紫外可見分光光度計(jì)法測定飲料中苯甲酸鈉的含量

1、紫外-可見分光光度計(jì)法測定飲料中苯甲酸鈉的含量一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康? . 了解和熟悉紫外-分光光度計(jì)的原理和結(jié)構(gòu)，學(xué)習(xí) UV-2501的操作。2 .掌握紫外分光光度法測定苯甲酸鈉的吸收光譜圖。3 .掌握標(biāo)準(zhǔn)曲線法測定樣品中苯甲酸鈉的含量。二、實(shí)驗(yàn)原理為了防止食品在儲(chǔ)存、運(yùn)輸過程中發(fā)生腐蝕、變質(zhì)，常在食品中添加少量 防腐劑。防腐劑使用的品種和用量在食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中都有嚴(yán)格的規(guī)定，苯甲酸及其鈉鹽、鉀鹽是食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)允許使用的主要防腐劑之一，根據(jù) GB2760- 1996規(guī)定，碳酸飲料中苯甲酸鈉的允許最大使用量為0.2g/kg。苯甲酸具有芳香結(jié)構(gòu)，在波長225nm和272nm處有K吸收帶和B吸收帶。 根據(jù)苯甲

2、酸（鈉）在225nm處有最大吸收，測得其吸光度即可用標(biāo)準(zhǔn)曲線法 求出樣品中苯甲酸鈉的含量。三、儀器和試劑1 .紫外可見分光光度計(jì) UV-2501 （日本島津），1.0cm石英比色皿，50ml容量 瓶。2 . NaOH 溶液（0.1mol/L）3 .苯甲酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制（1）苯甲酸鈉標(biāo)準(zhǔn)貯備液（1.000g/L）:準(zhǔn)確稱量經(jīng)過干燥的苯甲酸鈉1.000g（105C干燥處理2h）于1000mL容量瓶中，用適量的蒸儲(chǔ)水溶解后定容。該貯備液可置于冰箱保存一段時(shí)間。（2）苯甲酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液（100.0mg/L）:準(zhǔn)確移取苯甲酸鈉儲(chǔ)備液10.00mL于100mL容量瓶中，加入蒸儲(chǔ)水稀釋定容。(3)系列標(biāo)準(zhǔn)溶

3、液的配制：分別準(zhǔn)確移取苯甲酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL 和 5.00mL 于 5 個(gè) 50mL 容量瓶中，各加入 0.1mol/L NaOH 溶液1.00mL后，用蒸儲(chǔ)水稀釋定容。得到濃度分別為2.0 mg/L、4.0mg/L、 6.0mg/L、8.0mg/L和10.0mg/L的苯甲酸鈉系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。4 .雪碧(500mL)5 .蒸儲(chǔ)水四、實(shí)驗(yàn)步驟1 .吸收曲線的繪制(1)系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制50mL瓶編號(hào)123456100.0mg/L苯甲酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液體積(mL)0.001.002.003.004.005.000.1mol/L NaOH 溶液體積（mL）1.

4、00用蒸儲(chǔ)水容量50.0系列標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度(mg/L)0.02.04.06.08.010.0記錄吸光度A值(2)吸收曲線的測定用某一濃度較高的標(biāo)準(zhǔn)液如4號(hào)或5號(hào)溶液，于210nm300nm波長范圍 內(nèi)掃描，即的苯甲酸鈉的吸收曲線。(3)由吸收曲線上找出最大吸收波長 加ax。2 .工作(標(biāo)準(zhǔn)或校正)曲線的繪制按溶液由稀到濃的順序分別測定他們的吸光度 A,然后以濃度為橫坐標(biāo),吸光度A為縱坐標(biāo)作圖，求出線性方程和相關(guān)系數(shù)。濃度(mg/L )046810X吸光度A-0.0110.2250.3330.4410.5520.10443 .市售飲料樣品溶液的含量測定(1)準(zhǔn)確移取市售飲料1.5ml于50mL容量

5、瓶中，用超聲脫氣5min驅(qū)趕 二氧化碳后，加入0.1mol/LNaOH溶液1.00mL,用蒸儲(chǔ)水稀釋定容。(2)按測定工作曲線標(biāo)準(zhǔn)液的方法測定樣品的 A,由標(biāo)準(zhǔn)曲線或線性方程 求出50mL樣品溶液中的苯甲酸鈉的濃度。(3)求出市售飲料中苯甲酸(鈉)的含量。五、數(shù)據(jù)處理1 .苯甲酸鈉紫外-可見吸收光譜的測定，并找出最大吸收峰波長。2 .苯甲酸鈉標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定，以及曲線方程、相關(guān)系數(shù)的測定。3 .樣品中苯甲酸鈉含量的測定?！咀⒁馐马?xiàng)】1 .試樣和標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的實(shí)驗(yàn)條件應(yīng)完全一致。2 .不同牌號(hào)的飲料中苯甲酸鈉含量不同，移取時(shí)樣品量可酌情增減?！舅伎碱}】1 .紫外可見分光光度計(jì)由哪些部件構(gòu)成？各有什

