ABO 血型試驗(yàn) (正反定型 )

1、ABO血型試驗(yàn)（正反定型）一 原理利用紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)，通過(guò)正反定型準(zhǔn)確鑒定 ABO血型二試劑和材料1 .抗-A （B型血），抗-B （A型血）及抗-A+B （O型血）分型血清2 . 5%A、B及。型試劑紅細(xì)胞鹽水懸液。3 .受檢者血清o4 .受檢者5%紅細(xì)胞鹽水懸液。三操作（玻片法）1 .取清潔玻片一張，用蠟筆劃成方格，標(biāo)明抗-A、抗-B和抗-A+B,分別用滴 管滴加抗-A、抗-B和抗-A+B分型血清1滴于方格內(nèi)，再加受檢者2%紅細(xì) 胞懸液1滴，混合。2 .另取清潔玻片一張，用蠟筆劃成方格，標(biāo)明 A細(xì)胞、B細(xì)胞和O細(xì)胞，用 滴管各加受檢者血清1滴，再分別用滴管加A、B和。型試劑紅細(xì)胞懸液 1滴

2、。3 .將玻片輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)，使血清與細(xì)胞充分混勻，連續(xù)約 15min,以肉眼觀察有 無(wú)凝集反應(yīng)。也可用低倍鏡觀察結(jié)果。四 結(jié)果判定：見(jiàn)表1表1 ABO血型正反定型結(jié)果分型血清+受檢者紅細(xì)胞受檢者受檢者血清+試劑紅細(xì)胞抗-A抗-B抗A+B血型A細(xì)胞B細(xì)胞O細(xì)胞+一+A一+一一+B+一一一一O+一+AB一一一注：+ =凝集；-=不凝集五注意事項(xiàng)1 .試管、滴管和玻片必需清潔干燥，防止溶血。2 .操作中應(yīng)先加血清后加紅細(xì)胞懸液，以便容易核實(shí)是否漏加血清3 .為防止冷凝集現(xiàn)象的干擾，一般在室溫內(nèi)進(jìn)行試驗(yàn)4標(biāo)準(zhǔn)抗血清必須符合標(biāo)準(zhǔn)，不要長(zhǎng)期放在室溫，以免污染和孳長(zhǎng)細(xì)菌，等滲生理鹽水必須等滲、新鮮、無(wú)微生物孳生

3、。5觀察結(jié)果要仔細(xì)，微弱凝集、或肉眼觀察未凝集的標(biāo)本，要用顯微鏡觀察。注意特異性凝集與繼發(fā)性血液凝固、串錢(qián)狀形成和異物的區(qū)別。六 血型鑒定中常見(jiàn)的假陽(yáng)性反應(yīng)1紅細(xì)胞串錢(qián)形成：紅細(xì)胞相互重疊，連接成串，象一串重疊的錢(qián)幣，稱(chēng)為串錢(qián)形成，又稱(chēng)假凝集?？梢?jiàn)于血漿蛋白紊亂、血沉加快的各種病例或?qū)嶒?yàn)中溫度過(guò)高，作用時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，致水分蒸發(fā)，血清濃縮。可在觀察結(jié)果前，再加等滲鹽水 1 滴，徹底混勻，串錢(qián)狀紅細(xì)胞因血液稀釋而散開(kāi)。也可用高倍鏡仔細(xì)觀察凝集塊的形態(tài)和用洗滌后和紅細(xì)胞配制懸液。2寒冷凝集： 在較低溫度出現(xiàn)的凝集稱(chēng)為寒冷凝集。多數(shù)正常人的血清在02oC時(shí)能凝集本人的紅細(xì)胞，又稱(chēng)自家凝集。這種凝集是可逆的

4、，在0-2 oC 時(shí)作用最強(qiáng)，20oC 時(shí)可消失。但在支原體肺炎、自免溶貧、肝硬化、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等患者血清中，可以出現(xiàn)高效價(jià)的病理性自身冷凝集抗體，能與本人及其它各型人的紅細(xì)胞發(fā)生凝集。其最適反應(yīng)溫度是低溫，一般在 25-30OC凝 集作用即減弱?？朔椒ǎ罕粰z紅細(xì)胞在配制懸液前，先用37oC等滲生理鹽 水洗滌，必要時(shí)試驗(yàn)操作可在 37oC條件下進(jìn)行，或在37oC水浴中反復(fù)觀察 幾次，報(bào)告時(shí)要注明有寒冷凝集現(xiàn)象。七 血型鑒定中常見(jiàn)的假陰性反應(yīng)1. 標(biāo)準(zhǔn)血清效價(jià)太低親和力不強(qiáng) : 抗血清保存方法不當(dāng)或貯藏時(shí)間過(guò)長(zhǎng)而致 效價(jià)減弱是最常見(jiàn)原因。2. 被檢紅細(xì)胞敏感度過(guò)低: 如新生兒紅細(xì)胞抗原形成不

