免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù) (3)

1、關(guān)于免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù) (3)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第一頁(yè)，共41頁(yè) 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二頁(yè)，共41頁(yè) 抗原抗體反應(yīng)的原理抗原抗體反應(yīng)的原理物質(zhì)基礎(chǔ)：抗原的物質(zhì)基礎(chǔ)：抗原的抗原決定基抗原決定基與抗體與抗體的的抗原結(jié)合部位抗原結(jié)合部位之間的結(jié)構(gòu)互補(bǔ)性。之間的結(jié)構(gòu)互補(bǔ)性。兩者相互結(jié)合，在適宜條件下，出現(xiàn)兩者相互結(jié)合，在適宜條件下，出現(xiàn)可見(jiàn)反應(yīng)。可見(jiàn)反應(yīng)?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三頁(yè)，共41頁(yè) 一、抗原抗體反應(yīng)的一、抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)及其影響因素特點(diǎn)及其影響因素1、特異性、特異性2、可見(jiàn)性（比例適合）、可見(jiàn)性（比例適合）3、可逆性、可逆性現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四頁(yè)，共41頁(yè)1.特異性特異性抗原A抗原C抗原B特異性反應(yīng)交叉反應(yīng)無(wú)反應(yīng)現(xiàn)在

2、學(xué)習(xí)的是第五頁(yè)，共41頁(yè)2、抗原抗體反應(yīng)的可見(jiàn)性、抗原抗體反應(yīng)的可見(jiàn)性適合比例性適合比例性抗體含量抗原含量前帶后帶等價(jià)帶現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第六頁(yè)，共41頁(yè)網(wǎng)格學(xué)說(shuō)（網(wǎng)格學(xué)說(shuō)（lattice theorylattice theory）抗體過(guò)剩抗原過(guò)?？贵w抗體比例合適現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第七頁(yè)，共41頁(yè)3.可逆性可逆性K（親和常數(shù)）=Ag+AbAg Ab現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第八頁(yè)，共41頁(yè)1、利用已知抗原檢測(cè)未知抗體、利用已知抗原檢測(cè)未知抗體（1）檢測(cè)病原微生物的相應(yīng)抗體以輔助診斷疾?。海z測(cè)病原微生物的相應(yīng)抗體以輔助診斷疾?。?傷寒傷寒病、流行性乙型腦炎、病、流行性乙型腦炎、AIDS病等。病等。（2）檢測(cè)自身抗體）檢

3、測(cè)自身抗體診斷自身免疫?。涸\斷自身免疫?。篠LE、類風(fēng)濕性關(guān)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等節(jié)炎等2、利用已知抗體檢測(cè)未知抗原、利用已知抗體檢測(cè)未知抗原（1）鑒定病原菌：診斷疾?。╄b定病原菌：診斷疾?。?）檢測(cè)腫瘤相關(guān)抗原：檢測(cè)甲胎蛋白以診斷肝癌）檢測(cè)腫瘤相關(guān)抗原：檢測(cè)甲胎蛋白以診斷肝癌（3）檢測(cè)血型抗原、）檢測(cè)血型抗原、HLA抗原：鑒定血型，親子鑒定抗原：鑒定血型，親子鑒定（4）檢測(cè)藥物半抗原：）檢測(cè)藥物半抗原： 確認(rèn)運(yùn)動(dòng)員是否服用興奮劑確認(rèn)運(yùn)動(dòng)員是否服用興奮劑現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第九頁(yè)，共41頁(yè)二、二、 抗原或抗體的檢測(cè)方法抗原或抗體的檢測(cè)方法 凝集反應(yīng)凝集反應(yīng)沉淀反應(yīng)沉淀反應(yīng)補(bǔ)體參與的抗原抗體反應(yīng)補(bǔ)體參與的抗

