2011CB504700-重要病毒跨種間感染與傳播致病的分子機(jī)制研究

1、項(xiàng)目名稱：重要病毒跨種間感染與傳播致病的分子機(jī)制研究首席科學(xué)家：高福中國科學(xué)院微生物研究所起止年限：2011.12011.1 至 2015.82015.8依托部門：中國科學(xué)院二、預(yù)期目標(biāo)總體目標(biāo)本項(xiàng)目根據(jù)國家新發(fā)人類傳染病防治上的戰(zhàn)略需求，聚焦國際上病毒病研究的前沿，立足于我國重要病毒性傳染病發(fā)生與流行的現(xiàn)狀，選擇新型冠狀病毒、乙腦病毒、登革病毒、狂犬病毒和流感病毒等對(duì)我國具有嚴(yán)重危害或潛在危害的代表性病毒為主要研究對(duì)象，運(yùn)用病毒學(xué)、分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和結(jié)構(gòu)生物學(xué)等現(xiàn)代生命科學(xué)技術(shù)手段，揭示重要病毒尤其是新型病毒在動(dòng)物宿主中的生態(tài)分布特征；解析病毒基因變異和進(jìn)化規(guī)律，闡明病毒跨種間感染與致

2、病的分子基礎(chǔ)， 在病毒跨種間傳播研究基礎(chǔ)理論方面有突破，進(jìn)一步推動(dòng)我國在該領(lǐng)域的研究達(dá)到國際先進(jìn)水平，為我國新發(fā)傳染病的防治提供科學(xué)支撐。通過該項(xiàng)目的實(shí)施，將不僅培養(yǎng)一批在病毒學(xué)研究領(lǐng)域國際創(chuàng)新型拔尖人才和學(xué)術(shù)骨干，形成具有國際競(jìng)爭(zhēng)力的團(tuán)隊(duì)，而且將建立分子病毒學(xué)、 分子免疫學(xué)和病毒生態(tài)學(xué)研究等科研基地，為我國新發(fā)人傳染病的預(yù)防與控制水平的持續(xù)提升奠定穩(wěn)固的科學(xué)基礎(chǔ)。五年預(yù)期目標(biāo)1.建立自然貯存宿主重要病毒病原生態(tài)學(xué)研究平臺(tái)從野生動(dòng)物中分離新型冠狀病毒、尼帕或類似副粘病毒、漢坦病毒、流感病毒；弄清楚SARSSARS 病毒直接動(dòng)物溯源和生態(tài)傳播鏈；闡明我國境內(nèi)蝙蝠體內(nèi)感染和攜帶的幾種已知人類重要病

3、毒的種類、分布和病毒在蝙蝠等重要貯存動(dòng)物貯存和傳播的分子機(jī)理，揭示乙腦病毒在不同動(dòng)物宿主之間的傳播機(jī)制與傳播關(guān)系；明確高致病性禽流感病毒主要疫源地（青海湖流域、洞庭湖）生態(tài)的分布、儲(chǔ)存方式、 生存及消長規(guī)律，以及流感病毒在家禽和哺乳動(dòng)物的生態(tài)分布，建立自然宿主動(dòng)物病毒資源庫。2闡明重要病毒分子變異和進(jìn)化的規(guī)律以及生物學(xué)特性通過對(duì)新型冠狀病毒、乙腦病毒、尼帕或類似副粘病毒、流感病毒等進(jìn)行病毒的全基因組序列測(cè)定，揭示功能基因組的遺傳變 異特征；通過基因組信息學(xué)特征分析，揭示病毒基因組進(jìn)化規(guī)律。確定登革病毒在蚊子細(xì)胞 中復(fù)制所必須的 5 5 UTRUTR 和 3 3 UTRUTR 順勢(shì)作用元件，鑒定

