藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義

1、藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第四章第四章藥物定量分析樣品與分析方法驗(yàn)證藥物定量分析樣品與分析方法驗(yàn)證藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第一節(jié)定量分析樣品的前處理第一節(jié)定量分析樣品的前處理u一、概述一、概述u研究對(duì)象：含金屬或含鹵素，硫，磷，研究對(duì)象：含金屬或含鹵素，硫，磷，硒等特殊元素藥物分析前處理。硒等特殊元素藥物分析前處理。u二、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法二、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法u三、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法三、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義 一、概述一、概述原料原料: :不經(jīng)特殊處理直接測(cè)定不經(jīng)特殊處理直接測(cè)定原料原料: :經(jīng)有機(jī)破壞后測(cè)定經(jīng)有機(jī)破壞后測(cè)定 制劑制

2、劑: :排除處方中干擾組分排除處方中干擾組分藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義二、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法二、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法（一）直接測(cè)定法（一）直接測(cè)定法1.1.配位滴定法配位滴定法2.2.氧化還原法氧化還原法（二）經(jīng)水解后測(cè)定法（二）經(jīng)水解后測(cè)定法1.1.堿水解后測(cè)定法堿水解后測(cè)定法2.2.酸水解后測(cè)定法酸水解后測(cè)定法（三）經(jīng)還原分解后測(cè)定（三）經(jīng)還原分解后測(cè)定藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義二、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法二、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法（一）直接測(cè)定法（一）直接測(cè)定法1.1.配位滴定法配位滴定法 葡萄糖酸鈣葡萄糖酸鈣 【含量測(cè)定含量測(cè)定】 取本品取本品0.5g0.5g，精密

3、稱定，加水，精密稱定，加水100ml100ml，微熱使溶解，加氫氧化鈉試液，微熱使溶解，加氫氧化鈉試液 15ml15ml與與鈣紫紅素指示劑鈣紫紅素指示劑0.1g0.1g，用乙二胺四醋酸二鈉滴，用乙二胺四醋酸二鈉滴定液定液(0.05mol/L) (0.05mol/L) 滴定至溶液自紫滴定至溶液自紫 色轉(zhuǎn)變?yōu)樯D(zhuǎn)變?yōu)榧兯{(lán)色。每純藍(lán)色。每1ml1ml乙二胺四醋酸二鈉滴定液乙二胺四醋酸二鈉滴定液（0.05mol/L 0.05mol/L ）相當(dāng)于）相當(dāng)于22.42mg 22.42mg 的的 C12H22CaO14.H2OC12H22CaO14.H2O。 藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義二、不經(jīng)有機(jī)破壞

4、的分析方法二、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法（一）直接測(cè)定法（一）直接測(cè)定法2.2.氧化還原法氧化還原法 葡萄糖酸銻鈉葡萄糖酸銻鈉 【含量測(cè)定含量測(cè)定】 取本品約取本品約0.3g0.3g，精密稱定，置，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加水具塞錐形瓶中，加水100ml 100ml 、鹽酸、鹽酸15 ml15 ml與碘與碘化鉀試液化鉀試液10ml10ml，密塞，振搖后，在暗處?kù)o置，密塞，振搖后，在暗處?kù)o置1010分鐘，用硫代硫酸鈉滴定液分鐘，用硫代硫酸鈉滴定液(0.1mo l/L)(0.1mo l/L)滴定，滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)

5、果用空白消失，并將滴定的結(jié)果用空白 試驗(yàn)校正。每試驗(yàn)校正。每1ml1ml硫代硫酸鈉滴定液硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)(0.1mol/L)相當(dāng)于相當(dāng)于6.088mg 6.088mg 的的SbSb。 藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義二、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法二、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法（二）經(jīng)水解后測(cè)定法（二）經(jīng)水解后測(cè)定法 1.1.堿水解后測(cè)定法堿水解后測(cè)定法 三氯叔丁醇三氯叔丁醇 【含量測(cè)定含量測(cè)定】 取本品約取本品約0.1g0.1g，精密稱定，加乙醇，精密稱定，加乙醇5ml 5ml ，溶解后，加溶解后，加2020氫氧化鈉氫氧化鈉 溶液溶液5ml 5ml ，加熱回流，加熱回流1515分

6、鐘，分鐘，放冷至室溫，加水放冷至室溫，加水20ml20ml與硝酸與硝酸5ml 5ml ，精密加硝酸銀滴，精密加硝酸銀滴定液定液 (0.1mol/L)30ml(0.1mol/L)30ml，再加鄰苯二甲酸二丁酯，再加鄰苯二甲酸二丁酯5ml 5ml ，密塞，強(qiáng)力振搖后，加硫酸鐵銨指示液密塞，強(qiáng)力振搖后，加硫酸鐵銨指示液 2ml 2ml ，用硫氰，用硫氰酸銨滴定液酸銨滴定液(0.1mol/L)(0.1mol/L)滴定，并將滴定的結(jié)果用空白滴定，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每試驗(yàn)校正。每1ml1ml的的 硝酸銀滴定液硝酸銀滴定液(0.1mol/L)(0.1mol/L)相當(dāng)于相當(dāng)于6.216mg 6.2

