抗原修復技術條件的選擇

1、抗原修復技術條件的選擇抗原修復技術條件的選擇臨床與實驗病理學雜志 2000年第1期第16卷 中山園地我們有幸成為跨世紀的見證人，信息時代對我們每一個人都提供了更多的機會和挑戰(zhàn)。為此北京中山生物技術有限公司和臨床與實驗病理學雜志編輯部聯(lián)合推出“中山園地”，愿她成為友誼的紐帶，連結所有的病理工作者，使我們成為真正的朋友；愿她成為前進的橋梁，橫跨醫(yī)學技術的現(xiàn)在和未來，為您的事業(yè)助一臂之力，歡迎大家賜稿，謝謝各位的關注!北京中山生物技術有限公司研發(fā)部組織在福爾馬林或其它固定液中固定會引起位于蛋白內或蛋白間的亞甲基橋的橋連，引起許多抗原決定簇被封閉。如在組織切片前未進行某種形式的抗原修復，免疫染色結果將

2、不能令人滿意甚至不能成功。最常用的抗原修復技術是酶消化和熱引導的抗原決定簇的修復(heatinduced epitope retrieval,HIER)，但其它技術，如聲波處理抗原修復技術也在某些實驗室應用。有些抗體則適宜于幾種抗原修復技術的聯(lián)合使用，如酶消化加HIER可使anti-calponin抗體的染色效果最佳。有關抗原修復的基本要素如下：1足夠的抗原修復是影響免疫組化染色結果最重要的因素，總的說來，較檢測系統(tǒng)更為重要。2盡管某種形式的抗原修復對大多數(shù)抗體有益，但有些抗體經抗原修復后不再發(fā)生反應(例如某些不需要抗原修復的抗體)。3主要的抗原修復形式包括：。酶處理，如：胰蛋白酶、胃蛋白酶、

3、pronase。熱引導的抗原決定簇修復，使用濕熱。HIER對大多數(shù)的抗體有益，特別是核抗原(對它們來說，HIER可能是抗體工作的前提條件，如Ki-67、雌激素)。4某些抗體適宜于幾種抗原修復方法聯(lián)合使用，如anticalponin抗體經酶處理及HIER聯(lián)合修復后抗體工作效果最佳。5抗某一抗原的不同抗體可能需要不同的抗原修復方式，如有些抗CD21的抗體可能需要酶消化，而另一些則需要HIER。6使用HIER時，要注意兩個基本點：。抗體孵育前每一步操作均勿使組織干燥，否則免疫反應可能完全不能進行。加熱后放置足夠的時間(至少1020 min)使之變涼是必需的，可假設為允許蛋白恢復到它的自然結構，否則H

4、IER將無任何效果。目前常見的抗原修復液，如：枸櫞酸緩沖液、尿素、EDTA、Tris-HCl、氯化銨和商品化靶修復液。作者選擇壓力鍋HIER方法，結果表明在pH8.0 1 mmol/L EDTA溶液中修復的效果最佳，特別是與常用的枸櫞酸緩沖液(pH6.0)比較。有人認為EDTA-HIER的作用機制是通過鈣離子的鰲合而實現(xiàn)的，而且這種鰲合作用只有在堿性pH值下才起作用(注意：枸櫞酸緩沖液作用似乎也是通過鈣離子的鰲合而實現(xiàn)的，并且也是在高pH值下工作的效果最好)。形成于hydromethylene、羧基及磷酸基團間的鈣離子配體復合物通過空間排列的障礙作用，封閉了抗原決定簇的位點。因此去除了鈣離子即

5、打碎了混合物。然而，對于酸性的抗原修復液，如Tris-HCl，抗原修復似乎是通過高濃度的氫離子離解了鈣離子復合物或打斷了福爾馬林固定產生的交聯(lián)而實現(xiàn)的。如果一個實驗室想將枸櫞酸緩沖液換為EDTA溶液作為抗原修復因子，大多數(shù)抗體的稀釋度將被提高，這就是說，每個抗體的稀釋度將要重新估測。這樣不僅可以節(jié)省抗體，而且可使免疫染色更加穩(wěn)定。pH值(堿性范圍)非常重要，因為對有效的抗原修復來說，pH值似乎比抗原修復液的化學成分更為重要。對大多數(shù)抗體，抗原修復液全范圍pH值均使HIER進行有效的修復，而對某些抗體，(如：Ki-67、ER)，中間范圍的pH值(3.06.0)會降低染色的強度，高于或低于此臨界帶均使染色強度增強。極少數(shù)抗體(CD34、HMB45)，用HIER時，在低pH值(1.02.0)下染色效果不好，在高pH值下的染色效果極佳。因此，盡管pH值6.0的枸櫞酸緩沖液可使大多數(shù)抗體良好地工作，但不可能總是工作良好。作為通用的修復液，堿性pH值的修復液遠較枸櫞酸緩沖液有效，而固定了很長時間或是非常舊的檔案資料，酸性pH值的抗原修復液的工作效果優(yōu)于堿性pH值的修復液(包括EDTA)，因此在通用抗原修復液不能進行免疫染色或染色效果