陰道微生態(tài)評價

1、陰道微生態(tài)評價陰道微生態(tài)評價及其適宜技術及其適宜技術 個舊市人民醫(yī)院檢驗科個舊市人民醫(yī)院檢驗科 王銳王銳 護理生殖道護理生殖道關注微生態(tài)關注微生態(tài) 最重要！最重要！陰道陰道粘膜粘膜陰道陰道正常正常菌群菌群陰道陰道免疫免疫系統(tǒng)系統(tǒng)陰道微生態(tài)概念陰道微生態(tài)概念陰道防御系統(tǒng)陰道防御系統(tǒng)陰道微生態(tài)是陰道最重要的防御系統(tǒng)陰道微生態(tài)是陰道最重要的防御系統(tǒng)陰道原籍菌陰道原籍菌(乳酸桿菌乳酸桿菌)數(shù)量數(shù)量:8x107 cfu/ ml5%95%123 正常育齡婦女陰道菌群由六種不同種類的正常育齡婦女陰道菌群由六種不同種類的細菌以及念珠菌、支原體等組成細菌以及念珠菌、支原體等組成。正常陰道內(nèi)有正常陰道內(nèi)有100種

2、微生物存在。種微生物存在。這些微生物在陰道內(nèi)形成生態(tài)平衡。這些微生物在陰道內(nèi)形成生態(tài)平衡。陰道菌群（陰道的微生態(tài)系統(tǒng)）陰道菌群（陰道的微生態(tài)系統(tǒng)）陰道微生態(tài)概念陰道微生態(tài)概念CFU (Colony-Forming Units) 經(jīng)培養(yǎng)所得菌簇形成單位的英文縮寫。 細菌（可見）和真菌的測量單位。cfu:colony-forming unit，菌落形成單位，將稀釋后的一定量的菌液通過澆注或涂布的方法，讓其內(nèi)的微生物單細胞一一分散在瓊脂平板上，待培養(yǎng)后，每一活細胞就形成一個菌落。與常規(guī)利用顯微鏡對微生物數(shù)量進行測量不同，主要是對可見（即多數(shù)情況下形成菌落）的細菌數(shù)量進行測量的單位。 意思就是每毫升菌

3、液中含有多少單細胞！ 陰道粘膜上皮細胞陰道粘膜上皮細胞（過路菌）（過路菌）乳桿菌（原籍菌）乳桿菌（原籍菌）（條件致病菌）（條件致病菌）是由不同種屬是由不同種屬的宿主傳來的的宿主傳來的是其自身宿主個體對其是其自身宿主個體對其無免疫反應或低免疫反應，無免疫反應或低免疫反應，是宿主個體固有的菌群是宿主個體固有的菌群 是由同種屬不同是由同種屬不同宿主個體傳來的宿主個體傳來的陰道微生態(tài)概念陰道微生態(tài)概念乳桿菌的作用機制乳桿菌的作用機制u分解糖原，維持陰道酸性環(huán)境。u產(chǎn)生多種抑菌物質(zhì)：乙酸、16-18碳脂肪酸 H202、乳酸菌素、硬脂酸等。u競爭粘附：也稱占位性保護。u競爭營養(yǎng)物質(zhì)：大量定位于陰道中的乳桿

4、菌處 于競爭優(yōu)勢狀態(tài)，利用陰道上皮 細胞中的糖原，減少其他細菌的 碳源供應，通過競爭營養(yǎng)物質(zhì)而 干擾一些厭氧菌如白色假絲酵母 菌（白念）的生長。維持酸性環(huán)境維持酸性環(huán)境形成保護性菌膜形成保護性菌膜殺滅致病菌殺滅致病菌乳酸桿菌乳酸桿菌正常陰道菌群作用正常陰道菌群作用陰道微生態(tài)平陰道微生態(tài)平衡的核心：衡的核心：維持乳酸維持乳酸菌特別是菌特別是產(chǎn)產(chǎn)H2O2乳乳酸菌在陰酸菌在陰道菌群中道菌群中的優(yōu)勢地的優(yōu)勢地位！位！ 在陰道粘膜表面形成一層保護性菌膜，在陰道粘膜表面形成一層保護性菌膜，防止入侵微生物在陰道粘膜上定植防止入侵微生物在陰道粘膜上定植 乳酸菌產(chǎn)生的乳酸使陰道乳酸菌產(chǎn)生的乳酸使陰道分泌物維持酸

