，皮下注射，每周23次， 第2周每次加到500600萬單位，第3周加到9001000萬單位連續(xù)6周，共8周為1療程。 干擾素亦可局部注射（瘤周浸潤）、腔內(nèi)注射（癌性胸腹腔積液）或膀胱內(nèi)灌注。毒副作用毒副作用：高劑量干擾素具有一般生物制劑的反應(yīng)即發(fā)熱、流感樣癥狀，肌肉酸痛等，其次是輕度骨髓抑制。一般對肝腎功能無影響，少數(shù)有轉(zhuǎn)氨

4、酶、血肌酐升高。52 2、白細胞介素、白細胞介素-2 -2 （IL-2)IL-2)來源：主要由激活的T淋巴細胞分泌和表達，此外NK、轉(zhuǎn)化的B細胞和LAK細胞也可產(chǎn)生 作用：促進T細胞增殖及相應(yīng)的細胞因子分泌 刺激NK生長并增強其殺細胞活性 誘導(dǎo)LAK、NK、TIL擴增及細胞因子的分泌 促進B細胞分化、增殖和產(chǎn)生抗體 參與機體的炎癥反應(yīng)、抗腫瘤免疫反應(yīng)和移植排斥反應(yīng)臨床藥物：基因工程IL-2 欣吉爾、德路生 、遠策欣 。6適應(yīng)癥適應(yīng)癥：用于腎細胞癌、黑色素瘤、乳腺癌、膀胱癌、肝癌、直腸癌、淋巴瘤、肺癌等惡性腫瘤的治療。用于癌性胸腹水的控制。用于手術(shù)后、放療及化療后的腫瘤治療，可增強機體免疫功能。

5、也用于自身免疫性疾病和病毒性、細菌性疾病的治療，如乙肝、結(jié)核病。用法用法：1）胸腹腔注射 100-200萬IU/次，每周1-2次，2-4周為一療程。 2）局部注射 根據(jù)癌灶大小決定劑量，每次每個病灶不少于610萬IU，隔日1次，4周為一療程。 3）皮下注射 60-100萬IU/m3，每日1次，每周5次，4周為一療程。 4）靜脈滴注 40-80萬IUIU/m3，每日1次，緩慢滴注，每周5次，4周為一療程。7毒副作用毒副作用：治療中常見副反應(yīng)為發(fā)熱、寒戰(zhàn)、乏力、惡心、輕度食欲下降等。其他少見的副反應(yīng)包括局部反應(yīng)、皮疹、血壓下降、水潴留、轉(zhuǎn)氨酶升高等。 這些副反應(yīng)多為輕度、易耐受，停藥后可自行緩解。

6、必要時可給與消炎痛或給予升壓等措施對癥處理。83 3、ILIL- -1212 主要是由抗原呈遞細胞（如單核巨噬細胞、樹突細胞及主要是由抗原呈遞細胞（如單核巨噬細胞、樹突細胞及B B淋淋巴細胞產(chǎn)生）巴細胞產(chǎn)生） 作用：誘導(dǎo)作用：誘導(dǎo)Th0Th0分化為分化為Th1Th1，增強細胞免疫應(yīng)答，增強細胞免疫應(yīng)答 促進促進NKNK、T T細胞增殖，誘導(dǎo)細胞增殖，誘導(dǎo)LAKLAK、TILTIL產(chǎn)生，產(chǎn)生， 并增強上述細胞的殺傷功能并增強上述細胞的殺傷功能 誘導(dǎo)誘導(dǎo)Th1Th1、NKNK分泌分泌IFN-IFN- 促進巨噬細胞分泌一氧化氮，殺傷腫瘤細胞促進巨噬細胞分泌一氧化氮，殺傷腫瘤細胞 抑制腫瘤血管的生成抑

7、制腫瘤血管的生成 增強腫瘤細胞表達增強腫瘤細胞表達MHC-I IIMHC-I II類分子，提高腫類分子，提高腫 瘤細胞對免疫效應(yīng)細胞的易感性瘤細胞對免疫效應(yīng)細胞的易感性 增加抗原遞呈細胞對腫瘤抗原的遞呈功能增加抗原遞呈細胞對腫瘤抗原的遞呈功能9動物試驗動物試驗： 應(yīng)用基因工程技術(shù)，將IL-12基因?qū)肽[瘤細胞、樹突細胞、成纖維細胞等，制成腫瘤疫苗，使IL-12在局部分泌，誘發(fā)機體的抗腫瘤免疫。臨床試驗臨床試驗： 重組人(rHu)IL-12治療慢性乙型肝炎，效應(yīng)與劑量相關(guān)，但較大劑量較易有不良反應(yīng)， IL-12能恢復(fù)由實體瘤轉(zhuǎn)移患者PBMC獲得的NK細胞活性， IL12還能增強毛細胞白血病患者N

8、K細胞活性， IL-12抗腫瘤作用104 4、IL-4IL-4主要由活化的T淋巴細胞（特別是Th2細胞）產(chǎn)生。作用作用：促進休止期的B細胞活化，促進B細胞分泌IgE，增加B細胞的抗原遞呈功能，促進體液免疫應(yīng)答。 維持胸腺細胞和活化T細胞的生長，誘導(dǎo)Th2產(chǎn)生，抑 制Th1分泌細胞因子。 誘導(dǎo)NK細胞增殖。 激活巨噬細胞，促進其抗原遞呈和殺傷腫瘤細胞的作用。 誘導(dǎo)外周血單個核細胞分泌M-CSF和G-CSF，增強中性粒細胞介導(dǎo)的吞噬、殺傷功能和抗體依賴性細胞介導(dǎo)的細胞毒效應(yīng)（ADCC）應(yīng)用應(yīng)用：主要用于DC細胞的誘導(dǎo)、擴增。 115 5、腫瘤壞死因子、腫瘤壞死因子TNFTNF1 1）TNF-TNF

9、-：主要來源于LPS、細菌DNA等抗原分子激活的單核巨噬細胞、其它細胞如T淋巴細胞、B淋巴細胞等產(chǎn)生的。 作用： 影響免疫反應(yīng)過程 影響非免疫細胞 促進細胞因子分泌 調(diào)控細胞凋亡 全身反應(yīng)2 2）TNF-TNF-：主要由Th1、CD8T細胞和早期的B細胞產(chǎn)生作用作用：是炎癥過程的重要組成成分126 6、集落刺激因子、集落刺激因子 是一種低分子量糖蛋白，能夠在體內(nèi)外選擇性刺激造血干細胞增生、分化成某一譜系的細胞分類：G-CSF,M-CSF, GM-CSF, IL-3, EPO, SCF137 7、胸腺素、胸腺素 分為兩族 作用：1）具有免疫增強作用，可促進T細 胞、NK、LAK等細胞的增殖及殺傷