7、16mg 的的C4H7Cl3O.1/2H2OC4H7Cl3O.1/2H2O。 藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義二、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法二、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法（二）經(jīng)水解后測(cè)定法（二）經(jīng)水解后測(cè)定法2.2.酸水解后測(cè)定法酸水解后測(cè)定法 硬脂酸鎂硬脂酸鎂 【含量測(cè)定含量測(cè)定】 取本品約取本品約1g1g，精密稱定，精密，精密稱定，精密加硫酸滴定液加硫酸滴定液(0.05mol/L)50ml (0.05mol/L)50ml ，煮，煮 沸至油沸至油層澄清，繼續(xù)加熱層澄清，繼續(xù)加熱1010分鐘，放冷至室溫，加甲分鐘，放冷至室溫，加甲基橙指示液基橙指示液1 1 2 2 滴，用氫氧化鈉滴，用氫氧化鈉 滴

8、定液滴定液(0.1mol/L)(0.1mol/L)滴定。每滴定。每1ml1ml硫酸滴定液硫酸滴定液(0.05mol/L) (0.05mol/L) 相當(dāng)于相當(dāng)于2.016mg 2.016mg 的的MgOMgO。 藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義二、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法二、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法（三）經(jīng)還原分解后測(cè)定法（三）經(jīng)還原分解后測(cè)定法1.1.堿性還原后測(cè)定堿性還原后測(cè)定2.2.酸性還原后測(cè)定酸性還原后測(cè)定3.3.利用可游離的金屬離子的氧化性測(cè)定利用可游離的金屬離子的氧化性測(cè)定含量含量藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義三、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法三、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法一、濕法破壞一、濕法破

9、壞二、干法破壞二、干法破壞1. 1. 高溫?zé)胱品ǜ邷責(zé)胱品?. 2. 氧瓶燃燒法氧瓶燃燒法藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義三、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法三、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法一、濕法破壞一、濕法破壞 凱氏定氮法凱氏定氮法（Kjeldahl nitrogen determination)Kjeldahl nitrogen determination)適用：含氨基或酰胺結(jié)構(gòu)的藥物適用：含氨基或酰胺結(jié)構(gòu)的藥物原理原理: : 含氮藥物與硫酸共熱含氮藥物與硫酸共熱, ,將有機(jī)氮轉(zhuǎn)變成將有機(jī)氮轉(zhuǎn)變成無(wú)機(jī)氨無(wú)機(jī)氨, ,然后測(cè)定氮的含量。然后測(cè)定氮的含量。 藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義三、經(jīng)有機(jī)破壞的分析

10、方法三、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法 一、濕法破壞一、濕法破壞 凱氏定氮法凱氏定氮法 雙氯非那胺雙氯非那胺 【含量測(cè)定含量測(cè)定】 取本品約取本品約0.3g0.3g，精密稱定，精密稱定，照氮測(cè)定法（附錄照氮測(cè)定法（附錄 D D 第一法）測(cè)定。第一法）測(cè)定。 每每1ml1ml硫酸滴定液硫酸滴定液(0.05mol/L) (0.05mol/L) 相當(dāng)于相當(dāng)于15.26mg 15.26mg 的的C6H6Cl2N2O4S2 C6H6Cl2N2O4S2 。 藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義三、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法三、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法 一、干法破壞一、干法破壞 氧瓶燃燒法氧瓶燃燒法適用適用含鹵素或硫、磷等元素的

11、有機(jī)藥物的鑒別、含鹵素或硫、磷等元素的有機(jī)藥物的鑒別、限度檢查或含量測(cè)定及藥物中雜質(zhì)硒的檢查。限度檢查或含量測(cè)定及藥物中雜質(zhì)硒的檢查。 藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義三、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法三、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法 一、干法破壞一、干法破壞 氧瓶燃燒法氧瓶燃燒法碘苯酯碘苯酯 【含量測(cè)定含量測(cè)定】 取本品約取本品約20mg20mg，精密稱定，照氧瓶燃燒法（附錄，精密稱定，照氧瓶燃燒法（附錄 C C）進(jìn)行有機(jī)破）進(jìn)行有機(jī)破 壞，用氫氧化鈉試液壞，用氫氧化鈉試液2ml 2ml 與水與水10ml10ml為吸收液，為吸收液，俟吸收完全后，加溴醋酸溶液（取醋酸鉀俟吸收完全后，加溴醋酸溶液（取醋酸鉀 1

12、0g 10g ，加冰醋酸適量，加冰醋酸適量使溶解，加溴使溶解，加溴0.4ml 0.4ml ，再加冰醋酸使成，再加冰醋酸使成100ml100ml）10ml10ml，密塞，振，密塞，振搖，搖， 放置數(shù)分鐘，加甲酸約放置數(shù)分鐘，加甲酸約1ml 1ml ，用水洗滌瓶口，并通入空氣，用水洗滌瓶口，并通入空氣流約流約3 3 5 5 分鐘以除去剩余的分鐘以除去剩余的 溴蒸氣，加碘化鉀溴蒸氣，加碘化鉀2g2g，密塞，搖，密塞，搖勻，用硫代硫酸鈉滴定液勻，用硫代硫酸鈉滴定液(0.02mol/L) (0.02mol/L) 滴定，至近終點(diǎn)滴定，至近終點(diǎn) 時(shí)，加時(shí)，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失淀粉指示液，繼續(xù)滴定

