篩選雜交瘤細胞細胞培養(yǎng)篩選

1、2.2.2 2.2.2 動物細胞融合與單克隆抗體動物細胞融合與單克隆抗體1 1、概念、概念 動物細胞融合動物細胞融合也稱細胞雜也稱細胞雜交交，是指，是指兩個或多個兩個或多個動物細動物細胞形成一個細胞的過程胞形成一個細胞的過程2 2、原理：、原理： 膜的流動性膜的流動性4 4、誘導(dǎo)方法：、誘導(dǎo)方法： 聚乙二醇（聚乙二醇（PEGPEG）、）、 滅活的病毒、電激等。滅活的病毒、電激等。5 5、過程：、過程：3 3、過程：、過程：細胞相互凝集細胞相互凝集膜上蛋白質(zhì)分子和膜上蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布脂質(zhì)分子重新排布細胞膜打開細胞膜打開細胞發(fā)生融合細胞發(fā)生融合病毒表面含有的糖蛋白和一些病毒表面含有的糖

2、蛋白和一些酶能夠與細胞膜的糖蛋白發(fā)生酶能夠與細胞膜的糖蛋白發(fā)生作用，使細胞相互凝集。作用，使細胞相互凝集。6 6、優(yōu)點：、優(yōu)點： 突破了有性雜交的局限，突破了有性雜交的局限，使遠緣雜交成為可能使遠緣雜交成為可能動植物細胞在結(jié)構(gòu)上有何區(qū)別？這與它們動植物細胞在結(jié)構(gòu)上有何區(qū)別？這與它們雜交或融合過程有什么影響？雜交或融合過程有什么影響？問題討論問題討論動物細胞無細胞壁，動物細胞融合過程中動物細胞無細胞壁，動物細胞融合過程中不須去除細胞壁和再生出細胞壁。不須去除細胞壁和再生出細胞壁。問題討論問題討論、動物細胞融合與植物原生質(zhì)體融合的基本、動物細胞融合與植物原生質(zhì)體融合的基本原理是否相同？原理是否相同

3、？相同，都是細胞膜的流動性相同，都是細胞膜的流動性問題討論問題討論主要用于制備主要用于制備單克隆抗體單克隆抗體獲得雜種植株獲得雜種植株物理、化學(xué)方法物理、化學(xué)方法（同左）（同左）滅活的病毒滅活的病毒物理（離心、振物理（離心、振蕩、電激）蕩、電激）化學(xué)（聚乙二醇）化學(xué)（聚乙二醇）使細胞分散后誘使細胞分散后誘導(dǎo)細胞融合導(dǎo)細胞融合去除細胞壁后誘去除細胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合導(dǎo)原生質(zhì)體融合細胞膜的流動性細胞膜的流動性細胞膜的流動性細胞膜的流動性用途用途誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)方法步驟步驟融合的原理融合的原理動物細胞融合動物細胞融合植物體細胞雜交植物體細胞雜交比較項目比較項目？（一）獲得抗體的傳統(tǒng)方法（一）獲得抗體的

4、傳統(tǒng)方法1、方法：、方法： 向動物體內(nèi)反復(fù)注射某種抗原，使動向動物體內(nèi)反復(fù)注射某種抗原，使動物產(chǎn)生抗體，從動物血清中分離所需抗體。物產(chǎn)生抗體，從動物血清中分離所需抗體。2、缺點：、缺點： .3、解決問題的設(shè)想、解決問題的設(shè)想: 免疫反應(yīng)過程中，免疫反應(yīng)過程中，每一個每一個B淋巴淋巴細胞細胞只分泌一種只分泌一種特異性抗體。特異性抗體。 克隆單一的克隆單一的B淋巴細胞，形成細淋巴細胞，形成細胞群，獲得大量的單一抗體。胞群，獲得大量的單一抗體。4、面臨的新問題：、面臨的新問題： 一個一個B淋巴細胞不可能在體外培養(yǎng)淋巴細胞不可能在體外培養(yǎng)條件下無限增殖的。條件下無限增殖的。 .1 1、如何獲得化學(xué)性質(zhì)

5、單一、特異性強的抗體？、如何獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強的抗體？問題討論問題討論提示：提示：2 2、瘤細胞和癌細胞有何區(qū)別？、瘤細胞和癌細胞有何區(qū)別？2 2、單克隆抗體制備過程、單克隆抗體制備過程 注射抗原注射抗原B B淋巴細胞淋巴細胞骨髓瘤細胞骨髓瘤細胞細胞融合、細胞融合、篩選篩選雜交瘤細胞雜交瘤細胞細胞培養(yǎng)細胞培養(yǎng)篩選篩選，繼續(xù)培養(yǎng)，繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細胞群特定抗體的細胞群體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔單克隆抗體單克隆抗體（選擇性培養(yǎng)基）（選擇性培養(yǎng)基）誘導(dǎo)其融合的誘導(dǎo)其融合的方法有哪些？方法有哪些？單克隆抗體的制備 單克隆抗體的制備B BB

