金銀花檢驗(yàn)方法驗(yàn)證方案

1、金銀花檢驗(yàn)方法驗(yàn)證方案本品為忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾或帶初開的花。夏初花開放前采收，干燥。 性狀 本品呈棒狀，上粗下細(xì)，略彎曲，長(zhǎng)23cm，上部直徑約3mm，下部直徑約1.5mm。表面黃白色或綠白色（貯久色漸深），密被短柔毛。偶見葉狀苞片。花萼綠色，先端5裂，裂片有毛，長(zhǎng)約2mm。開放者花冠筒狀，先端二唇形；雄蕊5，附于筒壁，黃色；雌蕊1，子房無毛。氣清香，味淡、徼苦。 鑒別 取本品粉末0.2g，加甲醇5ml，放置12小時(shí)，濾過，取濾液作為供試品溶液。另取綠原酸對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(附錄 B)試驗(yàn)

2、，吸取供試品溶液1020l、對(duì)照品溶液lOl，分別點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上，以乙酸丁酯-甲酸-水(7：2.5：2.5)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。 檢查 水分 不得過12.0%(附錄H 第二法)。 總灰分 不得過10. 0%(附錄K)。 酸不溶性灰分 不得過3O%（附錄K）。 重金屬及有害元素 照鉛、鎘、砷、汞、銅測(cè)定法（附錄B原子吸收分光光度法或電感耦合等離子體質(zhì)譜法）測(cè)定，鉛不得過百萬分之五；鎘不得過千萬分之三；砷不得過百萬分之二；汞不得過千萬分之二；銅不得過百萬分之二十。 含量測(cè)定 綠

3、原酸 照高效液相色譜法(附錄D)測(cè)定。 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.4%磷酸溶液(13：87)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為327nm。理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于1000。 對(duì)照品溶滾的制備 取綠原酸對(duì)照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每Iml含40g的溶液，即得(10以下保存)。 供試品溶液的制備 取本品粉末（過四號(hào)篩）約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率30kHz)30分鐘，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色量瓶

4、中，加50%甲醇至刻度，搖勻，即得。 測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5lOl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。 本品按干燥品計(jì)算，含綠原酸(Cl6H1809)不得少于1.5%。 木犀草苷 照高效液相色譜法(附錄D)測(cè)定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用苯基硅烷鍵合硅膠為填充劑（Agilent ZORBAX SB-phenyl 4.6mm×250mm,5pm），以乙腈為流動(dòng)相A，以o5%冰醋酸溶液為流動(dòng)相B，按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)為350nm。理論板數(shù)按木犀草苷峰計(jì)算應(yīng)不低于20000。 時(shí)間（分鐘） 流動(dòng)相A（%） 流動(dòng)相B（%） 015 1020 9080 15

5、30 20 80 3040 2030 8070 對(duì)照品溶液的制備 取木犀草苷對(duì)照品適量，精密稱定，加70%乙醇制成每Iml含40g的溶液，即得。 供試品溶液的制備 取本品細(xì)粉末（過四號(hào)篩）約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇50ml，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率35kHz)l小時(shí)，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液lOml，回收溶劑至干，殘?jiān)?0%乙醇溶解，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，即得。 測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10弘l，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。 本品按干燥品計(jì)算，含木犀草苷(C21H20O

6、11)不得少于0.050%。四、驗(yàn)證小組成員及職責(zé)4.1驗(yàn)證小組成員4.2人員職責(zé)人 員職 責(zé)驗(yàn)證小組組長(zhǎng)組織相關(guān)的驗(yàn)證培訓(xùn)；負(fù)責(zé)起草驗(yàn)證方案、組織項(xiàng)目的具體驗(yàn)證、督促驗(yàn)證小組成員按照驗(yàn)證方案的要求做好驗(yàn)證記錄；起草并完成驗(yàn)證報(bào)告，對(duì)整個(gè)驗(yàn)證項(xiàng)目負(fù)責(zé)。驗(yàn)證小組成員按照方案實(shí)施驗(yàn)證、并做好記錄、意外情況及時(shí)匯報(bào)和記錄、協(xié)助起草驗(yàn)證方案和報(bào)告。 表1：五、驗(yàn)證實(shí)施步驟5.1、為了確保驗(yàn)證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確可靠，采取以下幾個(gè)先行保障措施5.2儀器：己經(jīng)過校正并在有效期內(nèi)5.3人員：均經(jīng)過培訓(xùn)，熟悉方法及使用的儀器5.4對(duì)照品：均購自藥品檢驗(yàn)所5.5材料：均符合檢驗(yàn)要求5.6參考資料：中國藥典2010年版一部