10、 活性 2）參與細胞骨架的形成，通過對 肌動蛋白的調(diào)節(jié)，參與某些腫瘤的 轉(zhuǎn)移14（二）腫瘤的主動免疫治療（二）腫瘤的主動免疫治療 應(yīng)用腫瘤抗原或模擬腫瘤抗原的疫苗刺激機體免疫系統(tǒng)，激發(fā)或增強機體的抗腫瘤特異性免疫應(yīng)答，阻止腫瘤生長、擴散和復(fù)發(fā)。15腫瘤疫苗腫瘤疫苗 腫瘤疫苗與傳統(tǒng)疫苗在概念上不同，它主要不是用于腫瘤的預(yù)防，而是通過瘤苗的接種來刺激機體對腫瘤的免疫應(yīng)答來治療腫瘤。 該法應(yīng)用的前提是腫瘤抗原能刺激機體產(chǎn)生免疫反應(yīng)。 對手術(shù)后清除微小轉(zhuǎn)移瘤灶和隱匿瘤、預(yù)防腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)有較好的效果。 161、腫瘤細胞疫苗 即通過自體腫瘤細胞粗提取物，經(jīng)物理化學(xué)或即通過自體腫瘤細胞粗提取物，經(jīng)物理化學(xué)

11、或生物手段處理后抑制其生長能力，保持其免疫原性，生物手段處理后抑制其生長能力，保持其免疫原性，需加入佐劑如卡介苗等以增強免疫原性。需加入佐劑如卡介苗等以增強免疫原性。172、腫瘤基因工程疫苗 腫瘤基因工程疫苗通過基因重組技術(shù)，將目的基因?qū)胧荏w細胞而制備的疫苗。 2 2、腫瘤基因工程疫苗、腫瘤基因工程疫苗181)1)、提高機體抗腫瘤能力、提高機體抗腫瘤能力 將外源基因?qū)朊庖呒毎?，其表達產(chǎn)物作用于免疫細胞，促進免疫細胞生長、分化，從而提高機體的抗腫瘤能力。 目前研究較多的是細胞因子基因的轉(zhuǎn)導(dǎo)，如IL-2、IL-4、IL-6、IL-12、IL-15、IL-18、IFN-以及GM-CSF等。 實驗

12、顯示，在各種細胞因子中，以GMCSF基因修飾的腫瘤細胞疫苗效果最好，這與其誘導(dǎo)DC成熟有關(guān)。 192)2)、增強腫瘤免疫原性、增強腫瘤免疫原性 通過表達腫瘤所缺乏的某些分子，以增強其免疫原性。如將B7基因?qū)刖哂心[瘤抗原的腫瘤細胞，不僅能恢復(fù)腫瘤特異性免疫反應(yīng)，也可增強IL-2的抗瘤活性。一些腫瘤相關(guān)抗原（TAA）基因的轉(zhuǎn)導(dǎo)研究，顯示也可以增強其免疫原性，如CEA、AFP、gp100、MART-1。203)3)、基因產(chǎn)物直接殺傷瘤細胞、基因產(chǎn)物直接殺傷瘤細胞 如TNF基因?qū)肽[瘤細胞可使局部持續(xù)分泌TNF、從而直接殺傷腫瘤細胞。213、肽疫苗8-108-10個氨基酸的多肽是個氨基酸的多肽是T

13、T細胞識別的基礎(chǔ)細胞識別的基礎(chǔ)肽疫苗主要包括以下二種：1）、癌基因、抑癌基因突變肽疫苗 目前已合成的p21-K-Ras-125突變肽、EGFRvIII突變肽和Her2/neu肽等。2）、病毒相關(guān)疫苗 如EB病毒與鼻咽癌、Burkitt淋巴瘤，HBV與肝癌，人類T細胞白血病病毒與成人T細胞白血病。22OncophageOncophage (Vitespen) (Vitespen)通過加工、純化自體腫瘤細胞的gp96等熱休克蛋白HSP，獲得大量腫瘤抗原。一項III 期臨床研究中728 腎癌術(shù)后隨機分為觀察組和治療組結(jié)果： 復(fù)發(fā)率 觀察組 治療組 P值 全部 27.3% 25.0% 0.384 I+

14、 II期 27.0% 15.2% 0.056 III +IV 27.5% 32.0% 0.686 中危患者* 30.9% 16.3% 0.004 中?；颊?:I/II期低分化/III期高分化 俄羅斯2008-4-9批準(zhǔn)Oncophage 用于中危腎癌的輔助治療。 Lancet. 2008 (9633):145234 4、核酸疫苗 核酸疫苗是由能引起保護性免疫反應(yīng)的抗原基因片段及其載體構(gòu)建而成。 包括DNA疫苗和RNA疫苗。4、核酸疫苗245、抗獨特型抗體疫苗 腫瘤抗原可誘導(dǎo)抗體(Ab1)產(chǎn)生，該抗體可變區(qū)的獨特型決定簇具有免疫源性，可誘導(dǎo)抗體Ab2產(chǎn)生，稱為抗獨特性抗體。也是一種抗抗體。 在這

15、些Ab2中，有的可模擬原來的抗原結(jié)構(gòu)誘導(dǎo)抗原的特異性免疫反應(yīng)，可作為腫瘤疫苗應(yīng)用。 這種疫苗的特點是，它既不這種疫苗的特點是，它既不是天然抗原的本身，也不是是天然抗原的本身，也不是人工合成的抗原自身，而是人工合成的抗原自身，而是抗原本身的抗原本身的“摸擬物摸擬物”，當(dāng)，當(dāng)用這種疫苗接種時，機體雖用這種疫苗接種時，機體雖然沒有直接接觸抗原，卻能然沒有直接接觸抗原，卻能產(chǎn)生對相應(yīng)抗原的免疫應(yīng)答產(chǎn)生對相應(yīng)抗原的免疫應(yīng)答 具有抗原放大效應(yīng)具有抗原放大效應(yīng)25已進入已進入、期臨床期臨床的的抗獨特型抗體抗獨特型抗體：卵巢癌相關(guān)抗原CA125的獨特型疫苗：AcA125黑色素瘤的獨特性疫苗：BEC2、TriG

16、em等淋巴瘤的獨特性疫苗：Id-KLH乳腺癌的獨特性疫苗：1E10結(jié)直腸癌的獨特性疫苗：105AD7266 6、樹突狀細胞（、樹突狀細胞（DCDC）疫苗）疫苗 腫瘤抗原屬于內(nèi)源性抗原，機體主要依靠CTL免疫應(yīng)答殺傷腫瘤細胞。但腫瘤細胞表面的MHC-抗原肽段復(fù)合物表達水平低，需要經(jīng)體內(nèi)抗原提呈細胞加工、處理，提供誘導(dǎo)T細胞活化的第二信號，才能激發(fā)腫瘤特異性CTL的產(chǎn)生。由于DC在誘導(dǎo)體液免疫應(yīng)答和細胞免疫應(yīng)答中的重要功能，目前認為，DC在啟動抗腫瘤免疫的抗原呈遞中發(fā)揮重要作用。27Dendritic cells connect innate immunity and adaptive immun

