復(fù)方利咽潤(rùn)喉顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究(一)

1、復(fù)方利咽潤(rùn)喉顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究(一)    作者：孔銘， 錢(qián)大瑋， 朱玲英， 周軍【關(guān)鍵詞】 熊果酸；,復(fù)方利咽潤(rùn)喉顆粒；,高效液相色譜摘要：目的建立高效液相色譜蒸發(fā)光散色（HPLCELSD）法測(cè)定復(fù)方利咽潤(rùn)喉顆粒中熊果酸的含量。方法采用漢邦ODSC18 (4.6 mm×250 mm,5 m)色譜柱；柱溫:30；流動(dòng)相:甲醇水冰醋酸(83170.1)；流速:1.0 ml/min；檢測(cè)器：Alltech ELSD2000蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（漂移管溫度:72，氣體流量：1.9 L/min）。結(jié)果熊果酸在4.22742.27 g范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，回收

2、率為98.54%，RSD為2.12%。結(jié)論該方法具有良好的精密度和重現(xiàn)性，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，是測(cè)定熊果酸含量的較好方法。關(guān)鍵詞：熊果酸； 復(fù)方利咽潤(rùn)喉顆粒； 高效液相色譜蒸發(fā)光散色法； 山楂復(fù)方利咽潤(rùn)喉顆粒由山楂等多味中藥經(jīng)加工制成的中藥復(fù)方制劑。具有清熱利咽、寬胸清咽等功能，臨床上用于外感風(fēng)熱所致的咽喉發(fā)干、聲音嘶啞及急慢性咽炎、扁桃體炎見(jiàn)上述證候者，常用于保護(hù)聲帶作用。 在處方組成固定，原料穩(wěn)定，工藝穩(wěn)定的前提下，本文對(duì)該制劑中熊果酸1的含量進(jìn)行了測(cè)定，作為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究?jī)?nèi)容。1 儀器與試劑1.1 儀器Waters高效液相色譜儀，Alliance 2695四元泵及自動(dòng)進(jìn)樣系統(tǒng)、柱溫箱、Empo

3、wer色譜工作站；Alltech ELSD 2000 檢測(cè)器； Millipore MilliQ純水器； METTLER萬(wàn)分之一及十萬(wàn)分之一電子天平；GA10B無(wú)油低噪音空氣源。2 方法與結(jié)果2.1 色譜條件和系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)色譜柱：Lichrospher C18 (4.6 mm×250 mm，5 m)，柱溫30，流動(dòng)相：甲醇水冰醋酸（83170.1），流速1.0 ml/min蒸發(fā)光散射檢測(cè)法檢測(cè)，漂移管溫度72，氣體流速1.9 L/min，進(jìn)樣量20 l。在此條件下,供試品溶液中熊果酸與相鄰成分達(dá)到基線分離,分離度大于1.5,理論板數(shù)以熊果酸峰計(jì)可達(dá)10 000。2.2 對(duì)照品溶液的

4、制備精密稱(chēng)取熊果酸對(duì)照品適量，加甲醇溶解制成每毫升含1.409 mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制精密吸取熊果酸對(duì)照品溶液（ 1.409 mg/ml）3.0，5.0，10.0，15.0，20.0，30.0 l，注入液相色譜儀，測(cè)定其峰面積，以考察在選定的HPLC條件下熊果酸線性范圍。以進(jìn)樣量的常用對(duì)數(shù)值作為橫坐標(biāo),峰面積的常用對(duì)數(shù)值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：Y= 1.642 6X+ 4.056 4，r= 0.999 6。2.4 供試品溶液的制備取復(fù)方利咽潤(rùn)喉顆粒5 g，研細(xì)，精密稱(chēng)定，置50 ml具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 ml，密塞，超聲提取30 min，放冷，濾液

5、過(guò)濾，殘?jiān)蒙倭考状枷矗喜V液，蒸干，甲醇溶解并定容至10 ml，搖勻，用微孔濾膜（0.45 m）濾過(guò)，取濾液，即得。2.5 陰性對(duì)照液的制備按處方比例稱(chēng)取除去山楂的其他藥材適量，依照復(fù)方利咽潤(rùn)喉顆粒的制備工藝和供試品溶液的制備方法制備陰性對(duì)照溶液，依法測(cè)定。結(jié)果陰性樣品在熊果酸相應(yīng)的保留時(shí)間無(wú)干擾。見(jiàn)圖1。a供試品 b對(duì)照品 c陰性對(duì)照溶液圖1 HPLC色譜圖（略） 2.6 精密度實(shí)驗(yàn)按選定的HPLC條件下以1.409 mg/ml的熊果酸對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，10 l/次，以考察儀器的精密度，RSD為2.15%。 2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)平行提取5份樣品，在所擬訂色譜條件下分別進(jìn)樣20 l，測(cè)

6、定，計(jì)算結(jié)果熊果酸含量為 0.449 mg/g，RSD（）為2.64%。2.8 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)對(duì)同一供試品溶液每隔2 h進(jìn)樣1次，依法測(cè)定，結(jié)果表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定，測(cè)得熊果酸含量RSD為 3.03。2.9 回收率實(shí)驗(yàn)采用加樣回收法，取已知含量（0.449 mg/g）的樣品適量，分別加入熊果酸對(duì)照品(1.106 mg/ml)1.0 ml，按上述色譜條件，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。表1 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略） 2.10 樣品含量測(cè)定分別取不同批號(hào)的本品各2份，精密稱(chēng)定，按供試品制備方法制備測(cè)定,計(jì)算結(jié)果取平均值。結(jié)果見(jiàn)表2。表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果（略） 3 討論3.1 作者首先比較了甲醇、乙

7、醚、醋酸乙酯對(duì)樣品中熊果酸含量的影響，結(jié)果測(cè)得樣品含量分別為0.42，0.21，0.23 mg/g，結(jié)果表明乙醚，醋酸乙酯提取不完全，故選擇甲醇為提取溶媒。3.2 隨后比較了超聲時(shí)間對(duì)熊果酸提取的影響，分別選擇的超聲時(shí)間為15，30，45 ，60 min，結(jié)果測(cè)得樣品含量為0.36，0.41，0.40，0.41 mg/g，說(shuō)明超聲提取30 min后熊果酸不再增加，故選擇超聲30 min。3.3 熊果酸與齊墩果酸在紫外末端吸收很難分離較好24，選用紫外檢測(cè)器，操作條件十分嚴(yán)格，噪音對(duì)結(jié)果影響很大，而采用ELSD檢測(cè)器檢測(cè)，不受外部環(huán)境干擾，分離較好，且簡(jiǎn)便、靈敏，故本方法為復(fù)方利咽潤(rùn)喉顆粒中熊果酸含量測(cè)定的有效分析方法。參考文獻(xiàn)：1 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典，部S.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005.2 王 旭，關(guān) 晶.大山楂口嚼片定性定量的研究J.中國(guó)中藥雜志，1999，24（11）：675.