實驗一 坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備 骨骼肌收縮

1、第一部分第一部分坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備 蛙類的某些基本生命活動和生理功能與哺乳類動物有相似之處，而且其離體組織的生活條件比較簡單，易于控制和掌握，來源也較豐富，由此在生理學(xué)實驗，尤其是細(xì)胞生理學(xué)的某些實驗中，常用蛙或蟾蜍的坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本來觀察神經(jīng)肌肉的興奮性、刺激與反應(yīng)的規(guī)律及肌肉收縮的特點等。制備具有正常興奮收縮功能的蛙制備具有正常興奮收縮功能的蛙類坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本是生理學(xué)實驗的基類坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本是生理學(xué)實驗的基本操作技術(shù)之一。本操作技術(shù)之一。 蟾蜍或蛙；蛙板、探針、粗剪刀、細(xì)剪刀、尖鑷子、玻璃分針、大頭針、培養(yǎng)皿、滴管、瓷碗、鋅銅弓或鋁銀電極、任氏液。

2、取蟾蜍一只，用左手握住，以示指壓其頭部前端使其盡量前俯，右手持探針自枕骨大孔處垂直刺入，到達(dá)椎管，即將探針改變方向刺入顱腔，向各側(cè)不斷攪動，徹底搗毀腦組織；再將探針原路退出，刺向尾側(cè)，捻動探針使逐漸刺入整個椎管內(nèi)，搗毀脊髓。此時蟾蜍下頜呼吸運動應(yīng)消失，四肢松軟，即成為一毀腦脊髓的蟾蜍（pithed toad）。否則須按上法再行搗毀。 2剪除軀干上部及內(nèi)臟剪除軀干上部及內(nèi)臟 用粗剪刀在顱骨后方剪斷脊柱。左手握住蟾蜍脊柱，右手將粗剪刀沿兩側(cè)（避開坐骨神經(jīng)）剪開腹壁。此時軀干上部及內(nèi)臟即全部下垂。剪除全部軀干上部及內(nèi)臟組織，棄于瓷碗內(nèi)。 3剝皮剝皮 避開神經(jīng)，用左手持圓頭鑷子夾住脊柱，右手捏住皮膚邊

3、緣，逐步向下牽拉剝離皮膚。拉至大腿時，如阻力較大，可先剝下一側(cè)，再剝另一側(cè)。將全部皮膚剝除后，將標(biāo)本置于盛有任氏液的培養(yǎng)皿中。 4、分離兩腿、分離兩腿：避開坐骨神經(jīng)，用粗剪刀從背側(cè)剪去骶骨，然后沿中線將脊柱剪成左右兩半，再從恥骨聯(lián)合中央剪開（為保證兩側(cè)坐骨神經(jīng)完整，應(yīng)避免剪時偏向一側(cè)）。將已分離的標(biāo)本浸入盛有任氏液的培養(yǎng)皿中。 5、游離坐骨神經(jīng)：、游離坐骨神經(jīng)：取腿一條，先用玻璃分針沿脊柱側(cè)游離坐骨神經(jīng)腹腔部，然后用大頭針將標(biāo)本背位固定于干凈蛙板上。再用玻璃分針循股二頭肌和半膜肌之間的坐骨神經(jīng)溝，縱向分離暴露坐骨神經(jīng)之大腿部分，直至分離至腘窩脛神經(jīng)分叉處。然后剪斷股二頭肌腱、半腱肌和半膜肌肌腱

4、，并繞至前方剪斷股四頭肌腱。自上向下剪斷所有坐骨神經(jīng)分支。將連著34節(jié)椎骨的坐骨神經(jīng)分離出來。 6、完成坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本：、完成坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本：將已游離的坐骨神經(jīng)搭在腓腸肌上。用粗剪刀自膝關(guān)節(jié)周圍向上剪除并刮凈所有大腿肌肉，在距膝關(guān)節(jié)約1cm處剪斷股骨。棄去上段股骨，保留部分即為坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本 一、實驗?zāi)康囊?、實驗?zāi)康?. 學(xué)習(xí)和掌握骨骼肌收縮的記錄方法學(xué)習(xí)和掌握骨骼肌收縮的記錄方法2. 觀察刺激強(qiáng)度與肌肉收縮反應(yīng)的關(guān)系觀察刺激強(qiáng)度與肌肉收縮反應(yīng)的關(guān)系3. 觀察骨骼肌的單收縮、收縮的總和以及強(qiáng)觀察骨骼肌的單收縮、收縮的總和以及強(qiáng)直收縮現(xiàn)象直收縮現(xiàn)象二、原理二、原理腓腸肌由許多肌纖維組