6、 B BB B B瘤瘤 瘤瘤瘤瘤 瘤瘤、細胞融合后培養(yǎng)液中有幾種細胞？、細胞融合后培養(yǎng)液中有幾種細胞？篩選雜種細胞篩選雜種細胞思考：思考：雜交瘤細胞雜交瘤細胞、制備過程中應(yīng)用哪些細胞工程技術(shù)手段？、制備過程中應(yīng)用哪些細胞工程技術(shù)手段？3、單克隆抗體的概念：、單克隆抗體的概念： 化學(xué)性質(zhì)單一，特異性強的抗體化學(xué)性質(zhì)單一，特異性強的抗體4、單克隆抗體的優(yōu)點：、單克隆抗體的優(yōu)點： 特異性強，靈敏度高，并可大量制備。特異性強，靈敏度高，并可大量制備。（三）單克隆抗體的應(yīng)用（三）單克隆抗體的應(yīng)用準確、高效、簡易、快速準確、高效、簡易、快速（導(dǎo)向作用，作為載體，生物導(dǎo)彈（導(dǎo)向作用，作為載體，生物導(dǎo)彈= =

7、單克隆抗體單克隆抗體+ +藥物，用于治療腫瘤）藥物，用于治療腫瘤）兩個過程兩個過程動物細胞培養(yǎng)過程動物細胞培養(yǎng)過程單克隆抗體制備過程單克隆抗體制備過程三個三個“一一”一個誘導(dǎo)細胞融合的新方法一個誘導(dǎo)細胞融合的新方法 滅活病毒滅活病毒一個新細胞一個新細胞雜交瘤細胞雜交瘤細胞一個優(yōu)勢一個優(yōu)勢單克隆抗體特異單克隆抗體特異性強、靈敏度高的優(yōu)勢性強、靈敏度高的優(yōu)勢 下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的抗下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的抗體實驗方案體實驗方案2、該方案能達到預(yù)期效果嗎？為什么？、該方案能達到預(yù)期效果嗎？為什么？4、圖中、圖中B為為_過程，常用過程

8、，常用_作為誘導(dǎo)劑，該細胞繼作為誘導(dǎo)劑，該細胞繼承承_的遺傳特性，既能的遺傳特性，既能_,又能又能_。1、該實驗方案的目的是、該實驗方案的目的是_3、A是從小鼠的脾臟中取得是從小鼠的脾臟中取得_,該細胞能夠產(chǎn)生該細胞能夠產(chǎn)生_5、C過程指細胞培養(yǎng)，該過程包括過程指細胞培養(yǎng)，該過程包括_培養(yǎng)和培養(yǎng)和_培養(yǎng)兩個階段，其培養(yǎng)兩個階段，其中中_代以內(nèi)的的細胞屬于細胞株。代以內(nèi)的的細胞屬于細胞株。制備單克隆抗體制備單克隆抗體B細胞細胞抗體抗體細胞融合細胞融合滅活病毒滅活病毒雙親細胞雙親細胞分泌抗體分泌抗體無限增殖無限增殖原代原代傳代傳代50B體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)骨髓瘤細胞骨髓瘤細胞雜交瘤細胞雜交瘤細胞足夠數(shù)

9、量的細胞群足夠數(shù)量的細胞群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔AC 世界上第一只克隆羊世界上第一只克隆羊“多莉多莉”的培育過程如的培育過程如圖所示，請據(jù)圖回答：圖所示，請據(jù)圖回答：乙乙甲甲abcdef(1)圖中的甲為蘇格蘭綿羊，圖中的甲為蘇格蘭綿羊，乙為多莉羊。那么，乙為多莉羊。那么，a和和b是通過是通過_分裂形成的，分裂形成的，其其DNA含量是體細胞的含量是體細胞的 _ ；c肯定是肯定是_ 細細胞，乙的遺傳性狀與提供胞，乙的遺傳性狀與提供 _的綿羊的綿羊 一致一致.減數(shù)減數(shù)一半一半體體細胞核細胞核乙乙甲甲abcdef(2)產(chǎn)生產(chǎn)生 甲和乙的過程分別甲和乙的過程分別是是和和（3）在形成乙是的過程中，）

10、在形成乙是的過程中，需要將需要將d的細胞核取出，將的細胞核取出，將c細胞核移入細胞核移入d細胞內(nèi)，此技術(shù)細胞內(nèi)，此技術(shù)叫叫。所需的受體細胞。所需的受體細胞大多采用動物卵細胞的原因大多采用動物卵細胞的原因是是（4）綿羊的白色對黑色為）綿羊的白色對黑色為顯色。若甲是白色綿羊，要顯色。若甲是白色綿羊，要判斷它是否純合體，選用與判斷它是否純合體，選用與它交配的綿羊最好是它交配的綿羊最好是-有性生殖有性生殖克隆克隆核移植核移植卵細胞大，易于操作；卵細卵細胞大，易于操作；卵細胞具有繼續(xù)分化的潛能胞具有繼續(xù)分化的潛能。黑毛黑毛乙乙甲甲abcdef（5）在產(chǎn)生多莉羊時，需將）在產(chǎn)生多莉羊時，需將e細胞形成的早期胚胎移入另一細胞形成的早期胚胎移入另一頭母羊（頭母羊（f）子宮里，這種技術(shù)）子宮里，這種技術(shù)在細胞工程中叫在細胞工程中叫（6）繼植物組織培養(yǎng)后，克?。├^植物組織培養(yǎng)后，克隆綿羊的培育成功，證明動物細綿羊的培育成功，證明動物細胞也有胞也有（7）在繁殖多