7、藥品生產(chǎn)驗(yàn)證指南(2003版) 檢測(cè)結(jié)果:表檢驗(yàn)結(jié)果結(jié)果判斷試驗(yàn)A試驗(yàn)B檢測(cè)人: 檢測(cè)日期:5.7 驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn):試驗(yàn)A供試品溶液在與對(duì)照藥材溶液及對(duì)照品溶液相同的位置顯相同顏色的斑點(diǎn)。試驗(yàn)B供試品溶液在與對(duì)照品溶液相同的位置未顯斑點(diǎn)。5.8 檢驗(yàn)結(jié)果評(píng)價(jià) 六 含量測(cè)定照高效液相色譜法測(cè)定。儀器：LC-10AT液相色譜儀6.1空白溶液的制備：直接取甲醇作為空白溶液。6.2將結(jié)果填入下表。表 含量測(cè)定專屬性試驗(yàn)表保留時(shí)間供試品溶液對(duì)照品溶液空白溶液檢測(cè)人： 檢測(cè)日期：6.3驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)：供試品溶液中應(yīng)呈現(xiàn)與木犀草苷對(duì)照品保留時(shí)間相同的色譜峰；空白溶液中在這點(diǎn)應(yīng)無色譜峰。6.4結(jié)果評(píng)價(jià)以濃度為橫坐標(biāo)，峰面

8、積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。將結(jié)果填入下表。表 木犀草苷不同濃度的峰面積濃度（mg/ml）峰面積（v*sec）回歸方程相關(guān)系數(shù)檢測(cè)人： 檢測(cè)日期：6.5結(jié)果評(píng)價(jià)6.6準(zhǔn)確度6.7 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用苯基硅烷鍵合硅膠為填充劑（Agilent ZORBAX SB-phenyl 4.6mm×250mm,5pm），以乙腈為流動(dòng)相A，以o5%冰醋酸溶液為流動(dòng)相B，按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)為350nm。理論板數(shù)按木犀草苷峰計(jì)算應(yīng)不低于20000。 時(shí)間（分鐘） 流動(dòng)相A（%） 流動(dòng)相B（%） 015 1020 9080 1530 20 80 3040 2030 8070 6.

9、8 對(duì)照品溶液的制備 取木犀草苷對(duì)照品適量，精密稱定，加70%乙醇制成每Iml含40g的溶液，即得。6.9供試品溶液的制備 取本品細(xì)粉末（過四號(hào)篩）約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇50ml，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率35kHz)l小時(shí)，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液lOml，回收溶劑至干，殘?jiān)?0%乙醇溶解，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，即得。 測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10Ml，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。 本品按干燥品計(jì)算，含木犀草苷(C21H20O11)不得少于0.050%。式中f為對(duì)照

10、品的濃度除以對(duì)照品峰面積得到的值的平均值；AT為對(duì)照品峰面積；單位v*sec ；n為供試品的稀釋倍數(shù)；WT為供試品的稱量；單位g。6.11 計(jì)算結(jié)果填入下表：表5 含量測(cè)定木犀草苷加樣回收率試驗(yàn)表序號(hào)樣品稱量（g）樣品中木犀草苷含量（mg）對(duì)照品加入量（mg）實(shí)測(cè)值（mg）回收率（%）回收率的平均值（）RSD（%）123456789檢測(cè)人： 檢測(cè)日期：6.12 結(jié)果評(píng)價(jià)七 精密度7.1重復(fù)性（設(shè)操作人員A）7.1.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用苯基硅烷鍵合硅膠為填充劑（Agilent ZORBAX SB-phenyl 4.6mm×250mm,5pm），以乙腈為流動(dòng)相A，以o5%冰醋酸

