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文檔簡介
1、醫(yī)用基因工程復習思考題第一章基因和基因組及基因工程的概念一、名詞概念移動基因(插入序列;轉位子);斷裂基因;RNA剪輯;內含子(間隔序列)與表達子;重疊基因;重復序列;假基因;啟動子與終止子;起始位點、終止位點。二、討論題1. 什么叫基因?何謂基因的新概念?基因的主要功能是什么?2. 一種基因一種酶的提法妥否?3. 基因密碼子三聯(lián)體間是否存在著逗號?4. 基因表達的產物中,氨基酸序列相同時,基因密碼子是否一定相同?為什么?5. 何謂轉位子和轉位作用?轉位的后果如何?6. 基因中最小的突變單位和重組單位是什么?7. 基因工程應包括哪些內容?何謂基因工程的四大里程碑和三大技術發(fā)明?8. 真核細胞基
2、因組中常有內含子存在,能否在原核細胞獲得表達?能,為什么?不能,為什么?第二章基因工程中常用的工具酶1. 什么是限制性核酸內切酶?2. 什么是R/M現(xiàn)象?如何解釋?3. II型核酸內切酶的基本特點有哪些?4. 影響II型核酸內切酶活性的因素有哪些?如何克服和避免這些不利因素?5. DNAit接酶有哪兩類?有何不同?6. 甲基化酶有哪兩類?有何應用價值?7. 什么叫同尾酶、同裂酶?在基因工程中有何應用價值?8. 平末端連接的方法有哪些?(圖示)9. Klenow酶的特性和用途有哪些?舉例說明。10. 反轉錄酶的特性有哪些?有何應用價值?11. 列舉堿性磷酸酶BAP/CAP勺應用之一。12. 列舉
3、末端核苷酸序列轉移酶的應用之一。13. 質粒單酶切點的基因連接如何降低本底和防止自我環(huán)化和提高連接效率?14. 基因片段與載體的平末端連接的方法有哪些?15. 用寡核甘酸和銜接物DNA勺短片段連接時為使基因內部的切點保護,常用何種辦法解決?第三章基因克隆載體1. 基因工程常用的載體有哪5種?其共同特性如何?2. 什么是質粒?質粒分哪幾種?有哪兩種復制類型,質粒的分子生物學特性有哪些?3. 質粒存在的三種形式是什么?4. 分離質粒的基本步驟有哪些?5. 分離純化質粒的方法有哪幾種?簡述CsCl密度梯度(浮密度)分離法、堿變性法的原理,如何選擇合適的分離方法?6. 作為理想質粒載體的基本條件有哪些
4、?7. 什么叫插入失活,舉例說明之。8. 構建pBR322質粒載體的親本質粒有哪些?9. 什么叫插入型和替換型噬菌體載體?插入型和替換型入噬菌體Cosmid容納外源DNA勺最大容量是多少?10. 將外源性DNA克隆到-半乳糖甘酶失活的插入型入噬菌體上后,如何篩選重組噬菌體?11. 簡述細線狀噬菌體M3在基因工程中的應用。12. 什么是Cos質粒、Cos位點和Cos細胞?13. 什么叫cccDN府口ocDNA14. 酶母載體有哪三種類型?它們構成的成分各有哪些?什么叫穿梭載體?15. 改造后的SV0載體有哪幾種類型?各舉例說明之。第四章目的基因的分離和克隆一、名詞解釋基因組文庫;cDNA文庫。二
5、、問答1 .目的基因克隆時常用哪些方法分離和獲得基因?2 .構建基因組庫的意義及構建過程?3 .構建cDN欣庫的意義、常用載體及構建過程?4 .目的基因與載體的連接方法有哪些?各有哪些優(yōu)點?基因重組時在兩個酶切位點中其中有一個不相匹配時,你如何解決連接問題?5 .試述T-A克隆法的原理和用途?第五章重組DN礙入宿主細胞與轉化子的篩選一、名詞解釋轉化;轉染;轉導;-互補。二、問答1. 重組DN響宿主細胞的導入方法有哪些?2. 影響CaCl2轉化率的因素有那些?3. 如何利用抗性標記基因篩選陽性克?。?. 如何利用LacZ標記基因篩選陽性克???5. 如何從所克隆到的基因重組載體中鑒定目的基因的存在