5、性環(huán)境；分泌物維持酸性環(huán)境；乳酸菌產(chǎn)生的乳酸菌產(chǎn)生的H2O2可可殺滅入侵的致病菌。殺滅入侵的致病菌。陰道微生態(tài)概念陰道微生態(tài)概念 乳桿菌乳桿菌數(shù)量減少，生數(shù)量減少，生化指化指標標改改變變， ， 陰道微生陰道微生 態(tài)態(tài)破壞破壞陰道菌陰道菌群失調(diào)群失調(diào) 各類各類陰道炎陰道炎 加重加重陰道菌陰道菌群失調(diào)群失調(diào)各種各種誘因誘因各類陰道炎的共性各類陰道炎的共性-源于或伴有微生態(tài)破壞！源于或伴有微生態(tài)破壞！為什么要關注陰道微生態(tài)為什么要關注陰道微生態(tài)菌群演變造成菌群結構改變，特點：菌群演變造成菌群結構改變，特點：1、厭氧菌需氧菌、等條件致病菌大量增加、厭氧菌需氧菌、等條件致病菌大量增加 2、乳酸菌特別是產(chǎn)

6、過氧化氫乳酸菌減少或消失、乳酸菌特別是產(chǎn)過氧化氫乳酸菌減少或消失所有的陰道感染所有的陰道感染都源于或伴有陰都源于或伴有陰道微生態(tài)改變道微生態(tài)改變 乳酸菌%厭氧菌%加德納菌%支原體% LB- LB正常80-10080-10070-10070-100 10-4010-400-300-30 20-40 20-40宮頸炎10-4010-4010-3010-3030-5030-5020-4020-4060-8060-80BV 0-20 0-20 0-10 0-10 40-70 40-70 60-80 60-80 40-60 40-60滴蟲陰道炎10-4010-400-200-2010-3010-300-

7、300-3020-4020-40霉菌陰道炎20-5020-500-400-4020-3020-3010-4010-4020-3020-30 老年性陰道炎0-200-200-100-1040-6040-6020-4020-4050-6050-60 通過形態(tài)學、生物化學、通過形態(tài)學、生物化學、 免疫學和分子生物學免疫學和分子生物學 等等 方法所獲得的陰道菌群方法所獲得的陰道菌群 數(shù)量和功能方面的信息數(shù)量和功能方面的信息 分析陰道分析陰道菌群結構菌群結構的演替的演替正常優(yōu)勢菌正常優(yōu)勢菌的菌群數(shù)量的菌群數(shù)量與功能變化與功能變化條件致病條件致病微生物菌微生物菌群數(shù)量與群數(shù)量與功能功能變變化化外來致病外來

8、致病微生物菌微生物菌群數(shù)量與群數(shù)量與功能功能變變化化 機體反機體反應應水平水平如何評價陰道微生態(tài)？如何評價陰道微生態(tài)？ - -陰道微生態(tài)評價的內(nèi)涵陰道微生態(tài)評價的內(nèi)涵為什么要關注陰道微生態(tài)為什么要關注陰道微生態(tài)形態(tài)學生物標志物形態(tài)學生物標志物 菌群數(shù)量與功能的變化菌群數(shù)量與功能的變化形態(tài)學評價形態(tài)學評價-菌群數(shù)量的變化菌群數(shù)量的變化： 形態(tài)學的方法形態(tài)學的方法系統(tǒng)的方法系統(tǒng)的方法-陰道微生態(tài)評價內(nèi)容陰道微生態(tài)評價內(nèi)容陰道微生態(tài)評價的內(nèi)容陰道微生態(tài)評價的內(nèi)容 標本中細菌分布、排標本中細菌分布、排列的密集程度，列的密集程度， 即每克即每克或每毫升標本中的菌落數(shù)。或每毫升標本中的菌落數(shù)。 分級標準分

