實(shí)驗(yàn)3直接滴定法測(cè)還原糖

1、實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)3直接滴定法測(cè)還原糖直接滴定法測(cè)還原糖 還原性糖概念：還原糖是指具有還原性的糖還原性糖概念：還原糖是指具有還原性的糖類。在糖類中，分子中含有游離醛基和酮基的單類。在糖類中，分子中含有游離醛基和酮基的單糖和含有游離醛基的二糖都具有還原性。糖和含有游離醛基的二糖都具有還原性。 還原糖包括葡萄糖、果糖、半乳糖、乳糖、還原糖包括葡萄糖、果糖、半乳糖、乳糖、麥芽糖等。非還原糖有蔗糖、淀粉、纖維素等，麥芽糖等。非還原糖有蔗糖、淀粉、纖維素等，但它們都可以通過(guò)水解生成相應(yīng)的還原性單糖。但它們都可以通過(guò)水解生成相應(yīng)的還原性單糖。所以糖類的測(cè)定是以還原糖的測(cè)定為基礎(chǔ)的。所以糖類的測(cè)定是以還原糖的測(cè)定為基

2、礎(chǔ)的。1. 實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 將一定量的堿性酒石酸銅甲、乙液等量將一定量的堿性酒石酸銅甲、乙液等量混合，立即生成天藍(lán)色的氫氧化銅沉淀，這混合，立即生成天藍(lán)色的氫氧化銅沉淀，這種沉淀很快與酒石酸鉀鈉反應(yīng)，生成深藍(lán)色種沉淀很快與酒石酸鉀鈉反應(yīng)，生成深藍(lán)色的可溶性酒石酸鉀鈉銅絡(luò)合物。在加熱條件的可溶性酒石酸鉀鈉銅絡(luò)合物。在加熱條件下，以次甲基藍(lán)作為指示劑，用樣液滴定，下，以次甲基藍(lán)作為指示劑，用樣液滴定，實(shí)驗(yàn)三：還原糖的測(cè)定（直接滴定法）實(shí)驗(yàn)三：還原糖的測(cè)定（直接滴定法）樣液中的還原糖與酒石酸鉀鈉銅反應(yīng)，生樣液中的還原糖與酒石酸鉀鈉銅反應(yīng)，生成紅色的氧化亞銅沉淀，待二價(jià)銅全部被成紅色的氧化亞銅沉淀，

3、待二價(jià)銅全部被還原后，稍過(guò)量的還原糖把次甲基藍(lán)還原，還原后，稍過(guò)量的還原糖把次甲基藍(lán)還原，溶液由藍(lán)色變?yōu)闊o(wú)色，即為滴定終點(diǎn)。根溶液由藍(lán)色變?yōu)闊o(wú)色，即為滴定終點(diǎn)。根據(jù)樣液消耗量可計(jì)算還原糖含量。據(jù)樣液消耗量可計(jì)算還原糖含量。 （1）CuSO4 + 2NaOH = 2Cu(OH)2 + Na2SO4Cu(OH)2 +COOKCHOHCOONaCHOH（2）=COOKCHOCOONaCHOCu+ 2H2O（3）=COOKCHOCOONaCHOCu+ 3Cu2OCHO(CHOH)4CH2OH+COOH(CHOH)3CH2OH6+ 6H2OCOOKCHOHCOONaCHOH+ 6+ H2CO3（4）2.

4、 適用范圍與特點(diǎn)適用范圍與特點(diǎn) 本法又稱快速法，其特點(diǎn)是試劑用量少，本法又稱快速法，其特點(diǎn)是試劑用量少，操作和計(jì)算都比較簡(jiǎn)便、快速，滴定終點(diǎn)明操作和計(jì)算都比較簡(jiǎn)便、快速，滴定終點(diǎn)明顯，適用于各類食品中還原糖的測(cè)定。但測(cè)顯，適用于各類食品中還原糖的測(cè)定。但測(cè)定醬油、深色果汁等樣品時(shí)，因色素干擾，定醬油、深色果汁等樣品時(shí)，因色素干擾，滴定終點(diǎn)常常模糊不清，影響準(zhǔn)確性。本法滴定終點(diǎn)常常模糊不清，影響準(zhǔn)確性。本法是國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)分析方法。是國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)分析方法。3. 實(shí)驗(yàn)材料、儀器與試劑實(shí)驗(yàn)材料、儀器與試劑實(shí)驗(yàn)材料：蘋果實(shí)驗(yàn)材料：蘋果儀儀 器：分析天平、研缽、電爐、鐵架器：分析天平、研缽、電爐、鐵架 臺(tái)、錐形瓶

