論文 開題報告

1、南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院畢業(yè)設(shè)計（論文）開題報告課 題 名 稱：氣質(zhì)聯(lián)用法分析三棱揮發(fā)性成分 學(xué) 生 姓 名：陳曉棟 學(xué) 號：040007106 專 業(yè)：中藥資源與開發(fā) 指 導(dǎo) 教 師：吳啟南 實 習(xí) 單 位：南京中醫(yī)藥大學(xué) 南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院年 月 日南京中醫(yī)藥大學(xué)本科畢業(yè)設(shè)計(論文)開題報告學(xué)生姓名陳曉棟學(xué)號040007106專業(yè)/年級/班級07中藥資源與開發(fā)指導(dǎo)教師姓名吳啟南職稱教授，博導(dǎo)所在單位或部門南京中醫(yī)藥大學(xué)指導(dǎo)教師姓名職稱所在單位或部門課題來源國家自然基金項目課題類型研究型課題課題名稱氣質(zhì)聯(lián)用法分析三棱揮發(fā)性成分畢業(yè)設(shè)計（論文）的內(nèi)容和意義選題背景與意義三棱，是黑三棱科植物黑三棱

2、(Sparganium Stoloniferum Buch.Ham) 、小黑三棱( Sparganium Simplex) 、細(xì)葉黑三棱( Sparganium Stenophyllum) 和莎草科的荊三棱( Scirpusflariatilis)的塊莖，味辛、苦，性平。歸肝、脾經(jīng)。具有行氣、破血、消積、止痛的作用。對于治療氣血凝滯、癥瘕積聚、心腹疼痛、脅下漲疼、經(jīng)閉、瘡腫堅硬、產(chǎn)后淤血腹痛、跌打損傷等病癥有較好的作用。因具有多種藥理作用和臨床應(yīng)用,所以三棱一直是中國藥典所收載的藥物。三棱的化學(xué)成分復(fù)雜多樣，可研究價值與探索發(fā)掘的意義也非常重大。目前，國內(nèi)對三棱藥理研究，揮發(fā)油成分以及三棱的化

3、學(xué)成分已有較多研究與探討，而對于各個不同產(chǎn)地的三棱的揮發(fā)性成分的研究則并不多見。因此這個課題是采用氣質(zhì)聯(lián)用的分析方法（GS-MS）對十一個產(chǎn)地的三棱（1.江西 2.河南 3.江蘇南京 4.浙江永康 5.山東 6.河北 7.荊三棱 8.遼寧 9.浙江南部 10.新渥 11.湖北）的揮發(fā)性成分進(jìn)行初步分析，并為以后各方面對三棱的研究提供參考依據(jù)。 此外三棱還有很多活性成分尚未被找到，很多藥理研究也僅停留在提取物階段,因此對其化學(xué)成分進(jìn)行深入研究,進(jìn)一步闡明化學(xué)成分和臨床應(yīng)用間的聯(lián)系,對于指導(dǎo)臨床用藥和有關(guān)新藥開發(fā)的意義也可見一斑，因此這個課題對于三棱的進(jìn)一步研究與利用有著重要的意義。文獻(xiàn)綜述單獨附

4、在開題報告后面研究方案和技術(shù)路線1.收集不同產(chǎn)地的三棱樣品，曬干，粉碎，過20目篩備用。2.稱取適量樣品，乙醚水浴回流提?。粸V過，揮干，乙醚定容至5 ml容量瓶。3.采用GC-MS分析，并通過譜庫檢索，確定成分及含量。研究進(jìn)度2010.11-2010.12 樣品收集及前處理。2011.3-2011.4 揮發(fā)性成分提取及GC-MS分析。2011.5 譜庫檢索并完成論文。特色與創(chuàng)新課題針對三棱多揮發(fā)性成分的特點，采用GC-MS這種重要并且常用的分析技術(shù)進(jìn)行分析，利用氣相色譜的分離能力讓三棱提取液的組分分離，并用質(zhì)譜鑒定分離出來的成分以及其精確的量。鑒于GC-MS聯(lián)用是聯(lián)用技術(shù)中困難較少的一種，加上