4、出在登革病毒復(fù)制過程中起重要作用的種屬特異順勢(shì)作用元件和細(xì)胞因子。闡明重要病毒尤其是新型病毒的生物學(xué)特性，括病毒的致病性、傳播性和感染性，揭示病毒基因變異對(duì)病毒致病性與傳播性的影響等，奠定病毒種間傳播研究的分子基礎(chǔ)。3 3、 揭示跨種間傳播中病毒配體與受體的作用機(jī)制用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)和反向遺傳操作技術(shù)構(gòu)建系列假病毒及嵌合病毒，結(jié)合蛋白質(zhì)生物大分子相互作用研究，闡明病毒配體與不同物種宿主細(xì)胞受體的相互作用機(jī)制，病毒侵入宿主細(xì)胞過程的囊膜蛋白-受體結(jié)合與融合機(jī)制；揭示部分新型冠狀病毒的受體類型及性質(zhì)，奠定型冠狀病毒跨物種感染研究的基礎(chǔ)；通過體外真核表達(dá)病毒識(shí)別宿主細(xì)胞受體蛋白， 弄清基因重要結(jié)構(gòu)

5、位點(diǎn)的改變， 對(duì)其受體結(jié) 合功能和侵入細(xì)胞功能的影響， 以及與病毒高致病力的關(guān)系； 應(yīng)用細(xì)胞轉(zhuǎn)染等現(xiàn)代技術(shù)， 在 不操作活病毒的基礎(chǔ)上，找尋黃病毒受體。4 4、 解析重要病毒在不同宿主細(xì)胞中的復(fù)制機(jī)制利用現(xiàn)代生命組學(xué)等技術(shù)解析新型冠狀病毒、乙型腦炎病毒等基因組復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、表達(dá)以及組裝的機(jī)理，弄清病毒蛋白在不同宿主細(xì)胞復(fù)制過程中的作用基礎(chǔ)； 解析病毒在不同宿主細(xì)胞復(fù)制過程中病毒及宿主細(xì)胞MicroRNAMicroRNA表達(dá)譜改變，以及 MicroRNAMicroRNA 表達(dá)譜對(duì)不同病毒復(fù)制轉(zhuǎn)錄的影響與結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，探討病毒感染的種屬與組織嗜性及復(fù)制的共性與特性；鑒定出和登革熱病毒的蚊子細(xì)胞蛋白因子，

6、確定它們?cè)诓《?RNARNA 復(fù)制過程中的作用。解析流感病毒聚合酶基因突變、插入、缺失等對(duì)病毒 復(fù)制和致病性的影響。5、揭示宿主限制性因子在病毒跨種間傳播中的作用機(jī)制篩選鑒定出與流感病毒、漢坦病毒、狂犬病毒和逆轉(zhuǎn)錄病毒蛋白互作的宿主細(xì)胞限制性因子；通過研究不同種屬的宿主限制性因子對(duì)病毒感染性的影響，闡明宿主限制性因子在病毒感染、致病及跨種屬感染中的分子機(jī)制。并通過研究病毒蛋白與宿主細(xì)胞內(nèi)蛋白的相互作用，篩選與病毒相關(guān)蛋白發(fā)生相互作用的細(xì)胞內(nèi)靶蛋白，探討相關(guān)新蛋白與靶蛋白之間的相互作用對(duì)病毒機(jī)能的影響，并為將來研制小分子藥物奠定理論基礎(chǔ)。6 6、 建立新型病毒感染動(dòng)物模型建立不同生理和免疫狀態(tài)下

7、流感病毒或新型冠狀病毒等病 毒感染動(dòng)物模型，揭示實(shí)驗(yàn)動(dòng)物病毒感染、復(fù)制、傳播能力、機(jī)體免疫應(yīng)答水平變化、機(jī)體病變和進(jìn)程等，結(jié)合感染前生理和免疫狀態(tài)的本底情況，揭示免疫應(yīng)答水平的不同與病毒致病能力的關(guān)系，解析不同免疫狀態(tài)導(dǎo)致病毒不同致病能力的分子作用機(jī)制。建立人 MHCMHC 轉(zhuǎn)基因小鼠感染模型；揭示 CD8+TCD8+T 和 CD4+TCD4+T 淋巴細(xì)胞比例及分布規(guī)律、細(xì)胞因子釋放情況 等免疫反應(yīng)變化規(guī)律，闡明 MHCMHC 限制性在病毒跨種間傳播中的作用；建立新型病毒體內(nèi)分 布實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)小鼠模型。7 7、人才培養(yǎng)與基地建設(shè)培養(yǎng)一批在病毒學(xué)研究領(lǐng)域國際創(chuàng)新型拔尖人才和學(xué)術(shù)骨干，形成具有國際競(jìng)爭(zhēng)

