機(jī)能學(xué)創(chuàng)新性試驗(yàn)設(shè)計(jì)報(bào)告書(shū)

1、機(jī)能實(shí)驗(yàn)學(xué)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)報(bào)告實(shí)驗(yàn)名稱(chēng)：人指甲對(duì)慢性化膿性中耳炎的藥用價(jià)值實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)人：專(zhuān)業(yè)：年級(jí)班級(jí)：聯(lián)系電話(huà)：指導(dǎo)教師：2017年11月15日實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：一、立題理論依據(jù)及研究現(xiàn)狀。理論依據(jù)：根據(jù)草醫(yī)草藥簡(jiǎn)便驗(yàn)方匯編中所述，人指甲(煨存性)，冰片少許，共研細(xì)粉。用時(shí)先將耳道潔凈，后吹藥粉。可治慢性化膿性中耳炎。在某一偏方中也有說(shuō)將人指甲烤干后磨粉，然后摻入一定比例的白磯。用時(shí)將耳道潔凈，后吹藥粉。從以上依據(jù)可知，人指甲對(duì)慢性化膿性中耳炎有一定的藥用價(jià)值，但其科學(xué)性有待考察。研究現(xiàn)狀：針對(duì)慢性化膿性中耳炎，王冰和許垠在國(guó)際耳鼻咽喉頭頸外科雜志中表示，慢性化膿性中耳炎與細(xì)菌生物膜密切相關(guān)。他們認(rèn)為低毒力的

2、細(xì)菌或病毒感染是分泌性中耳炎的重要致病因素，而細(xì)菌生物膜的形成和發(fā)展包括調(diào)節(jié)膜的形成、細(xì)菌可逆性附著、細(xì)菌繁殖、細(xì)菌播散5個(gè)過(guò)程，可通過(guò)屏障作用、生物膜特殊的微環(huán)境、耐藥表型的表達(dá)對(duì)抗機(jī)體免疫、密度感應(yīng)系統(tǒng)等多種方式導(dǎo)致抗生素耐藥，從而導(dǎo)致慢性感染遷延不愈或反復(fù)性發(fā)作。通過(guò)對(duì)患者的分泌液進(jìn)行培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)最主要的致病菌為金葡萄菌和銅綠假單胞菌。故針對(duì)慢性化膿性中耳炎的治療方面提出假設(shè)：通過(guò)抑制細(xì)菌的黏附，破壞保護(hù)性基質(zhì)、脂質(zhì)體包裹抗生素穿透生物膜的目的，從而對(duì)慢性感染的治療提供新的突破。二、主要研究?jī)?nèi)容及實(shí)驗(yàn)過(guò)程。1、實(shí)驗(yàn)對(duì)象、性別、規(guī)格、數(shù)量健康豚鼠70只，雌雄不拘，體重250-300g。所選豚

3、鼠均為耳廓反應(yīng)靈敏，電耳鏡檢查可見(jiàn)鼓膜完整，光錐清晰，排除外耳道、鼓膜、中耳等感染。2、儀器與藥品儀器：籠子、電耳鏡、試管、注射器、生化培養(yǎng)箱、方形濾紙?jiān)噭恒~綠假單胞菌落、3%戊巴比妥鈉溶液、生理鹽水、人指甲粉末、白磯粉末、冰片粉末、氧氟沙星洗耳液3、實(shí)驗(yàn)步驟(1)將豚鼠分為七組，分別進(jìn)行編號(hào)(1-7)放置于鼠籠中。(2)制備豚鼠的慢性化膿性中耳炎模型。取真空保藏銅綠假單胞菌菌種活化24h后、取一個(gè)單菌落于盛5mlMH肉湯培養(yǎng)液的試管中、35c靜止培養(yǎng)12h左右，取3ml轉(zhuǎn)入盛150mlMH肉湯培養(yǎng)液的錐形瓶中，35C、120r/min振蕩培養(yǎng)12h.制成菌懸液，并將此菌輕液作為母液。采用邊

4、配制邊測(cè)定的方法，用MH肉湯培養(yǎng)液作對(duì)照溶液，用光程為1cm的立方石英比色杯校準(zhǔn)其線(xiàn)，然后依次2倍稀釋加母液的MH肉湯培養(yǎng)液，測(cè)定其OD值?！瓣愐鷥骸苯?jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)，測(cè)算出波長(zhǎng)在585mm寸，銅綠假單月菌菌液濃度與ODfi之間關(guān)系的問(wèn)歸方程式為Y=0.0711X+0.5018.式中Y為ODfi,X為菌液濃度，基本單位為108CFU/ml.本實(shí)驗(yàn)所需菌液濃度為1.0x106CFU/ml。當(dāng)X等于1時(shí)，具菌液濃度為8-、1.0x10CFU/ml,對(duì)應(yīng)的ODfi為0.5729.我們計(jì)算最接近此ODfi時(shí)母披的稀釋倍數(shù)，將母液用PBSffi釋同樣倍數(shù)并再稀釋100倍，所得到的菌液濃度即為1.0x106CFU

