常用的生化反應ppt課件

1、 認識染色方法鑒別細菌的局限性認識染色方法鑒別細菌的局限性 掌握幾種常用生化反應的原理、方法和結果判斷掌握幾種常用生化反應的原理、方法和結果判斷 產(chǎn)氣腸桿菌產(chǎn)氣腸桿菌Enterobacter arogenes） 大腸埃希菌大腸埃希菌Escherichia coli） 普通變形桿菌普通變形桿菌Proteus vulgaris） 銅綠假單胞菌銅綠假單胞菌Pseudomonas aeruginosa） 細菌對各種糖的分解能力及代謝產(chǎn)物不細菌對各種糖的分解能力及代謝產(chǎn)物不同，可借以鑒別細菌。一般非致病菌能發(fā)同，可借以鑒別細菌。一般非致病菌能發(fā)酵多種單糖，如大腸埃希菌能分解葡萄糖酵多種單糖，如大腸埃希菌

2、能分解葡萄糖和乳糖，產(chǎn)生甲酸等產(chǎn)物，并有甲酸脫氫和乳糖，產(chǎn)生甲酸等產(chǎn)物，并有甲酸脫氫酶，可將其分解為酶，可將其分解為CO2和和H2，故生化反應，故生化反應結果為產(chǎn)酸產(chǎn)氣，以結果為產(chǎn)酸產(chǎn)氣，以“ ”表示。傷寒沙表示。傷寒沙門菌分解葡萄糖產(chǎn)酸，但無甲酸脫氫酶，門菌分解葡萄糖產(chǎn)酸，但無甲酸脫氫酶，故生化結果為產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，以故生化結果為產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，以“+”表示。表示。傷寒沙門菌不能分解乳糖，以傷寒沙門菌不能分解乳糖，以“-”表示。表示。 將實驗菌種接種到將實驗菌種接種到2支支O-F管中管中 在其中在其中1支管中加入無菌液體石蠟，厚度支管中加入無菌液體石蠟，厚度0.5cm左右。左右。 35培養(yǎng)培養(yǎng)18-

3、24小時。小時。 結果結果 開口管開口管 加石蠟管加石蠟管 結果結果 黃色黃色 黃色黃色 發(fā)酵型發(fā)酵型F） 黃色黃色 綠色綠色 氧化型氧化型O） 綠色綠色 藍色藍色 產(chǎn)堿型產(chǎn)堿型產(chǎn)氣腸桿菌能使丙酮酸脫羧生成中產(chǎn)氣腸桿菌能使丙酮酸脫羧生成中性的乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇被性的乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇被氧化在堿性溶液中生成二乙酰，氧化在堿性溶液中生成二乙酰，后者可與含胍基的化合物反應生成紅后者可與含胍基的化合物反應生成紅色化合物，稱色化合物，稱VP試驗陽性。大腸埃試驗陽性。大腸埃希菌不能生成乙酰甲基甲醇，希菌不能生成乙酰甲基甲醇，VP陰陰性。性。VP甲液：甲液：5%萘酚萘酚VP乙液：乙液：40%

4、KOH產(chǎn)氣腸桿菌使丙酮酸脫羧后形成中性產(chǎn)物，培養(yǎng)液pH5.4，甲基紅指示劑呈桔黃色，為甲基紅試驗陰性，大腸埃希菌分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，培養(yǎng)液呈酸性pH5.4，指示劑甲基紅呈紅色，稱甲基紅試驗陽性。 能利用枸櫞酸鹽作為唯一碳源的細能利用枸櫞酸鹽作為唯一碳源的細菌如產(chǎn)氣腸桿菌，分解枸櫞酸鹽生成菌如產(chǎn)氣腸桿菌，分解枸櫞酸鹽生成碳酸鹽，同時分解培養(yǎng)基的銨鹽生成碳酸鹽，同時分解培養(yǎng)基的銨鹽生成氨，由此使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性，使指示氨，由此使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性，使指示劑溴麝香草酚藍劑溴麝香草酚藍BTB由淡綠轉為由淡綠轉為深藍，此為枸櫞酸鹽利用試驗陽性。深藍，此為枸櫞酸鹽利用試驗陽性。 含有色氨酸酶的細菌如大腸埃希菌