5、成，刺激腓腸肌時，不同的刺激強(qiáng)度會引起肌腓腸肌由許多肌纖維組成，刺激腓腸肌時，不同的刺激強(qiáng)度會引起肌肉的不同反應(yīng)。當(dāng)刺激強(qiáng)度過小時，肌肉不發(fā)生收縮反應(yīng)，刺激為閾肉的不同反應(yīng)。當(dāng)刺激強(qiáng)度過小時，肌肉不發(fā)生收縮反應(yīng)，刺激為閾下刺激。而能引起肌肉發(fā)生收縮反應(yīng)的最小刺激為閾刺激，刺激的強(qiáng)下刺激。而能引起肌肉發(fā)生收縮反應(yīng)的最小刺激為閾刺激，刺激的強(qiáng)度稱為閾強(qiáng)度，當(dāng)全部肌纖維同時收縮時，出現(xiàn)最大的收縮反應(yīng)，引度稱為閾強(qiáng)度，當(dāng)全部肌纖維同時收縮時，出現(xiàn)最大的收縮反應(yīng)，引起最大收縮反應(yīng)的最小刺激強(qiáng)度稱為最適刺激強(qiáng)度。起最大收縮反應(yīng)的最小刺激強(qiáng)度稱為最適刺激強(qiáng)度。肌肉組織對于一個閾上強(qiáng)度的刺激發(fā)生一次迅速的收縮

6、反應(yīng)，稱為單肌肉組織對于一個閾上強(qiáng)度的刺激發(fā)生一次迅速的收縮反應(yīng)，稱為單收縮。單收縮的過程可分三個時期：潛伏期、縮短期和舒張期。收縮。單收縮的過程可分三個時期：潛伏期、縮短期和舒張期。兩個同等強(qiáng)度的閾上刺激，相繼作用于神經(jīng)肌肉標(biāo)本，如果刺激間隔兩個同等強(qiáng)度的閾上刺激，相繼作用于神經(jīng)肌肉標(biāo)本，如果刺激間隔小于單收縮的時程，則出現(xiàn)兩個收縮反應(yīng)的重疊，稱為收縮的總和。小于單收縮的時程，則出現(xiàn)兩個收縮反應(yīng)的重疊，稱為收縮的總和。 強(qiáng)直收縮：不完全強(qiáng)直收縮；完全強(qiáng)直收縮。強(qiáng)直收縮：不完全強(qiáng)直收縮；完全強(qiáng)直收縮。a bcd蟾蜍坐骨神經(jīng)腓腸肌單收縮曲線蟾蜍坐骨神經(jīng)腓腸肌單收縮曲線三、試劑與器材三、試劑與器材

7、 蛙、計算機(jī)、生物信號處理系統(tǒng)、解剖針、手術(shù)蛙、計算機(jī)、生物信號處理系統(tǒng)、解剖針、手術(shù)剪、圓頭手術(shù)鑷、尖頭手術(shù)鑷、玻璃分針、蛙板、剪、圓頭手術(shù)鑷、尖頭手術(shù)鑷、玻璃分針、蛙板、肌槽、連接導(dǎo)線、張力換能器、刺激輸出線、任肌槽、連接導(dǎo)線、張力換能器、刺激輸出線、任氏液、棉線、培養(yǎng)皿。氏液、棉線、培養(yǎng)皿。 肌槽肌槽張力換能器張力換能器1、剝制有活性的坐骨神經(jīng)、剝制有活性的坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本腓腸肌標(biāo)本（在任氏液中浸泡十分鐘左右，使其興奮性較穩(wěn)定）。（在任氏液中浸泡十分鐘左右，使其興奮性較穩(wěn)定）。2、連接實驗裝置、連接實驗裝置 將張力換能器和肌槽固定在鐵支架上，肌肉標(biāo)本的股骨固將張力換能器和肌槽固定在鐵