13、至藍(lán)色消失, ,并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每校正。每1ml1ml硫代硫代 硫酸鈉滴定液硫酸鈉滴定液(0.02mol/L) (0.02mol/L) 相當(dāng)于相當(dāng)于1.388mg 1.388mg 的的C19H29IO2C19H29IO2。 藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第二節(jié)第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn)定量分析方法的特點(diǎn)一、容量分析法一、容量分析法 （1 1） 適用于化學(xué)原料藥的含量測(cè)定適用于化學(xué)原料藥的含量測(cè)定 （2 2）容量分析法的有關(guān)計(jì)算）容量分析法的有關(guān)計(jì)算 （3 3）含量測(cè)定）含量測(cè)定二、光譜分析法二、光譜分析法三、色譜分析法三、色譜分析法 藥物定量分析樣品和

14、分析方式驗(yàn)證講義第二節(jié)第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn)定量分析方法的特點(diǎn)一、容量分析法的特點(diǎn)一、容量分析法的特點(diǎn) 裝置簡(jiǎn)單，操作簡(jiǎn)便、快速，方法耐用裝置簡(jiǎn)單，操作簡(jiǎn)便、快速，方法耐用性高，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確（性高，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確（RSDRSD0.2%0.2%）；專）；專屬性差，適用于含量較高的樣品分析，屬性差，適用于含量較高的樣品分析，常用于化學(xué)原料藥的含量測(cè)定。常用于化學(xué)原料藥的含量測(cè)定。 掌握含量測(cè)定的計(jì)算公式和方法。掌握含量測(cè)定的計(jì)算公式和方法。藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第二節(jié)第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn)定量分析方法的特點(diǎn)二、光譜分析法二、光譜分析法（1 1）紫外分光光度法）紫外分光光度法特點(diǎn)：

15、特點(diǎn)： 1. 1.靈敏度高，靈敏度高，1010-4 -4 -10-10-7-7g/mlg/ml。 2. 2.準(zhǔn)確度高，準(zhǔn)確度高，RSD%RSD%：2%-5%2%-5%。 3. 3.儀器價(jià)廉物美，操作簡(jiǎn)便，易于普及。儀器價(jià)廉物美，操作簡(jiǎn)便，易于普及。 4. 4.應(yīng)用廣泛。應(yīng)用廣泛。藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第二節(jié)第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn)定量分析方法的特點(diǎn)二、光譜分析法二、光譜分析法（1 1）紫外分光光度法）紫外分光光度法 含量測(cè)定方法含量測(cè)定方法 1. 1.對(duì)照品比較法對(duì)照品比較法 2. 2.吸收系數(shù)法吸收系數(shù)法 3. 3.計(jì)算分光分度法。計(jì)算分光分度法。 4. 4.比色法比色法藥物定

16、量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第二節(jié)第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn)定量分析方法的特點(diǎn)二、光譜分析法二、光譜分析法（2 2）熒光分析法）熒光分析法 特點(diǎn)特點(diǎn)1.1.靈敏度高，靈敏度高，1010-10 -10 10 10-12-12g/mlg/ml。2.2.在低濃度溶液中進(jìn)行。在低濃度溶液中進(jìn)行。3.3.在測(cè)定供試品溶液時(shí)在測(cè)定供試品溶液時(shí), ,用基準(zhǔn)溶液代替對(duì)照品溶液校正用基準(zhǔn)溶液代替對(duì)照品溶液校正儀器的靈敏度。儀器的靈敏度。4.4.用熒光衍生試劑用熒光衍生試劑, ,提高分析方法的靈敏度和選擇性。提高分析方法的靈敏度和選擇性。 藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第二節(jié)第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn)定量分析

17、方法的特點(diǎn)三、色譜分析法三、色譜分析法 （一）高效液相色譜法（一）高效液相色譜法特點(diǎn)特點(diǎn) 高靈敏度（高靈敏度（ 1010-12 -12 -10-10-15-15g/mlg/ml ）、高選擇性、高效）、高選擇性、高效能、高速度及應(yīng)用廣泛。能、高速度及應(yīng)用廣泛。 藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第二節(jié)第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn)定量分析方法的特點(diǎn)三、色譜分析法三、色譜分析法 （一）高效液相色譜法（一）高效液相色譜法系統(tǒng)適用性系統(tǒng)適用性（1 1）理論板數(shù)）理論板數(shù) （2 2）分離度）分離度 （3 3）重復(fù)性）重復(fù)性 （4 4）拖尾因）拖尾因子子含量測(cè)定方法含量測(cè)定方法（1 1）內(nèi)標(biāo)法）內(nèi)標(biāo)法 （2

18、2）外標(biāo)法）外標(biāo)法 藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第三節(jié)第三節(jié) 藥品分析方法的驗(yàn)證藥品分析方法的驗(yàn)證 目目 的的 證明建立和采用的方法適合相應(yīng)檢測(cè)的要求。證明建立和采用的方法適合相應(yīng)檢測(cè)的要求。 內(nèi)內(nèi) 容容 準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度 精密度，專屬性，檢測(cè)限，定量限，線性，線性范圍精密度，專屬性，檢測(cè)限，定量限，線性，線性范圍和耐用性和耐用性 藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第三節(jié)第三節(jié) 藥品分析方法的驗(yàn)證藥品分析方法的驗(yàn)證一、準(zhǔn)確度（一、準(zhǔn)確度（Accuracy)Accuracy) 指方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參指方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，用回收率表示。考值接近的程度，用回收率表示。藥