5、足 , 老年人紅細(xì)胞敏感性下降 , 或紅細(xì)胞標(biāo)本貯藏時(shí)間過(guò)久（ 紅細(xì)胞敏感性在血塊中下降相對(duì)較快），易將A亞型錯(cuò)定為。型。3. 紅細(xì)胞懸液過(guò)濃或過(guò)淡: 抗原抗體比例適當(dāng)時(shí)反應(yīng)最明顯。如紅細(xì)胞懸液液過(guò)濃時(shí) , 標(biāo)準(zhǔn)血清中的抗體全部被吸收 , 呈后帶現(xiàn)象, 以致凝集不明顯或不凝集。 紅細(xì)胞濃度太淡, 抗體濃度相對(duì)增高 , 呈前帶現(xiàn)象而不易凝集, 或凝集很弱 , 未被發(fā)現(xiàn)。 克服方法 : 按規(guī)定配制紅細(xì)胞懸液, 懸液太濃時(shí)可多加1 滴血清 , 轉(zhuǎn)動(dòng)玻片 , 增加紅細(xì)胞接觸的機(jī)會(huì) . 微弱凝集必須用顯微鏡觀察。4. 溶血反應(yīng) : 紅細(xì)胞抗原與相對(duì)應(yīng)的免疫抗體相遇, 在補(bǔ)體存在時(shí)就可發(fā)生溶血。 溶血反應(yīng)

6、與凝集反應(yīng)在血型鑒定上意義相同 , 都是抗原抗體反應(yīng)。 克服方法 : 玻片法看結(jié)果時(shí), 片底最好襯以白紙, 溶血時(shí)液滴邊緣呈透明紅色試驗(yàn)前后兩次鏡下觀察, 可發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞減少或消失。作血型發(fā)現(xiàn)溶血, 要換好的等滲鹽水和洗滌后紅細(xì)胞重新配制懸液來(lái)作血型鑒定。5. 溶解性抗原或血型物質(zhì)的中和作用 : 未經(jīng)洗滌的紅細(xì)胞懸液中，帶有血漿中的血型物質(zhì)。特別是輕度溶血，部分紅細(xì)胞溶解，釋放出大量可溶性抗原，可將血清中對(duì)應(yīng)的抗體中和，以致抗體不足，使紅細(xì)胞不能凝集?？酥品椒ǎ翰皇褂萌苎獦?biāo)本，用洗滌后的紅細(xì)胞配制懸液。6. 試驗(yàn)時(shí)間過(guò)短：血型抗原抗體反應(yīng)需要一定時(shí)間，時(shí)間不夠，較弱的凝集就不能出現(xiàn)。因此，玻片法

7、不能少于15 分鐘。7. 反應(yīng)溫度不當(dāng)：完全抗體作用的最適溫度多在 20oC左右至4oC,因此ABO 血型鑒定應(yīng)在室溫進(jìn)行。8. 輕度凝集誤認(rèn)為不凝集。9. 不完全抗體遮斷引起的假陰性：新生兒溶血病時(shí)，病兒紅細(xì)胞的血型抗原被母體內(nèi)的不完全抗體致敏，從而遮斷其與相同特異的完全抗體的反應(yīng)，以致定型時(shí)出現(xiàn)假陰性。RH 血型試驗(yàn)一 原理利用紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)，采用單克隆IgM/IgG 抗 D 抗體，使用玻片法或試管法檢測(cè)紅細(xì)胞表面的RH (D)抗原。二 試劑1 RH 抗血清(抗D 血清)2 35%紅細(xì)胞懸液三 操作1 玻片法 ： 在清潔玻片上滴加一滴抗D 血清， 加待檢全血一滴， 輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)玻片，使抗血清與紅細(xì)胞充分混勻，連續(xù)5 分鐘，用肉眼觀察有無(wú)凝集反應(yīng)。凝集者為RH (D)陽(yáng)性；不凝集為RH (D)陰性。2 試管法 ：取清潔干燥試管一支，加抗D 血清一滴，再加入35%紅細(xì)胞懸液一滴，輕輕混勻后靜置1 分鐘，置離心機(jī)中，以3000 轉(zhuǎn)/分離心1 分鐘。用肉眼觀察有無(wú)凝集反應(yīng)。凝集者為 RH (D)陽(yáng)性；不凝集為RH (D)陰性。注意事項(xiàng)1待檢標(biāo)本應(yīng)為非抗凝血，紅細(xì)胞濃度以 35%RBC 等滲鹽水懸