17、ity人DC至少有三條來自于不同前體細胞的發(fā)育途徑：1）CD34+細胞分化為DC2）外周血單核細胞分化為DC3）淋巴樣DC前體細胞分化途徑28臨床應(yīng)用臨床應(yīng)用治療惡性淋巴瘤治療惡性淋巴瘤 腫瘤抗原可以基因、多肽、蛋白、甚至完整細胞的形式負荷給DC，因此DC疫苗的制備明顯比基因修飾的腫瘤細胞疫苗容易，因而促進了DC疫苗進入臨床試驗。 1996美國斯坦福大學(xué)的Hsu等首先采用抗獨特型抗體負荷的DC疫苗治療了4例B細胞型淋巴瘤，3例獲部分緩解。 29抗原沖擊抗原沖擊DCDC治療乳腺癌（治療乳腺癌（I/III/II期臨床）期臨床）病人：病人： 高表達高表達HER2的轉(zhuǎn)移性乳腺癌病人的轉(zhuǎn)移性乳腺癌病人1

18、6例例方法：方法： HER500沖擊的自體沖擊的自體APC 2108 to 5109 ， 二周一次，共三次。二周一次，共三次。 副作用：主要為寒戰(zhàn)和發(fā)熱，沒有副作用：主要為寒戰(zhàn)和發(fā)熱，沒有3-4級的毒副反應(yīng)級的毒副反應(yīng)結(jié)果：結(jié)果： 12個可評價的病人，個可評價的病人，1例例PR 結(jié)論：結(jié)論： HER500沖擊的自體沖擊的自體DC使用安全，有一定使用安全，有一定 療效，但效率仍不夠高。療效，但效率仍不夠高。 J. W. Kylstra, et al. ASCO 200330治療轉(zhuǎn)移性腎癌（治療轉(zhuǎn)移性腎癌（I/III/II期臨床）期臨床）病人：病人：轉(zhuǎn)移性腎癌轉(zhuǎn)移性腎癌 15例例方法：方法：腫瘤細

19、胞溶解物沖擊的腫瘤細胞溶解物沖擊的DC 3.95106 淋巴結(jié)內(nèi)注射淋巴結(jié)內(nèi)注射副作用：副作用：無明顯的毒副作用無明顯的毒副作用結(jié)果：結(jié)果：7例進展，例進展，7例穩(wěn)定，例穩(wěn)定，1例部分退縮例部分退縮 (14.4106細胞細胞 )結(jié)論：結(jié)論：腫瘤細胞溶解物沖擊的腫瘤細胞溶解物沖擊的DC，即使在有大，即使在有大負荷腫瘤時也有效，在大劑量使用時更有效，負荷腫瘤時也有效，在大劑量使用時更有效，無毒副作用。無毒副作用。 Marten A, et al. Cancer Immunol Immunother. 2002Marten A, et al. Cancer Immunol Immunother. 2

20、002 31PROVENGE (sipuleucel-T) ProvengeProvenge是是PA2024 (GM-CSFPA2024 (GM-CSF和和PAPPAP的融合蛋白的融合蛋白) )與自身樹突狀細胞與自身樹突狀細胞孵孵育后獲得的自體育后獲得的自體DCDC細胞疫苗細胞疫苗。 III期研究設(shè)計期研究設(shè)計:127例無癥狀激素治療無效的轉(zhuǎn)移性前列腺癌患者例無癥狀激素治療無效的轉(zhuǎn)移性前列腺癌患者，以以2:1比例比例接受接受sipuleucel-T (2周周1次，連續(xù)次，連續(xù)3次次) 或安慰劑治療，或安慰劑治療，3 3月后曲線月后曲線分離。分離。 J Clin Oncol.2006:30893

21、2DC Vax-Brain患者DC細胞經(jīng)自體腫瘤細胞刺激后獲得。膠質(zhì)瘤手術(shù)聯(lián)合放化療的MS為14.6個月，TTP為6.9個月。 N Engl J Med, 2005:987I期和I/II期研究中發(fā)現(xiàn)膠質(zhì)瘤經(jīng)DCVax-Brain治療后（皮下注射）后，3年存活率為53%，95%的患者MS超過14.6個月，TTP超過6.9個月。http:/ 由于大多數(shù)腫瘤抗原 未被識別，因此腫瘤細胞溶解物負荷的DC疫苗可使更多的患者接受此種方法治療。 直接攜帶腫瘤抗原的DC作用更為直接，可以活化靜息的T細胞，誘導(dǎo)強烈的抗腫瘤免疫反應(yīng)。 34（三）腫瘤的被動免疫治療（三）腫瘤的被動免疫治療1 1、單克隆抗體靶向治療

22、、單克隆抗體靶向治療 又稱之為生物導(dǎo)彈技術(shù)，通過補體系統(tǒng)和自然殺傷細胞起抗腫瘤作用。 嵌合型單抗達到95以上人源化,減少了異種免疫原性。351） 抗腫瘤單克隆抗體直接體內(nèi)應(yīng)用 很多進入臨床治療試驗，包括抗白細胞 分化抗原CD19、CD20、CD22、CD33，表皮生長因子受體（EGFR），MU C1，前列腺特異性抗原（PSA），前列腺特異性膜抗原（PSMA），癌基因cerbB2產(chǎn)物，神經(jīng)節(jié)苷酯GD3、GM2等抗原的單抗。 362） 抗腫瘤單克隆抗體與抗腫瘤藥物、生物毒素、細胞因子或放射性核素偶聯(lián)： 生物毒素，如假單胞菌毒素或蓖麻毒素； 放射線同位素，如131I 、186Re、177Lu、90Y

23、、212Bi、67Cu、等 單抗作為導(dǎo)向物可增加毒素、放射性同位素等在腫瘤局部 的濃度，增加對腫瘤的殺傷力或誘導(dǎo)腫瘤局部的免疫反應(yīng)。37 3）基因工程抗體-毒素（或酶）融合蛋白直接殺瘤 4）抗腫瘤單克隆抗體和抗效應(yīng)細胞表面分子的抗體組成雙特異性抗體，可引導(dǎo)殺瘤效應(yīng)細胞向腫瘤灶集中 5)胞內(nèi)抗體在腫瘤細胞內(nèi)表達，特異性作用于致瘤的癌基因產(chǎn)物或端粒酶38 2 2、腫瘤過繼性免疫治療、腫瘤過繼性免疫治療 向腫瘤患者體內(nèi)輸注具有抗瘤活性的免疫細胞，直接殺傷腫瘤細胞或激發(fā)機體抗腫瘤免疫效應(yīng)。 回輸?shù)男?yīng)細胞包括：在體外用腫瘤抗原或淋巴因子激活的淋巴細胞（CIK、TIL等）、導(dǎo)入外援細胞因子基因并表達相應(yīng)

24、產(chǎn)物的淋巴細胞等。391 11)1)LAKLAK細胞細胞 LAK細胞是在1980年由美國國立癌癥研究所Rosenberg發(fā)現(xiàn)，并在1982年由Grimm等命名的。這是一類由IL-2激活的能夠殺傷NK抵抗的新型免疫細胞，是一種強烈的，廣譜的，具有殺瘤活性的細胞。隨后臨床上廣泛應(yīng)用于腫瘤等疾病治療。但由于LAK細胞活性的維持需要IL-2，而IL-2副作用大，而且在以后的臨床總結(jié)中發(fā)現(xiàn)LAK細胞療效較低，現(xiàn)已基本不用。402 2) )CD3AKCD3AK細胞細胞 是在LAK細胞基礎(chǔ)上，用抗CD3單抗和IL-2聯(lián)合誘導(dǎo)的殺瘤細胞。由于使用了抗CD3單抗刺激，減少了IL-2的用量，降低LAK治療的毒副作