8、力的團(tuán)隊(duì)，造就一支跨學(xué)科、跨領(lǐng)域、精誠合作、團(tuán)結(jié)奮進(jìn)的科研隊(duì)伍，而且將建立分子病毒學(xué)、分子免疫學(xué)和病毒生態(tài)學(xué)研究等科研基地，在新型病毒生態(tài)學(xué)、病毒生理與病理學(xué)、病毒結(jié)構(gòu)學(xué)、病毒基因組學(xué)等研究領(lǐng)域取得重大突破，發(fā)表百篇以上具有國際前沿水平的科研論文，為我國重要傳染病的防治提供理論和科學(xué)支撐。三、研究方案學(xué)術(shù)思路：本項(xiàng)目立足于我國重要病毒傳染病產(chǎn)生與跨種間傳播的現(xiàn)狀與國家在傳染病防控方面的重大需求，綜合現(xiàn)代病毒生態(tài)學(xué)、分子病毒學(xué)、分子生物學(xué)、生物信息學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和生物化學(xué)等，以解析病毒跨種間傳播機(jī)理為目標(biāo)，以新型冠狀病毒、黃病毒、狂犬病毒、流感病毒等為重點(diǎn)研究對(duì)象，利用學(xué)科交叉，發(fā)揮多學(xué)科優(yōu)勢(shì)，

9、從病毒的生態(tài)分布、遺傳變異與進(jìn)化、病毒與宿主細(xì)胞相互作用等層面揭示重要病毒跨種間傳播與致病的分子機(jī)制（見圖 1 1）。通過本項(xiàng)目實(shí)施，造就一支在病毒跨種間傳播研究領(lǐng)域具有國際競(jìng)爭(zhēng)力的優(yōu)秀團(tuán)隊(duì)，在新發(fā)傳染病發(fā)生機(jī)制研究方面取得重大突破，為國家應(yīng)對(duì)突發(fā)公共衛(wèi)生事件、構(gòu)筑公共安全體系、保障人民健康提供理論依據(jù)和技術(shù)支撐。技術(shù)路線:詳見流程圖（圖 1 1 ）。本研究將系統(tǒng)地研究新型冠狀病毒、乙腦病毒、狂犬病毒、流感病毒等重要病毒的生態(tài)分布、變異進(jìn)化規(guī)律、病毒與受體的識(shí)別、病毒在細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制機(jī)制、宿主限制性因子對(duì)病毒復(fù)制的影響等，圍繞病毒跨種間感染傳播與致病的分子機(jī)制開展研究四、年度計(jì)劃研究?jī)?nèi)容預(yù)期目標(biāo)

10、1 1.在全國各地大量采集蝙蝠、嚙齒類動(dòng)1 1.采集蝙蝠樣本 500500 份；家畜樣本物、食蟲目動(dòng)物的血清、 咽拭子和肛拭500500 份；子樣品；采集不同地區(qū)，不同動(dòng)物，包2 2.獲得流感病毒、新型冠狀病毒、乙括野生動(dòng)物、動(dòng)物園動(dòng)物和特種養(yǎng)殖經(jīng)腦病毒等的分離毒株和序列； 獲得濟(jì)動(dòng)物、以及包括雞、豬和犬等家畜和分離毒株的致病性和傳播性特點(diǎn)。家禽的棉拭子、組織和血液樣品 3 3.獲得不冋基因型的乙型腦炎病毒、2 2 .進(jìn)行流感病毒、新型冠狀病毒、乙腦病登革病毒、流感病毒囊膜蛋白；獲第毒等的分離和病毒流行病學(xué)調(diào)查研究，得部分囊膜蛋白的晶體結(jié)構(gòu)。研究病毒的宿主特征，對(duì)分離鑒定的病4 4.對(duì)病毒目的

