食品添加劑辣椒橙1范圍本標(biāo)準(zhǔn)適用于以辣椒果皮及其制品為原料

1、食品添加劑辣椒橙1范圍脫辣椒素等工藝制成的食品添加本標(biāo)準(zhǔn)適用于以辣椒果皮及其制品為原料，經(jīng)萃取、過(guò)濾、濃縮、劑辣椒橙。食品添加劑辣椒橙為橙色或橙紅色油狀液體。2分子式和相對(duì)分子質(zhì)量2.1 分子式辣椒紅素：C40H56O3辣椒玉紅素：C40H56O42.2 相對(duì)分子質(zhì)量辣椒紅素：584.85辣椒玉紅素：600.853技術(shù)要求應(yīng)符合表1的規(guī)定。表1 技術(shù)要求項(xiàng)目指標(biāo)檢驗(yàn)方法類(lèi)胡蘿卜素總量，w/%標(biāo)稱(chēng)附錄A中A.3辣椒總堿/卩g/mL符合聲稱(chēng)附錄A中A.4辣椒紅素和辣椒玉紅素，w/%>類(lèi)胡蘿卜素總量的30%附錄A中A.5砷(以 As 計(jì))/ (mg/kg)<3.0附錄A中A.6鉛(Pb)

2、/(mg/kg)<2.0附錄A中A.7總有機(jī)溶劑殘留量，w/%<0.005附錄A中A.8檢驗(yàn)方法A.1 一般規(guī)定本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑和水，在沒(méi)有注明其他要求時(shí)，均指分析純?cè)噭┖?GB/T 6682 2021規(guī)定的三級(jí)水。試驗(yàn)中所需標(biāo)準(zhǔn)溶液、雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液、制劑及制品在沒(méi)有注明其他規(guī)定時(shí)，均按GB/T 601、GB/T 602、GB/T 603規(guī)定配制和標(biāo)定。A.2 鑒別試驗(yàn)A.2.1顯色反響在1滴試樣中加2滴3滴三氯甲烷和1滴硫酸，溶液呈深藍(lán)色。A.2.2最大吸收樣品溶解在丙酮中，在約462nm處有最大吸收峰。樣品溶解在正己烷中，約在470nm處有最大吸收峰。A.2.3高效液相色譜法通過(guò)測(cè)

3、試，詳見(jiàn)“辣椒紅素和辣椒玉紅素含量測(cè)定。A.3 類(lèi)胡蘿卜素總量的測(cè)定A.3.1方法提要采用分光光度計(jì)法測(cè)定辣椒橙中的類(lèi)胡蘿卜素在最大吸收波長(zhǎng)處約462nm吸光度值，計(jì)算其含量。試劑和材料丙酮。儀器和設(shè)備分光光度計(jì)。比色皿：10r試樣溶液的配制準(zhǔn)確稱(chēng)取0.3g0.5g 精確至0.0002 g 辣椒橙加到100mL容量瓶中，參加丙酮搖動(dòng)溶解，定容，靜置2min。吸取該溶液1mL參加另外一個(gè)100mL容量瓶中，丙酮定容到刻度，充分搖動(dòng)。A.3.5 分析步驟將辣椒橙試樣溶液置于10mm比色皿中，在最大吸收波長(zhǎng)處約462nm讀取吸光度 A。調(diào)整樣品濃度，使吸光度在 0.30.7之間。A.3.6結(jié)果計(jì)算類(lèi)

4、胡蘿卜素總量以 w1計(jì)，數(shù)值以%表示，按式A.1計(jì)算：A "0000/、w1 A.1 2100 m式中：A 辣椒橙試樣溶液的吸光度值；2100辣椒紅素/辣椒玉紅素在丙酮中462nm波長(zhǎng)處的吸光度 人鳥(niǎo)；m 試樣質(zhì)量的數(shù)值，單位為克g;計(jì)算結(jié)果表示到小數(shù)點(diǎn)后1位。A.4 辣椒總堿的測(cè)定A.4.1 方法提要采用高效液相色譜法測(cè)定辣椒總堿降二氫辣椒堿、辣椒堿和二氫辣椒堿的含量。A.4.2 試劑和材料A.4.2.1合成辣椒堿標(biāo)樣，純度大于99%。A.4.2.2 乙醇。A.4.2.3 丙酮。A.4.2.4 乙腈。A.4.3 儀器和設(shè)備A.4.3.1高效液相色譜儀：帶有 20山定量環(huán)、熒光檢測(cè)器

