細(xì)胞核移植課件

1、細(xì)胞核移植第三節(jié) 細(xì)胞核移植(yzh)第一頁(yè)，共二十九頁(yè)。細(xì)胞核移植細(xì)胞核移植：是一種利用顯微操作技術(shù)將一種動(dòng)物的細(xì)胞核移入同種或異種動(dòng)物的去核成熟卵母細(xì)胞內(nèi)的技術(shù)。 供體細(xì)胞 受體細(xì)胞 重構(gòu)胚動(dòng)物克?。翰唤?jīng)過(guò)有性生殖過(guò)程，通過(guò)細(xì)胞核移植生產(chǎn)遺傳結(jié)構(gòu)與細(xì)胞核供體相同動(dòng)物個(gè)體的技術(shù)，叫做動(dòng)物克隆。 供體細(xì)胞 受體細(xì)胞 重組胚 重組胚激活與培養(yǎng)(piyng) 胚胎移植 后代鑒定第二頁(yè)，共二十九頁(yè)。細(xì)胞核移植一 細(xì)胞核移植(yzh)發(fā)展歷程兩棲類細(xì)胞核移植魚(yú)類的核移植哺乳類的細(xì)胞核移植 第三頁(yè)，共二十九頁(yè)。細(xì)胞核移植1 兩棲類細(xì)胞核移植(yzh)1938年Spemann最先提出(t ch)將多細(xì)胞胚

2、胎的每一個(gè)細(xì)胞核移植到去掉核的卵母細(xì)胞中，使它們重新發(fā)育成胚胎的設(shè)想。1952年，Briggs和King沿用Spemann的思路和實(shí)驗(yàn)技術(shù)，首次獲得兩棲動(dòng)物美洲豹蛙胚胎細(xì)胞核移植的后代第四頁(yè)，共二十九頁(yè)。細(xì)胞核移植n 1958 1958年到年到19621962年，英國(guó)劍橋大學(xué)的年，英國(guó)劍橋大學(xué)的John Gurdon John Gurdon 和和MachineerMachineer利用爪蟾原腸內(nèi)胚層細(xì)胞核移植，利用爪蟾原腸內(nèi)胚層細(xì)胞核移植， 培育出可育的非洲爪蟾培育出可育的非洲爪蟾n 19741974年年John GurdonJohn Gurdon以同樣的方法，用青蛙腳蹼以同樣的方法，用青蛙腳

3、蹼 角質(zhì)化細(xì)胞進(jìn)行角質(zhì)化細(xì)胞進(jìn)行(jnxng)(jnxng)移核試驗(yàn)，蛙卵發(fā)育成了蝌蚪。移核試驗(yàn)，蛙卵發(fā)育成了蝌蚪。第五頁(yè)，共二十九頁(yè)。細(xì)胞核移植2 魚(yú)類的核移植從1961年開(kāi)始，童第周等以金魚(yú)和鳑鮍魚(yú)為材料(cilio)，進(jìn)行魚(yú)類不同亞科間的細(xì)胞核移植獲得成功，用以研究雜交細(xì)胞核與純種細(xì)胞核在發(fā)育功能上的差異，以及細(xì)胞質(zhì)對(duì)細(xì)胞核的影響第六頁(yè)，共二十九頁(yè)。細(xì)胞核移植 1979年，中國(guó)科學(xué)院武漢水生物研究所利用鯽魚(yú)做移核試驗(yàn)。他們把鯽魚(yú)囊胚期細(xì)胞經(jīng)過(guò)385天59代連續(xù)傳代培養(yǎng)后，再將此種培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞核移植到同種鯽魚(yú)的未受精卵中。到1980年4月，他們成功地培育了兩尾無(wú)性繁殖的幼魚(yú)，其中(qzh

4、ng)一條發(fā)育正常。第七頁(yè)，共二十九頁(yè)。細(xì)胞核移植 1989年，童第周、牛滿江又將鯽魚(yú)胚胎細(xì)胞核移入鯉魚(yú)去核的未受精卵中，實(shí)現(xiàn)了不同種間的核質(zhì)雜交(zjio)，成功地?zé)o性繁殖了“鯉鯽核魚(yú)”新品種。第八頁(yè)，共二十九頁(yè)。細(xì)胞核移植3 哺乳類的細(xì)胞核移植(yzh) 1977年，美國(guó)(mi u)緬因州巴爾港的杰克遜實(shí)驗(yàn)室用“亞無(wú)性繁殖”的方式，培育出7只單親小鼠。第九頁(yè)，共二十九頁(yè)。細(xì)胞核移植u將卵細(xì)胞受精，在精、卵核融合之前，把精核去掉，然后 放入加有適量細(xì)胞松馳B的溶液中。u經(jīng)此番(c fn)處理的卵細(xì)胞的染色體復(fù)制后出現(xiàn)了兩個(gè)核，將此 雙核細(xì)胞放入正常培養(yǎng)液中培養(yǎng)。u卵中的雙核細(xì)胞自動(dòng)融合，并且