11、基因進(jìn)行定點(diǎn)突變， 觀一毒進(jìn)行全基因組測(cè)定與分析； 觀察新型察病毒突變株和野生株對(duì)不冋宿年病毒的生物學(xué)特征，重點(diǎn)是對(duì)動(dòng)物的致主細(xì)胞及不同組織來源細(xì)胞中復(fù)病性和傳播性流感病毒在不冋宿主中制能力的差別，尋找決定病毒在不的復(fù)制及跨種屬傳播機(jī)制；同種屬宿主細(xì)胞中復(fù)制的關(guān)鍵位3 3.利用原核或真核細(xì)胞表達(dá)乙型腦炎病點(diǎn)。毒、登革病毒、流感病毒囊膜蛋白；利5 5.篩選出 5-105-10 種分別與流感病毒、用分子篩層析、離子交換等技術(shù)分離純漢坦病毒及狂犬病病毒蛋白相互化蛋白；病毒囊膜蛋白的晶體篩選； 建作用的宿主細(xì)胞因子。立自噬途徑研究細(xì)胞模型。6 6獲得人 HLA-A2/DR1HLA-A2/DR1和4 4

12、.冠狀病毒在不冋宿主中的復(fù)制及跨種HLA-A11/DR1HLA-A11/DR1 轉(zhuǎn)基因小鼠。完成研究?jī)?nèi)容預(yù)期目標(biāo)屬傳播機(jī)制；登革病毒在不冋宿主中的5-105-10 株高致病性禽流感病毒、狂復(fù)制及跨種屬傳播機(jī)制；病毒在不冋組犬病毒等新型病毒的生物學(xué)特征織中復(fù)制的 miRNAmiRNA 表達(dá)譜對(duì)病毒復(fù)鑒定，獲得至少 4 4 株具有不同神制的調(diào)控及分子機(jī)制；經(jīng)嗜性新型病毒。5 5.以成熟的病毒蛋白與宿主因子互作平7 7.發(fā)表研究論文 1010 篇以上臺(tái)為基礎(chǔ)，尋找流感病毒的宿主限制性 因子; ;篩選與漢坦病毒主蛋白（核蛋白 為主）相互作用的宿主細(xì)胞因子；通過 蛋白質(zhì)互作手段，找出種間毒株差異的 宿主

13、相關(guān)蛋白，并獲得不冋毒力狂犬病 毒株感染的潛伏期早期和感染中、晚期免疫相關(guān)細(xì)胞和中樞神經(jīng)組織材料。6 6.人 MHCMHC 轉(zhuǎn)基因小鼠構(gòu)建；高致病性禽 流感病毒、西尼羅病毒等新型病毒嗜神 經(jīng)生物學(xué)特征鑒定研究?jī)?nèi)容預(yù)期目標(biāo)1.1.檢測(cè)新型冠狀病毒、新型漢坦病毒、1.1.獲得 1010 株以上病毒的部分基因組序新型副粘病毒新型感病毒在動(dòng)物屮的夕列；確疋新型病毒與人類病毒在在血感染情況；對(duì)病毒檢測(cè)為陽性樣品進(jìn)清學(xué)和基因序列上的差異。行病毒培養(yǎng)和分離；分析新檢測(cè)的病2.2.獲得流感病毒、新型冠狀病毒、乙腦毒序列與已知人類同類病毒的差異和病毒等的分離毒株和全基因組序列；進(jìn)化關(guān)系。獲得流行毒株的遺傳變異規(guī)

14、律和生物2.2.繼續(xù)進(jìn)行病毒的分離和調(diào)查；研究病學(xué)特性；建立病毒的反向遺傳操作系毒在經(jīng)過不同宿主傳播后病毒生物學(xué)統(tǒng) 1 1 套。第特性的改變特征和規(guī)律；對(duì)分離鑒定3.3.獲得乙腦病毒、登革病毒細(xì)胞候選受的病毒進(jìn)行全基因組測(cè)定，利用基因體；獲得一些影響流感病毒 HAHA 蛋白二組信息學(xué)分析技術(shù)，研究病毒的遺傳與唾液酸受體的重要蛋白殘基；初步變異和分子進(jìn)化規(guī)律和特征，并建立了解流感病毒如何影響細(xì)胞自噬的信年病毒的反向遺傳操作技術(shù)系統(tǒng)。號(hào)通路。3.3.分離病毒易感細(xì)胞膜蛋白，利用 GSTGST4.4.獲得目的重組病毒；建立人冠狀病毒pull-dowpull-dow n n 的方式篩選候選受體；質(zhì)庫；