9、級標準(放大倍放大倍10100觀察每觀察每視野平均細菌數(shù)視野平均細菌數(shù))I級級 （記為（記為“+”）1個個9個個 II級級 （記為（記為“+”） 10個個99個個 III級級 （記為（記為“+”） 100個以上個以上 IV級級 （記為（記為“+ +”） 細菌聚集成團細菌聚集成團 (涂片中所見細菌種類涂片中所見細菌種類) I級級 （記為（記為“+”） 能辨別能辨別13種細菌；種細菌； II級級 （記為（記為“+”） 能辨別能辨別46種細菌；種細菌； III級級 （記為（記為“+”） 能辨能辨別別710種細菌；種細菌； IV級級 （記為（記為+） 能辨別能辨別11種以上細菌。種以上細菌。(局部有無

10、炎癥局部有無炎癥-菌群的致病性菌群的致病性) 有無白細胞、有無白細胞、膿細胞滲出，膿細胞滲出， 有無吞噬現(xiàn)象有無吞噬現(xiàn)象等。等。菌群的密集度菌群的密集度機體炎性反應機體炎性反應菌群的多樣性菌群的多樣性優(yōu)勢菌優(yōu)勢菌陰道微生態(tài)形態(tài)學評價陰道微生態(tài)形態(tài)學評價 存在的問題存在的問題 形態(tài)學評價結果的可靠性形態(tài)學評價結果的可靠性 與實驗室人員的技能和責任有關與實驗室人員的技能和責任有關 不能了解陰道菌群中正常優(yōu)勢菌和有害菌的功能不能了解陰道菌群中正常優(yōu)勢菌和有害菌的功能陰道微生態(tài)評價的內(nèi)容陰道微生態(tài)評價的內(nèi)容 A、正常優(yōu)勢菌功能生物學標志、正常優(yōu)勢菌功能生物學標志 B、致病微生物與條件致病微生、致病微生

11、物與條件致病微生 物增殖的生物學標志物增殖的生物學標志 C、機體反應性的生物學標志、機體反應性的生物學標志了解菌群數(shù)量的變化了解菌群數(shù)量的變化形態(tài)學評價形態(tài)學評價生物標志物生物標志物了解菌群了解菌群數(shù)量與功數(shù)量與功能的變化能的變化陰道微生態(tài)陰道微生態(tài)系統(tǒng)評價系統(tǒng)評價陰道微生態(tài)評價的內(nèi)容陰道微生態(tài)評價的內(nèi)容 唾液酸苷酶唾液酸苷酶BV 門冬酰胺蛋白門冬酰胺蛋白酶酶霉菌性陰道炎霉菌性陰道炎胱胺酰蛋白酶胱胺酰蛋白酶滴蟲性陰道炎滴蟲性陰道炎乳酸脫氫酶乳酸脫氫酶急性化膿性陰道炎急性化膿性陰道炎透明質(zhì)酸酶透明質(zhì)酸酶BV、淋菌性陰道炎、淋菌性陰道炎白細胞酯酶白細胞酯酶宮頸炎及各種陰道感染宮頸炎及各種陰道感染