5、、漏斗、燒杯、玻臺(tái)、錐形瓶、漏斗、燒杯、玻 棒、容量瓶、移液管、酸式滴棒、容量瓶、移液管、酸式滴 定管。定管。試試 劑：劑：（1）堿性酒石酸銅甲液：稱取）堿性酒石酸銅甲液：稱取15g硫酸銅硫酸銅(CuSO4 5H2O)及次甲基藍(lán)，溶于水中并稀釋至及次甲基藍(lán)，溶于水中并稀釋至l000 mL。（2）堿性酒石酸銅乙液：稱?。A性酒石酸銅乙液：稱取50g酒石酸鉀鈉及酒石酸鉀鈉及75g氫氧化鈉，溶于水中，再加入氫氧化鈉，溶于水中，再加入4g亞鐵氰化鉀亞鐵氰化鉀，完全溶解后，用水稀釋至，完全溶解后，用水稀釋至1000mL貯存于橡膠貯存于橡膠塞玻璃瓶?jī)?nèi)。塞玻璃瓶?jī)?nèi)。（3）乙酸鋅溶液：稱取乙酸鋅，加）乙酸鋅溶

6、液：稱取乙酸鋅，加3mL乙酸，乙酸，加水溶解并稀釋至加水溶解并稀釋至l00mL。（4）10.6%亞鐵氰化鉀溶液：稱取亞鐵氰化鉀亞鐵氰化鉀溶液：稱取亞鐵氰化鉀，加水溶解并稀釋至，加水溶解并稀釋至l00mL。（5）葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取經(jīng)過(guò)）葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取經(jīng)過(guò)962干干燥燥2h的純葡萄糖，加水溶解后加入的純葡萄糖，加水溶解后加入5mL鹽酸，鹽酸，并以水稀釋至并以水稀釋至l000mL。此溶液每毫升相當(dāng)于葡。此溶液每毫升相當(dāng)于葡萄糖。萄糖。4. 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟（1）樣品處理：稱取約試樣，置于）樣品處理：稱取約試樣，置于100mL容容量瓶中，加量瓶中，加50mL水，混勻，慢慢加入水，混勻，

7、慢慢加入5 mL乙乙酸鋅溶液及酸鋅溶液及5mL亞鐵氰化鉀溶液，加水至刻亞鐵氰化鉀溶液，加水至刻度，混勻，沉淀，靜置度，混勻，沉淀，靜置30min，用干燥濾紙過(guò)，用干燥濾紙過(guò)濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液備用。濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液備用。（2）標(biāo)定堿性酒石酸銅溶液：吸取堿性灑石酸）標(biāo)定堿性酒石酸銅溶液：吸取堿性灑石酸銅甲乙液各，置于銅甲乙液各，置于150mL錐形瓶中，加水錐形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠，加入玻璃珠3粒。從滴定管滴加約粒。從滴定管滴加約9mL葡萄糖葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，控制在標(biāo)準(zhǔn)溶液，控制在2min內(nèi)加熱至沸，趁熱以每?jī)?nèi)加熱至沸，趁熱以每2秒秒l滴的速度繼續(xù)滴加葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，直至溶滴的