15、揭示不冋突變對(duì)病毒 RNARNA 翻譯譜鑒疋候選受體；研究不冋流感病毒和復(fù)制的影響；獲得宿主細(xì)胞 miRNAmiRNAHAHA 蛋白與受體的作用特征；在細(xì)胞與病毒 miRNAmiRNA 表達(dá)譜。模型上研究自噬影響流感病毒侵入的5.5.篩選出 2-62-6 種分別與流感病毒和漢坦分子機(jī)制。病毒相互作用的宿主限制性因子；闡4.4.流感病毒在不冋宿主中的復(fù)制及跨種明部分宿主限制性因子對(duì)流感病毒和屬傳播機(jī)制；冠狀病毒在不冋宿主中漢坦病毒復(fù)制的影響及其作用機(jī)制；研究?jī)?nèi)容預(yù)期目標(biāo)的復(fù)制及跨種屬傳播機(jī)制；登革病毒獲得狂犬病病毒感染前后宿主在蛋白在不同宿主中的復(fù)制及跨種屬傳播機(jī)質(zhì)水平的差異點(diǎn)6.6.明確高致病

16、性禽流感病毒對(duì)在制；病毒在不冋組織中復(fù)制的 miRNAmiRNA表達(dá)譜對(duì)病毒復(fù)制的調(diào)控及分子機(jī)HLA-A2/DR1HLA-A2/DR1 、HLA-A11/DR1HLA-A11/DR1 轉(zhuǎn)基制;因小鼠體內(nèi)感染特性，初步揭示MHCMHC 限制性在高致病性禽流感病毒5.5. 運(yùn)用蛋白- -蛋白互作以及病毒學(xué)方法探索佰主限制性因子在流感病毒復(fù)制跨物種感染過程中的作用；完成新型過程中的調(diào)控機(jī)制；追蹤宿主限制性病毒的基因組測(cè)序，利用生物信息學(xué)因子與病毒核蛋白相互作用后對(duì)病毒方法并發(fā)現(xiàn)嗜神經(jīng)性相關(guān)毒力位點(diǎn)，復(fù)制、裝配及成熟釋放的影響和生物通過反向遺傳學(xué)手段進(jìn)行驗(yàn)證。學(xué)意義；通過色譜質(zhì)譜技術(shù)對(duì)外周免疫相關(guān)細(xì)胞

17、和中樞神經(jīng)組織進(jìn)行蛋白 質(zhì)組學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)狂犬病病毒感染前 后宿主在蛋白質(zhì)組水平表現(xiàn)出的差異 占；八、6.6.建立病毒體內(nèi)分布實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)動(dòng)物模型，對(duì)高致病性禽流感病毒等病毒的感染動(dòng)力學(xué)進(jìn)行初步探討。7.7.發(fā)表研究論文 2020 篇以上研究?jī)?nèi)容預(yù)期目標(biāo)1.1.對(duì)檢測(cè)為陽病毒性的進(jìn)行病毒分離培1.1.獲得 3-53-5 株新分離病毒的全基因養(yǎng)；開展新分類病毒的細(xì)胞和動(dòng)物敏組序列；揭示野生動(dòng)物或豕畜冠狀感性實(shí)驗(yàn)，評(píng)價(jià)病毒的佰主范圍和對(duì)病毒的遺傳變異情況。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的致病能力；2.2.建立病毒的毒株庫和基因庫；確定2.2.繼續(xù)進(jìn)行病毒分子流行病學(xué)的調(diào)查與影響病毒致病性和傳播性的關(guān)鍵研究，分析病毒的進(jìn)化和變