5、細(xì)胞開(kāi)始分裂。u將此種胚胎移入母鼠子宮培育。u生產(chǎn)出7只單親小鼠。第十頁(yè)，共二十九頁(yè)。細(xì)胞核移植 1981年，瑞士日內(nèi)瓦大學(xué)和美國(guó)杰克遜實(shí)驗(yàn)室合作，首次對(duì)小鼠卵進(jìn)行移核試驗(yàn)獲得成功。他們將囊胚內(nèi)細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞的核移入去核的受精卵中，經(jīng)培養(yǎng)移核卵發(fā)育(fy)至囊胚期，再將此胚胎移入同步孕鼠子宮內(nèi)，最后產(chǎn)下兩雌一雄仔鼠，并發(fā)育(fy)成了可育的個(gè)體。第十一頁(yè)，共二十九頁(yè)。細(xì)胞核移植第十二頁(yè)，共二十九頁(yè)。細(xì)胞核移植第十三頁(yè)，共二十九頁(yè)。細(xì)胞核移植二 細(xì)胞核移植(yzh)克隆動(dòng)物的技術(shù)路線核供體細(xì)胞和獲得與取核受體細(xì)胞的準(zhǔn)備與去核細(xì)胞核移植重組胚的激活與培養(yǎng)胚胎移植核移植后代鑒定 第十四頁(yè)，共二十九頁(yè)。細(xì)

6、胞核移植1 核供體細(xì)胞獲得(hud)與取核細(xì)胞來(lái)源：胚胎細(xì)胞，干細(xì)胞，體細(xì)胞細(xì)胞類型：成纖維細(xì)胞，上皮細(xì)胞細(xì)胞周期時(shí)相：G0/G1細(xì)胞傳代數(shù)供體年齡 取核第十五頁(yè)，共二十九頁(yè)。細(xì)胞核移植2 受體細(xì)胞的準(zhǔn)備與去核減數(shù)分裂期成熟卵母細(xì)胞卵母細(xì)胞去核方法 盲吸去核法：細(xì)胞松弛素 熒光染料Hoechst33342 功能性去核法：用紫外線或激光照射使染色體失活；化學(xué)(huxu)誘導(dǎo)去核法：脫羰秋水仙堿 第十六頁(yè)，共二十九頁(yè)。細(xì)胞核移植3 細(xì)胞核移植胞質(zhì)內(nèi)直接(zhji)注射法透明帶下注射法第十七頁(yè)，共二十九頁(yè)。細(xì)胞核移植第十八頁(yè)，共二十九頁(yè)。細(xì)胞核移植第十九頁(yè)，共二十九頁(yè)。細(xì)胞核移植第二十頁(yè)，共二十九頁(yè)

7、。細(xì)胞核移植第二十一頁(yè)，共二十九頁(yè)。細(xì)胞核移植4 重組胚的激活電激活：電脈沖次數(shù)、時(shí)間、間隔；化學(xué)(huxu)激活：7%乙醇，離子霉素，鈣離子載體。 第二十二頁(yè)，共二十九頁(yè)。細(xì)胞核移植5 重組胚培養(yǎng)(piyng)和移植6 體細(xì)胞核移植后代的鑒定第二十三頁(yè)，共二十九頁(yè)。細(xì)胞核移植三 胚胎細(xì)胞核移植克隆(k ln)動(dòng)物四 體細(xì)胞克隆動(dòng)物第二十四頁(yè)，共二十九頁(yè)。細(xì)胞核移植五 影響核移植動(dòng)物成功率的因素核供體卵母細(xì)胞去核卵母細(xì)胞的成熟程度及其激活(j hu)能力核質(zhì)相互作用與細(xì)胞周期同步化重組胚的培養(yǎng)及發(fā)育第二十五頁(yè)，共二十九頁(yè)。細(xì)胞核移植六 克隆技術(shù)的應(yīng)用前景：培育優(yōu)良畜種和生產(chǎn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(dngw)

8、；生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物；生產(chǎn)人胚胎干細(xì)胞用于細(xì)胞和組織替代療法；復(fù)制瀕危的動(dòng)物物種，保存和傳播動(dòng)物物種資源。 第二十六頁(yè)，共二十九頁(yè)。細(xì)胞核移植七 克隆技術(shù)存在(cnzi)的問(wèn)題 理論問(wèn)題(wnt)分化的體細(xì)胞克隆對(duì)遺傳物質(zhì)重編的機(jī)理還不清楚；分化的體細(xì)胞克隆對(duì)遺傳物質(zhì)重編的機(jī)理還不清楚；克隆動(dòng)物是否會(huì)記住供體細(xì)胞的年齡；克隆動(dòng)物是否會(huì)記住供體細(xì)胞的年齡；克隆動(dòng)物的連續(xù)后代是否會(huì)累積突變基因；克隆動(dòng)物的連續(xù)后代是否會(huì)累積突變基因；在克隆過(guò)程中胞質(zhì)線粒體所起的遺傳作用等問(wèn)題還沒(méi)有解決。在克隆過(guò)程中胞質(zhì)線粒體所起的遺傳作用等問(wèn)題還沒(méi)有解決。 第二十七頁(yè)，共二十九頁(yè)。細(xì)胞核移植實(shí)踐問(wèn)題克隆動(dòng)物的成功率還很低克隆動(dòng)物的成功率還很低 ；生出的部分個(gè)體表現(xiàn)出生理或免疫缺限；生出的部分個(gè)體表現(xiàn)出生理或免疫缺限； 即使是正常發(fā)育的即使是正常發(fā)育的“多莉多莉”，也被發(fā)現(xiàn)有早衰，也被發(fā)現(xiàn)有早衰(zoshui)跡象；跡象；對(duì)倫理道德的沖擊。對(duì)倫理道德的沖擊。第二十八頁(yè)，共二十九頁(yè)。細(xì)胞核移植內(nèi)容(nirng)總結(jié)第三節(jié) 細(xì)胞核移植。1938年Spemann最先提出將多細(xì)胞胚胎的每一個(gè)細(xì)胞核移植到去掉核的卵母細(xì)胞中，使它們重新發(fā)育成胚胎的設(shè)想。1958年到1962年，英國(guó)