第2章-實(shí)驗(yàn)室無菌操作技術(shù)(1)--0911

1、第第2章章 實(shí)驗(yàn)室無菌操作技術(shù)實(shí)驗(yàn)室無菌操作技術(shù) 植物離體培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的基本要求和設(shè)備植物離體培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的基本要求和設(shè)備 基本方法和技術(shù)基本方法和技術(shù) 植物離體培養(yǎng)的一般過程植物離體培養(yǎng)的一般過程2.1 實(shí)驗(yàn)室的基本組成實(shí)驗(yàn)室的基本組成2.2 常用的儀器設(shè)備常用的儀器設(shè)備2.4 培養(yǎng)基的基本成分和作用培養(yǎng)基的基本成分和作用2.5 培養(yǎng)基制備的一般程序培養(yǎng)基制備的一般程序2.3 器皿、用具的洗滌、消毒和滅菌器皿、用具的洗滌、消毒和滅菌2.6 植物離體培養(yǎng)的一般過程植物離體培養(yǎng)的一般過程 What are the space, equipment, and chemical requirements

2、 of an efficient Tissue Culture Operation? 2.1 實(shí)驗(yàn)室的基本組成實(shí)驗(yàn)室的基本組成 Laboratory organization 細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)室的基本要求：細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)室的基本要求： 植物材料必須始終生長在植物材料必須始終生長在無菌條件無菌條件與與可控環(huán)境可控環(huán)境中；可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪M(jìn)行其中；可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪M(jìn)行其它它觀察觀察、分析分析和和操作操作。實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備無菌操作無菌操作控制培養(yǎng)控制培養(yǎng) Media preparation area Storage space (clean glassware) Washing area (dirty g

3、lassware) Transfer room (with Laminar Flow Hood) Growth room with temperature and photoperiod control基本實(shí)驗(yàn)室基本實(shí)驗(yàn)室l 準(zhǔn)備室準(zhǔn)備室/化學(xué)實(shí)驗(yàn)室化學(xué)實(shí)驗(yàn)室l 接種室接種室l 培養(yǎng)室培養(yǎng)室輔助實(shí)驗(yàn)室輔助實(shí)驗(yàn)室l 細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)室l 煉苗室煉苗室l 溫室溫室 1. 化學(xué)實(shí)驗(yàn)室化學(xué)實(shí)驗(yàn)室(基本操作室、準(zhǔn)備室基本操作室、準(zhǔn)備室) 功能：功能：洗滌、滅菌、培養(yǎng)基配制、植物材料的預(yù)處洗滌、滅菌、培養(yǎng)基配制、植物材料的預(yù)處理、制備重蒸餾水、進(jìn)行生理、生化因素的分析，存理、制備重蒸餾水、進(jìn)行生理、

4、生化因素的分析，存放藥品等。放藥品等。 要求要求：寬敞明亮，通風(fēng)條件好，地面便于清理并應(yīng)：寬敞明亮，通風(fēng)條件好，地面便于清理并應(yīng)防滑處理。防滑處理。 需要設(shè)備：需要設(shè)備：實(shí)驗(yàn)臺、水池實(shí)驗(yàn)臺、水池、試劑柜、冰箱、烘箱、試劑柜、冰箱、烘箱、天平、滅菌鍋、電磁爐、微波爐、水浴鍋、酸度計(jì)、天平、滅菌鍋、電磁爐、微波爐、水浴鍋、酸度計(jì)、蒸餾水器、磁力攪拌器、臺式離心機(jī)、顯微鏡等，以蒸餾水器、磁力攪拌器、臺式離心機(jī)、顯微鏡等，以及常用玻璃、塑料器皿。及常用玻璃、塑料器皿。滅滅 菌菌 鍋（濕熱滅菌器）鍋（濕熱滅菌器） 2. 無菌操作室無菌操作室 (1) 緩沖準(zhǔn)備室緩沖準(zhǔn)備室 面積約面積約35m2，進(jìn)入無菌室

5、前需在緩沖室里，進(jìn)入無菌室前需在緩沖室里換上經(jīng)過滅菌的衛(wèi)生服、拖鞋，戴上口罩。最好換上經(jīng)過滅菌的衛(wèi)生服、拖鞋，戴上口罩。最好安裝安裝1盞紫外燈，用以滅菌。盞紫外燈，用以滅菌。(2) 接種室接種室 功能：功能：是進(jìn)行無菌工作的場所，如材料的滅菌接是進(jìn)行無菌工作的場所，如材料的滅菌接種，無菌材料的培養(yǎng)、繼代等，種，無菌材料的培養(yǎng)、繼代等， 是植物組織培養(yǎng)研是植物組織培養(yǎng)研究或生產(chǎn)工作中最關(guān)鍵的部分究或生產(chǎn)工作中最關(guān)鍵的部分。 要求：要求：封閉性好，干爽安靜、清潔明亮、墻壁封閉性好，干爽安靜、清潔明亮、墻壁光滑平整不易積染灰塵，地面平坦無縫便于清洗和光滑平整不易積染灰塵，地面平坦無縫便于清洗和滅菌。