18、異規(guī)律；基因位點(diǎn)。利用構(gòu)建的反向遺傳操作技術(shù)平臺(tái)，3.3.獲得 1-21-2 個(gè)乙腦病毒、登革病毒研究病毒基因點(diǎn)變異、基因突變、基受體或輔助受體；從分子結(jié)構(gòu)水平第因重配等對(duì)病毒致病性和傳播性的影揭示流感病毒 HAHA 蛋白與唾液酸響，重點(diǎn)探討影響病毒傳播特性尤其受體相互作用影響流感病毒跨種三是跨種間傳播特性的關(guān)鍵因子或因間傳播的機(jī)制；闡明流感病毒表達(dá)年素。蛋白如何影響細(xì)胞自噬水平。3.3.在細(xì)胞模型上對(duì)篩選的乙腦病毒、登4.4.揭示病毒在不冋宿主上生長能力革病毒候選受體進(jìn)行進(jìn)一步的驗(yàn)證；的動(dòng)態(tài)變化；獲得人冠狀病毒感染流感病毒突變體的表達(dá)純化、與唾液性克隆；獲得四種病毒 RNARNA 上的酸受體

19、復(fù)合體的晶體結(jié)構(gòu)；在細(xì)胞模細(xì)胞蛋白因子。型上研究自噬影響流感病毒侵入的分5.5.深入闡明宿主限制性因子在流感子機(jī)制。病毒及漢坦病毒復(fù)制過程中的調(diào)4.4.流感病毒在不冋宿主中的復(fù)制及跨種控機(jī)制；篩選出 1-21-2 個(gè)與狂犬病屬傳播機(jī)制；冠狀病毒在不冋宿主中病毒相互作用的宿主限制性因子。的復(fù)制及跨種屬傳播機(jī)制；登革病毒6.6.通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)獲得流感病毒體研究?jī)?nèi)容預(yù)期目標(biāo)在不同宿主中的復(fù)制及跨種屬傳播機(jī)內(nèi)分布實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)動(dòng)物模型；通過細(xì)制；病毒在不冋組織中復(fù)制的 miRNAmiRNA胞學(xué)和動(dòng)物學(xué)實(shí)驗(yàn)，初步闡明新型表達(dá)譜對(duì)病毒復(fù)制的調(diào)控及分子機(jī)病毒嗜神經(jīng)性相關(guān)毒力位點(diǎn)的作制;用機(jī)制5.5.繼續(xù)探索佰主限

20、制性因子在流感病毒7.7.發(fā)表研究論文 2020 篇以上及漢坦病毒復(fù)制過程中的調(diào)控機(jī)制；探索弱毒誘導(dǎo)的早期抗感染因子（宿主限制性因子）的本質(zhì)和強(qiáng)毒誘導(dǎo)的早期致病因子對(duì)宿主限制性因子的影響；6.6.病毒體內(nèi)分布實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)動(dòng)物模型構(gòu)建；新型病毒嗜神經(jīng)性相關(guān)毒力位點(diǎn)的功能研究。1.1.研究新型病毒的受體及其跨種物種感1.1.揭示蝙蝠、嚙齒類動(dòng)物、食蟲目動(dòng)第染的分子機(jī)理研究；分析我國漢坦腎出物在病毒跨種群傳播的關(guān)鍵基因血熱疾病主要疫區(qū)疾病流行情況與病序列；初步弄清楚我國犬流感病四毒遺傳變異的關(guān)系；檢測(cè)犬流感病毒的毒的可能的來源。流行情況。2.2.豐富病毒毒株庫和基因庫；闡明新年2.2.持續(xù)進(jìn)行病毒的分離