4、原抗體反應(yīng)免疫標(biāo)記技術(shù)免疫標(biāo)記技術(shù)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十頁(yè)，共41頁(yè)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十一頁(yè)，共41頁(yè) （一）（一）凝集反應(yīng)（凝集反應(yīng)（agglutinationagglutination） 顆粒性抗原顆粒性抗原（紅細(xì)胞、細(xì)菌、（紅細(xì)胞、細(xì)菌、 乳膠顆粒等）與抗乳膠顆粒等）與抗體特異性結(jié)合，形成肉眼可見(jiàn)的凝集塊。體特異性結(jié)合，形成肉眼可見(jiàn)的凝集塊。血細(xì)胞凝集實(shí)驗(yàn)及補(bǔ)血細(xì)胞凝集實(shí)驗(yàn)及補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十二頁(yè)，共41頁(yè)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十三頁(yè)，共41頁(yè)（二）沉淀反應(yīng)（二）沉淀反應(yīng)（precipitationprecipitation）1、單向免疫擴(kuò)散（single immunodiffusio

5、n）：常用于測(cè)定）：常用于測(cè)定IgG、IgM、IgA、C3、C4等。等。單向免疫擴(kuò)散及免疫電泳單向免疫擴(kuò)散及免疫電泳現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十四頁(yè)，共41頁(yè)1、單向免疫擴(kuò)散（single immunodiffusion）：常用于測(cè)）：常用于測(cè)定定IgG、IgM、IgA、C3、C4等。等。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十五頁(yè)，共41頁(yè)（四）免疫標(biāo)記技術(shù)（四）免疫標(biāo)記技術(shù)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十六頁(yè)，共41頁(yè)酶：酶：辣根過(guò)氧化物酶、辣根過(guò)氧化物酶、鹼性磷酸酶鹼性磷酸酶現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十七頁(yè)，共41頁(yè)流式細(xì)流式細(xì)胞儀胞儀現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十八頁(yè)，共41頁(yè)臨床應(yīng)用vT、B細(xì)胞及其亞群的鑒定細(xì)胞及其亞群的鑒定v血清中自身抗體的檢測(cè)血清中自身抗

6、體的檢測(cè)v組織中組織中Ig及補(bǔ)體組分的檢測(cè)及補(bǔ)體組分的檢測(cè)v腫瘤抗原的檢定腫瘤抗原的檢定v細(xì)菌和病毒的快速檢定細(xì)菌和病毒的快速檢定v特異的組織固定抗體檢測(cè)特異的組織固定抗體檢測(cè)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十九頁(yè)，共41頁(yè)2.酶免疫分析酶免疫分析(enzyme immunoassay，EIA) 酶免疫分析分類： 非均相酶免疫測(cè)定非均相酶免疫測(cè)定(heterogeneous enzyme immunoassay) 均相酶免疫測(cè)定均相酶免疫測(cè)定(homogeneous enzyme immunoassay) 常用標(biāo)記酶：HRP、堿性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等。 非均相酶免疫測(cè)定非均相酶免疫測(cè)定(heterogeneo

7、us enzyme immunoassay)(heterogeneous enzyme immunoassay)是是目前應(yīng)用最廣泛，又分為目前應(yīng)用最廣泛，又分為： 固相酶免疫測(cè)定固相酶免疫測(cè)定： 瓊脂糖珠(Sepharose 4B)作為載體的DASS體系 聚苯乙烯及其他固相支持物的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) 液相酶免疫測(cè)定液相酶免疫測(cè)定 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十頁(yè)，共41頁(yè)v9）酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)）酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十一頁(yè)，共41頁(yè)第二節(jié)第二節(jié) 免疫分子的免疫分子的常用檢測(cè)方法常用檢測(cè)方法現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十二頁(yè)，共41頁(yè)v血清免疫球蛋白的定量測(cè)定血清免疫球蛋白的定量測(cè)定（IgG、I

8、gM、IgA） 單向免疫擴(kuò)散、免疫比濁法單向免疫擴(kuò)散、免疫比濁法v細(xì)胞因子檢測(cè) 生物學(xué)方法：生物活性測(cè)定 免疫學(xué)方法：ELISA 分子生物學(xué)方法：PCR現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十三頁(yè)，共41頁(yè)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十四頁(yè)，共41頁(yè)一、免疫細(xì)胞的分離與純化一、免疫細(xì)胞的分離與純化現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十五頁(yè)，共41頁(yè)細(xì)胞免疫功能的檢測(cè)淋巴細(xì)胞的分離1500rpm, 20度, 30min現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十六頁(yè)，共41頁(yè)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十七頁(yè)，共41頁(yè) T T細(xì)胞增生細(xì)胞增生( (轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化) )試驗(yàn)試驗(yàn) T T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn)原理細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn)原理 T T細(xì)胞功能的體內(nèi)檢測(cè)法細(xì)胞功能的體內(nèi)檢測(cè)法 流式細(xì)胞術(shù)流

