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1、熒光相關(guān)光譜（ Fluorescence Correlation Spectroscopy ）一、概念 FCS通過(guò)測(cè)定溶液中微區(qū)內(nèi)（fL）發(fā)光粒子因布朗運(yùn)動(dòng)或化學(xué)反應(yīng)而產(chǎn)生的熒光漲落現(xiàn)象，分析熒光漲落的相關(guān)函數(shù)而獲得單個(gè)粒子（如分子）的濃度、化學(xué)動(dòng)力學(xué)參數(shù)等信息。 概念于20世紀(jì)70年代提出，90年代開(kāi)始發(fā)展。（計(jì)算機(jī)技術(shù)、光學(xué)檢測(cè)技術(shù)、激光共焦技術(shù)）Rhodamine green488nm激發(fā)相關(guān)公式 微區(qū)內(nèi)熒光分子數(shù)在任一時(shí)間t的變化導(dǎo)致熒光強(qiáng)度的漲落值為： 用歸一化自相關(guān)函數(shù)將熒光漲落與延遲時(shí)間相關(guān)：二、相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù) 激光器 共焦顯微鏡 高數(shù)值孔徑物鏡 1.單光子激發(fā) 2.雙光子激發(fā) 3

2、.熒光互相關(guān)光譜： 分子量之差小于8倍，擴(kuò)散系數(shù)之差小于2倍。 標(biāo)記兩種不同熒光試劑，兩個(gè)獨(dú)立激光器激發(fā)，兩個(gè)檢測(cè)器分別檢測(cè)。三、應(yīng)用 1.生物分子相互作用 金環(huán)蛇毒素和乙酰膽堿受體的作用 組氨酸標(biāo)記肽與金屬螯合脂的作用 轉(zhuǎn)鐵蛋白與人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的作用 秋水仙堿與微管蛋白的作用 2.活細(xì)胞相關(guān)研究 A.細(xì)胞膜 磷脂雙分子層4nm厚，可按二維模型處理 胰島素原C-肽與人細(xì)胞膜的相互作用 表皮增長(zhǎng)因子與膜結(jié)合受體的特異結(jié)合 神經(jīng)肽在胰腺癌細(xì)胞細(xì)胞膜的結(jié)合作用 B.胞內(nèi) 線粒體中NADH、黃素蛋白有自發(fā)熒光 乳膠微球在細(xì)胞內(nèi)的擴(kuò)散行為 寡聚核苷酸在細(xì)胞核內(nèi)的分子運(yùn)動(dòng) -半乳糖酶融合蛋白在胞內(nèi)的運(yùn)動(dòng)3.核酸研究 DNA PCR擴(kuò)增動(dòng)力學(xué)研究 DNA單個(gè)分子構(gòu)象波動(dòng)4.疾病診斷

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