5、或紫外檢測(cè)器。A.4.3.2檢測(cè)器：熒光檢測(cè)器-激發(fā)波長(zhǎng)280nm，發(fā)射波長(zhǎng)325nm。紫外檢測(cè)器-檢測(cè)波長(zhǎng)280nm。A.4.3.3 色譜柱：長(zhǎng)為150mm，內(nèi)徑為4.6mm的不銹鋼柱，固定相為 C18、粒徑5呵。A.4.3.4固相萃取小柱：C18 SEP-PAK 6mL。A.4.4色譜分析條件A.4.4.1流動(dòng)相：乙腈：水溶液=40:60水溶液為1%乙酸溶液v/v。A.4.4.2 流量：1.5mL/min 。A.4.4.3進(jìn)樣量：20此。A.4.5標(biāo)樣溶液的配制準(zhǔn)確稱(chēng)取75mg合成辣椒堿，純度大于 99%, CAS RN : 2444-46-4參加500mL容量瓶中，加乙醇溶解稀釋到刻度，

6、搖勻，此溶液為標(biāo)準(zhǔn)溶液A，濃度為150卩g/mL。吸取10mL標(biāo)準(zhǔn)溶液A參加到100mL容量瓶中，加乙醇溶解稀釋到刻度，搖勻，此溶液為標(biāo)準(zhǔn)溶液B，濃度為15卩g/mL吸取5mL標(biāo)準(zhǔn)溶液 B參加到100mL容量瓶中，加乙醇溶解稀釋到刻度，搖勻，此溶液標(biāo)準(zhǔn)溶液C,濃度為0.75 g/mLA.4.6樣品溶液的配制準(zhǔn)確稱(chēng)取5g辣椒橙加到50mL容量瓶中，防止樣品粘到容量瓶?jī)?nèi)壁上。參加5mL丙酮，搖動(dòng)直至樣品完全溶解。傾斜 45。角觀(guān)察樣品是否粘附瓶底。緩慢參加乙醇95%或無(wú)水乙醇直到溶液渾濁，稀釋到刻度，混合均勻。用10mL注射器直接吸取 5mL樣品溶液參加到規(guī)格為 6mL固相萃取柱中，避免樣品粘附到

7、注射器的內(nèi)壁上。樣品通過(guò)萃取柱并收集到25mL的容量瓶中。用5mL乙醇洗滌萃取柱，洗滌三次，洗滌液收集到容量瓶中。乙醇定容，經(jīng)0.45 in過(guò)濾器過(guò)濾，濾液裝入玻璃瓶中。A.4.7分析步驟在規(guī)定的色譜條件下，分別用微量注射器吸取試樣溶液和適宜的標(biāo)準(zhǔn)溶液注入并充滿(mǎn)定量環(huán)，進(jìn)行色譜檢測(cè)，待最后一個(gè)組分流出完畢，用色譜工作站或積分儀進(jìn)行結(jié)果處理。進(jìn)樣順序是標(biāo)準(zhǔn)溶液、試樣溶液、標(biāo)準(zhǔn)溶液。A.4.8結(jié)果計(jì)算降二氫辣椒堿濃度以Cn計(jì)，數(shù)值以i g/mL表示，按式A.2計(jì)算：NCsCn- A.2式中:N降二氫辣椒堿的平均峰面積數(shù)值；cs標(biāo)樣濃度 i g/mLAi 標(biāo)樣的平均峰面積數(shù)值；rN降二氫辣椒堿相對(duì)標(biāo)

8、樣的響應(yīng)因子。辣椒堿濃度以Cc計(jì)，數(shù)值以1 g/mL表示，按式A.3計(jì)算:Cc =Cs rc(A.3 )式中:C辣椒堿的平均峰面積數(shù)值；cs標(biāo)樣濃度 i g/mLAi 標(biāo)樣的平均峰面積數(shù)值； rc 辣椒堿相對(duì)標(biāo)樣的響應(yīng)因子。二氫辣椒堿濃度以 cd計(jì)，數(shù)值以i g/mL表示，按式A.4計(jì)算:CdD仝A D(A.4 )D 二氫辣椒堿的平均峰面積數(shù)值;cs標(biāo)樣濃度 卩g/mLAi 標(biāo)樣的平均峰面積數(shù)值； rD二氫辣椒堿相對(duì)標(biāo)樣的響應(yīng)因子。樣品中辣椒總堿(降二氫辣椒堿、辣椒堿和二氫辣椒堿)以W2計(jì)，數(shù)值以 卩g/mL表示，按式(A.5)計(jì)算：W2= Cn + Cc +Cd (A.5)式中：cn降二氫辣