25、用，且CD3AK的抗腫瘤活性大大高于LAK細胞。 對晚期惡性腫瘤患者輸注自體 CD3AK 細胞 1個療程后 ,實體瘤組治療有效率為 25. 45%,臨床獲益率為 74. 54%;淋巴瘤組有效率為 83. 33%,臨床獲益率為 91. 67%。41 在利用外周血淋巴細胞制備免疫效應(yīng)細胞的研究中，為增加效應(yīng)細胞的數(shù)量和殺瘤活性，常添加一些激活劑如抗CD3單抗，植物血凝素PHA等，以提高免疫治療療效。 實驗顯示PHA預(yù)刺激雖能促進IL-2激活的殺傷細胞的增殖，但對殺傷活性并無明顯改善，而培養(yǎng)15天以上，經(jīng)PHA預(yù)刺激的P-LAK和P-CD3AK細胞殺傷活性顯著提高，且PHA與抗CD3單抗有協(xié)同效應(yīng)。

26、423 3) )TILTIL細胞細胞（腫瘤浸潤的淋巴細胞）腫瘤浸潤的淋巴細胞） 腫瘤浸潤的淋巴細胞，是從新鮮的腫瘤組織中分離出來，體外經(jīng)IL-2，抗CD3單抗，TNF等刺激，經(jīng)20-45天培養(yǎng)，獲得的具有一定特異性的抗腫瘤細胞。其局限在于分離困難，體外培養(yǎng)時間過長。43 我們于1997-1998年選擇21例癌性胸腹水患者，其中肺癌4例，乳腺癌5例，腸癌4例，骨癌7例，胰腺癌1例。所有病例均經(jīng)病理學(xué)和細胞學(xué)診斷。共抽取33次胸腹水做TIL細胞培養(yǎng)，抽取胸水2502200ml，腹水量12004400ml。21例患者中14例經(jīng)16次的TIL胸腹腔回輸治療?；剌斊陂g隔天皮下注射IL-2 50萬單位。1

27、4例患者回輸治療結(jié)果顯示總有效率為78.57%，其中3例胸腹水消失，并觀察1個月無復(fù)發(fā)，1個月后檢查胸腹水無瘤細胞；8例胸腹水有明顯減少，并控制1個月以上；3例僅控制12周。444 4) )TAKTAK細胞細胞 TAK是由可溶性腫瘤抗原，抗CD3單抗和IL-2共同誘導(dǎo)的殺瘤細胞。用可溶性腫瘤抗原誘導(dǎo)細胞識別腫瘤，以提高殺瘤親和性；用抗CD3單抗誘導(dǎo)所有T細胞活化，培養(yǎng)出以CD8+T細胞為主的殺瘤細胞。TAK細胞不僅增加了殺瘤的特異性，且體外增殖快，IL-2用量低。 用胃癌可溶性抗原（TSA），聯(lián)合抗CD3單抗和IL-2共同刺激正常人的外周血單核細胞，培養(yǎng)10天后，經(jīng)流式細胞儀表型分析，表明其免

28、疫效應(yīng)細胞以CD8+T細胞為主，其細胞增殖速度，增殖水平與CD3AK和LAK相比明顯升高，且對抗原來源的胃癌細胞具有極強的殺傷活性（98.5%），高于CD3AK（82.1%）和LAK（62.05%）。45 我們于1996-1998年，采用靜脈或口服化療和免疫效應(yīng)細胞輸注為主體的化學(xué)免疫療法，治療晚期原發(fā)性肝癌18例。 收治的38例晚期原發(fā)性肝癌病人中，18例采用化學(xué)免疫療法（甲組），同期收治的晚期肝癌患者，除對癥處理外，單用靜脈化療或肝動脈插管化療20例，列為對照組（乙組）。 總緩解率（總緩解率（CR+PRCR+PR）：）： 甲組22.22%（4/18） 乙組0% 無1例緩解 465 5) )

29、CIKCIK細胞細胞 是將人外周血單個核細胞經(jīng)體外用各種細胞因子共同刺激培養(yǎng)所獲得的免疫細胞。由于同時表達CD3和CD56分子，故又稱為NK樣T細胞，CIK細胞兼具有T淋巴細胞強大的抗瘤活性和NK細胞的非MHC限制性殺瘤特點，其抗腫瘤活性遠大于LAK和TIL。因此被認為是新一代腫瘤過繼細胞免疫治療的首選方案。 刺激因子除了抗CD3單抗、IL-2外，還需用IFN-和IL-1等細胞因子。 47CIKCIK細胞殺傷機制細胞殺傷機制 、識別、識別 由于CIK的細胞殺傷作用是非MHC限制性的，故CD4、CD8在其識別腫瘤細胞或病毒感染的細胞過程中并非必不可少。細胞表面粘附分子LFA-1 ICAM-1在C

30、IK細胞識別過程中起關(guān)鍵作用。對正常細胞無毒性作用。48、殺傷殺傷 細胞對腫瘤細胞或感染細胞的直接殺傷： CIK細胞在受到外源性抗原或敏感靶細胞刺激時會釋放具有細胞毒性的胞漿顆粒物到膜外空間，其中細胞可產(chǎn)生最大的顆粒釋放量。這些胞漿顆粒物對靶細胞具有直接殺傷作用。 炎性細胞因子的殺傷活性：培養(yǎng)的細胞可以分泌多種細胞因子，如、（腫瘤壞死因子）、等，不僅對靶細胞有直接抑制作用，還可通過調(diào)節(jié)機體免疫 系 統(tǒng) 反 應(yīng) 性 間 接 殺 傷 靶 細 胞 。 誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡：細胞在培養(yǎng)過程中表達（型跨膜糖蛋白），一方面增強了其對腫瘤細胞引發(fā)的凋亡的抵抗性，還可通過對（型跨膜糖蛋白）腫瘤細胞誘導(dǎo)凋亡行使其對

31、腫瘤細胞的慢性殺傷作用，保證抗瘤活性的長期持久。49CIKCIK細胞的殺瘤特點細胞的殺瘤特點 1、增殖速度快 CIK細胞中的效應(yīng)細胞CD3+CD56+細胞在正常人外周血中極其罕見，僅1%5%，在體外經(jīng)多因子培養(yǎng)2830天，CD3+CD56+細胞迅速增多，較培養(yǎng)前升幅可達1000倍以上。且所占百分比也大幅上升，細胞毒活性亦達峰值。 2、殺傷活性高、殺瘤譜廣 CIK細胞的總殺傷單位（TLU）為LAK 細胞的73倍甚至更高，CIK細胞的瘤細胞抑制Log指數(shù)為2.53.5，較LAK細胞的瘤細胞抑制指數(shù)高2 個Log。其抗病毒活性大大增強。 因沒有T 淋巴細胞殺傷時的MHC 限制性，故對于多種腫瘤細胞