19、物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第三節(jié)第三節(jié) 藥品分析方法的驗(yàn)證藥品分析方法的驗(yàn)證二、精密度（二、精密度（Precision)Precision) 指平行測(cè)定的各測(cè)量值（實(shí)驗(yàn)指平行測(cè)定的各測(cè)量值（實(shí)驗(yàn)值）之間互相接近的程度。值）之間互相接近的程度。藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第三節(jié)第三節(jié) 藥品分析方法的驗(yàn)證藥品分析方法的驗(yàn)證三、專屬性三、專屬性 指其它組分可能存在下，采用指其它組分可能存在下，采用的方法能準(zhǔn)確測(cè)定出被測(cè)物的特的方法能準(zhǔn)確測(cè)定出被測(cè)物的特性。性。藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第三節(jié)第三節(jié) 藥品分析方法的驗(yàn)證藥品分析方法的驗(yàn)證四、檢測(cè)限（四、檢測(cè)限（Limit of de

20、tection, Limit of detection, LOD)LOD) 指試樣中被測(cè)物能被檢測(cè)出的最指試樣中被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低濃度或量。低濃度或量。藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第三節(jié)第三節(jié) 藥品分析方法的驗(yàn)證藥品分析方法的驗(yàn)證五、定量限（五、定量限（Limit of Limit of quantitation, LOQ)quantitation, LOQ) 指試樣中被測(cè)物能被定量測(cè)定指試樣中被測(cè)物能被定量測(cè)定的最低量。的最低量。藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第三節(jié)第三節(jié) 藥品分析方法的驗(yàn)證藥品分析方法的驗(yàn)證六、線六、線 性性 指在一定范圍內(nèi)，試樣濃度與指在一定范圍內(nèi)，試樣濃度

21、與響應(yīng)值呈正比。響應(yīng)值呈正比。 藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第三節(jié)第三節(jié) 藥品分析方法的驗(yàn)證藥品分析方法的驗(yàn)證七、范七、范 圍圍 指一種分析方法的精密度，準(zhǔn)指一種分析方法的精密度，準(zhǔn)確度都符合要求的試驗(yàn)結(jié)果成線確度都符合要求的試驗(yàn)結(jié)果成線性時(shí)供試物濃度的變化范圍。性時(shí)供試物濃度的變化范圍。藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第三節(jié)第三節(jié) 藥品分析方法的驗(yàn)證藥品分析方法的驗(yàn)證 八、耐八、耐 用用 性性 指在測(cè)定條件有小的變動(dòng)時(shí)，指在測(cè)定條件有小的變動(dòng)時(shí)，測(cè)定結(jié)果不受影響的承受程度，測(cè)定結(jié)果不受影響的承受程度，為于常規(guī)檢驗(yàn)提供依據(jù)。為于常規(guī)檢驗(yàn)提供依據(jù)。藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義藥品分

22、析方法驗(yàn)證內(nèi)容藥品分析方法驗(yàn)證內(nèi)容準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度耐用性耐用性精密度精密度專屬性專屬性線性與線性范圍線性與線性范圍檢測(cè)限與定量限檢測(cè)限與定量限Text藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第四節(jié)第四節(jié) 體內(nèi)藥物分析簡(jiǎn)介體內(nèi)藥物分析簡(jiǎn)介 重要性：重要性： 為了達(dá)到藥物在臨床上的使用安全、合為了達(dá)到藥物在臨床上的使用安全、合理和有效，人們?cè)絹?lái)越要求了解和提供理和有效，人們?cè)絹?lái)越要求了解和提供藥物在體內(nèi)的更多信息，即需要對(duì)藥物藥物在體內(nèi)的更多信息，即需要對(duì)藥物及其制劑的體內(nèi)吸收、分布、代謝和排及其制劑的體內(nèi)吸收、分布、代謝和排泄過(guò)程、作用機(jī)制及藥物效應(yīng)進(jìn)行研究，泄過(guò)程、作用機(jī)制及藥物效應(yīng)進(jìn)行研究，因而促使藥

23、物動(dòng)力學(xué)、生物藥劑學(xué)、臨因而促使藥物動(dòng)力學(xué)、生物藥劑學(xué)、臨床藥理學(xué)等一些新興邊緣學(xué)科的發(fā)展與床藥理學(xué)等一些新興邊緣學(xué)科的發(fā)展與建立。建立。 藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第四節(jié)第四節(jié) 體內(nèi)藥物分析簡(jiǎn)介體內(nèi)藥物分析簡(jiǎn)介 定義：定義： 體內(nèi)藥物分析是通過(guò)分析手段體內(nèi)藥物分析是通過(guò)分析手段了解藥物在體內(nèi)數(shù)量與質(zhì)量的變了解藥物在體內(nèi)數(shù)量與質(zhì)量的變化，獲得各種藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)，化，獲得各種藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)，代謝的方式和途徑等信息。代謝的方式和途徑等信息。 藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第四節(jié)第四節(jié) 體內(nèi)藥物分析簡(jiǎn)介體內(nèi)藥物分析簡(jiǎn)介任務(wù)：任務(wù)： 1 1）進(jìn)行體內(nèi)各種體液、組織，器官和排泄物中藥物及）進(jìn)