11、溶液為流動(dòng)相B，按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)為350nm。理論板數(shù)按木犀草苷峰計(jì)算應(yīng)不低于20000。 時(shí)間（分鐘） 流動(dòng)相A（%） 流動(dòng)相B（%） 015 1020 9080 1530 20 80 3040 2030 80707.1.2對(duì)照品溶液的制備 取木犀草苷對(duì)照品適量，精密稱定，加70%乙醇制成每Iml含40g的溶液，即得。7.1.3供試品溶液的制備 取本品細(xì)粉末（過四號(hào)篩）約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇50ml，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率35kHz)l小時(shí)，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液lOml，回收

12、溶劑至干，殘?jiān)?0%乙醇溶解，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，即得。 測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10Ml，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。 本品按干燥品計(jì)算，含木犀草苷(C21H20O11)不得少于0.050%。7.1.4計(jì)算 式中f為對(duì)照品的濃度除以對(duì)照品峰面積得到的值的平均值；AT為對(duì)照品峰面積；單位v*sec ；n為供試品的稀釋倍數(shù)；WT為供試品的稱量；單位g。7.1.5將計(jì)算的結(jié)果填入下表表 含量測(cè)定木犀草苷重復(fù)性試驗(yàn)表序號(hào)樣品稱量（g）含量（g/g）含量的平均值（g/g）RSD（%）123456檢測(cè)人： 檢測(cè)日期：7.1.6結(jié)果評(píng)價(jià)7.2中間精密度（換一時(shí)間，換

13、一操作人員，設(shè)操作人員為B）7.2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用苯基硅烷鍵合硅膠為填充劑（Agilent ZORBAX SB-phenyl 4.6mm×250mm,5pm），以乙腈為流動(dòng)相A，以o5%冰醋酸溶液為流動(dòng)相B，按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)為350nm。理論板數(shù)按木犀草苷峰計(jì)算應(yīng)不低于20000。 時(shí)間（分鐘） 流動(dòng)相A（%） 流動(dòng)相B（%） 015 1020 9080 1530 20 80 3040 2030 80707.2.2對(duì)照品溶液的制備 取木犀草苷對(duì)照品適量，精密稱定，加70%乙醇制成每Iml含40g的溶液，即得。7.2.3供試品溶液的制備 取本品細(xì)粉末

14、（過四號(hào)篩）約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇50ml，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率35kHz)l小時(shí)，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液lOml，回收溶劑至干，殘?jiān)?0%乙醇溶解，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，即得。 測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10Ml，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。 本品按干燥品計(jì)算，含木犀草苷(C21H20O11)不得少于0.050%。7.2.4計(jì)算 式中f為對(duì)照品的濃度除以對(duì)照品峰面積得到的值的平均值；AT為對(duì)照品峰面積；單位v*sec ；n為供試品的稀釋倍數(shù)；WT為供試品的稱量

15、；單位g。7.2.5將計(jì)算的結(jié)果填入下表表： 含量測(cè)定木犀草苷中間精密度試驗(yàn)表序號(hào)樣品稱量（g）含量（g/g）含量的平均值（g/g）RSD（%）操作員A123456操作員B123456檢測(cè)人： 檢測(cè)日期：7.2.6結(jié)果評(píng)價(jià)八 耐用性8.1以流動(dòng)相的組成比例、同一規(guī)格的色譜柱為變動(dòng)因素，得出測(cè)定結(jié)果不受影響的程度，為使方法用于常規(guī)檢驗(yàn)提供依據(jù)。8.2色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用苯基硅烷鍵合硅膠為填充劑（Agilent ZORBAX SB-phenyl 4.6mm×250mm,5pm），以乙腈為流動(dòng)相A，以o5%冰醋酸溶液為流動(dòng)相B，按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)為350nm。理論板數(shù)按木犀草苷峰計(jì)算應(yīng)不低于20000。 時(shí)間（分鐘） 流動(dòng)相A（%） 流動(dòng)相B（%） 015 1020 9080 1530 20 80 3040 2030 80708.3對(duì)照品溶液的制備 取木犀草苷對(duì)照品適量，精密稱定，加70%乙醇制成每Iml含40g的溶液，即得。8.4供試品溶液的制備 取本品細(xì)粉末（過四號(hào)篩）約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇50ml，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率35kHz)l小時(shí)，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重