6、滅菌。 需要：需要： 紫外燈、屋頂?shù)某闅膺^濾器、超凈工作紫外燈、屋頂?shù)某闅膺^濾器、超凈工作臺（接種箱）、接種器具、小型噴霧器臺（接種箱）、接種器具、小型噴霧器 3. 培養(yǎng)室培養(yǎng)室功能功能：對植物離體材料進(jìn)行人工調(diào)控培養(yǎng)。：對植物離體材料進(jìn)行人工調(diào)控培養(yǎng)。 培養(yǎng)室的特殊要求：培養(yǎng)室的特殊要求： 首先要保證無菌、保持室內(nèi)清潔、溫度首先要保證無菌、保持室內(nèi)清潔、溫度 2030 C ，有加熱、制冷等控溫設(shè)備、有保暖窗，有加熱、制冷等控溫設(shè)備、有保暖窗簾、有空氣調(diào)節(jié)裝置促進(jìn)空氣流動、控制實(shí)內(nèi)相簾、有空氣調(diào)節(jié)裝置促進(jìn)空氣流動、控制實(shí)內(nèi)相對濕度對濕度7080%、可以控制定時(shí)開關(guān)照明燈、可、可以控制定時(shí)開關(guān)照

7、明燈、可以利用自然燈光照明以利用自然燈光照明.基本設(shè)備基本設(shè)備：控溫、控濕、定時(shí)照明設(shè)備，培：控溫、控濕、定時(shí)照明設(shè)備，培養(yǎng)架、搖床或轉(zhuǎn)床等養(yǎng)架、搖床或轉(zhuǎn)床等 4. 細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)室：細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)室： 功能：功能：分析、觀察、記錄離體培養(yǎng)物的生長分析、觀察、記錄離體培養(yǎng)物的生長情況。情況。 需要：需要： 普通光學(xué)顯微鏡、實(shí)體解剖顯微鏡、普通光學(xué)顯微鏡、實(shí)體解剖顯微鏡、倒倒 置顯微鏡、熒光顯微鏡、血球計(jì)數(shù)器、切片置顯微鏡、熒光顯微鏡、血球計(jì)數(shù)器、切片機(jī)等。機(jī)等。 5. 煉苗室：煉苗室： 功能：功能：從試管苗向溫室植株的過渡，馴化從試管苗向溫室植株的過渡，馴化 需要：需要：各種育苗移栽器具，控溫、高濕、

8、控制各種育苗移栽器具，控溫、高濕、控制光照光照 6. 溫室：溫室： 功能：功能：從煉苗室向大田植株移栽的過渡從煉苗室向大田植株移栽的過渡 需要：需要：各種栽植器具、日光溫室各種栽植器具、日光溫室Donor plant cultivation Acclimation（馴化）（馴化） and establishment of regenerates to ambient（環(huán)境的）（環(huán)境的） conditionsopen-roof greenhouse 2.2 配制培養(yǎng)基所用器皿配制培養(yǎng)基所用器皿 接種、培養(yǎng)器皿接種、培養(yǎng)器皿 生理、生化、細(xì)胞學(xué)分析測試必備儀器生理、生化、細(xì)胞學(xué)分析測試必備儀器 煉

9、苗、移栽器具煉苗、移栽器具M(jìn)edia preparation areaCulture medium Desk centrifugeChemical bench Reagent and stock solutions pH meter Shelf ( shelves)Balances ( analytical and top-loading balances)Fridge and freezer Magnetic stirrerWater purification Glassware Pipette（移液器、槍）（移液器、槍）Aluminmum foil rollTest tubeCulture

10、 vessels Autoclave Steam sterilization Dry sterilizationHot-air ovens DishwashersHot plate Parafilm rollWater squeeze bottlePetri dishes (培養(yǎng)皿）培養(yǎng)皿）Volumetric flasks （容量瓶）（容量瓶）Graduated cylinders （量筒）（量筒） Beakers （燒杯）（燒杯）高壓滅菌器高壓滅菌器Autoclave高高壓壓滅滅菌菌鍋鍋手手提提式式高高壓壓滅滅菌菌鍋鍋如如何何正正確確使使用？用？微微 波波 爐爐電子天平電子天平恒溫培養(yǎng)箱恒