24、行體內(nèi)各種體液、組織，器官和排泄物中藥物及代謝物的分離測(cè)定。代謝物的分離測(cè)定。 2 2）進(jìn)行新測(cè)定方法的研究、開(kāi)發(fā)，以供臨床常規(guī)測(cè)定）進(jìn)行新測(cè)定方法的研究、開(kāi)發(fā)，以供臨床常規(guī)測(cè)定之用。之用。 3 3）進(jìn)行分析質(zhì)量管理工作，提高測(cè)定技術(shù)和效率，以）進(jìn)行分析質(zhì)量管理工作，提高測(cè)定技術(shù)和效率，以便獲得迅速，準(zhǔn)確，可靠的測(cè)定結(jié)果。便獲得迅速，準(zhǔn)確，可靠的測(cè)定結(jié)果。 4 4）進(jìn)行方法學(xué)研究，及時(shí)為相關(guān)學(xué)科的研究提供合理）進(jìn)行方法學(xué)研究，及時(shí)為相關(guān)學(xué)科的研究提供合理的最佳分析條件與方法，估計(jì)、評(píng)定各種方法能達(dá)到的最佳分析條件與方法，估計(jì)、評(píng)定各種方法能達(dá)到的靈敏、專屬和準(zhǔn)確的程度。的靈敏、專屬和準(zhǔn)確的程度

25、。 5 5）參與相關(guān)學(xué)科研究中對(duì)獲得的分析結(jié)果的闡明工作，）參與相關(guān)學(xué)科研究中對(duì)獲得的分析結(jié)果的闡明工作，使所得的測(cè)定數(shù)據(jù)更有助于說(shuō)明問(wèn)題。使所得的測(cè)定數(shù)據(jù)更有助于說(shuō)明問(wèn)題。 藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第四節(jié)第四節(jié) 生物樣品分析方法的生物樣品分析方法的基本要求基本要求 一、樣品的種類一、樣品的種類 凡是體內(nèi)藥物到達(dá)之處，如各種體液，凡是體內(nèi)藥物到達(dá)之處，如各種體液，器官組織和排泄物等，都是體內(nèi)藥物分器官組織和排泄物等，都是體內(nèi)藥物分析的對(duì)象。血液是最常用的生物樣品。析的對(duì)象。血液是最常用的生物樣品。 藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第四節(jié)第四節(jié) 生物樣品分析方法的生物樣品分析方法的基

26、本要求基本要求 一、樣品的種類一、樣品的種類 ( (一一) )血液血液 (1)(1)血漿血漿 全血中加入抗凝劑全血中加入抗凝劑( (肝素、枸櫞酸、草酸肝素、枸櫞酸、草酸鹽、鹽、EDTAEDTA等），經(jīng)離心后取上清液。等），經(jīng)離心后取上清液。 （2 2）血清）血清 全血不加抗凝劑，由血液中纖維蛋白原全血不加抗凝劑，由血液中纖維蛋白原等影響下等影響下, ,引起血液凝結(jié)而析出的澄清黃色液體引起血液凝結(jié)而析出的澄清黃色液體, ,離心離心后取上清液。后取上清液。 （3 3）全血）全血 加入抗凝劑混勻，以防凝血。加入抗凝劑混勻，以防凝血。 藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第四節(jié)第四節(jié) 生物樣品分析方法的

27、生物樣品分析方法的 基本要求基本要求 一、樣品的種類一、樣品的種類 ( (二二) )尿樣尿樣 尿藥測(cè)定主要用于藥物劑量回收，藥物腎清除率、尿藥測(cè)定主要用于藥物劑量回收，藥物腎清除率、藥物體內(nèi)代謝及藥物體內(nèi)代謝及 生物利用度研究，也可用于乙酰化代生物利用度研究，也可用于乙?；x快、慢型測(cè)定等。謝快、慢型測(cè)定等。 尿樣濃度與血樣濃度相關(guān)性差。尿樣濃度與血樣濃度相關(guān)性差。 藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第四節(jié)第四節(jié) 生物樣品分析方法的生物樣品分析方法的 基本要求基本要求 一、樣品的種類一、樣品的種類 ( (三三) )唾液唾液 唾液中的藥物濃度通常與血液濃度相關(guān)，可用唾液唾液中的藥物濃度通常與血

28、液濃度相關(guān)，可用唾液中的藥物濃度來(lái)反應(yīng)血漿濃度。中的藥物濃度來(lái)反應(yīng)血漿濃度。 唾液的采集一般是在漱口后唾液的采集一般是在漱口后1515分鐘，收集，離心后，分鐘，收集，離心后，取上清液。取上清液。藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第四節(jié)第四節(jié) 生物樣品分析方法的生物樣品分析方法的 基本要求基本要求 二、樣品的儲(chǔ)存二、樣品的儲(chǔ)存 血漿和血清都必須在采血后即時(shí)分離。否則，血凝血漿和血清都必須在采血后即時(shí)分離。否則，血凝后冰凍保存，則因冰凍時(shí)引起細(xì)胞溶解，而阻礙血漿后冰凍保存，則因冰凍時(shí)引起細(xì)胞溶解，而阻礙血漿或血清的分出，同時(shí)因溶血而影響藥物濃度變化?；蜓宓姆殖?，同時(shí)因溶血而影響藥物濃度變化。 尿

29、樣宜立即測(cè)定，否則應(yīng)加入防腐劑或低溫冷藏。尿樣宜立即測(cè)定，否則應(yīng)加入防腐劑或低溫冷藏。藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第四節(jié)第四節(jié) 生物樣品分析方法的生物樣品分析方法的 基本要求基本要求 三、生物樣品分析前處理技術(shù)、生物樣品分析前處理技術(shù) 微量藥物存在于大量生物介質(zhì)中，若直接進(jìn)微量藥物存在于大量生物介質(zhì)中，若直接進(jìn)行測(cè)定，內(nèi)源性物質(zhì)可能干擾，藥物濃度太低行測(cè)定，內(nèi)源性物質(zhì)可能干擾，藥物濃度太低將會(huì)達(dá)不到儀器靈敏度要求。因此，生物樣品將會(huì)達(dá)不到儀器靈敏度要求。因此，生物樣品中的藥物必須經(jīng)過(guò)分離、純化與濃集，必要時(shí)中的藥物必須經(jīng)過(guò)分離、純化與濃集，必要時(shí)還需對(duì)待測(cè)組分進(jìn)行化學(xué)改性處理，從而為最還