9、椒堿的濃度 卩g/mLCc,辣椒堿的濃度卩g/mLcd二氫辣椒堿的濃度 卩g/mL表A.1各辣椒堿參數(shù)各辣椒堿名稱(chēng)紫外檢測(cè)器響應(yīng)因子(UV)熒光檢測(cè)器響應(yīng)因子(FLU)相對(duì)保存時(shí)間/min降二氫辣椒堿(2)0.980.920.90辣椒堿(rc)0.890.881.00二氫辣椒堿(8 )0.930.931.58A.5 辣椒紅素和辣椒玉紅素含量的測(cè)定A.5.1方法提要采用高效液相色譜法，用面積歸一化法測(cè)定辣椒紅素和辣椒玉紅素的含量。試劑和材料丙酮：色譜純。無(wú)水硫酸鈉。氫氧化鉀-甲醇溶液：2g氫氧化鉀溶于100mL甲醇。乙醚。儀器和設(shè)備咼效液相色譜儀：帶有二極管陣列檢測(cè)器，波譜范圍350 nm600

10、nm。色譜柱：長(zhǎng)為250 min，內(nèi)徑為4mm的不銹鋼柱，固定相為 C18。色譜分析條件檢測(cè)波長(zhǎng):450nm。A.5.4.2 流量：1.5mL/min。A.5.4.3進(jìn)樣量：5L。A.5.4.4 梯度洗脫：時(shí)間/min丙酮水-10 進(jìn)樣前752507525575251095517955221000277525A.5.5樣品溶液的配制稱(chēng)取0.2g樣品溶于適量丙酮中，轉(zhuǎn)移至500mL分液漏斗，參加丙酮至溶液體積為100mL，再參加100mL乙醚，混合均勻，過(guò)濾。參加 100mL氫氧化鉀-甲醇溶液，靜置1h,定時(shí)搖動(dòng)。除去水相，用水 洗滌有機(jī)相數(shù)次，直到洗液無(wú)色。經(jīng)無(wú)水硫酸鈉過(guò)濾，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在35

11、 C以下蒸干。將枯燥的色素轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中，用丙酮溶解定容，冷卻?？稍诜治銮坝贸暡òl(fā)生器將樣品充分溶解，經(jīng)0.45 m過(guò)濾器過(guò)濾。A.5.6分析步驟在規(guī)定的色譜條件下，用微量注射器吸取5 試樣溶液注入進(jìn)樣閥，待最后一個(gè)組分流出完畢， 用色譜工作站或積分儀進(jìn)行結(jié)果處理。出峰順序：新葉黃素、 辣椒玉紅素、 紫黃質(zhì)、辣椒紅素、氧化玉米黃素、 玉米黃質(zhì)、類(lèi)胡蘿卜黃色素 A、玉米黃質(zhì)、隱辣椒質(zhì)、 3玉米黃質(zhì)、3胡蘿卜素。A.5.7結(jié)果計(jì)算樣品中辣椒紅素和辣椒玉紅素含量以W3計(jì)，數(shù)值以%表示，按式A.6 計(jì)算：A2A3'' A100%(A.6 )式中：A2 試樣中辣椒紅素的峰面積數(shù)

12、值；A3 試樣中辣椒玉紅素的峰面積數(shù)值;SAi試樣中各組分i的峰面積之和。計(jì)算結(jié)果表示到小數(shù)點(diǎn)后 1位。A.6砷的測(cè)定A.6.1方法提要辣椒橙經(jīng)濕法消解后，制備成試樣溶液，用原子吸收光譜法測(cè)定砷的含量。A.6.2 試劑和材料硝酸硫酸溶液： 1+1硝酸 -高氯酸混合溶液：3+1砷 As 標(biāo)準(zhǔn)溶液：按GB/T 602配制和標(biāo)定后，再根據(jù)使用的儀器要求進(jìn)行稀釋配制成含砷相應(yīng)濃度的三種標(biāo)準(zhǔn)溶液。A.6.2.5 氫氧化鈉溶液： 1g/L 。A.6.2.6 硼氫化鈉溶液： 8g/L 溶劑為 1g/L 的氫氧化鈉溶液 。A.6.2.7 鹽酸溶液： 1+10。A.6.2.8 碘化鉀溶液： 200g/L 。A.

13、6.3 儀器和設(shè)備A.6.3.1 原子吸收光譜儀。A.6.3.2 儀器參考條件：砷空心陰極燈分析線(xiàn)波長(zhǎng)：193.7nm;狹縫：0.5 nm1.0nm ;燈電流：6 mA10 mA 。載氣流速：氬氣250mL/min 。原子化器溫度：900 C。分析步驟試樣消解稱(chēng)取約1g試樣精確至0.001g ,置于250mL三角或圓底燒瓶中，加 10mL15mL硝酸和2mL 硫酸溶液，搖勻后用小火加熱趕出二氧化氮?dú)怏w，溶液變成棕色，停止加熱，放冷后參加5mL 硝酸 -高氯酸混合液， 強(qiáng)火加熱至溶液透明或微黃色， 如仍不透明， 放冷后再補(bǔ)加 5mL 硝酸 -高氯酸混合溶液， 繼續(xù)加熱至溶液透明無(wú)色或微黃色并產(chǎn)生