21、，密切關(guān)注動(dòng)物臨型病毒的基因和生物學(xué)特點(diǎn)；確疋床和人醫(yī)臨床新型病毒的出現(xiàn)和新型病毒非編碼區(qū)的功能位點(diǎn)。研究?jī)?nèi)容預(yù)期目標(biāo)病毒的基因組特征；并利用構(gòu)建的反向3.3.獲得重組表達(dá)的受體蛋白；闡明病遺傳操作技術(shù)平臺(tái)，研究病毒基因非編毒囊膜蛋白與受體直接的相互作碼區(qū)的作用和功能，探討病毒基因非編用能力。碼區(qū)核苷酸的改變對(duì)病毒致病性和傳4.4.揭示病毒在體內(nèi)不冋部位的復(fù)制播性重點(diǎn)是跨種間傳播特性的影響。能力的差別；揭示病毒突變株和野3.3.根據(jù)前二年研究結(jié)果，如果未按原計(jì)劃生株對(duì)不同種屬細(xì)胞感染，復(fù)制能獲得病毒的受體或輔助受體， 將采用其力的差別；分析影響病毒在宿主中他方法進(jìn)一步師選；對(duì)已師選到的受體復(fù)制

22、能力的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。進(jìn)行體外表達(dá)，研究病毒囊膜蛋白與受5.5.闡明不同種屬宿主細(xì)胞限制性因體的相互作用。子對(duì)流感病毒和漢坦病毒感染及4.4.流感病毒在不冋宿主中的復(fù)制及跨種致病的分子基礎(chǔ)和調(diào)控機(jī)制；確疋屬傳播機(jī)制；冠狀病毒在不冋宿主中的狂犬病病毒結(jié)構(gòu)蛋白中哪種成分復(fù)制及跨種屬傳播機(jī)制；登革病毒在不在影響佰主限制性因子方面發(fā)揮同宿主中的復(fù)制及跨種屬傳播機(jī)制；病主要作用毒在不同組織中復(fù)制的miRNAmiRNA 表達(dá)6.6.完成咼致病性禽流感病毒在小鼠譜對(duì)病毒復(fù)制的調(diào)控及分子機(jī)制。體內(nèi)的感染動(dòng)力學(xué)研究，揭示咼致5.5.比較不同種屬的宿主限制性因子對(duì)流病性禽流感病毒在哺乳動(dòng)物體內(nèi)感病毒感染、致病影響的差異

23、；比較導(dǎo)的組織嗜性和感染過程；通過蛋白致 HFRSHFRS 和 HPSHPS、重型和輕型 HFRSHFRS質(zhì)組學(xué)、生物芯片等技術(shù)發(fā)現(xiàn)與新的來源于不同宿主的不同型別的漢坦型病毒嗜神經(jīng)性相關(guān)的宿主蛋白病毒分別與不同類型宿主細(xì)胞的相互/MicroRNA/MicroRNA研究?jī)?nèi)容預(yù)期目標(biāo)作用異同，探討不同種屬宿主細(xì)胞限制7.7.發(fā)表研究論文 2525 篇。性因子對(duì)病毒感染及致病的分子基礎(chǔ)和調(diào)控機(jī)制；進(jìn)一步解析狂犬病病毒結(jié)構(gòu)蛋白中哪種成分在影響宿主限制性因子方面發(fā)揮主要作用。6.6.新型病毒體內(nèi)感染動(dòng)力學(xué)研究；新型病毒嗜神經(jīng)性相關(guān)宿主蛋白/MicroRNA/MicroRNA的篩選與鑒定。1.1.新型病毒

24、體內(nèi)感染動(dòng)力學(xué)研究；新型1.1.闡明動(dòng)物攜帶的新型冠狀病毒、漢坦病毒嗜神經(jīng)性相關(guān)宿主蛋白病毒、流感病毒等與人類疾病的關(guān)系。/MicroRNA/MicroRNA的篩選與鑒定。2.2.完善病毒毒株庫和基因庫；總結(jié)病毒2.2.持續(xù)進(jìn)行病毒的分離和病毒基因組信流行規(guī)律和影響生物學(xué)特性的功能位第息學(xué)研究和病毒生物學(xué)特性研究；綜點(diǎn)。合分析課題組幾年的研究結(jié)果，分析3.3.獲得病毒囊膜蛋白與受體復(fù)合體的晶五病毒基因組的變異在病毒跨種間傳播體結(jié)構(gòu)，闡明病毒與受體的相互作用中的作用；機(jī)制，揭示病毒跨種間傳播機(jī)制。年3.3.篩選病毒囊膜蛋白與受體復(fù)合體的晶4.4.闡明宿主限制性因子在流感病毒感體結(jié)構(gòu)；染、致病及跨

