植物檢疫檢驗技術(shù)

1、植物檢疫檢驗技術(shù)目錄一二三常用的實驗室檢測方法現(xiàn)場檢驗技術(shù)植物檢疫檢驗技術(shù)一、現(xiàn)場檢驗技術(shù)現(xiàn)場檢查和抽樣是現(xiàn)場檢驗的主要內(nèi)容。1、現(xiàn)場檢查主要是針對運輸及裝載工具及存放貨物、攜帶物及郵寄物等應(yīng)檢物進行直觀檢查。檢查對象：運輸、裝載工具、貨物及存入場所、攜帶郵寄物等；檢驗場地：機場、碼頭、車站等?，F(xiàn)場檢查方法：（1）肉眼檢查：現(xiàn)場快速檢查。（2）過篩檢查：植物籽粒的現(xiàn)場檢查。（3）x 光機檢查：旅客攜帶物的現(xiàn)場檢查。（4）檢疫犬檢查：旅客攜帶物的現(xiàn)場檢查。過篩檢查X光機檢查檢疫犬檢查2、現(xiàn)場抽樣是用科學(xué)的方法從檢疫物總體中抽取有代表性的樣品，作為評定該批檢疫物質(zhì)量和安全的依據(jù)。一般根據(jù)貨物的種類

2、和可能攜帶的有害生物的生物學(xué)特性決定具體的抽樣方案?，F(xiàn)場抽樣注意事項：代表性、害蟲的移動性和趨性等。抽樣標(biāo)準和方法：抽樣標(biāo)準和方法有按批抽樣、按件抽樣、室內(nèi)檢驗抽樣和抽樣方法。批：同一品名、同一商品標(biāo)準、用同一運輸工具、來自或運往同一地點、并有同一收貨人或發(fā)貨人的貨物。件：一批貨物中每一個獨立的袋、箱、筐、桶、捆、托等。散裝貨物以一定重量為一件。樣本量：一份樣品的重量或體積。樣本數(shù)：一批貨物中的幾份樣品即為樣本數(shù)檢疫抽樣中樣本數(shù)的確定需要視貨物類型而定。小樣：初級樣品，由一批貨物的不同容器內(nèi)或散堆的不同部位分別抽取的樣品?；旌蠘悠罚核?shù)份小樣在容器內(nèi)混合。平均樣品：送檢樣品，小樣混合后，再次

3、進行取樣。抽樣方法：根據(jù)不同有害生物的分布規(guī)律及生物學(xué)特性、貨物數(shù)量、裝載方式、堆放形式等而定。常用方法有對角線取樣法、棋盤式取樣法和隨機取樣法或分層隨機取樣法等幾種。例如：分層隨機取樣法 在抽樣總體中按生物個體劃分為若干個層(組)，對每層分別抽取一組隨機樣本，然后通過加權(quán)對總體參數(shù)做出估計。二、常用的實驗室檢測方法是由檢驗人員在實驗室中借助一定的儀器設(shè)備對樣品進行深入檢查的植物檢疫法定程序，以確認有害生物是否存在或鑒別有害生物的種類。實驗室檢測方法有比重檢測、染色檢測、洗滌檢測、保濕萌芽檢測、分離培養(yǎng)檢測、鑒別寄主檢測、血清學(xué)檢測、顯微鏡檢測以及分子鑒定和計算機輔助鑒定（如PCR技術(shù)和計算機

4、技術(shù)結(jié)合）等。1、比重檢測適用范圍：一般用于檢驗種子、糧谷、豆類中的鉆蛀性害蟲，也可檢驗其中的菌癭、菌核和病秕籽粒及菟絲子等雜草種子。原理：不同物質(zhì)的密度不同。材料：常用飽和食鹽水。比重檢測比重即密度 即利用比重原理監(jiān)測病粒與蟲粒。健康種子生病種子輕重浮在水面沉在水底、染色檢測高錳酸鉀染色法：取樣品15g，去除雜質(zhì)后倒在銅絲網(wǎng)中，浸入30溫水內(nèi)min，移浸于1高錳酸鉀溶液中浸染4560s，取出用清水漂洗掉黏附在籽粒表面的顏色，倒在白色吸水紙上，用擴大鏡檢查。凡籽粒上有黑點的，撿出解剖鏡檢。蟲蛀品紅染色法：取樣品15g，放入銅絲網(wǎng)內(nèi)，在30水中侵1min，移入酸性品紅溶液中浸染25min，取出用

5、清水洗凈，倒入白色吸水紙上，用擴大鏡檢查。凡蟲蛀粒表面均染有0.5mm左右櫻桃紅小點；若是蟲傷或機械損傷則染色淺且斑點不規(guī)則形。蟲蛀碘或碘化鉀染色法：對象: 豆象類蛀害的豆籽。方法: 取代表樣品50g，放入銅網(wǎng)或包于紗布內(nèi)，浸入1%碘化鉀溶液或2%灑精碘溶液中，經(jīng)1-1.5min，取出移入0.5%氫氧化鉀溶液中浸30s，取出用清水洗滌15-20s，立即用擴大鏡觀察。凡豆粒表面有1-2mm直徑圓斑者，即為蟲蛀粒，結(jié)合鏡下剖檢。蟲蛀病毒病染色：原理: 健康植株感染病毒病后，會產(chǎn)生多酚體，多酚體與氫氧化鈉起化學(xué)反應(yīng)能顯現(xiàn)深藍色。方法: 配乙醇甲醛溶液(95%乙醇700mL，37%甲醛20mL，蒸餾水