32、系 和 新 鮮 腫 瘤 組 織 均 表 現(xiàn) 出 強 大 的 殺 傷 活 性 。 3、對多重耐藥腫瘤細胞同樣敏感 CIK細胞對化療藥物敏感的親本細胞和不敏感的轉(zhuǎn)化細胞均具有強大的殺傷活性，兩者比較無差別。 4 、 殺 瘤 活 性 不 受 C s A 、 F K 5 0 6 等 免 疫 抑 制 劑 的 影 響 免疫抑制劑CsA（環(huán)孢霉素A）和FK506（普樂可復(fù)）不影響靶細胞誘導(dǎo)的CIK細 胞 脫 顆 粒 ， 并 且 C I K 細 胞 對 靶 細 胞 的 殺 傷 活 性 不 會 因 此 降 低 。 5、對正常骨髓造血前體細胞毒性很小 CIK細胞對正常髓系克隆生成幾乎沒有影響，對GM-CFU（粒細

33、胞巨噬細胞集落形成單位）僅有不足1級的抑制。 6 、 能 抵 抗 腫 瘤 細 胞 引 發(fā) 的 效 應(yīng) 細 胞 F a s - F a s L 凋 亡 CIK細胞內(nèi)有抗凋亡基因表達，并檢出多種保護基因，如Bcl-2等和survivin的轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)。CIK細胞具備合成FasL的能力， CIK細胞可以對抗體內(nèi)FasL陽性腫瘤所引發(fā)的效應(yīng)細胞活性下降。 50CIKCIK制備制備采集：外周血單個核細胞。分離：PBMNC經(jīng)淋巴細胞分離液分離、洗滌后懸浮于含10%AB血清的RPMI 1640中。培養(yǎng)：第一天培養(yǎng)加入-IFN 1000U/ml，24小時后加入IL-2 1000U/ml，在37，5% CO2孵

34、箱中培養(yǎng)。以后每3天更換培養(yǎng)液補加IL-2 1000U/ml；培養(yǎng)710天。無菌檢測：細菌霉菌培養(yǎng)陰性；熱源檢測陰性。收獲：收集細胞，加入含1%白蛋白的生理鹽水洗滌。回輸：洗滌后的細胞懸浮于1%白蛋白生理鹽水中，將CIK細胞通過輸血器經(jīng)靜脈輸給患者。療程：培養(yǎng)的第8-10天開始，分八袋回輸，每次間隔1-2天。自回輸CIK細胞前一天起, 可每日靜脈輸注IL-2，每日劑量為100萬單位直到回輸結(jié)束。51525354臨床應(yīng)用臨床應(yīng)用 體內(nèi)回輸CIK細胞, 可以在沒有損傷機體免疫系統(tǒng)結(jié)構(gòu)和功能的前提下,直接殺傷腫瘤細胞, 并可調(diào)節(jié)和增強機體的免疫功能。 特別適應(yīng)于那些對手術(shù)、放療、化療已無適應(yīng)證的晚期

35、腫瘤患者,因而成為治療腫瘤的重要輔助治療方法,為預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā)、改善生存質(zhì)量提供了新途徑。 一般在放療、化療后間隔24周,機體免疫力有所恢復(fù)時,輸入CIK細胞,可提高腫瘤患者的緩解率并在清除微小殘留病灶方面發(fā)揮重要作用。556 6) )DC-CIKDC-CIK 將外周血來源的CIK 細胞和同源DC 細胞共培養(yǎng)一段時間后發(fā)現(xiàn),DC 和CIK 細胞的增殖能力明顯增強,共培養(yǎng)14 d 后CIK細胞的增殖倍數(shù)比共培養(yǎng)7d 時高出2 倍左右。共培養(yǎng)24 h 后,DC 細胞白細胞介素12 的分泌量為單獨培養(yǎng)時的6.93 倍,與DC 細胞共培養(yǎng)的CIK 細胞對腫瘤細胞的殺傷活性顯著提高。CDCD8 8+ +

36、T T 細胞細胞CIKCIK細胞細胞NK NK 細胞細胞 樹突狀細胞樹突狀細胞（DCDC）長期控制和清除對疾病的早期防御56DC-CIKDC-CIK制備流程制備流程57587) NK7) NK細胞細胞自然殺傷細胞(natural killer cell,NK )細胞不經(jīng)致敏可直接殺傷敏感的腫瘤細胞,是宿主抗腫瘤的第一道防線。自然殺傷細胞(黃色)在它們嚴重破壞機體之前識別并殺死癌細胞(粉紅色)或病毒感染的細胞NK細胞受體和配體細胞受體和配體5960中國腫瘤臨床 2013,40卷9090例食管癌中晚期患者（例食管癌中晚期患者（TNM III-IVTNM III-IV期）接期）接受枯息性手術(shù)后，分為

37、單純化療組受枯息性手術(shù)后，分為單純化療組4040例、化例、化療聯(lián)合療聯(lián)合NKNK細胞治療細胞治療MCIAMCIA陰性組（簡稱聯(lián)合陰性組（簡稱聯(lián)合MICA-MICA-組）組）2525例及化療聯(lián)合例及化療聯(lián)合NKNK細胞治療細胞治療MCIAMCIA陽性組（簡稱聯(lián)合陽性組（簡稱聯(lián)合MICA+MICA+組）組）2525例。例。 中國腫瘤生物治療雜志 2013,20卷61體細胞免疫治療聯(lián)合腫瘤常規(guī)治療的基本方案體細胞免疫治療聯(lián)合腫瘤常規(guī)治療的基本方案惡性腫瘤惡性腫瘤手術(shù)治療手術(shù)治療可手術(shù)可手術(shù)放化療敏感（常規(guī)放化療）放化療敏感（常規(guī)放化療）放化療間隙聯(lián)合細胞免疫治療放化療間隙聯(lián)合細胞免疫治療（卵巢癌、乳

38、腺癌、小細胞肺（卵巢癌、乳腺癌、小細胞肺癌和鼻咽癌等）癌和鼻咽癌等） 放化療不敏感放化療不敏感（腎癌、前列腺癌、黑色素瘤（腎癌、前列腺癌、黑色素瘤和肝癌等）和肝癌等）放化療敏感（常規(guī)放化療）放化療敏感（常規(guī)放化療）放化療間隙聯(lián)合細胞免疫治療放化療間隙聯(lián)合細胞免疫治療（卵巢癌、乳腺癌、小細胞肺（卵巢癌、乳腺癌、小細胞肺癌和鼻咽癌等）癌和鼻咽癌等）細胞免疫治療細胞免疫治療疾病疾病穩(wěn)定期穩(wěn)定期細胞免疫治療細胞免疫治療聯(lián)合內(nèi)分泌或聯(lián)合內(nèi)分泌或靶向治療，細靶向治療，細胞因子治療胞因子治療?？浦委煂？浦委煟ㄎ?chuàng)介入）（微創(chuàng)介入）不能手術(shù)（不能手術(shù)（期，期，期）期）復(fù)發(fā)者復(fù)發(fā)者細胞免疫治療細胞免疫治療疾病疾

