基因工程原理期末復(fù)習(xí)思考題

1、醫(yī)用基因工程復(fù)習(xí)思考題第一章基因和基因組及基因工程的概念一、名詞概念移動基因（插入序列；轉(zhuǎn)位子）；斷裂基因；RNA剪輯；內(nèi)含子（間隔序列）與表達(dá)子；重疊基因；重復(fù)序列；假基因；啟動子與終止子；起始位點(diǎn)、終止位點(diǎn)。二、討論題1. 什么叫基因?何謂基因的新概念?基因的主要功能是什么?2. 一種基因一種酶的提法妥否？3. 基因密碼子三聯(lián)體間是否存在著逗號？4. 基因表達(dá)的產(chǎn)物中，氨基酸序列相同時，基因密碼子是否一定相同？為什么？5. 何謂轉(zhuǎn)位子和轉(zhuǎn)位作用?轉(zhuǎn)位的后果如何?6. 基因中最小的突變單位和重組單位是什么？7. 基因工程應(yīng)包括哪些內(nèi)容？何謂基因工程的四大里程碑和三大技術(shù)發(fā)明?8. 真核細(xì)胞基

2、因組中常有內(nèi)含子存在，能否在原核細(xì)胞獲得表達(dá)？能，為什么？不能，為什么？第二章基因工程中常用的工具酶1. 什么是限制性核酸內(nèi)切酶？2. 什么是R/M現(xiàn)象？如何解釋？3. II型核酸內(nèi)切酶的基本特點(diǎn)有哪些？4. 影響II型核酸內(nèi)切酶活性的因素有哪些？如何克服和避免這些不利因素？5. DNAit接酶有哪兩類？有何不同？6. 甲基化酶有哪兩類？有何應(yīng)用價值？7. 什么叫同尾酶、同裂酶？在基因工程中有何應(yīng)用價值？8. 平末端連接的方法有哪些？（圖示）9. Klenow酶的特性和用途有哪些？舉例說明。10. 反轉(zhuǎn)錄酶的特性有哪些？有何應(yīng)用價值？11. 列舉堿性磷酸酶BAP/CAP勺應(yīng)用之一。12. 列舉

3、末端核苷酸序列轉(zhuǎn)移酶的應(yīng)用之一。13. 質(zhì)粒單酶切點(diǎn)的基因連接如何降低本底和防止自我環(huán)化和提高連接效率？14. 基因片段與載體的平末端連接的方法有哪些？15. 用寡核甘酸和銜接物DNA勺短片段連接時為使基因內(nèi)部的切點(diǎn)保護(hù)，常用何種辦法解決？第三章基因克隆載體1. 基因工程常用的載體有哪5種？其共同特性如何？2. 什么是質(zhì)粒？質(zhì)粒分哪幾種？有哪兩種復(fù)制類型，質(zhì)粒的分子生物學(xué)特性有哪些？3. 質(zhì)粒存在的三種形式是什么？4. 分離質(zhì)粒的基本步驟有哪些？5. 分離純化質(zhì)粒的方法有哪幾種？簡述CsCl密度梯度（浮密度）分離法、堿變性法的原理，如何選擇合適的分離方法？6. 作為理想質(zhì)粒載體的基本條件有哪些

4、？7. 什么叫插入失活，舉例說明之。8. 構(gòu)建pBR322質(zhì)粒載體的親本質(zhì)粒有哪些？9. 什么叫插入型和替換型噬菌體載體?插入型和替換型入噬菌體Cosmid容納外源DNA勺最大容量是多少？10. 將外源性DNA克隆到-半乳糖甘酶失活的插入型入噬菌體上后，如何篩選重組噬菌體？11. 簡述細(xì)線狀噬菌體M3在基因工程中的應(yīng)用。12. 什么是Cos質(zhì)粒、Cos位點(diǎn)和Cos細(xì)胞？13. 什么叫cccDN府口ocDNA14. 酶母載體有哪三種類型？它們構(gòu)成的成分各有哪些？什么叫穿梭載體？15. 改造后的SV0載體有哪幾種類型？各舉例說明之。第四章目的基因的分離和克隆一、名詞解釋基因組文庫；cDNA文庫。二

5、、問答1 .目的基因克隆時常用哪些方法分離和獲得基因？2 .構(gòu)建基因組庫的意義及構(gòu)建過程？3 .構(gòu)建cDN欣庫的意義、常用載體及構(gòu)建過程？4 .目的基因與載體的連接方法有哪些？各有哪些優(yōu)點(diǎn)？基因重組時在兩個酶切位點(diǎn)中其中有一個不相匹配時，你如何解決連接問題？5 .試述T-A克隆法的原理和用途？第五章重組DN礙入宿主細(xì)胞與轉(zhuǎn)化子的篩選一、名詞解釋轉(zhuǎn)化；轉(zhuǎn)染；轉(zhuǎn)導(dǎo)；-互補(bǔ)。二、問答1. 重組DN響宿主細(xì)胞的導(dǎo)入方法有哪些？2. 影響CaCl2轉(zhuǎn)化率的因素有那些？3. 如何利用抗性標(biāo)記基因篩選陽性克?。?. 如何利用LacZ標(biāo)記基因篩選陽性克??？5. 如何從所克隆到的基因重組載體中鑒定目的基因的存在