5、、變形桿菌等可分解色氨酸生成吲哚靛基質），若加入對二甲基氨基苯甲醛，與吲哚結合形成玫瑰吲哚，呈紅色，稱吲哚試驗陽性。 變形桿菌、乙型副傷寒沙門菌等能分解含硫氨基酸如胱氨酸、甲硫氨酸等，生成硫化氫。在有醋酸鉛或硫酸亞鐵存在時，則生成黑色硫化鉛或硫化亞鐵，可借以鑒別細菌。 變形桿菌具有尿素酶，可分解尿素產(chǎn)變形桿菌具有尿素酶，可分解尿素產(chǎn)生氨，培養(yǎng)基呈堿性，以酚紅為指示劑檢生氨，培養(yǎng)基呈堿性，以酚紅為指示劑檢測呈紅色。測呈紅色。 吲哚吲哚I）、甲基紅）、甲基紅M）、）、VPV）、）、枸櫞酸鹽利用枸櫞酸鹽利用C四種試驗，常用于四種試驗，常用于鑒定腸道桿菌，合稱之為鑒定腸道桿菌，合稱之為IMViC試驗。

6、試驗。大腸埃希菌呈大腸埃希菌呈“+-”，產(chǎn)氣腸桿菌，產(chǎn)氣腸桿菌為為“-+”。 原理：硝酸鹽還原反應包括兩個過程：一是在合成過程中，原理：硝酸鹽還原反應包括兩個過程：一是在合成過程中，硝酸鹽還原為亞硝酸鹽和氨，再由氨轉化為氨基酸和細胞硝酸鹽還原為亞硝酸鹽和氨，再由氨轉化為氨基酸和細胞內其他含氮化合物；二是在分解代謝過程中，硝酸鹽或亞內其他含氮化合物；二是在分解代謝過程中，硝酸鹽或亞硝酸鹽代替氧作為呼吸酶系統(tǒng)中的終末受氫體。能使硝酸硝酸鹽代替氧作為呼吸酶系統(tǒng)中的終末受氫體。能使硝酸鹽還原的細菌從硝酸鹽中獲得氧而形成亞硝酸鹽和其他還鹽還原的細菌從硝酸鹽中獲得氧而形成亞硝酸鹽和其他還原性產(chǎn)物。原性產(chǎn)物

7、。 硝酸鹽還原的過程因細菌不同而異硝酸鹽還原的過程因細菌不同而異: 有的細菌僅使硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，如大腸埃有的細菌僅使硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，如大腸埃希菌；希菌； 有的細菌則可使其還原為亞硝酸鹽和離子態(tài)的銨；有的細菌則可使其還原為亞硝酸鹽和離子態(tài)的銨； 有的細菌能使硝酸鹽或亞硝酸鹽還原為氮，如假有的細菌能使硝酸鹽或亞硝酸鹽還原為氮，如假單胞菌等。單胞菌等。 硝酸鹽還原試驗系測定還原過程中所產(chǎn)生的亞硝硝酸鹽還原試驗系測定還原過程中所產(chǎn)生的亞硝酸。酸。 試劑：甲液試劑：甲液 對氨基苯磺酸對氨基苯磺酸 乙液乙液 - -奈胺奈胺 結果：出現(xiàn)紅色為陽性。結果：出現(xiàn)紅色為陽性。 若加入試劑后無顏色反應，

8、可能是：硝酸鹽沒有被還原，若加入試劑后無顏色反應，可能是：硝酸鹽沒有被還原，試驗陰性；硝酸鹽被還原為氨和氮等其他產(chǎn)物而導致假試驗陰性；硝酸鹽被還原為氨和氮等其他產(chǎn)物而導致假陰性結果，這時應在試管內加入少許鋅粉，如出現(xiàn)紅色則陰性結果，這時應在試管內加入少許鋅粉，如出現(xiàn)紅色則表明試驗確實為陰性。若仍不產(chǎn)生紅色，表示試驗為假陰表明試驗確實為陰性。若仍不產(chǎn)生紅色，表示試驗為假陰性。性。 若要檢查是否有氮氣產(chǎn)生，可在培養(yǎng)基管內加一小倒管，若要檢查是否有氮氣產(chǎn)生，可在培養(yǎng)基管內加一小倒管，如有氣泡產(chǎn)生，表示有氮氣生成。如有氣泡產(chǎn)生，表示有氮氣生成。 原理：具有過氧化氫酶的細菌，能催化過氧化氫生成水和原理：