39、病穩(wěn)定期穩(wěn)定期 化療不敏感化療不敏感（原發(fā)性肝癌、腎癌、前列腺（原發(fā)性肝癌、腎癌、前列腺癌和黑色素瘤等）癌和黑色素瘤等）細胞免疫治療細胞免疫治療聯(lián)合?？浦委熉?lián)合專科治療62CIKCIK輸注不良反應(yīng)輸注不良反應(yīng)免疫活性細胞回輸后患者可出現(xiàn)一過性類流感樣癥狀，如發(fā)熱（體溫37.539.5），輕度頭痛、乏力、關(guān)節(jié)酸痛，持續(xù)時間均不超過12 h， 可自行緩解，所有患者均能很好耐受治療。 63643 3、過繼性免疫效應(yīng)細胞治療的優(yōu)點、過繼性免疫效應(yīng)細胞治療的優(yōu)點 (1)(1)免疫細胞在體外處理，可繞過體內(nèi)腫瘤免疫障礙的種種機免疫細胞在體外處理，可繞過體內(nèi)腫瘤免疫障礙的種種機制，從而選擇性地操作抗腫瘤免疫

40、反應(yīng)制，從而選擇性地操作抗腫瘤免疫反應(yīng): : 如新鮮分離的腫瘤浸潤性淋巴細胞（如新鮮分離的腫瘤浸潤性淋巴細胞（tumor infiltrating tumor infiltrating lymphocytelymphocyte，TILTIL）往往缺乏抗腫瘤效應(yīng)，而在體外一定條）往往缺乏抗腫瘤效應(yīng)，而在體外一定條件下培養(yǎng)一段時間后可恢復(fù)特異性抗腫瘤作用；在體外培養(yǎng)件下培養(yǎng)一段時間后可恢復(fù)特異性抗腫瘤作用；在體外培養(yǎng)條件下，腫瘤抗原特異性耐受的免疫細胞可被逆轉(zhuǎn)。條件下，腫瘤抗原特異性耐受的免疫細胞可被逆轉(zhuǎn)。 65(2)(2)免疫細胞的活化及效應(yīng)過程往往由一免疫細胞的活化及效應(yīng)過程往往由一些細胞因子

41、介導(dǎo)，而目前基因工程可大些細胞因子介導(dǎo)，而目前基因工程可大量克隆不同的細胞因子，也可大量克隆量克隆不同的細胞因子，也可大量克隆腫瘤抗原或多肽，這使體外活化擴增大腫瘤抗原或多肽，這使體外活化擴增大量的抗腫瘤免疫細胞更為可行方便。量的抗腫瘤免疫細胞更為可行方便。 66(3)(3)免疫細胞的體外活化擴增可避免一些制劑免疫細胞的體外活化擴增可避免一些制劑 體內(nèi)大量應(yīng)用帶來的嚴重毒副作體內(nèi)大量應(yīng)用帶來的嚴重毒副作 用，如用，如: : ILIL2 2、TNFTNF、ILIL4 4、ILIL7 7、ILIL1212等具有抗腫瘤作用，等具有抗腫瘤作用，抗抗CD3CD3單克隆抗體單克隆抗體(MabCD3)(Ma

42、bCD3)的體內(nèi)應(yīng)用可激活的體內(nèi)應(yīng)用可激活T T淋巴細胞，但淋巴細胞，但這些制劑由于其復(fù)雜的多種作用，在體內(nèi)大量應(yīng)用可導(dǎo)致嚴這些制劑由于其復(fù)雜的多種作用，在體內(nèi)大量應(yīng)用可導(dǎo)致嚴重的甚至致死性副作用，這也是這些因子難以被批準(zhǔn)臨床使重的甚至致死性副作用，這也是這些因子難以被批準(zhǔn)臨床使用的重要原因，而在體外操作可避免這些副作用。用的重要原因，而在體外操作可避免這些副作用。 67 (4)(4)目前已能在體外大量擴增自體或異基因的抗腫目前已能在體外大量擴增自體或異基因的抗腫 瘤免疫細胞，其數(shù)量大于腫瘤疫苗在體內(nèi)激活的效瘤免疫細胞，其數(shù)量大于腫瘤疫苗在體內(nèi)激活的效 應(yīng)細胞數(shù)，一些體外培養(yǎng)的免疫細胞已進入臨

43、床治應(yīng)細胞數(shù)，一些體外培養(yǎng)的免疫細胞已進入臨床治 療試驗。療試驗。 實驗顯示腫瘤疫苗在體內(nèi)應(yīng)用可增加體內(nèi)的腫實驗顯示腫瘤疫苗在體內(nèi)應(yīng)用可增加體內(nèi)的腫瘤特異性瘤特異性CTLCTL數(shù)量，但到一定時候，體內(nèi)的數(shù)量，但到一定時候，體內(nèi)的CTLCTL到達到達平臺期而不再增加，這主要由體內(nèi)存在的特異性及平臺期而不再增加，這主要由體內(nèi)存在的特異性及非特異性免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)限制了非特異性免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)限制了CTLCTL克隆的擴增。而克隆的擴增。而在體外培養(yǎng)可突破此調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)，大量擴增免疫效應(yīng)在體外培養(yǎng)可突破此調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)，大量擴增免疫效應(yīng)細胞。細胞。68理想的過繼性免疫細胞治療應(yīng)具有以下特點理想的過繼性免疫細胞治療應(yīng)具有

44、以下特點: : (1)(1)可大量獲得，實驗室研究及臨床實踐顯示，臨床治療量可大量獲得，實驗室研究及臨床實踐顯示，臨床治療量的免疫細胞應(yīng)在的免疫細胞應(yīng)在1 110101010以上以上 (2)(2)為腫瘤特異性為腫瘤特異性 (3)(3)抗腫瘤活性強抗腫瘤活性強 (4)(4)體內(nèi)應(yīng)用可耐受體內(nèi)應(yīng)用可耐受 (5)(5)可聚集在腫瘤灶可聚集在腫瘤灶 (6)(6)可在體內(nèi)存活可在體內(nèi)存活 、增殖、增殖 69二、免疫治療的作用 腫瘤免疫治療即能夠直接清除體內(nèi)的殘存腫瘤腫瘤免疫治療即能夠直接清除體內(nèi)的殘存腫瘤細胞，又能夠提高機體的整體免疫功能，還具有將細胞，又能夠提高機體的整體免疫功能，還具有將患者個體化的

45、腫瘤抗原信息遞呈給體內(nèi)腫瘤免疫殺患者個體化的腫瘤抗原信息遞呈給體內(nèi)腫瘤免疫殺傷細胞的獨特作用。傷細胞的獨特作用。 腫瘤免疫治療已成為臨床上繼手術(shù)、化療、放腫瘤免疫治療已成為臨床上繼手術(shù)、化療、放療之后的第四種最有效的腫瘤治療方法。在腫瘤綜療之后的第四種最有效的腫瘤治療方法。在腫瘤綜合治療方案中，免疫治療成為提高腫瘤治愈率和有合治療方案中，免疫治療成為提高腫瘤治愈率和有效率的一個關(guān)鍵措施。效率的一個關(guān)鍵措施。 70三、免疫治療的臨床地位三、免疫治療的臨床地位免疫治療是最有前途的抗腫瘤手段之一免疫治療是最有前途的抗腫瘤手段之一目前尚未起主導(dǎo)作用目前尚未起主導(dǎo)作用定位于手術(shù)、放化療后清除殘留病灶定位