12、短鏈脂肪酸（如乙酸、琥珀酸）增加短鏈脂肪酸（如乙酸、琥珀酸）增加 單胺和多胺增加（胺試驗陽性）單胺和多胺增加（胺試驗陽性） 菌胞壁糖類（如阿拉伯醇糖）增加菌胞壁糖類（如阿拉伯醇糖）增加陰道微生態(tài)評價的方法陰道微生態(tài)評價的方法生物化學方法生物化學方法微生物學方法微生物學方法分子生物學方法分子生物學方法免疫學方法免疫學方法1 優(yōu)勢菌優(yōu)勢菌(乳酸菌乳酸菌)功能的生化標志物功能的生化標志物2 致病與條件致病微生物致病與條件致病微生物增殖的生化標志物增殖的生化標志物3 機體反應性的生化標志物機體反應性的生化標志物 乳酸菌代謝包括：過氧化氫、乳酸菌代謝包括：過氧化氫、 乳乳 酸酸 乳酸菌素乳酸菌素微生物微

13、生物代謝產(chǎn)物代謝產(chǎn)物細菌、衣原體等病原體大量增殖細菌、衣原體等病原體大量增殖白細胞白細胞吞噬病原體過多吞噬病原體過多病原體釋放的水解酶和病原體釋放的水解酶和毒素分解白細胞壁毒素分解白細胞壁白細胞酯酶釋放到胞白細胞酯酶釋放到胞外外分泌物中白細胞酯酶活性增高。分泌物中白細胞酯酶活性增高。過氧化氫濃度過氧化氫濃度SNA活性活性LE活性活性生態(tài)優(yōu)勢菌指標生態(tài)優(yōu)勢菌指標致病菌指標致病菌指標宿主反應指標宿主反應指標衛(wèi)衛(wèi)生部十年百生部十年百項計項計劃推廣劃推廣項項目目江西省星火江西省星火計計劃劃項項目目浙江省醫(yī)浙江省醫(yī)藥衛(wèi)藥衛(wèi)生科技重點推廣生科技重點推廣項項目目 了解陰道菌群結構了解陰道菌群結構和功能的變化

14、，和功能的變化， 評價陰道的微生態(tài)狀況評價陰道的微生態(tài)狀況陰道微生態(tài)評價適宜技術陰道微生態(tài)評價適宜技術 陰道微生陰道微生態(tài)評態(tài)評價適宜技價適宜技術術-細菌性陰道病聯(lián)合測定技術介紹細菌性陰道病聯(lián)合測定技術介紹標本采集要規(guī)范標本采集要規(guī)范 各種病原體的性質(zhì)和檢測各種病原體的性質(zhì)和檢測要求的不同，決定了標本的種要求的不同，決定了標本的種類、取材部位、和保存條件標類、取材部位、和保存條件標本運輸方式等都有不同，采集本運輸方式等都有不同，采集標本上如有錯誤或疏忽，都會標本上如有錯誤或疏忽，都會影響檢驗結果。影響檢驗結果。標本采集的規(guī)范標本采集的規(guī)范 一般陰道感一般陰道感 染診斷的取染診斷的取 材，須取陰

15、材，須取陰 道后穹隆部道后穹隆部 位的分泌物。位的分泌物。 要盡量使用要盡量使用 大一些的棉大一些的棉 簽取樣，要簽取樣，要 將棉簽在取將棉簽在取 材部位旋轉材部位旋轉 并停留并停留20秒秒 要使用試劑盒要使用試劑盒 配套的保存液配套的保存液 保存標本。標保存標本。標 本在本在2-8保存保存 不宜超過不宜超過2天。天。取材之前取材之前24小時小時內(nèi)，應無性交、內(nèi)，應無性交、無盆浴或陰道沖無盆浴或陰道沖洗；在洗；在48小時內(nèi)小時內(nèi)未使用陰道潤滑未使用陰道潤滑劑或陰道劑或陰道“興奮劑興奮劑”等化學物質(zhì)等化學物質(zhì)一般要求一般要求取材部位要準確取材部位要準確取材方法要得當取材方法要得當標本量要充足標本