9、具有過氧化氫酶的細菌，能催化過氧化氫生成水和新生態(tài)氧，繼而形成分子氧出現(xiàn)氣泡。新生態(tài)氧，繼而形成分子氧出現(xiàn)氣泡。 試劑：試劑：3 3過氧化氫溶液。過氧化氫溶液。 方法：取待測菌涂在玻片上，然后加方法：取待測菌涂在玻片上，然后加3 3過氧化氫數(shù)滴立過氧化氫數(shù)滴立即觀察結果。即觀察結果。 結果：有大量氣泡產(chǎn)生者為陽性。不產(chǎn)生氣泡者為陰性。結果：有大量氣泡產(chǎn)生者為陽性。不產(chǎn)生氣泡者為陰性。 原理：氧化酶細胞色素氧化酶是細胞色素呼吸酶系統(tǒng)的原理：氧化酶細胞色素氧化酶是細胞色素呼吸酶系統(tǒng)的最終呼吸酶。具有氧化酶的細菌，首先使細胞色素最終呼吸酶。具有氧化酶的細菌，首先使細胞色素C C氧化，氧化，再由氧化型

10、細胞色素再由氧化型細胞色素C C使對苯二胺氧化，生成有色的醌類化使對苯二胺氧化，生成有色的醌類化合物。合物。 試劑：試劑：1 1鹽酸四甲基對苯二胺或鹽酸四甲基對苯二胺或1 1鹽酸二甲基對苯二胺。鹽酸二甲基對苯二胺。 方法：取潔凈濾紙一小塊，沾取菌少許，然后加試劑。方法：取潔凈濾紙一小塊，沾取菌少許，然后加試劑。 結果：細菌在與試劑接觸結果：細菌在與試劑接觸1010秒內呈深紫色，為陽性。秒內呈深紫色，為陽性。 葡萄糖葡萄糖 乳糖乳糖1 10 鐵：枸櫞酸鐵銨鐵：枸櫞酸鐵銨 指示劑：酚紅指示劑：酚紅 我們人為的把高層代表葡萄糖，斜面代表乳糖。我們人為的把高層代表葡萄糖，斜面代表乳糖。以葡萄糖，乳糖為

11、例葡萄糖是最早利用的單糖，發(fā)酵葡萄糖的中間產(chǎn)物丙酮酸為酸性，酚紅指示劑為黃色。1、斜面生長的菌量多，面積大，跟氧分子接觸的面積也大氧化丙酮酸 CO2H2O中性，PH不變2、斜面蛋白質被細菌利用，氨基酸被利用產(chǎn)生NH3，堿性，酚紅指示劑為紅色。 高層中丙酮酸濃度高，跟氧分子接觸少，在高層中丙酮酸濃度高，跟氧分子接觸少，在2424小時內小時內不會被氧化，因此仍為黃色。不會被氧化，因此仍為黃色。 高層黃色斜面紅色高層黃色斜面紅色 如葡萄糖，乳糖，則高層與斜面均為黃色如葡萄糖，乳糖，則高層與斜面均為黃色2424小時小時內）。內）。 如果延長培養(yǎng)時間，高層中的丙酮酸也會進一步氧化，同如果延長培養(yǎng)時間，高

12、層中的丙酮酸也會進一步氧化，同時細菌利用蛋白質后產(chǎn)堿性物質越來越多，則高層也會變時細菌利用蛋白質后產(chǎn)堿性物質越來越多，則高層也會變?yōu)榧t色。為紅色。 有些細菌能分解含硫氨基酸如胱氨酸、甲硫氨酸等，有些細菌能分解含硫氨基酸如胱氨酸、甲硫氨酸等，生成硫化氫生成硫化氫H2SH2SFeFe 黑色的硫化亞鐵黑色的硫化亞鐵 問：有無葡萄糖，乳糖的情況？為什么？問：有無葡萄糖，乳糖的情況？為什么？ 半固體半固體 M M代表動力代表動力 I I代表吲哚靛基質）代表吲哚靛基質） U U代表尿素代表尿素 結果觀察時先觀察有無動力，試驗管有無變紅三分之二結果觀察時先觀察有無動力，試驗管有無變紅三分之二管變紅為尿素陽性），然后加入對二甲基氨基苯甲醛，觀管變紅為尿素陽性），然后加入對二甲基氨基苯甲醛，觀察吲哚試驗結果。察吲哚試驗結果。 思考題：思考題： KIA的試驗原理的試驗原理 1 1、用革蘭染色法觀察四種試驗細菌的形態(tài)學特征、用革蘭染色法觀察四種試驗細菌的形態(tài)學特征 2 2、將四種試驗細菌接種各種生化反應管：、將四種試驗細菌接種各種