5、其定性能力高，分析精確度高，分析自動化的優(yōu)點，因此課題的開展過程也將較為順利。此外，通過對十一種不同產(chǎn)地的三棱進(jìn)行分析研究，能廣泛全面地了解三棱的化學(xué)成分及揮發(fā)性成分的組成部分，能對三棱揮發(fā)性成分有較為全面和多樣的研究與了解。對于今后的深入和進(jìn)一步對三棱的研究能提供極具價值的參考依據(jù)。指導(dǎo)教師意 見指導(dǎo)教師簽名： 年 月 日教研室或?qū)嵙?xí)單位意 見負(fù)責(zé)人簽名： 年 月 日學(xué)院意見 教學(xué)院長簽名： 年 月 日附：與課題內(nèi)容相關(guān)的文獻(xiàn)資料不少于2000字，參考文獻(xiàn)不少于10種。附：文獻(xiàn)綜述三棱，是黑三棱科植物黑三棱(Sparganium Stoloniferum Buch.Ham) 、小黑三棱( S

6、parganium Simplex) 、細(xì)葉黑三棱( Sparganium Stenophyllum) 和莎草科的荊三棱( Scirpusflariatilis)的塊莖，味辛、苦，性平。歸肝、脾經(jīng)。具有行氣、破血、消積、止痛的作用。對于治療氣血凝滯、癥瘕積聚1、心腹疼痛、脅下漲疼、經(jīng)閉、瘡腫堅硬、產(chǎn)后淤血腹痛、跌打損傷等病癥有較好的作用, 并被廣泛應(yīng)用于心腦血管疾病,腫瘤,婦科各類疾病的治療?，F(xiàn)代藥理研究表明:在35種常用活血化淤藥當(dāng)中,三棱的作用強(qiáng)度居前10位2。三棱的化學(xué)成分復(fù)雜多樣，可研究價值與探索發(fā)掘的意義也非常重大。因具有多種藥理作用和臨床應(yīng)用,所以三棱一直是中國藥典所收載的藥物。1

7、.三棱的歷史沿革與利用前景。始載于唐代 本草拾遺的三棱, 因具有多種藥理作用和臨床應(yīng)用，所以自宋代開始作做正品藥用,并一直被中國藥典收載，并且三棱在婦科、腫瘤、肝病及心血管疾病等方面具有廣泛開發(fā)和利用的前景。2. 三棱的藥理作用方面及研究從邱魯嬰3和鄧英君4等的藥理實驗研究均可以看出，三棱能顯著提高小鼠因熱刺激引起的疼痛反應(yīng)的痛閾值，降低因醋酸刺激引起的扭體反轉(zhuǎn)次數(shù)。因此三棱在鎮(zhèn)痛作用方面的效果是顯而易見的，在對心腦血管的作用方面，于永紅等5研究了三棱對培養(yǎng)的兔子胸主動脈中膜平滑肌細(xì)胞DNA合成的影響。結(jié)果表明三棱提取物可以抑制兔動脈中膜平滑肌細(xì)胞的增殖。曾慶杏等6在wistar鼠大腦中動脈阻

8、塞的局灶性腦缺血模型上研究了其對腦電圖的影響。結(jié)果表明,復(fù)方三棱能減輕神經(jīng)功能缺損程度,減小梗死灶體積，從這些研究中都可以看出三棱在破血消積以及行氣方面有較好的效用。3.三棱的化學(xué)成分方面研究3.1三棱的主要化學(xué)成分三棱中主要含有揮發(fā)油7，還含有黃酮類、皂苷類、苯丙素類等其他化學(xué)成分。3.2有關(guān)方面的研究董學(xué)、王國強(qiáng)8等人利用柱色譜技術(shù)，對三棱進(jìn)行分離純化，得到了5個化合物，并且根據(jù)光譜數(shù)據(jù)和理化性質(zhì)鑒定其結(jié)構(gòu)，分別為:-谷甾醇棕櫚酸酯(I)、三棱雙苯內(nèi)酯(II)、三棱二苯乙炔(III)、6, 7, 10-三羥基-8-十八烯酸(IV)和胡蘿卜苷棕櫚酸酯(V)。張衛(wèi)東9、秦路平等將三棱先用乙醇提

9、取,再用正丁醇萃取,采用低壓硅膠柱層析的方法進(jìn)行分離,然后用現(xiàn)代光譜方法進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，分離得到2個化合物,分別為5,6-膽酸甲酯-3-O-L-鼠李糖-(14)-D-吡喃葡萄糖和-谷甾醇-3-O-D-吡喃葡萄糖甙,都是兩個之前沒有被分析出來的新的化合物。張淑運10從三棱的乙酸乙酯提取物中，分離得到3種化學(xué)成分,分別為-谷甾醇、丁二酸和胡蘿卜甙。并應(yīng)用氣-質(zhì)聯(lián)用色譜儀對其混合脂肪酸進(jìn)行了分析,鑒定了21種脂肪酸,占總脂肪酸含量的97.7%,其中十六酸、十八二烯酸、十八烯酸、十八酸含量較高,占混合脂肪酸的90%。 可見，三棱的化學(xué)成分復(fù)雜多樣，可研究價值與探索發(fā)掘的意義也非常重大。4.GC-MS技術(shù)