30、需對(duì)待測(cè)組分進(jìn)行化學(xué)改性處理，從而為最后測(cè)定創(chuàng)造良好的條件。后測(cè)定創(chuàng)造良好的條件。 藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第四節(jié)第四節(jié) 生物樣品分析方法的生物樣品分析方法的 基本要求基本要求 三、生物樣品分析前處理技術(shù)三、生物樣品分析前處理技術(shù) ( (一一) ) 蛋白質(zhì)的去除蛋白質(zhì)的去除 （二）綴合物的水解（二）綴合物的水解 （三）有機(jī)破壞（三）有機(jī)破壞 （四）分離、純化和濃集（四）分離、純化和濃集 （五）化學(xué)衍生化法（五）化學(xué)衍生化法 藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第四節(jié)第四節(jié) 生物樣品分析方法的生物樣品分析方法的 基本要求基本要求( (一一) ) 蛋白質(zhì)的去除蛋白質(zhì)的去除目的：目的：1 1

31、）使于蛋白質(zhì)結(jié)合的藥物釋放出來(lái)，以便準(zhǔn)確地測(cè)定藥）使于蛋白質(zhì)結(jié)合的藥物釋放出來(lái)，以便準(zhǔn)確地測(cè)定藥物及其代謝產(chǎn)物的濃度。物及其代謝產(chǎn)物的濃度。2 2）減免后續(xù)溶劑萃取過(guò)程中乳化現(xiàn)象）減免后續(xù)溶劑萃取過(guò)程中乳化現(xiàn)象3 3）保護(hù)儀器性能）保護(hù)儀器性能 藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第四節(jié)第四節(jié) 生物樣品分析方法的生物樣品分析方法的 基本要求基本要求( (一一) ) 蛋白質(zhì)的去除方法蛋白質(zhì)的去除方法1 1）加入與水混溶的有機(jī)溶劑）加入與水混溶的有機(jī)溶劑 可使蛋白質(zhì)分子內(nèi)及分子間的氫鍵發(fā)生變化而可使蛋白質(zhì)分子內(nèi)及分子間的氫鍵發(fā)生變化而使蛋使蛋 白質(zhì)凝聚，進(jìn)而使與之結(jié)合的藥物釋放出來(lái)。白質(zhì)凝聚，進(jìn)而使

32、與之結(jié)合的藥物釋放出來(lái)。藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第四節(jié)第四節(jié) 生物樣品分析方法的生物樣品分析方法的 基本要求基本要求2 2）加入中性鹽）加入中性鹽 可使溶液的離子強(qiáng)度發(fā)生變化，能使蛋白可使溶液的離子強(qiáng)度發(fā)生變化，能使蛋白質(zhì)脫水后沉淀下來(lái)，離心后可獲得含有藥物質(zhì)脫水后沉淀下來(lái)，離心后可獲得含有藥物及其代謝物的上層清液。及其代謝物的上層清液。藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第四節(jié)第四節(jié) 生物樣品分析方法的生物樣品分析方法的 基本要求基本要求3 3）加入強(qiáng)酸）加入強(qiáng)酸 使蛋白質(zhì)分子的陽(yáng)離子形成不溶性鹽而沉使蛋白質(zhì)分子的陽(yáng)離子形成不溶性鹽而沉淀，條件是淀，條件是pHpH值要低于蛋白質(zhì)的等電

33、點(diǎn)。值要低于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第四節(jié)第四節(jié) 生物樣品分析方法的生物樣品分析方法的 基本要求基本要求4 4）加入含鋅鹽及銅鹽的沉淀劑）加入含鋅鹽及銅鹽的沉淀劑 當(dāng)當(dāng)pHpH值高于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)時(shí)，蛋白質(zhì)分子值高于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)時(shí)，蛋白質(zhì)分子中帶負(fù)電荷的羧基與金屬離子形成不溶性的中帶負(fù)電荷的羧基與金屬離子形成不溶性的鹽而沉淀。鹽而沉淀。藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第四節(jié)第四節(jié) 生物樣品分析方法的生物樣品分析方法的 基本要求基本要求）酶解法）酶解法 最常用蛋白水解酶：枯草菌溶素最常用蛋白水解酶：枯草菌溶素可使蛋白質(zhì)分解而放出藥物?？墒沟鞍踪|(zhì)分解而放出藥物。 藥物

34、定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第四節(jié)第四節(jié) 生物樣品分析方法的生物樣品分析方法的 基本要求基本要求( (二二) ) 綴合物的水解綴合物的水解 尿中藥物多呈綴合狀態(tài)。一些含尿中藥物多呈綴合狀態(tài)。一些含-OH-OH，- -COOHCOOH，-NH-NH3 3，-SH-SH的藥物可與內(nèi)源性物質(zhì)葡的藥物可與內(nèi)源性物質(zhì)葡萄糖酸或硫酸形成葡糖酸苷或硫酸綴合物。萄糖酸或硫酸形成葡糖酸苷或硫酸綴合物。1 1）酸水解）酸水解2 2）酶水解）酶水解 藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第四節(jié)第四節(jié) 生物樣品分析方法的生物樣品分析方法的基本要求基本要求( (三三) ) 有機(jī)破壞有機(jī)破壞 尿中藥物多呈綴合狀態(tài)。一些含尿