14、白煙 防止燒干出現(xiàn)炭化現(xiàn)象 ，停止加熱，放冷后加 5mL 水 加熱至沸，除去剩余的硝酸 -高氯酸必要時(shí)可再加水煮沸一次，繼續(xù)加熱至發(fā)生白煙，保持 10min，放 冷后移入 100mL 容量瓶假設(shè)溶液出現(xiàn)渾濁、沉淀或機(jī)械雜質(zhì)須過(guò)濾 ，用鹽酸溶液稀釋定容。同時(shí)按相同的方法制備空白溶液。A.6.4.2 測(cè)定量取25mL消解后的試樣溶液至 50mL容量瓶，參加5mL碘化鉀溶液，用鹽酸溶液稀釋定容，搖勻， 靜置 15min。同時(shí)按相同的方法以空白溶液制備空白測(cè)試液。 開(kāi)啟儀器，待儀器及砷空心陰極燈充分預(yù)熱，基線(xiàn)穩(wěn)定后，用硼氫化鈉溶液作氫化物復(fù)原發(fā)生劑， 以標(biāo)準(zhǔn)空白、標(biāo)準(zhǔn)溶液、 樣品空白測(cè)試液及樣品溶液的

15、順序， 按電腦指令分別進(jìn)樣。測(cè)試結(jié)束后電腦自動(dòng)生成工作曲線(xiàn)及扣除樣品空白后的樣品溶液中砷濃度， 輸入樣品信息 名稱(chēng)、稱(chēng)樣量、稀釋體積等 即自動(dòng)換算出試樣中砷含量。平行測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不大于 0.1mg/kg ，取其算術(shù)平均值作為測(cè)定結(jié)果。A.7 鉛的測(cè)定方法提要辣椒橙經(jīng)濕法消解后，制備成試樣溶液，用原子吸收光譜法測(cè)定鉛的含量。試劑和材料鉛Pb標(biāo)準(zhǔn)溶液：按GB/T 602配制和標(biāo)定后，再根據(jù)使用的儀器要求進(jìn)行稀釋配制成含鉛相 應(yīng)濃度的三種標(biāo)準(zhǔn)溶液。氫氧化鈉溶液： 1g/L 。硼氫化鈉溶液： 8g/L 溶劑為 1g/L 的氫氧化鈉溶液 。鹽酸溶液： 1+10。儀器和設(shè)備原子吸收光譜儀 。儀器參考

16、條件： GB 5009.12-2021 第三法 火焰原子吸收光譜法。分析步驟可直接采用 A.6.4.1 的試樣溶液和空白溶液。按GB 5009.12-2021第三法 火焰原子吸收光譜法操作。平行測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不大于1.0mg/kg，取其算術(shù)平均值作為測(cè)定結(jié)果。A.8 總有機(jī)溶劑殘留量方法提要采用氣相色譜法，用內(nèi)標(biāo)法測(cè)定總有機(jī)溶劑乙酸乙酯，甲醇，乙醇，丙酮，2-丙醇，己烷殘留量。試劑和材料甲醇。內(nèi)標(biāo)物： 3-甲基 -2-戊酮。儀器和設(shè)備氣相色譜儀。A.8.3.2檢測(cè)器：氫火焰離子化檢測(cè)器。A.8.3.3 色譜柱：石英毛細(xì)管柱，長(zhǎng)為30m，直徑為0.53mm ,膜厚gm 如DB-1或能到達(dá)同等

17、別離效果的其他毛細(xì)管柱。A.8.4色譜分析條件A.8.4.1 載氣：氦氣。A.8.4.2 流量：5mL/min。A.8.4.3 氣化室溫度：140 C。A.8.4.4檢測(cè)器溫度：300 CoA.8.4.5 柱溫：35C保持5min，然后以5C /min升溫至90C，保持6min。A.8.4.6 進(jìn)樣量：1.0mL 分流狀態(tài)下。A.8.5 溶液配制A.8.5.1 內(nèi)標(biāo)溶液的配制準(zhǔn)確量取50.0mL甲醇參加到50mL進(jìn)樣瓶中，密封，稱(chēng)重，然后通過(guò)隔膜注射15卩L3甲基-2-戊酮，稱(chēng)重，精確至0.01mg。A.8.5.2 樣品溶液的配制準(zhǔn)確稱(chēng)取0.20g樣品參加樣品瓶中，再參加 5.0mL甲醇和1.0mL內(nèi)標(biāo)溶液，60C加熱10min,充分搖動(dòng) 10秒鐘。A.8.5.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)溶液的配制準(zhǔn)確量取50.0mL甲醇參加到50mL樣品瓶中，密封。準(zhǔn)確稱(chēng)量，精確到0.01mg。通過(guò)隔膜注入50 L標(biāo)樣目標(biāo)化合物，