6、和正確性第六章外源基因在大腸桿菌中的表達調控1、 名詞解釋基因表達;啟動子;操縱子;Lac啟動子;Trp啟動子;Tac啟動子;RNA聚合酶;轉化的弱化作用;核糖體結合位點(SD序列);起始密碼子。2、 問答1. 原核表達系統(tǒng)常采用的啟動子有哪些?Lac、Tac、trp其特點如何?2. 強終止子如何發(fā)揮終止作用?弱終止子如何發(fā)揮作用?3. 克隆的外源基因在大腸桿菌中表達需要的條件有哪些?4. 影響外源基因在大腸桿菌中表達的因素有哪些?5. 構建原核表達載體應具備哪些基本要素?第七章外源基因在真核細胞中表達及調控1、 名詞概念原病毒;鋅指結構;亮氨酸拉鏈;RN端輯;tk基因2、 問答1. 真核表達
7、調控的順式作用元件有哪些?其作用特點是什么?2. 真核表達調控的反式作用因子有哪些?其作用特點是什么?3. 真核表達載體所必備的條件有哪些?真核表達載體常采用的選擇標記基因有哪些?4. 什么叫tk基因?在作選擇標記基因的克隆篩選中有何應用價值?5. 常用的真核病毒載體有那些?并簡述其特點?6. 真核細胞基因表達的過程是什么?主要有哪些調控機理?7. 簡述真核、原核兩大表達系統(tǒng)的優(yōu)缺點。第八章基因突變1、 名詞概念突變;基因突變;突變體;突變基因;野生型基因;無義突變;錯義突變;同義突變;區(qū)域隨機誘變2、 問答1. 寡核苷酸介導的點突變技術的原理是什么?簡述其誘變程序(最好結合圖示說明之)。2.
8、 什么叫Kunkel定點誘變法?什么叫硫代磷酸的核苷酸誘變法?什么叫大引物PCRW變法?(最好結合圖示說明之)。3. 基因突變技術在分子生物學研究和蛋白質工程研究中的有哪些應用?第九章基因工程技術與國民經濟的關系及作用(自學從略)第十章基因工程藥物的研究開發(fā)及其產業(yè)化一、名詞概念基因拼接;基因確失;比活性;IFNs類似物;IFNs雜合體;重組病毒載體;重組質粒型載體;二、問答1. 基因工程藥物包括哪幾大類?2. 基因工程藥物的基本操作程序有哪幾步?3. 基因改造常用的技術手段有哪些?舉例說明之。4. 如何獲得基因?常用的載體有哪幾種?5. 目的基因表達系統(tǒng)有哪幾種?其特點如何?6. 如果目的基
9、因的基因結構中有內含子存在,而且要采用原核表達系統(tǒng),你應如何分離克隆基因?7. 基因工程藥物的純化常用哪些方法?雜蛋白來自何方?8. 基因工程藥物質量控制點要點包括哪些?第十一章基因工程疫苗的研究與開發(fā)1、 名詞概念基因工程多肽疫苗;基因重組病毒活疫苗;基因缺失活疫苗;基因重組多價疫苗。2、 討論題1. 基因工程疫苗研究開發(fā)應遵循的原則是什么?2. 基因工程疫苗有哪幾種?舉例說明之。3. 基因工程疫苗的研究開發(fā)常用的途徑是什么?(最好采用示意圖回答)第十二章基因工程抗體和導向藥物1、 名詞概念CDR;嵌合抗體;單鏈抗體(ScFV);FV片段;重組Fab片段。2、 討論題1. CDRCD區(qū)CD的
10、別J由Ig的H鏈及L鏈中哪些基因片段組成?2. 人ScFV的基因組成、功能有哪些?有何優(yōu)點?3. 基因工程的人源化抗體的導向藥物包括哪些?在疾病診斷和生物治療中有什么應用價值?4. 何謂基因工程抗體的噬菌體表面呈現(xiàn)技術?有何價值?主要程序包括哪些?第十三章基因治療1、 名詞概念基因置換;基因修正;基因修飾;基因失活;基因治療;抑癌基因的基因療法;反義RNA®因療法;核酶藥物自殺基因療法;反基因療法;肽核酸;瘤苗基因療法;3)多重耐藥性(MDR基因療法.2、 討論題1. 基因治療所采用的基因轉移方法有哪些?簡要說明之。2. 病毒載體轉移基因有何特點?3. 腫瘤基因治療有哪些方法?簡要說明之。4. 藥物自殺基因的基因治療原理、種類和應用如何?5. 抗病毒基因治療的方法有哪些?簡要說明之。6. 有哪幾種反義核苷酸基因失活療法?簡述其作用原理。7. 基因治療的策略包括哪些?第十四
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