35、中藥物多呈綴合狀態(tài)。一些含-OH-OH，- -COOHCOOH，-NH-NH3 3，-SH-SH的藥物可與內(nèi)源性物質(zhì)葡的藥物可與內(nèi)源性物質(zhì)葡萄糖酸或硫酸形成葡糖酸苷或硫酸綴合物。萄糖酸或硫酸形成葡糖酸苷或硫酸綴合物。1 1）酸水解）酸水解2 2）酶水解）酶水解 藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第四節(jié)第四節(jié) 生物樣品分析方法的生物樣品分析方法的 基本要求基本要求( (四四) )分離、純化與濃集分離、純化與濃集1 1、生物樣本的分離與純化、生物樣本的分離與純化（1 1）液）液- -液萃?。ㄒ狠腿。╨iquid-liquid liquid-liquid extraction,LLEextracti

36、on,LLE）（2 2）液）液- -固萃取（固萃?。╨iquid-solid,LSEliquid-solid,LSE） 藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第四節(jié)第四節(jié) 生物樣品分析方法的生物樣品分析方法的基本要求基本要求（1 1）液）液- -液萃?。ㄒ狠腿。╨iquid-liquid extraction,LLEliquid-liquid extraction,LLE）親脂性的藥物與強(qiáng)極性的內(nèi)源性水溶性物質(zhì)，通親脂性的藥物與強(qiáng)極性的內(nèi)源性水溶性物質(zhì)，通過(guò)有機(jī)溶劑可以除去大部分干擾性物質(zhì)。過(guò)有機(jī)溶劑可以除去大部分干擾性物質(zhì)。注意：注意：1)1)所用溶劑對(duì)被測(cè)組分溶解度大所用溶劑對(duì)被測(cè)組分溶解度大

37、, ,與水不混溶與水不混溶, ,無(wú)毒無(wú)毒, ,化學(xué)穩(wěn)定化學(xué)穩(wěn)定, ,不易乳化。不易乳化。常用：乙醚，叔丁基甲醚，氯仿，乙酸乙酯等常用：乙醚，叔丁基甲醚，氯仿，乙酸乙酯等2 2）有機(jī)相：水相）有機(jī)相：水相=1=1：1 1（2 2：1 1）3 3）水相最佳）水相最佳pHpH值的選擇與藥物的值的選擇與藥物的pKapKa有關(guān)有關(guān)藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第四節(jié)第四節(jié) 生物樣品分析方法的生物樣品分析方法的基本要求基本要求(2(2）液）液- -固萃?。ü梯腿。↙SELSE）優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：1)1)引入雜質(zhì)少引入雜質(zhì)少 2 2）無(wú)乳化現(xiàn)象）無(wú)乳化現(xiàn)象3 3）萃取效率高，樣品用量少）萃取效率高，樣品用量少

38、4 4）水作溶劑，安全性高）水作溶劑，安全性高5 5）速度快，室溫下操作）速度快，室溫下操作缺點(diǎn)：成本高，重現(xiàn)性稍差缺點(diǎn)：成本高，重現(xiàn)性稍差分類：親水性，疏水性分類：親水性，疏水性藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第四節(jié)第四節(jié) 生物樣品分析方法的生物樣品分析方法的基本要求基本要求( (）生物樣品在待測(cè)組分中的濃集）生物樣品在待測(cè)組分中的濃集生物樣品在萃取過(guò)程中，微量待測(cè)組生物樣品在萃取過(guò)程中，微量待測(cè)組分往往分布于較大體積的萃取溶劑中，分往往分布于較大體積的萃取溶劑中，不能直接供和測(cè)定。不能直接供和測(cè)定。藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第四節(jié)第四節(jié) 生物樣品分析方法的生物樣品分析方法的基本要

39、求基本要求( (五）化學(xué)衍生化法五）化學(xué)衍生化法1 1）使樣品中的藥物轉(zhuǎn)化成具有可被分離的）使樣品中的藥物轉(zhuǎn)化成具有可被分離的性質(zhì)性質(zhì)2 2）提高檢測(cè)靈敏度）提高檢測(cè)靈敏度3 3）增強(qiáng)藥物的穩(wěn)定性）增強(qiáng)藥物的穩(wěn)定性4 4）提高對(duì)光學(xué)異構(gòu)體的分離能力）提高對(duì)光學(xué)異構(gòu)體的分離能力藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第四節(jié)第四節(jié) 生物樣品分析方法的生物樣品分析方法的 基本要求基本要求 三、生物樣品分析方法的驗(yàn)證三、生物樣品分析方法的驗(yàn)證 ( (一一) ) 特異性特異性 （二）標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍（二）標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍 （三）精密度與準(zhǔn)確度（三）精密度與準(zhǔn)確度 （四）靈敏度（四）靈敏度 （五）穩(wěn)定性（五