10、方法運用于三棱的研究分析GC-MS的分析技術(shù)是由氣相色譜（GC）和質(zhì)譜檢測器（MS）兩部分結(jié)合起來所組成的。該技術(shù)利用氣相色譜的分離能力讓混合物中的組分分離，并用質(zhì)譜鑒定分離出來的組分（定性分析）以及其精確的量（定量分析）。氣相和質(zhì)譜控制、數(shù)據(jù)的記錄、分析都由電腦完成。氣質(zhì)聯(lián)用具有非常高的靈敏度，并且分析范圍非常廣泛，例如農(nóng)藥、環(huán)保、藥物、興奮劑等方面的分析。而且GC-MS聯(lián)用是聯(lián)用技術(shù)中困難較少的一種。在氣相色譜和質(zhì)譜兩種技術(shù)之間，許多操作特性比較一致，即在氣相、靈敏度、掃描時間匹配、連續(xù)流動、溫度匹配等方面都較適應(yīng)。其最大的差異在于工作氣壓。陸兔林11，葉定江等采用氣相色譜-質(zhì)譜-計算機(jī)聯(lián)

11、用的方法,對三棱不同炮制品中揮發(fā)油進(jìn)行分析研究，根據(jù)氣相色譜-質(zhì)譜系統(tǒng)分析得到的各組分質(zhì)譜圖，用計算機(jī)檢索確定化合物名稱，并且采用質(zhì)譜離子峰面積歸一化法計算所測成分各自的相對含量。為三棱臨床用藥及制訂三棱飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了科學(xué)的理論依據(jù)。崔炳權(quán)12,郭曉玲也同樣采用GC-MS 結(jié)合計算機(jī)檢索的方法對細(xì)葉黑三棱的揮發(fā)油化學(xué)成分進(jìn)行了鑒定, 用色譜峰面積歸一化法確定各化學(xué)成分的相對含量。從揮發(fā)油中分離出11 個色譜峰, 鑒定出9 種化合物。揮發(fā)油主要成分為棕櫚酸、亞油酸、鄰苯二甲酸雙( 2- 甲氧基) 乙酯、鄰苯二甲酸雙( 2- 甲基) 丙酯。山東中醫(yī)學(xué)院的袁久榮13，姜店春從黑三棱的塊莖中提取揮

12、發(fā)油，然后將提取物用氣相色譜-質(zhì)譜-計算機(jī)聯(lián)用的方法經(jīng)過測試分析，從28個色譜峰中鑒定出13種化合物 因此可以看出GC-MS結(jié)合計算機(jī)的分析處理方法已經(jīng)被證明是可以廣泛運用于對三棱的提取物進(jìn)行分析的一種非常實用與重要的方法。5.揮發(fā)油及揮發(fā)性物質(zhì)提取物的制備方式。5.1揮發(fā)油揮發(fā)油也稱精油，是存在于植物體內(nèi)的一類具有揮發(fā)性，可隨水蒸汽蒸餾，與水不相混溶的油狀液體。揮發(fā)油在植物界分布極廣，作為中藥使用的植物就有數(shù)百種含有揮發(fā)油。長期以來，國內(nèi)外學(xué)者對中藥揮發(fā)油的提取與分離進(jìn)行了大量的研究探索，其提取與分離方法也在不斷的改進(jìn)和提高。5.2揮發(fā)油的提取方法以及處理方式。在揮發(fā)油的提取方法中，水蒸氣蒸

13、餾法法是最常用的方法。這個方法是將中藥適當(dāng)切碎后加水浸泡，然后可用共水蒸餾、隔水蒸餾或水蒸汽蒸餾。共水蒸餾加熱溫度一般為95左右，植物原料中的高沸點成分不易蒸出，藥材易焦糊，某些成分還會分解。王立斌等14采用水蒸氣蒸餾提取薄荷油的實驗表明，水蒸氣蒸餾是一種經(jīng)濟(jì)適用的有效提取中草藥中揮發(fā)油的重要方法，操作簡便安全，而且不污染環(huán)境。但是水蒸氣蒸餾法的缺點在于其過程易造成熱不穩(wěn)定及易氧化成分的破壞和揮發(fā)損失，對部分組分有破壞作用，因此在提取方式方面還有待加強(qiáng)與改進(jìn)。陸兔林等11在提取三棱揮發(fā)油時采用水蒸氣蒸餾法，并用乙醚萃取油層里的揮發(fā)油，最后用無水硫酸鈉吸水得供試品溶液進(jìn)行測定。還有一種方法是溶劑