46、于手術(shù)、放化療后清除殘留病灶目標(biāo)是預(yù)防復(fù)發(fā)目標(biāo)是預(yù)防復(fù)發(fā)關(guān)鍵是抗原在體內(nèi)有效地被遞呈并激關(guān)鍵是抗原在體內(nèi)有效地被遞呈并激 活活T T淋巴細胞淋巴細胞71四、免疫四、免疫治療的原則治療的原則 雖然目前免疫治療的方法還不是很有效的，只能雖然目前免疫治療的方法還不是很有效的，只能配合其他療法作為一種配合其他療法作為一種 輔助手段。但從腫瘤免疫輔助手段。但從腫瘤免疫的理論看，它涉及的是腫瘤發(fā)生發(fā)展的內(nèi)部因素和的理論看，它涉及的是腫瘤發(fā)生發(fā)展的內(nèi)部因素和內(nèi)部矛盾性。隨著它的迅速發(fā)展，為腫瘤的免疫治內(nèi)部矛盾性。隨著它的迅速發(fā)展，為腫瘤的免疫治療提出了廣泛的可能。療提出了廣泛的可能。 從宿主與腫瘤相互斗爭這

47、一矛盾出發(fā)，從增強宿從宿主與腫瘤相互斗爭這一矛盾出發(fā)，從增強宿主對腫瘤的免疫能力，以及消除腫瘤對免疫功能的主對腫瘤的免疫能力，以及消除腫瘤對免疫功能的抑制兩個方面入手，并繼續(xù)在增強機體非特異性免抑制兩個方面入手，并繼續(xù)在增強機體非特異性免疫能力方面進行研究，腫瘤的免疫治療是大有希望疫能力方面進行研究，腫瘤的免疫治療是大有希望的。的。 72 1 1、增強宿主對腫瘤的免疫能力：、增強宿主對腫瘤的免疫能力：1 1）提純改造抗原，提高抗原的免疫作用）提純改造抗原，提高抗原的免疫作用2 2）發(fā)揮細胞免疫的作用進行過繼免疫治療）發(fā)揮細胞免疫的作用進行過繼免疫治療3 3）利用細胞因子激活抗腫瘤免疫）利用細胞

48、因子激活抗腫瘤免疫4 4）抗體導(dǎo)向治療）抗體導(dǎo)向治療2 2、消除腫瘤對免疫的對抗、消除腫瘤對免疫的對抗 如何清除免疫抑制因子的作用，是腫瘤免疫治如何清除免疫抑制因子的作用，是腫瘤免疫治療很有希望的一個方面。療很有希望的一個方面。 73五、免疫治療的評價五、免疫治療的評價1 1、臨床評價：、臨床評價： 病 灶 變 化病 灶 變 化 - - - - - 臨 床 查 體 和 影 像 學(xué) 檢 查 （臨 床 查 體 和 影 像 學(xué) 檢 查 （ C TC T 、 MRIMRI、B B超、等）超、等） 內(nèi)鏡檢查內(nèi)鏡檢查 腫瘤標(biāo)志物腫瘤標(biāo)志物 肝功、腎功、血象等的改善肝功、腎功、血象等的改善 其他其他74腫瘤

49、標(biāo)志物（tumor markers,TM)19781978年年NCINCI提出提出19791979年確認并開始使用年確認并開始使用TMTM是表示腫瘤存在并反映其一定的生物特性的生化物質(zhì)是表示腫瘤存在并反映其一定的生物特性的生化物質(zhì)TMTM主要是指那些在血液、體液及組織中可檢測到的與腫瘤相主要是指那些在血液、體液及組織中可檢測到的與腫瘤相關(guān)的物質(zhì)，這些物質(zhì)達到一定的水平時能揭示某些腫瘤的存關(guān)的物質(zhì)，這些物質(zhì)達到一定的水平時能揭示某些腫瘤的存在。在。TMTM的臨床意義：的臨床意義： （1 1）診斷）診斷 （2 2）復(fù)發(fā)（）復(fù)發(fā)（3 3）判斷療效（）判斷療效（4 4）預(yù)后）預(yù)后75常用腫瘤標(biāo)志物甲胎

50、蛋白（甲胎蛋白（AFPAFP）癌胚抗原（癌胚抗原（CEACEA）糖類抗原（糖類抗原（CA50CA50、CA125CA125、CA15-3CA15-3、CA199CA199、CA242CA242、CA72-4CA72-4）2-2-微球蛋白（微球蛋白（ 2-MG2-MG）鐵蛋白（鐵蛋白（FtFt）細胞角質(zhì)素片段抗原細胞角質(zhì)素片段抗原21-121-1（CYFRA21-1CYFRA21-1）神經(jīng)元特異性烯醇化酶（神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSENSE）鱗狀上皮癌相關(guān)抗原（鱗狀上皮癌相關(guān)抗原（SCC-AgSCC-Ag）前列腺特異抗原（前列腺特異抗原（PSAPSA）前列腺酸性磷酸酶（前列腺酸性磷酸酶（PAPP

51、AP）核基質(zhì)核基質(zhì)762 2、免疫監(jiān)測、免疫監(jiān)測 -觀察觀察CTLCTL的反應(yīng)、認定的反應(yīng)、認定CTLCTL反應(yīng)的細胞類反應(yīng)的細胞類型、等，從而評價機體對免疫治療的反應(yīng)型、等，從而評價機體對免疫治療的反應(yīng)1 1）遲發(fā)超敏試驗（）遲發(fā)超敏試驗（DTHDTH） -體內(nèi)抗原特異性免疫監(jiān)測技術(shù)體內(nèi)抗原特異性免疫監(jiān)測技術(shù)2 2）機體免疫功能檢測）機體免疫功能檢測 體液免疫體液免疫指標(biāo)：定量分析抗原特異性抗體的指標(biāo)：定量分析抗原特異性抗體的數(shù)量和功能數(shù)量和功能檢驗科檢驗科 細胞免疫細胞免疫功能：功能：FCMFCM技術(shù)檢測淋巴細胞表面標(biāo)技術(shù)檢測淋巴細胞表面標(biāo)志志 CD3CD3、CD4CD4、CD8CD8、C

52、D19CD19、CD28CD28、CD16/CD56CD16/CD56、CD25CD25、HLA-DRHLA-DR、等等。、等等。實驗實驗室室 Th1Th1、Th2Th2類因子檢測類因子檢測：應(yīng)用：應(yīng)用FCM-CBAFCM-CBA技術(shù)，技術(shù)，采用磁珠微陣列技術(shù)，同時測定血清中采用磁珠微陣列技術(shù)，同時測定血清中4 46 6種免疫種免疫相關(guān)因子的水平相關(guān)因子的水平實驗實驗室室77783 3）T T細胞增殖反應(yīng)細胞增殖反應(yīng) -3 3H H測定法測定法4 4）T T細胞毒性檢測：細胞毒性檢測： 5151CrCr釋放試驗釋放試驗 LDHLDH MTT MTT （WST-1WST-1）5 5）T T細胞限