8、速度繼續(xù)滴加葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，直至溶液藍(lán)色剛好褪去為終點(diǎn)。記錄消耗葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液液藍(lán)色剛好褪去為終點(diǎn)。記錄消耗葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液的總體積，平行操作三份，取其平均，按下式計(jì)的總體積，平行操作三份，取其平均，按下式計(jì)算。算。F= cVF：10mL堿性酒石酸銅溶液相當(dāng)于葡萄糖的質(zhì)量，堿性酒石酸銅溶液相當(dāng)于葡萄糖的質(zhì)量，mgc：葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，：葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mg/mLV：標(biāo)定時(shí)消耗葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的總體積，：標(biāo)定時(shí)消耗葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的總體積，mL（3）試樣溶液預(yù)測(cè)：吸取堿性灑石酸銅甲液及）試樣溶液預(yù)測(cè)：吸取堿性灑石酸銅甲液及乙液，置于乙液，置于150mL錐形瓶中，加水錐形瓶中，加水10mL，加入，

9、加入玻璃珠玻璃珠3粒，控制在粒，控制在2min內(nèi)加熱至沸，趁沸以先內(nèi)加熱至沸，趁沸以先快后慢的速度，從滴定管中滴加試樣溶液，并?？旌舐乃俣?，從滴定管中滴加試樣溶液，并保持溶液沸騰狀態(tài)，待溶液顏色變淺時(shí)，以每持溶液沸騰狀態(tài)，待溶液顏色變淺時(shí)，以每2秒秒1滴的速度滴定，直至溶液藍(lán)色剛好褪去為終點(diǎn)，滴的速度滴定，直至溶液藍(lán)色剛好褪去為終點(diǎn)，記錄樣液消耗體積。記錄樣液消耗體積。 當(dāng)樣液中還原糖濃度過(guò)高時(shí)應(yīng)適當(dāng)稀釋，再當(dāng)樣液中還原糖濃度過(guò)高時(shí)應(yīng)適當(dāng)稀釋，再進(jìn)行正式測(cè)定，使每次滴定消耗樣液的體積控制進(jìn)行正式測(cè)定，使每次滴定消耗樣液的體積控制在與標(biāo)定堿性酒石酸銅溶液時(shí)所消耗的還原糖標(biāo)在與標(biāo)定堿性酒石酸銅溶

10、液時(shí)所消耗的還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積相近，約在準(zhǔn)溶液的體積相近，約在10mL左右。左右。 當(dāng)濃度過(guò)低時(shí)則采取直接加入當(dāng)濃度過(guò)低時(shí)則采取直接加入10mL樣品液，樣品液，免去加水免去加水10mL，再用還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至終，再用還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至終點(diǎn)，記錄消耗的體積與標(biāo)定時(shí)消耗的還原糖標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)，記錄消耗的體積與標(biāo)定時(shí)消耗的還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液體積之差相當(dāng)于溶液體積之差相當(dāng)于10mL樣液中所含還原糖的樣液中所含還原糖的量。量。（4）試樣溶液測(cè)定：吸取堿性灑石酸銅甲液及）試樣溶液測(cè)定：吸取堿性灑石酸銅甲液及乙液，置于乙液，置于150mL錐形瓶中，加水錐形瓶中，加水10mL，加入，加入玻璃珠玻璃珠3粒，從滴定管中

11、加比預(yù)測(cè)體積少粒，從滴定管中加比預(yù)測(cè)體積少lmL的的試樣溶液至錐形瓶中，使在試樣溶液至錐形瓶中，使在2min內(nèi)加熱至沸，內(nèi)加熱至沸，趁沸繼續(xù)以每趁沸繼續(xù)以每2秒秒l滴的速度滴定，直至藍(lán)色剛好滴的速度滴定，直至藍(lán)色剛好褪去為終點(diǎn)，記錄樣液消耗體積。同法平行操作褪去為終點(diǎn)，記錄樣液消耗體積。同法平行操作三份，得出平均消耗體積。三份，得出平均消耗體積。5. 結(jié)果計(jì)算結(jié)果計(jì)算還原糖（以葡萄糖計(jì)還原糖（以葡萄糖計(jì)%）=FmV1001000 100式中：式中： m樣品質(zhì)量，樣品質(zhì)量，gF10mL堿性酒石酸銅溶液相當(dāng)于堿性酒石酸銅溶液相當(dāng)于 葡萄糖的質(zhì)量，葡萄糖的質(zhì)量，mgV測(cè)定時(shí)平均消耗樣品的體積，測(cè)定時(shí)