6、么作用？答：紫外可見分光光度計(jì)由光源室、單色器、試樣室、檢測器及信號(hào)顯示系統(tǒng)五個(gè)部分組成。光源室能提供儀器使用波段的連續(xù)光譜，單色器是用以產(chǎn)生高純度單色光束的裝置，試樣室供盛放試液進(jìn)行吸光度測量之用，檢測器用于檢測輻射信號(hào)，信號(hào)顯示系統(tǒng)將圖譜、數(shù)據(jù)和操作條件都顯示出來。2 .本實(shí)驗(yàn)為什么要用石英比色皿？為什么不能用玻璃比色皿？答：因?yàn)椴Ａ兆贤夤?，影響測試液對(duì)紫外光吸光度的準(zhǔn)確性。而石英不吸 收紫外光。因此，可見光區(qū)域內(nèi)測試時(shí)需要用玻璃比色池，紫外區(qū)域內(nèi)測試時(shí) 用石英比色池。3 .苯甲酸的紫外光譜中有哪些吸收峰？各自對(duì)應(yīng)哪些吸收帶？由哪些躍遷引起？答：苯甲酸具有環(huán)狀共鈍結(jié)構(gòu)，在波長228nm

7、和272nm處有E吸收帶和B吸 收帶，由兀- 7!遷引起。UV-2501的操作1 .開機(jī)（1）打開計(jì)算機(jī)，打印機(jī)。（2）打開主機(jī)開關(guān)，雙擊軟件圖標(biāo) UVProbe,點(diǎn)擊“Connect儀器聯(lián)機(jī)，儀器 開始自檢，通過后按“OK：2 .吸收光譜的測定（1）選擇 “Window/' s SpectrumT開光譜模塊。 選擇“Edit ” - m MethOd定波長范圍（從大到?。瑨呙杷俣龋‵ast）,采 樣間隔（1.0）,掃描方式（Single）, Instrument Parameters（Absorbence）。樣品池和空白池均放上2.5mL緩沖溶液，點(diǎn)擊光度計(jì)按鍵條中的 “Basel

8、ine啟動(dòng)基線校正，點(diǎn)擊確定。注：在開始基線校正之前，確認(rèn)樣品或參比光束無任何障礙物，且樣品室 中沒有樣品。（4）參比池中加入緩沖溶液，樣品池中加入苯甲酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液，點(diǎn)擊按鍵條中的“Start測定紫外可見吸收光譜。(5)掃描完成后，在彈出的新數(shù)據(jù)采集對(duì)話框中輸入樣品名，點(diǎn)擊確定。(6)圖譜保存：選擇“File鄉(xiāng)“Savas”，在對(duì)話框頂部的保存位置中選擇適當(dāng) 的路徑，輸入文件名，保存類型中選擇Spc,點(diǎn)擊 保存”。 最大吸收峰：選擇“Operations ” - “Peak執(zhí)現(xiàn)最大吸收峰對(duì)應(yīng)的波長3 .標(biāo)準(zhǔn)曲線法測定待測樣品的濃度 (1)選擇“Window/' P PhotometriC

9、丁開測量光度模塊。(2)選擇 “Edit ” - “ Method置合適的波長(“Wavelength；如 225nm，點(diǎn)擊 “Add；點(diǎn)擊選定的 Wavelength,根據(jù)提示，點(diǎn)擊 next, next,方法，設(shè)定 保存路徑，點(diǎn)擊保存”。(3)樣品池和空白池均放上2.5mL緩沖溶液，點(diǎn)擊光度計(jì)按鍵條中的“Cellblank ；進(jìn)行背景校正。標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Standard table框里輸入Sample ID (從1開始)，標(biāo)準(zhǔn)溶液的 濃度“Concentration輸入完畢，將光標(biāo)移到 WL225下。在樣品池中由稀 到濃，依次放入系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，點(diǎn)擊按鍵條中的“Read std依次讀出標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的吸光度值。(濃度為0的空白液可先按 自動(dòng)歸零”后再讀數(shù))(5)點(diǎn)擊 “Graph”- “ StandardCurve Statistics -> “Equation," a Correlation Coeficient , "得到標(biāo)準(zhǔn)曲線的方程和相關(guān)系數(shù)。(6)同樣，樣品池中放入待測溶液，在Sample table框里框里輸入Samp