6、和正確性第六章外源基因在大腸桿菌中的表達(dá)調(diào)控1、 名詞解釋基因表達(dá)；啟動子；操縱子；Lac啟動子；Trp啟動子；Tac啟動子；RNA聚合酶；轉(zhuǎn)化的弱化作用；核糖體結(jié)合位點(diǎn)（SD序列）；起始密碼子。2、 問答1. 原核表達(dá)系統(tǒng)常采用的啟動子有哪些？Lac、Tac、trp其特點(diǎn)如何？2. 強(qiáng)終止子如何發(fā)揮終止作用？弱終止子如何發(fā)揮作用？3. 克隆的外源基因在大腸桿菌中表達(dá)需要的條件有哪些？4. 影響外源基因在大腸桿菌中表達(dá)的因素有哪些？5. 構(gòu)建原核表達(dá)載體應(yīng)具備哪些基本要素？第七章外源基因在真核細(xì)胞中表達(dá)及調(diào)控1、 名詞概念原病毒；鋅指結(jié)構(gòu)；亮氨酸拉鏈；RN端輯；tk基因2、 問答1. 真核表達(dá)

7、調(diào)控的順式作用元件有哪些？其作用特點(diǎn)是什么？2. 真核表達(dá)調(diào)控的反式作用因子有哪些？其作用特點(diǎn)是什么？3. 真核表達(dá)載體所必備的條件有哪些？真核表達(dá)載體常采用的選擇標(biāo)記基因有哪些？4. 什么叫tk基因？在作選擇標(biāo)記基因的克隆篩選中有何應(yīng)用價值？5. 常用的真核病毒載體有那些？并簡述其特點(diǎn)？6. 真核細(xì)胞基因表達(dá)的過程是什么？主要有哪些調(diào)控機(jī)理？7. 簡述真核、原核兩大表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)缺點(diǎn)。第八章基因突變1、 名詞概念突變；基因突變；突變體；突變基因；野生型基因；無義突變；錯義突變；同義突變；區(qū)域隨機(jī)誘變2、 問答1. 寡核苷酸介導(dǎo)的點(diǎn)突變技術(shù)的原理是什么？簡述其誘變程序（最好結(jié)合圖示說明之）。2.

8、 什么叫Kunkel定點(diǎn)誘變法？什么叫硫代磷酸的核苷酸誘變法？什么叫大引物PCRW變法？（最好結(jié)合圖示說明之）。3. 基因突變技術(shù)在分子生物學(xué)研究和蛋白質(zhì)工程研究中的有哪些應(yīng)用?第九章基因工程技術(shù)與國民經(jīng)濟(jì)的關(guān)系及作用（自學(xué)從略）第十章基因工程藥物的研究開發(fā)及其產(chǎn)業(yè)化一、名詞概念基因拼接；基因確失；比活性；IFNs類似物；IFNs雜合體；重組病毒載體；重組質(zhì)粒型載體；二、問答1. 基因工程藥物包括哪幾大類？2. 基因工程藥物的基本操作程序有哪幾步？3. 基因改造常用的技術(shù)手段有哪些？舉例說明之。4. 如何獲得基因？常用的載體有哪幾種？5. 目的基因表達(dá)系統(tǒng)有哪幾種？其特點(diǎn)如何？6. 如果目的基

9、因的基因結(jié)構(gòu)中有內(nèi)含子存在，而且要采用原核表達(dá)系統(tǒng)，你應(yīng)如何分離克隆基因？7. 基因工程藥物的純化常用哪些方法？雜蛋白來自何方？8. 基因工程藥物質(zhì)量控制點(diǎn)要點(diǎn)包括哪些？第十一章基因工程疫苗的研究與開發(fā)1、 名詞概念基因工程多肽疫苗；基因重組病毒活疫苗；基因缺失活疫苗；基因重組多價疫苗。2、 討論題1. 基因工程疫苗研究開發(fā)應(yīng)遵循的原則是什么？2. 基因工程疫苗有哪幾種？舉例說明之。3. 基因工程疫苗的研究開發(fā)常用的途徑是什么？(最好采用示意圖回答)第十二章基因工程抗體和導(dǎo)向藥物1、 名詞概念CDR；嵌合抗體；單鏈抗體(ScFV)；FV片段；重組Fab片段。2、 討論題1. CDRCD區(qū)CD的

10、別J由Ig的H鏈及L鏈中哪些基因片段組成？2. 人ScFV的基因組成、功能有哪些？有何優(yōu)點(diǎn)？3. 基因工程的人源化抗體的導(dǎo)向藥物包括哪些？在疾病診斷和生物治療中有什么應(yīng)用價值？4. 何謂基因工程抗體的噬菌體表面呈現(xiàn)技術(shù)？有何價值？主要程序包括哪些？第十三章基因治療1、 名詞概念基因置換；基因修正；基因修飾；基因失活；基因治療；抑癌基因的基因療法；反義RNA®因療法；核酶藥物自殺基因療法；反基因療法；肽核酸；瘤苗基因療法；3）多重耐藥性（MDR基因療法.2、 討論題1. 基因治療所采用的基因轉(zhuǎn)移方法有哪些？簡要說明之。2. 病毒載體轉(zhuǎn)移基因有何特點(diǎn)？3. 腫瘤基因治療有哪些方法？簡要說明之。4. 藥物自殺基因的基因治療原理、種類和應(yīng)用如何？5. 抗病毒基因治療的方法有哪些？簡要說明之。6. 有哪幾種反義核苷酸基因失活療法？簡述其作用原理。7. 基因治療的策略包括哪些？第十四