9、式細(xì)胞術(shù) T T分泌細(xì)胞因子功能測(cè)定分泌細(xì)胞因子功能測(cè)定（一）（一）T T細(xì)胞功能測(cè)定細(xì)胞功能測(cè)定免疫熒光測(cè)定及熒光免疫分選免疫熒光測(cè)定及熒光免疫分選現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十八頁(yè)，共41頁(yè) 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十九頁(yè)，共41頁(yè)放射性測(cè)定3H-TdR絲裂原（抗原）刺激淋淋巴巴細(xì)細(xì)胞胞轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)化化試試驗(yàn)驗(yàn)原原理理示示意意現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十頁(yè)，共41頁(yè)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十一頁(yè)，共41頁(yè)放射性測(cè)定細(xì)細(xì)胞胞毒毒試試驗(yàn)驗(yàn)原原理理示示意意細(xì)細(xì)靶細(xì)胞效應(yīng)細(xì)胞分離上清現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十二頁(yè)，共41頁(yè)IL-2、IL-2R、rIFN 、TNF等檢測(cè)等檢測(cè)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十三頁(yè)，共41頁(yè) （2）抗體形成細(xì)胞測(cè)定）抗體形成細(xì)胞測(cè)定 溶

10、血空斑試驗(yàn)溶血空斑試驗(yàn) （hemolytic forming cell assay，HFC）計(jì)算計(jì)算HFU/ml（1）B細(xì)胞增殖試驗(yàn)：細(xì)胞增殖試驗(yàn)：現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十四頁(yè)，共41頁(yè)第四節(jié)第四節(jié) 免疫學(xué)檢測(cè)方法的應(yīng)用免疫學(xué)檢測(cè)方法的應(yīng)用 評(píng)估與選擇 特異性（specificity） 敏感性（sensitivity） 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十五頁(yè)，共41頁(yè)特異性（特異性（specificity） 用該試驗(yàn)檢查非患者時(shí)出現(xiàn)陰性結(jié)果的用該試驗(yàn)檢查非患者時(shí)出現(xiàn)陰性結(jié)果的可能性?？赡苄?。敏感性（敏感性（sensitivity） 用該試驗(yàn)檢查某病患者時(shí)出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)用該試驗(yàn)檢查某病患者時(shí)出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果的可能性。果的可能

11、性。 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十六頁(yè)，共41頁(yè) 特異性特異性= =真陰性真陰性/ /（真陰性（真陰性+ +假陽(yáng)性）假陽(yáng)性）100%100% 敏感性敏感性= =真陽(yáng)性真陽(yáng)性/ /（真陽(yáng)性（真陽(yáng)性+ +假陰性）假陰性）100%100%現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十七頁(yè)，共41頁(yè)表表 免疫學(xué)測(cè)定方法敏感性比較免疫學(xué)測(cè)定方法敏感性比較測(cè)定方法測(cè)定方法敏感性（每升）敏感性（每升）單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)1 12mg2mg雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)1mg1mg火箭電泳火箭電泳0.5mg0.5mg對(duì)流電泳對(duì)流電泳0.1mg0.1mg免疫電泳免疫電泳5 510mg10mg凝集試驗(yàn)?zāi)囼?yàn)1g1g被動(dòng)血凝試驗(yàn)被動(dòng)血凝試驗(yàn)1g1g血凝抑制試驗(yàn)血凝抑制試驗(yàn)0.1g0.1g補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)0.1g0.1g放射免疫分析法放射免疫分析法1pg1pg酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)1ng1ng定量免疫熒光分析定量免疫熒光分析1pg1pg現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十八頁(yè)，共41頁(yè)臨床應(yīng)用臨床應(yīng)用