12、平均消耗樣品的體積，mL100樣品溶液的總體積，樣品溶液的總體積，mL6. 注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)（1）本方法測(cè)定的是一類具有還原性的糖，）本方法測(cè)定的是一類具有還原性的糖，包括葡萄糖、果糖、乳糖、麥芽糖等，只是包括葡萄糖、果糖、乳糖、麥芽糖等，只是結(jié)果用葡萄糖或其他轉(zhuǎn)化糖的方式表示，所結(jié)果用葡萄糖或其他轉(zhuǎn)化糖的方式表示，所以不能誤解為還原糖以不能誤解為還原糖=葡萄糖或其他糖，也葡萄糖或其他糖，也并不完全等于各還原糖含量之和。但如果已并不完全等于各還原糖含量之和。但如果已知樣品中只含有某一種糖，如乳制品中的乳知樣品中只含有某一種糖，如乳制品中的乳糖，則可以認(rèn)為還原糖糖，則可以認(rèn)為還原糖=某糖。某糖。

13、（2）堿性酒石酸銅甲乙液應(yīng)分別存放，臨）堿性酒石酸銅甲乙液應(yīng)分別存放，臨用時(shí)甲、乙液等量混合，避免析出氧化亞用時(shí)甲、乙液等量混合，避免析出氧化亞銅沉淀，使銅沉淀，使Cu2+有效濃度降低。有效濃度降低。（3）本法是與定量的酒石酸銅試劑作用，）本法是與定量的酒石酸銅試劑作用，Cu2+是定量的基礎(chǔ)，故樣品處理時(shí)，不能是定量的基礎(chǔ)，故樣品處理時(shí)，不能用銅鹽作蛋白質(zhì)沉淀劑，以免引入用銅鹽作蛋白質(zhì)沉淀劑，以免引入Cu2+，得到錯(cuò)誤的結(jié)果。得到錯(cuò)誤的結(jié)果。（4）反應(yīng)終點(diǎn)本來(lái)應(yīng)為氧化亞銅的紅色，為）反應(yīng)終點(diǎn)本來(lái)應(yīng)為氧化亞銅的紅色，為更易觀察，在堿性酒石酸銅乙液中加入了少更易觀察，在堿性酒石酸銅乙液中加入了少量

14、亞鐵氰化鉀，使紅色氧化亞銅與亞鐵氰化量亞鐵氰化鉀，使紅色氧化亞銅與亞鐵氰化鉀生成可溶性的復(fù)鹽，反應(yīng)終點(diǎn)由藍(lán)色變?yōu)殁浬煽扇苄缘膹?fù)鹽，反應(yīng)終點(diǎn)由藍(lán)色變?yōu)闇\黃色，即為改良的藍(lán)淺黃色，即為改良的藍(lán)-愛(ài)農(nóng)法。愛(ài)農(nóng)法。（5）滴定時(shí)不能隨意搖動(dòng)錐形瓶，更不能把）滴定時(shí)不能隨意搖動(dòng)錐形瓶，更不能把錐形瓶從熱源上取下來(lái)滴定，以防止空氣進(jìn)錐形瓶從熱源上取下來(lái)滴定，以防止空氣進(jìn)入反應(yīng)溶液中。入反應(yīng)溶液中。（7）樣品溶液預(yù)測(cè)的目的：一是本法對(duì)樣品溶）樣品溶液預(yù)測(cè)的目的：一是本法對(duì)樣品溶液中還原糖濃度有一定要求，測(cè)定時(shí)樣品溶液的液中還原糖濃度有一定要求，測(cè)定時(shí)樣品溶液的消耗體積應(yīng)與標(biāo)定葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液時(shí)消耗的體積相消耗體積應(yīng)與標(biāo)定葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液時(shí)消耗的體積相近（近（10mL左右），通過(guò)預(yù)測(cè)可