8、支架上，肌肉標(biāo)本的股骨固定于肌槽側(cè)面的小孔中，腓腸肌跟腱的結(jié)扎線連于張力換定于肌槽側(cè)面的小孔中，腓腸肌跟腱的結(jié)扎線連于張力換能器的受力片上，連線應(yīng)松緊適宜，并與桌面垂直，張力能器的受力片上，連線應(yīng)松緊適宜，并與桌面垂直，張力換能器的輸入端與第四通道相連換能器的輸入端與第四通道相連四、實驗內(nèi)容四、實驗內(nèi)容 （步驟）3、調(diào)節(jié)刺激器，改變刺激強(qiáng)度（從弱到強(qiáng)），觀察刺激強(qiáng)調(diào)節(jié)刺激器，改變刺激強(qiáng)度（從弱到強(qiáng)），觀察刺激強(qiáng)度變化對肌肉收縮的影響度變化對肌肉收縮的影響四、實驗內(nèi)容四、實驗內(nèi)容 （步驟）四、實驗內(nèi)容四、實驗內(nèi)容 （步驟）4、單收縮的分析、單收縮的分析電極直接刺激腓腸肌，測量單收縮的電極直接刺激

9、腓腸肌，測量單收縮的3 3個個時程：潛伏期、收縮期和舒張期時程：潛伏期、收縮期和舒張期刺激參數(shù)不變，刺激坐骨神經(jīng)，再測量單刺激參數(shù)不變，刺激坐骨神經(jīng)，再測量單收縮的三個時程收縮的三個時程四、實驗內(nèi)容四、實驗內(nèi)容 （續(xù)）5、復(fù)合收縮的分析、復(fù)合收縮的分析刺激強(qiáng)度不變刺激強(qiáng)度不變, ,調(diào)整刺激頻率調(diào)整刺激頻率, ,記錄不完全記錄不完全強(qiáng)直收縮曲線。強(qiáng)直收縮曲線。逐漸增大刺激頻率，記錄腓腸肌的完全強(qiáng)逐漸增大刺激頻率，記錄腓腸肌的完全強(qiáng)直收縮曲線。直收縮曲線。五、注意事項五、注意事項 標(biāo)本制備時要注意保持標(biāo)本的標(biāo)本制備時要注意保持標(biāo)本的濕潤濕潤 標(biāo)本制備時盡量標(biāo)本制備時盡量避免使用尖銳的器械避免使用尖

10、銳的器械，以免損傷神經(jīng)、肌肉，以免損傷神經(jīng)、肌肉 使用電刺激時，使用電刺激時，刺激強(qiáng)度不宜太大刺激強(qiáng)度不宜太大，否則可能導(dǎo)致神經(jīng)的損，否則可能導(dǎo)致神經(jīng)的損傷傷 實驗中保持換能器與標(biāo)本連線的實驗中保持換能器與標(biāo)本連線的張力不變張力不變 標(biāo)本未給刺激即出現(xiàn)攣縮，是由于標(biāo)本未給刺激即出現(xiàn)攣縮，是由于漏電漏電引起，請檢查連接引起，請檢查連接 每兩次剌激之間要讓標(biāo)本休息每兩次剌激之間要讓標(biāo)本休息30秒，秒，連續(xù)刺激不可超過連續(xù)刺激不可超過5s。 并用任氏液濕潤標(biāo)本，以保持良好興奮性。并用任氏液濕潤標(biāo)本，以保持良好興奮性。1、 隨著刺激強(qiáng)度的增加，肌肉的收縮曲線出現(xiàn)什么隨著刺激強(qiáng)度的增加，肌肉的收縮曲線出現(xiàn)什么變化，繪出該變化的曲線，并在相應(yīng)部位標(biāo)出對變化，繪出該變化的曲線，并在相應(yīng)部位標(biāo)出對應(yīng)的刺激強(qiáng)度的大小，其中必須標(biāo)出應(yīng)的刺激強(qiáng)度的大小，其中必須標(biāo)出閾刺激強(qiáng)度閾刺激強(qiáng)度、最適刺激強(qiáng)度最適刺激強(qiáng)度的大小，最后再分析肌肉收縮曲線的大小，最后再分析肌肉收縮曲線出現(xiàn)這些變化的原因。出現(xiàn)這些變化的原因。2、直接刺激腓腸肌與刺激神經(jīng)的單收縮曲線有何不、直接刺激腓腸肌與刺激神經(jīng)的單收縮曲線有何不同，繪出各自的曲線并說明原因。同，繪出各自的曲線并說明原因。六、結(jié)果