14、法，采用相似相溶原理,含揮發(fā)性的藥材用低沸點且能很好溶解揮發(fā)油成分的有機(jī)溶劑如石油醚、苯、乙醚等,連續(xù)回流或冷浸提取。經(jīng)蒸餾除去溶劑，即可得到粗制揮發(fā)油。但此法得到的揮發(fā)油含雜質(zhì)較多故必須進(jìn)一步精制提純。袁久榮13，姜店春等則對揮發(fā)油采用了三種提取方式，第一種也是用水蒸氣蒸餾法，得到揮發(fā)油，第二種是用沙氏提取器，加入一定量的乙醚和黑三棱細(xì)粒，并用45.恒溫水浴鍋上回流24小時回收乙醚，殘余物加入蒸餾水100ml，再用水蒸氣蒸餾法蒸餾得揮發(fā)油，并用乙醚萃取，經(jīng)無水硫酸鈉脫水，得揮發(fā)油。還有CO2超臨界流體萃取法以及微波輔助提取法等新技術(shù)在運用于揮發(fā)性成分提取方面在近幾年也顯示出比較好的使用前景，

15、但是鑒于實驗成本較高，條件有限，故在課題展開過程中暫不考慮采用這類技術(shù)。由此可見，采用乙醚回流提取方式對于三棱提取物的制備和樣品的前處理有著至關(guān)重要的作用，并且為后面的GC-MS方法測定奠定堅實的基礎(chǔ)。綜上所述,三棱的化學(xué)成分復(fù)雜,藥理作用和臨床應(yīng)用廣泛?，F(xiàn)代化學(xué)和藥理研究已部分闡明了化學(xué)成分和臨床應(yīng)用之間的聯(lián)系。但是還有很多活性成分未被找到,如抗腫瘤等成分15。很多藥理研究也僅停留在提取物階段,因此對其化學(xué)成分和藥理作用進(jìn)行深入研究,進(jìn)一步闡明化學(xué)成分和臨床應(yīng)用間的聯(lián)系,對于指導(dǎo)臨床用藥和有關(guān)新藥開發(fā)的意義也可見一斑。因此這個課題選用十一種不同產(chǎn)地的三棱，對其揮發(fā)性成分進(jìn)行研究，也希望能為三

16、棱的更進(jìn)一步研究提供理論依據(jù)作出貢獻(xiàn)，以上文獻(xiàn)對于課題的展開具有重要的參考借鑒價值，為接下來的工作也打下了扎實的基礎(chǔ)。參考文獻(xiàn)：1 安士影,錢士輝,蔣建勤.三棱的化學(xué)成分研究J.中國野生植物資源,2009,28(4):57-592 陳可冀,歐興長.活血化淤藥化學(xué)藥理與臨床M.濟(jì)南:山東科學(xué)技術(shù)出版社, 1995: 262.3 邱魯嬰,毛春芹,陸兔林.三棱總黃酮鎮(zhèn)痛作用研究J.時珍國醫(yī)國藥,2000,11(4):291292.4 鄧英君.三棱不同提取物鎮(zhèn)痛及抗凝血作用研究J.時珍國醫(yī)國藥,1999,10(12):883883.5 于永紅,盂衛(wèi)星,張國安,等.茵陳、赤芍、三棱、淫羊藿對培養(yǎng)的兔動脈

17、平滑肌細(xì)胞增殖的抑制作用J.湖北民族學(xué)院學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),1999,16(2):13.6 曾慶杏,李承晏,余紹祖.復(fù)方三棱、莪術(shù)、黃芪注射液治療腦梗死模型時對腦電圖的影響J.卒中與神經(jīng)疾病,1999,6(3):158159.7 陳耀祖,等.藥物分析雜志,1989,8(6):2708 董學(xué),王國榮,姚慶強(qiáng).三棱的化學(xué)成分J.藥學(xué)學(xué)報,2008,43(1):63-669 張衛(wèi)東,王永紅,秦路平,等.中藥三棱中新的甾體皂甙J.第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報,1996,17(2):174176.10 張淑運.三棱化學(xué)成分的研究J.中國中藥雜志,1995,20(8):486487.11 陸兔林,陶學(xué)勤,邵霞琴,葉定江.