11、溫培養(yǎng)箱真空干燥器（烘箱）真空干燥器（烘箱） 烘烘 箱箱(電熱箱）電熱箱）如何正確使用？如何正確使用？純水系統(tǒng)純水系統(tǒng)電穿孔系統(tǒng)電穿孔系統(tǒng)電融合儀電融合儀純純 水水 器器手持式基因槍手持式基因槍固定式基因槍固定式基因槍臺式高速冷凍離心機(jī)臺式高速冷凍離心機(jī)PCR 儀儀制冰機(jī)制冰機(jī)超低溫冰箱超低溫冰箱 酸酸 度度 計(jì)計(jì)手手 持持 酸酸 度度 計(jì)計(jì) 微量移液槍微量移液槍分注器分注器培培 養(yǎng)養(yǎng) 器器 皿皿Culture vesselsPetri dishesCulture bottles封口膜、棉繩、棉塞，塑料透氣蓋封口膜、棉繩、棉塞，塑料透氣蓋 磁力攪拌器磁力攪拌器冷凍干燥機(jī)冷凍干燥機(jī)酶酶 標(biāo)標(biāo) 儀

12、儀電動顯微操作儀電動顯微操作儀各種顯微鏡用于細(xì)胞學(xué)觀察各種顯微鏡用于細(xì)胞學(xué)觀察雙筒實(shí)體顯微鏡雙筒實(shí)體顯微鏡 （實(shí)體解剖鏡）（實(shí)體解剖鏡） 普通光學(xué)顯微鏡普通光學(xué)顯微鏡倒置顯微鏡倒置顯微鏡熒光顯微鏡熒光顯微鏡（血球計(jì)數(shù)器）（血球計(jì)數(shù)器）倒置顯微鏡倒置顯微鏡體視顯微鏡體視顯微鏡(解剖鏡）解剖鏡） 生物顯微鏡生物顯微鏡 熒光顯微鏡熒光顯微鏡Aseptic transfer area（room）Laminar air flow transfer hood ( Laminar flow cabinet)UV lampForceps , Spatulas, Scalpel（鑷子、藥匙、解剖刀）（鑷子、藥匙

13、、解剖刀）A book of matches Pipette filler (吸耳球）吸耳球）超凈工作臺超凈工作臺如如何何正正確確使使用？用？風(fēng)淋室風(fēng)淋室 風(fēng)淋室是凈化廠房配風(fēng)淋室是凈化廠房配套設(shè)備，用于吹除進(jìn)入套設(shè)備，用于吹除進(jìn)入廠房的工作人員身體及廠房的工作人員身體及攜帶物品和貨物表面附攜帶物品和貨物表面附著的塵埃，同時(shí)起到氣著的塵埃，同時(shí)起到氣閘作用，是防止未凈化閘作用，是防止未凈化的空氣進(jìn)入到凈化廠房的空氣進(jìn)入到凈化廠房的有效設(shè)備。其操作簡的有效設(shè)備。其操作簡單，檢修方便，運(yùn)行費(fèi)單，檢修方便，運(yùn)行費(fèi)用低。用低。 活性炭口罩活性炭口罩聯(lián)體式接種服聯(lián)體式接種服針筒式微孔溶劑濾膜針筒式微孔溶

14、劑濾膜過濾器過濾器 中型離心過濾器中型離心過濾器 無菌微孔過濾器無菌微孔過濾器 微型離心過濾器微型離心過濾器 無菌微孔過濾器無菌微孔過濾器 在過濾器的漏斗和接收瓶之間安裝在過濾器的漏斗和接收瓶之間安裝孔徑為孔徑為0.45m或或0.22m的微孔濾膜的微孔濾膜（millipore filter membrane）不銹鋼酒精燈不銹鋼酒精燈蘭花專用蘭花專用30cm直形鑷子直形鑷子1， 由進(jìn)口全不銹鋼制造；由進(jìn)口全不銹鋼制造；2， 可以整體高壓滅菌或用消毒藥劑浸泡，耐可以整體高壓滅菌或用消毒藥劑浸泡，耐腐蝕性強(qiáng)；腐蝕性強(qiáng)；3， 耐沖擊，不會受溫度影響而炸裂燙傷操作耐沖擊，不會受溫度影響而炸裂燙傷操作人員，安全可靠；人員，安全可靠；4， 專利技術(shù)的硬質(zhì)燈芯，不需要更換燈芯；專利技術(shù)的硬質(zhì)燈芯，不需要更換燈芯；5， 酒精燈整體高度低、底部寬大，從而杜絕酒精燈整體高度低、底部寬大，從而杜絕因酒精傾倒溢出而造成的嚴(yán)重事故。因酒精傾倒溢出而造成的嚴(yán)重事故。6， 酒精加注口為螺紋設(shè)計(jì)，直徑大，灌裝安酒精加注口為螺紋設(shè)計(jì)，直徑大，灌裝安全、簡便。全、簡便。電熱滅菌器電熱滅菌器Environmentally controlled culture area Shelves with lighting on a timer and contro