6、230mL混合)，用作脫色和多酚體固定劑。將樣品投入上述溶液的試管內(nèi)，在80水浴鍋內(nèi)加溫，使樣品完全脫綠。若溶液中含綠色過多，可換新溶液1-2次，即可脫凈。樣品脫綠后，投入盛有1mol/L NaOH溶液的試管中，在80-100的水浴鍋內(nèi)加溫，待充分顯色。若有多酚體存在則成深藍色，反之則呈黃色。注意事項：樣品有多酚體存在，呈藍色的時間不長，當(dāng)與空氣接觸后，在5-10min內(nèi)，即起氧化作用而變成紅色，故檢查應(yīng)及時。植株在受傷后也會產(chǎn)生多酚體，故取樣時應(yīng)避免截取受傷的葉片和根、枝。3、軟X光透視檢測? 0.01nm，硬X射線；0.01 ? 0.05nm，超軟X射線；經(jīng)軟X射線照射后，健康的種子，全粒

7、均勻透明，有陰影斑點的為蟲蛀粒、空殼或內(nèi)部有蟲體。4、洗滌檢測對象：真菌、細菌、線蟲方法：取樣10-100g，分成兩份，分別放入三角瓶內(nèi)，各注入無菌水10-100mL，加入少許1%濕潤劑，振蕩5-10min，然后將懸浮倒入離心管離心，去除上清液后，鏡檢離心管底部物質(zhì)。病原生物在底部沉降病原生物懸浮液檢查植物材料表面附著的微生物孢子、病原線蟲；用無菌水反復(fù)沖洗植物材料表面，得到病原菌物孢子懸浮液；或直接用少量植物材料浸水，進行高速離心分離5、保濕培養(yǎng)檢測吸水紙法：用無菌吸水紙在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)種子的病。 存在問題 ：許多重要種傳真菌用該法不能長出；腐生菌的迅速生長干擾實驗結(jié)果。 改進措施：冰凍吸水紙

8、法冰凍吸水紙法：將萌芽的幼苗在-20 下冰凍過夜。 優(yōu)點：病原物易形成孢子，又便于檢查。瓊脂平皿法：用水瓊脂液培養(yǎng)種子上的病原菌。 優(yōu)點：有利于病原的生長，雜菌少，便于檢查。多種培養(yǎng)方法6、分離培養(yǎng)檢測科赫氏法則的應(yīng)用真菌、細菌：組織分離法：試材消毒切小塊后在培養(yǎng)基上培養(yǎng)。稀釋培養(yǎng)法：按不同濃度稀釋后在培養(yǎng)基上培養(yǎng)。劃線培養(yǎng)法：沾一點病菌在培養(yǎng)基上劃線后培養(yǎng)。線蟲：改良貝爾曼漏斗法：用漏斗裝置分離出線蟲。過篩檢驗法：按不同粗細的篩子，篩出線蟲。漂浮分離法：讓線蟲在水面漂浮，分離出線蟲。分離培養(yǎng)檢測步驟：(1)在病植物上常伴隨有一種病原微生物存在； 鏡檢(2)該微生物可在離體的或人工培養(yǎng)基上分離

9、純化而得到純培養(yǎng)； 分離純化(3)將純培養(yǎng)接種到相同品種的健株上，出現(xiàn)癥狀相同的病害； 接種(4)從接種發(fā)病的植物上再分離到其純培養(yǎng)，性狀與接種物相同。 再次鏡檢鑒定接種檢測類型（1)拌種接種：病菌孢子拌種，之后培養(yǎng)鑒別。(2)浸種接種：用病原孢子或細菌的懸浮液浸種。(3)花器接種：將孢子懸浮液用注射器噴到花內(nèi)。(4)噴霧接種：將細菌或孢子懸浮液噴到植物上。 (5)針刺接種：用針束蘸取菌液后在葉片上穿刺。 (6)剪葉接種：用解剖剪剪去葉尖，浸細菌懸浮液。 (7)摩擦接種：用手或玻璃棒蘸病毒液，摩擦葉片。 7、害蟲的檢驗方法A、飼養(yǎng)檢驗 將樣品定量后置溫箱內(nèi)，定溫在2526下飼養(yǎng)35d或更長時間

10、，測定害蟲含量并鑒定種類。地下害蟲飼養(yǎng)箱昆蟲培養(yǎng)箱塑料袋密封數(shù)小時后，其中的實蠅幼蟲因缺氧破果而出。B、塑料袋密封檢驗C、水盆觀察法 將水果或蔬菜放入一個瓷盤內(nèi)，支放在盛有清水的大瓷盆上，再用40目尼龍紗罩上。室溫下觀察7-10d，實蠅幼蟲會從果中彈進大盆內(nèi)。本方法主要用于新鮮成熟度不高的水果。8、血清學(xué)檢測血清學(xué)反應(yīng)：指相應(yīng)的抗原和抗體在體外進行的結(jié)合反應(yīng)。通常用含有抗體的血清作為實驗材料，所以把體外的抗原、抗體反應(yīng)稱為血清學(xué)反應(yīng).各種病原生物、害蟲均可采用血清學(xué)方法來檢測，關(guān)鍵是要制備具有專化性的抗體(抗血清)，利用抗原抗體反應(yīng)檢測樣本中有無目標(biāo)生物存在。常用的檢測方法凝膠擴散試驗：乳膠凝集試驗：酶聯(lián)免疫分析：斑點免疫技術(shù)：免疫熒光檢驗：免疫電鏡技術(shù)：9、核酸技術(shù)核酸技術(shù)是一種DNA分析鑒定技術(shù)，其方法快速、準