40、）穩(wěn)定性 藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第四節(jié)第四節(jié) 生物樣品分析方法的生物樣品分析方法的 基本要求基本要求三、生物樣品分析方法的驗(yàn)證三、生物樣品分析方法的驗(yàn)證 特異性特異性穩(wěn)定性穩(wěn)定性精密度與準(zhǔn)確度精密度與準(zhǔn)確度標(biāo)準(zhǔn)曲線標(biāo)準(zhǔn)曲線靈敏度靈敏度線性范圍線性范圍Text藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第四節(jié)第四節(jié) 生物樣品分析方法的生物樣品分析方法的基本要求基本要求 三、生物樣品分析方法的驗(yàn)證三、生物樣品分析方法的驗(yàn)證 ( (一一) ) 特異性特異性1 1）空白生物樣本色譜圖）空白生物樣本色譜圖2 2）空白樣品標(biāo)樣）空白樣品標(biāo)樣3 3）服藥后生物樣本色譜圖）服藥后生物樣本色譜圖 藥物定量分析

41、樣品和分析方式驗(yàn)證講義第四節(jié)第四節(jié) 生物樣品分析方法的生物樣品分析方法的基本要求基本要求 三、生物樣品分析方法的驗(yàn)證三、生物樣品分析方法的驗(yàn)證 ( (三三) ) 精密度與準(zhǔn)確度精密度與準(zhǔn)確度1 1）精密度）精密度日內(nèi)精密度（日內(nèi)精密度（intra-day):intra-day):同一天內(nèi)，多次同一天內(nèi)，多次測(cè)量的精密度測(cè)量的精密度日間精密度日間精密度 (inter-day)(inter-day)不同時(shí)間內(nèi)測(cè)不同時(shí)間內(nèi)測(cè)定結(jié)果的變異性定結(jié)果的變異性藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第四節(jié)第四節(jié) 生物樣品分析方法的生物樣品分析方法的基本要求基本要求 三、生物樣品分析方法的驗(yàn)證三、生物樣品分析方法的

42、驗(yàn)證 ( (三三) ) 精密度與準(zhǔn)確度精密度與準(zhǔn)確度1 1）準(zhǔn)確度）準(zhǔn)確度絕對(duì)回收率：絕對(duì)回收率：%.%.相對(duì)回收率相對(duì)回收率: : 又稱方法回收率又稱方法回收率藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第四節(jié)第四節(jié) 生物樣品分析方法的生物樣品分析方法的基本要求基本要求 三、生物樣品分析方法的驗(yàn)證三、生物樣品分析方法的驗(yàn)證 ( (四四) ) 靈敏度靈敏度1 1）檢測(cè)限）檢測(cè)限(LOD): S/N=3(LOD): S/N=3時(shí)的被測(cè)物的濃度時(shí)的被測(cè)物的濃度. .2) 2) 定量限定量限(LOQ):(LOQ):能滿足測(cè)定個(gè)半能滿足測(cè)定個(gè)半衰期時(shí)樣品中藥物濃度或衰期時(shí)樣品中藥物濃度或maxmax的的1/10

43、-1/10-1/201/20時(shí)的藥物濃度時(shí)的藥物濃度藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第四節(jié)第四節(jié) 生物樣品分析方法的生物樣品分析方法的基本要求基本要求 三、生物樣品分析方法的驗(yàn)證三、生物樣品分析方法的驗(yàn)證 ( (五五) ) 穩(wěn)定性穩(wěn)定性1 1）短期室溫條件下的穩(wěn)定性考察）短期室溫條件下的穩(wěn)定性考察 長(zhǎng)期低溫條件下的穩(wěn)定性考察長(zhǎng)期低溫條件下的穩(wěn)定性考察2)2) 冷凍解凍（凍融）穩(wěn)定性考察冷凍解凍（凍融）穩(wěn)定性考察藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義第四節(jié)第四節(jié) 生物樣品分析方法的生物樣品分析方法的基本要求基本要求 三、生物樣品分析方法的驗(yàn)證三、生物樣品分析方法的驗(yàn)證 ( (六六) ) 質(zhì)量控制質(zhì)

44、量控制樣品樣品（七）測(cè)定結(jié)果（七）測(cè)定結(jié)果詳細(xì)記錄實(shí)驗(yàn)過(guò)程和結(jié)果詳細(xì)記錄實(shí)驗(yàn)過(guò)程和結(jié)果藥物定量分析樣品和分析方式驗(yàn)證講義思考題思考題一、簡(jiǎn)述含金屬或含鹵素，硫、磷、硒等特殊元素的藥一、簡(jiǎn)述含金屬或含鹵素，硫、磷、硒等特殊元素的藥物分析前處理方法有哪些？物分析前處理方法有哪些？二、簡(jiǎn)述凱氏定氮法的實(shí)驗(yàn)原理二、簡(jiǎn)述凱氏定氮法的實(shí)驗(yàn)原理, ,操作過(guò)程及適用范圍操作過(guò)程及適用范圍? ?方法中為何要選用硼酸作吸收液方法中為何要選用硼酸作吸收液? ?硼酸吸收液的濃度是硼酸吸收液的濃度是否需要標(biāo)定否需要標(biāo)定? ?所取體積是否必須準(zhǔn)確量取所取體積是否必須準(zhǔn)確量取? ?改用硫酸或改用硫酸或鹽酸用吸收液鹽酸用吸收液, ,行嗎行嗎? ? 三、簡(jiǎn)述氧瓶燃燒法的實(shí)驗(yàn)原理、裝置構(gòu)成及適用范圍？三、簡(jiǎn)述氧瓶燃燒法的實(shí)驗(yàn)原理、裝置構(gòu)成及適用范圍？四、簡(jiǎn)述容量分析法的特點(diǎn)及計(jì)算公式？四、簡(jiǎn)述容量分析法的特點(diǎn)及計(jì)算公