25、種屬感染中的作用及分4.4.新型病毒嗜神經(jīng)性相關(guān)宿主蛋白子機(jī)制；闡明漢坦病毒感染后大量包/MicroRNA/MicroRNA的功能研究涵體形成的分子機(jī)制及免疫病理意5.5.對(duì)前 4 4 年的研究成果進(jìn)行進(jìn)一步的補(bǔ)義；闡明機(jī)體中樞神經(jīng)系統(tǒng)對(duì)狂犬病研究?jī)?nèi)容預(yù)期目標(biāo)充和完善，進(jìn)行項(xiàng)目的總結(jié)驗(yàn)收。病毒的固有免疫機(jī)制和狂犬病病毒對(duì) 中樞神經(jīng)系統(tǒng)的致病機(jī)制5.5.發(fā)表論文 2525 篇以上。6.6.完成項(xiàng)目驗(yàn)收。一、研究?jī)?nèi)容1 1、重要病毒在自然宿主中的生態(tài)分布在前期對(duì)我國不同地域、 不同時(shí)間、不同宿主動(dòng)物病毒如新型冠狀病毒、乙腦病毒和漢坦病毒研究的調(diào)查研究基礎(chǔ)上，進(jìn)一步擴(kuò)大地域與宿主調(diào)查，確定我國境內(nèi)蝙

26、蝠體內(nèi)感染和攜帶的幾種已知人類重要病毒的種類、分布和病毒在蝙蝠等重要貯存動(dòng)物貯存和傳播的分子機(jī)理，研究乙腦病毒在不同動(dòng)物宿主之間的傳播機(jī)制與傳播關(guān)系；研究生態(tài)環(huán)境因素對(duì)病毒感染宿主范圍的影響； 評(píng)價(jià)新型病毒對(duì)人與動(dòng)物的潛在危害；調(diào)查流感病毒在野禽、 家禽和哺乳動(dòng)物的生態(tài)分布，研究侯鳥遷徙與疫病流行的關(guān)系，為疫病防控政策的制定提供理論依 據(jù)；建立病毒在自然宿主的生態(tài)分布數(shù)據(jù)庫，奠定重要病毒跨種間傳播研究與分析的物質(zhì)基礎(chǔ)。2重要病毒分子變異、進(jìn)化規(guī)律及其生物學(xué)特性在對(duì)重要病毒進(jìn)行生態(tài)學(xué)和流行病學(xué)調(diào)查研究的基礎(chǔ)上，以新型冠狀病毒、乙腦病毒、狂犬病毒、流感病毒等重要病毒為研究對(duì)象，進(jìn)行病毒的全基因組序

27、列測(cè)定研究，研究功能基因組的變異和進(jìn)化特征； 同時(shí)研究重要病毒尤其是新型病毒的生物學(xué)特性，包括病毒的致病性、傳播性和感染性，研究病毒基因變異對(duì)病毒種間傳播作用的影響等。由于近年來的研究發(fā)現(xiàn)病毒非結(jié)構(gòu)蛋白和病毒非編碼區(qū)在致病性和傳播性也起到非常重要的作用，因而在全基因組序列研究中，要注重研究病毒非編碼區(qū)變異和進(jìn)化特征，觀察病毒非編碼區(qū)變異對(duì)病毒生物學(xué)特性的影響。3 3、病毒跨種間傳播中病毒與受體的相互作用以乙型腦炎、流感病毒等為突破口， 研究病毒與受體的親和特性以及細(xì)胞受體和配體的 相互作用機(jī)制；用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)和反向遺傳操作技術(shù)構(gòu)建系列假病毒及嵌合病毒。結(jié)合蛋白質(zhì)生物大分子相互作用研究，研究病毒與不同物種宿主細(xì)胞的相互作用；同時(shí)利用昆蟲細(xì)胞表達(dá)病毒表面蛋白及各種突變體蛋白，從結(jié)構(gòu)層面研究受體與配體的作用，以此為基礎(chǔ)，用物理方法（SPRSPR）和生物學(xué)檢測(cè)手段研究病毒表面蛋白的突變對(duì)受體