53、制性稀釋分析法（細胞限制性稀釋分析法（LDALDA） -分析未知頻率的淋巴細胞克隆、定量檢測外分析未知頻率的淋巴細胞克隆、定量檢測外周血中最初抗原周血中最初抗原T T特異性淋巴細胞的數(shù)目或頻率。特異性淋巴細胞的數(shù)目或頻率。 操作復(fù)雜，被操作復(fù)雜，被ELISPOTELISPOT等新技術(shù)所取代等新技術(shù)所取代796 6）細胞因子檢測）細胞因子檢測 -測定測定T T淋巴細胞分泌的因子淋巴細胞分泌的因子ELISAELISA（酶聯(lián)免疫技術(shù)）（酶聯(lián)免疫技術(shù)）-檢測檢測T T淋巴細胞分泌于細胞外的因淋巴細胞分泌于細胞外的因子子ELISPOTELISPOT（酶聯(lián)免疫斑點技術(shù)）（酶聯(lián)免疫斑點技術(shù)）-檢測檢測T T

54、淋巴細胞分泌于細胞淋巴細胞分泌于細胞外的因子外的因子FCMFCM（流式細胞術(shù)）（流式細胞術(shù)）-檢測檢測T T淋巴細胞胞內(nèi)細胞因子淋巴細胞胞內(nèi)細胞因子807 7）其他）其他P-MHC tetramerP-MHC tetramer技術(shù)技術(shù)-檢測細胞表面受體（檢測細胞表面受體（TCRTCR）與）與MHCMHC分子遞呈的多肽的相互作用分子遞呈的多肽的相互作用定量定量PCRPCR技術(shù)技術(shù)-檢測細胞因子基因、檢測細胞因子基因、T T細胞受體復(fù)合細胞受體復(fù)合物基因等表達水平，反應(yīng)物基因等表達水平，反應(yīng)T T淋巴細胞功能狀態(tài)淋巴細胞功能狀態(tài) 81六、腫瘤免疫治療的新進展六、腫瘤免疫治療的新進展1、免疫卡控點抑

55、制劑 Checkpoimt inhibitor CTLA4、 PD-1、 PD-L1 2、TCR-T和CAR-T82協(xié)同刺激分子作用示意圖協(xié)同刺激分子作用示意圖T831、T細胞免疫卡控點治療細胞免疫卡控點治療84有兩種受體存在于有兩種受體存在于T細胞表面細胞表面B7 CD28 低親和力受體低親和力受體 CTLA-4 高親和力受體高親和力受體 B7-CD28結(jié)合結(jié)合:產(chǎn)生產(chǎn)生陽性信號陽性信號，增強免疫反應(yīng)。封閉，增強免疫反應(yīng)。封閉 CD28依賴的依賴的T細胞激活，下調(diào)免疫反應(yīng)。細胞激活，下調(diào)免疫反應(yīng)。 B7-CTLA-4結(jié)合結(jié)合:產(chǎn)生產(chǎn)生陰性信號陰性信號，下調(diào)免疫反應(yīng)。封閉，下調(diào)免疫反應(yīng)。封閉

56、CTLA-4促進抗腫瘤反應(yīng)。促進抗腫瘤反應(yīng)。85The Biology of Cancer86抗抗CTLA-4抗體治療黑色素瘤肺轉(zhuǎn)移患者抗體治療黑色素瘤肺轉(zhuǎn)移患者87Ipilimumab治療復(fù)治轉(zhuǎn)移性黑色素瘤(fully human, IgG1 monoclonal antibody, anti-CTLA-4)Ipi+gp100Ipi+gp100Ipi Ipi alonealonegp100 gp100 alonealonemOSmOS10.0m10.0m10.1m10.1m6.4m6.4m2y-SR2y-SR22%22%24%24%14%14%結(jié)果提示：Ipilimumab能夠延長轉(zhuǎn)移性黑色

57、素瘤患者的總生存，故2011年通過FDA批準(zhǔn)用于治療轉(zhuǎn)移性黑色素瘤。入組標(biāo)準(zhǔn)：二線治療（化療或細胞因子治療失敗）；HLA-A* 0201排除標(biāo)準(zhǔn)：既往CTLA-4抗體或疫苗治療；免疫抑制劑或自身免疫疾??；腦轉(zhuǎn)移、脈絡(luò)膜黑色素瘤88Early Response to TherapyEarly Response to TherapyCancer Investigation, 30:712720, 201289Gradual/Delayed ResponseGradual/Delayed ResponseCancer Investigation, 30:712720, 2012902011年，Nat

58、ure雜志指出：“腫瘤免疫治療的時代已經(jīng)來臨”。91抗抗PD-1抗體治療黑色素瘤肺、肝轉(zhuǎn)移患者抗體治療黑色素瘤肺、肝轉(zhuǎn)移患者T h e new engl and journa l o f medicineCD8+RECIST，為38%（44 / 117例）92Checkpoint Inhibitor: Nivolumab (BMS-936558)(fully human, IgG4 monoclonal antibody, anti-PD-1)melanomaNSCLCRCCRR28% (26/94)18% (14/76)27% (9/33)Durable OR was observed in

59、 patients with melanoma, NSCLC and RCC.l該研究中NSCLC患者的給藥濃度分別為1mg / kg、3mg / kg 和10mg / kg ；76例可評價療效NSCLC患者的ORR達18%；鱗癌與非鱗癌患者的ORR分別為33 % (6/18 ) 和12 %(7/58)。932 2、TCR-TTCR-T和和CAR-TCAR-T94基本概念基本概念 1 1、T T細胞（抗原）受體（細胞（抗原）受體（T cell receptor ,TCRT cell receptor ,TCR） TCR TCR為所有為所有T T細胞表面的特征性標(biāo)志，以非共價鍵與細胞表面的特征性

60、標(biāo)志，以非共價鍵與CD3CD3結(jié)合，形成結(jié)合，形成TCRTCRCD3CD3復(fù)合物。復(fù)合物。TCRTCR的作用是識別抗原。的作用是識別抗原。 2 2、TCR-TTCR-T TCRTCR基因轉(zhuǎn)染的基因轉(zhuǎn)染的T T細胞免疫治療細胞免疫治療 3 3、嵌合抗原受體、嵌合抗原受體(CAR)(CAR) 是通過基因改造的是通過基因改造的T T細胞抗原受體，賦予細胞抗原受體，賦予T T細胞細胞HLAHLA非依賴的方式識別腫瘤非依賴的方式識別腫瘤抗原的能力，抗原的能力，CARCAR的基礎(chǔ)設(shè)計中包括一個腫瘤相關(guān)抗原（的基礎(chǔ)設(shè)計中包括一個腫瘤相關(guān)抗原（tumor-associated tumor-associated