18、氣質(zhì)聯(lián)用法分析炮制對三棱揮發(fā)油的影響J.中成藥，1999，21(1):22-2312 崔炳權(quán),郭曉玲,林元藻.細(xì)葉黑三棱揮發(fā)油化學(xué)成分分析J.中國醫(yī)藥導(dǎo)報,2007.4,4(11):14-1513 袁久榮，姜店春. 黑三棱揮發(fā)油化學(xué)成分的研究J.山東中醫(yī)雜志，1998，8(6):28-2914 王立斌，馬永純，班偉.水蒸氣蒸餾法提取薄荷中揮發(fā)油J.通化師范學(xué)院學(xué)報，2005，26(6)：56-57.15 黃新煒,段玉峰,韓果萍,楊杰.中藥三棱的研究進(jìn)展J.中成藥，2003.7,25(7):576-578南京中醫(yī)藥大學(xué)畢業(yè)設(shè)計（論文）選題審批表學(xué)生姓名陳曉棟學(xué)號040007106專業(yè)/班級07中

19、藥資源與開發(fā)設(shè)計（論文）選題名稱氣質(zhì)聯(lián)用法分析三棱揮發(fā)性成分選題依據(jù)及準(zhǔn)備情況：三棱，是黑三棱科植物黑三棱(Sparganium Stoloniferum Buch.Ham) 、小黑三棱( Sparganium Simplex) 、細(xì)葉黑三棱( Sparganium Stenophyllum) 和莎草科的荊三棱( Scirpusflariatilis)的塊莖，味辛、苦，性平。歸肝、脾經(jīng)。具有行氣、破血、消積、止痛的作用。因具有多種藥理作用和臨床應(yīng)用,所以三棱一直是中國藥典所收載的藥物。三棱的化學(xué)成分復(fù)雜多樣，可研究價值與探索發(fā)掘的意義也非常重大。目前，國內(nèi)對三棱藥理研究，揮發(fā)油成分以及三棱的化

20、學(xué)成分已有較多研究與探討，而對于各個不同產(chǎn)地的三棱的揮發(fā)性成分的研究則并不多見。因此這個課題是采用氣質(zhì)聯(lián)用的分析方法（GS-MS）對十一個產(chǎn)地的三棱（1.江西 2.河南 3.江蘇南京 4.浙江永康 5.山東 6.河北 7.荊三棱 8.遼寧 9.浙江南部 10.新渥 11.湖北）的揮發(fā)性成分進(jìn)行初步分析，并為以后各方面對三棱的研究提供參考依據(jù)。此外三棱還有很多活性成分尚未被找到，很多藥理研究也僅停留在提取物階段,因此對其化學(xué)成分進(jìn)行深入研究,進(jìn)一步闡明化學(xué)成分和臨床應(yīng)用間的聯(lián)系,對于指導(dǎo)臨床用藥和有關(guān)新藥開發(fā)的意義也可見一斑，因此這個課題對于三棱的進(jìn)一步研究與利用有著重要的意義。經(jīng)過對文獻(xiàn)的查閱

21、以及老師的指導(dǎo)，目前實驗所需藥材，儀器設(shè)備均已準(zhǔn)備完畢，并且對三棱提取物的制備工作也已結(jié)束，準(zhǔn)備進(jìn)行揮發(fā)性成分的提取和下一步用GC-MS法進(jìn)行分析處理等各項步驟。指導(dǎo)教師意見： 指導(dǎo)教師簽字： 年 月 日教學(xué)院長意見： 簽字： 年 月 日1 安士影,錢士輝等.三棱的化學(xué)成分研究J.中國野生植物資源,2009,28(4):57-592 陳可冀,歐興長.活血化淤藥化學(xué)藥理與臨床M.濟(jì)南:山東科學(xué)技術(shù)出版社, 1995: 262.3 邱魯嬰,毛春芹,陸兔林.三棱總黃酮鎮(zhèn)痛作用研究J.時珍國醫(yī)國藥,2000,11(4):291292.4 鄧英君.三棱不同提取物鎮(zhèn)痛及抗凝血作用研究J.時珍國醫(yī)國藥,1999,10(12):883883.5 于永紅,盂衛(wèi)星,張國安,等.茵陳、赤芍、三棱、淫羊藿對培養(yǎng)的兔動脈平滑肌細(xì)胞增殖的抑制作用J.湖北民族學(xué)院學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),1999,16(2):13.6 曾慶杏,李承晏,余紹祖.復(fù)方三棱、莪術(shù)、黃芪注射液治療腦梗死