16、量要充足標本要正確保存標本要正確保存及時檢驗及時檢驗正確取材要把握一下幾點正確取材要把握一下幾點標本采集的規(guī)范標本采集的規(guī)范檢驗原理檢驗原理nH2O2陰道乳酸桿菌標志物n唾液酸苷酶NAase加德納菌、游動彎曲桿 菌等BV致病菌的標志物。n白細胞酯酶炎性細胞的標志物。H2O2（反應裝置上部的反應孔） 陰道液中過氧化氫經(jīng)過過氧化物酶作用，釋放出新生態(tài)氧，后者在4-氨基安替吡啉存在下，使3,5-二氯-2-羥基苯磺酸氧化成紅色或紫色，在反應系統(tǒng)中加入3,5-二氯-2-羥基苯磺酸的拮抗物，當標本中H2O2濃度2mol/L，反應結果呈紅色或紫色，呈色深度與H2O2 濃度成正比，標本中H2O2濃度 2mol

17、/L，反應結果呈藍色。結果判讀：u 陰性：顯紅色、紫色或藍紫色u 陽性：藍色u參考范圍： 2mol/L為陰性唾液酸苷酶活性測定（反應裝置中部的反應孔） 唾液酸苷酶水解5-溴-4-氯-3-吲哚神經(jīng)氨酸鹽，釋放出溴吲哚基遇重氮鹽起反應呈紅色或紫色，呈色深度與唾液酸苷酶活性呈正比。結果判讀：u陰性：不顯色或黃色u陽性：紅色、紫色或藍色，顯藍色表示唾液酸 苷酶活性濃度很高。u參考范圍： 7U/ml為陰性白細胞酯酶（反應裝置下部的反應孔） 白細胞酯酶水解5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸鹽，釋放出溴吲哚基，后者在氧的條件下呈藍色或綠色，呈色深度與白細胞酯酶活性成正比。結果判讀：參照比色板比色判讀結果u陰性：“

18、-”或“”u陽性：“+”、“+”、“+”u參考范圍：白細胞酯酶7U/ml為陰性 產(chǎn)過氧化氫乳酸產(chǎn)過氧化氫乳酸 菌占優(yōu)勢地位菌占優(yōu)勢地位 粘膜修復粘膜修復 炎癥消失炎癥消失 無引發(fā)無引發(fā)BV的的 細菌繁殖細菌繁殖正正 常常正正 常常陰陰 性性異異 常常增增 高高陽陽 性性過氧化氫濃度過氧化氫濃度LE活性活性SNa活性活性乳酸菌減少或消失乳酸菌減少或消失各種陰道感染各種陰道感染致病菌、條件致致病菌、條件致病菌增加病菌增加陰道微生態(tài)評價適宜技術陰道微生態(tài)評價適宜技術糾正了以白細胞糾正了以白細胞升高才為升高才為“炎癥炎癥”的的生殖道感染的概念生殖道感染的概念陰道感染診斷陰道感染診斷治療思路的新治療思路

19、的新突破突破臨床用途臨床用途指導婦產(chǎn)科臨床醫(yī)師從微生態(tài)角度重指導婦產(chǎn)科臨床醫(yī)師從微生態(tài)角度重新審視婦科感染性疾病；新審視婦科感染性疾??；關注感染及治療后的陰道微生態(tài)狀況，關注感染及治療后的陰道微生態(tài)狀況，樹立樹立“將陰道微生態(tài)恢復正常作為陰道將陰道微生態(tài)恢復正常作為陰道炎治療的最終目標炎治療的最終目標”的理念。的理念。A、彌補現(xiàn)有白帶常規(guī)檢查只做形態(tài)學檢查、不彌補現(xiàn)有白帶常規(guī)檢查只做形態(tài)學檢查、不做生化檢查，不能準確判斷感染的程度及陰道微做生化檢查，不能準確判斷感染的程度及陰道微生態(tài)、不能評價預后等不足；生態(tài)、不能評價預后等不足；B、 陰道微生態(tài)評價陰道微生態(tài)評價C、從微生態(tài)角度評價陰道炎是否治愈；從微生態(tài)角度評價陰道炎是否治愈