5、/ml,4C冰箱保存?zhèn)溆?。所有豚鼠月M腔注射3%勺戊巴比妥鈉溶液35-50mg/kg實(shí)施全身麻醉，用75%酉精消毒雙側(cè)外耳道。用1ml無(wú)菌注射器抽取1.0*106CFU/ml銅綠假單胞菌菌液，接5號(hào)半腰椎穿刺針，在光纖電耳鏡的直視下，經(jīng)鼓膜緊張部后下象限穿刺，向鼓室內(nèi)注射，每側(cè)各100口菌液。(3)向1組豚鼠耳中吹入人指甲粉末，2組豚鼠吹入白磯粉末，3組豚鼠吹入冰片粉末，4組豚鼠吹入人指甲和白帆的混合粉末，5組豚鼠吹入人指甲和冰片的混合粉末，6組豚鼠向耳中滴入氧氟沙星液，7組豚鼠不作處理。前6組豚鼠均一日兩次。(暫時(shí)以此劑量，最佳劑量可通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)調(diào)整)具體如卜表所?。涸噭㎎劑量組別第一組第二組

6、第三組第四組第五組第六組第七組指甲3mg白磯3mg冰片3mg指甲+白研3mg指甲+冰片3mg氧氟沙星3滴(4)對(duì)7組豚鼠進(jìn)行觀察并記錄數(shù)據(jù)。4、觀察指標(biāo)鼓膜炎癥狀念評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)如下表所示：(1)0分：1分：輕度充機(jī)，伴輕度內(nèi)陷2分：中度充血，伴中度內(nèi)陷或凸起，并有輕度中耳積液3分：重度充血和內(nèi)陷，并有中到重度的中耳積液4分：鼓膜穿孔并流膿(2)進(jìn)行聽(tīng)閾測(cè)驗(yàn)，檢驗(yàn)其傳導(dǎo)性耳聾的嚴(yán)重程度。三、實(shí)驗(yàn)研究的技術(shù)路線(xiàn)制定課題收集、查找資料制定實(shí)驗(yàn)計(jì)劃做預(yù)實(shí)驗(yàn)，檢驗(yàn)可行性正式實(shí)驗(yàn)對(duì)各個(gè)豚鼠的恢復(fù)情況進(jìn)行記錄分析結(jié)果四、預(yù)期實(shí)驗(yàn)結(jié)果(1)若4、5、6組豚鼠治愈所需的時(shí)間相同或比6組所需時(shí)間短(說(shuō)明4、5、6號(hào)所

7、使用的試劑效果相當(dāng)或比抗生素效果好)(2)若在(1)成立的條件下，1、2、3組所需時(shí)間較長(zhǎng)甚至與7組一般長(zhǎng)短(說(shuō)明1、2、3號(hào)所使用的試劑對(duì)慢性化膿性中耳炎無(wú)效)(3)若1、2、3、4、5在6組豚鼠痊愈后仍未痊愈而與7組豚鼠所需時(shí)間相當(dāng)甚至比7組豚鼠情況更嚴(yán)重(說(shuō)明1、2、3、4、5所用試劑無(wú)效甚至?xí)又馗腥?(4)若1、4、5、6所需時(shí)間相同或1、4、5所需時(shí)間少于6組，而2、3組所需時(shí)間較長(zhǎng)但也能痊愈(說(shuō)明人指甲粉起主要的作用，且與抗生素效果相當(dāng)或更好)(5)若2、3、4、5、6組所需時(shí)間相當(dāng)或2、3、4、5組所需時(shí)間少于6組而1組所需時(shí)間與7組相當(dāng)(說(shuō)明人指甲粉的作用不大或無(wú)效，而冰片或

8、白帆的效果比抗生素好)五、可行性分析(1)實(shí)驗(yàn)所需儀器、試劑以及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物不難獲得。(2)該動(dòng)物模型已有前人使用過(guò)并成功使用。(3)在正式實(shí)驗(yàn)之前，會(huì)進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)然后及時(shí)調(diào)整正式實(shí)驗(yàn)中可能出現(xiàn)的問(wèn)題。綜上所述，實(shí)驗(yàn)可行。六、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析用SPSS17.0進(jìn)行隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)的方差分析方法進(jìn)行檢驗(yàn)；通過(guò)對(duì)處理組和區(qū)組的數(shù)據(jù)處理得到P值，然后推斷藥物對(duì)總體的影響。七、可能遇到的問(wèn)題及解決方案(1)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的時(shí)間不恰當(dāng)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果誤差大；多次觀察，確定進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的最佳時(shí)機(jī)。(2)操作不熟練，在麻醉時(shí)或制作豚鼠模型時(shí)導(dǎo)致大鼠死亡或大鼠狀態(tài)不佳影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果；故在實(shí)驗(yàn)之前需要練習(xí)直到能夠熟練的操作。(3)在實(shí)驗(yàn)時(shí)細(xì)菌對(duì)抗生素產(chǎn)生了耐藥性導(dǎo)致抗生素效果不佳而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。暫時(shí)未想到解決方案，若出現(xiàn)這種情況應(yīng)該需要重新實(shí)驗(yàn)然后換用新的抗生素。(4)試劑劑量把握不好，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)