細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)：10 植物染色體分帶技術(shù)

1、實(shí)驗(yàn)十實(shí)驗(yàn)十 植物染色體分帶植物染色體分帶技術(shù)技術(shù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握植物染色體分帶的原理與方法掌握植物染色體分帶的原理與方法染色體標(biāo)本制作技術(shù)染色體標(biāo)本制作技術(shù) 1952年，美籍華人徐道覺，從助手的工作失年，美籍華人徐道覺，從助手的工作失誤中發(fā)現(xiàn)低滲處理分裂的細(xì)胞，可使染色體展誤中發(fā)現(xiàn)低滲處理分裂的細(xì)胞，可使染色體展開開 1956年，年，Tjio發(fā)現(xiàn)秋水仙素處理，可使分裂細(xì)發(fā)現(xiàn)秋水仙素處理，可使分裂細(xì)胞停滯在中期；胞停滯在中期； 借助特殊的處理程序，染色體的一定部位借助特殊的處理程序，染色體的一定部位顯示出深淺不同的染色體帶紋。顯示出深淺不同的染色體帶紋。 帶紋具有物種及不同染色體的特異性

2、，每帶紋具有物種及不同染色體的特異性，每條染色體的帶的數(shù)目、部位、寬窄及濃淡條染色體的帶的數(shù)目、部位、寬窄及濃淡都具有相對(duì)的穩(wěn)定性。都具有相對(duì)的穩(wěn)定性。實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 顯帶過(guò)程，是特殊的染料和染色體上的結(jié)構(gòu)發(fā)顯帶過(guò)程，是特殊的染料和染色體上的結(jié)構(gòu)發(fā)生特異反應(yīng)而產(chǎn)生，因所用染料與處理?xiàng)l件的生特異反應(yīng)而產(chǎn)生，因所用染料與處理?xiàng)l件的不同而產(chǎn)生不同的帶型。不同而產(chǎn)生不同的帶型。 C帶帶 N帶帶 G帶帶 C帶帶 高度重復(fù)序列的高度重復(fù)序列的DNA(異染色質(zhì)異染色質(zhì))經(jīng)酸堿變性和復(fù)性處理經(jīng)酸堿變性和復(fù)性處理后，易于復(fù)性；低重復(fù)序列和單一序列后，易于復(fù)性；低重復(fù)序列和單一序列DNA(常染色

3、質(zhì)常染色質(zhì))不復(fù)性。不復(fù)性。 經(jīng)經(jīng)Giemsa染色后呈現(xiàn)深淺不同的染色反應(yīng)。這種差異染色后呈現(xiàn)深淺不同的染色反應(yīng)。這種差異反應(yīng)染色體結(jié)構(gòu)的差異。反應(yīng)染色體結(jié)構(gòu)的差異。 主要顯示著絲粒、端粒、核仁組織區(qū)或染色體臂上的主要顯示著絲粒、端粒、核仁組織區(qū)或染色體臂上的結(jié)構(gòu)異染色質(zhì)結(jié)構(gòu)異染色質(zhì)實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 N帶帶 使染色體核仁組織區(qū)特異著色使染色體核仁組織區(qū)特異著色 G帶帶 染色體上的染色體上的DNA結(jié)合疏松的組蛋白易被胰蛋白結(jié)合疏松的組蛋白易被胰蛋白酶水解，染色后該區(qū)域?yàn)闇\帶，結(jié)合牢固的為酶水解，染色后該區(qū)域?yàn)闇\帶，結(jié)合牢固的為深帶；深帶； 染色體本身具有帶的結(jié)構(gòu)，如相差顯微鏡觀察染色體本身具有帶

4、的結(jié)構(gòu)，如相差顯微鏡觀察未染色的染色體時(shí)，直接就能觀察到帶未染色的染色體時(shí)，直接就能觀察到帶 機(jī)理未清機(jī)理未清實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟Giemsa C帶技術(shù)帶技術(shù) 飽和飽和Ba(OH)2溶液處理溶液處理5-10 min（20-25 oC)； 蒸餾水徹底沖洗，以清除蒸餾水徹底沖洗，以清除Ba(OH)2 ； 2 SSC鹽溶液鹽溶液60-65 oC保濕保濕2 h； 蒸餾水水洗蒸餾水水洗5 min，空氣干燥；，空氣干燥； pH 6.8磷酸緩沖液與磷酸緩沖液與Giemsa原液按原液按20:1混合，混合，染色染色30 min，自來(lái)水沖洗，空氣干燥；，自來(lái)水沖洗，空氣干燥； 鏡檢，繪圖；鏡檢，繪圖；

5、實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟Giemsa N帶技術(shù)帶技術(shù) 將染色體標(biāo)本，用將染色體標(biāo)本，用1 mol/L NaH2PO4溶液溶液(941) oC處理處理6-15 min； 50 oC蒸餾水沖洗蒸餾水沖洗3次；次； 空氣干燥；空氣干燥； pH 6.8磷酸緩沖液與磷酸緩沖液與Giemsa原液按原液按20:1混合，染色混合，染色30-60 min。 NaH2PO4處理時(shí)間長(zhǎng)，則染色時(shí)間也延長(zhǎng)；處理時(shí)間長(zhǎng)，則染色時(shí)間也延長(zhǎng)； 自來(lái)水沖洗，空氣干燥；自來(lái)水沖洗，空氣干燥； 鏡檢，繪圖；鏡檢，繪圖；實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟Giemsa G帶技術(shù)帶技術(shù) 尿素法尿素法 染色體標(biāo)本，用染色體標(biāo)本，用8M 尿素（尿素（2份份8M 尿素和尿素和1份份pH 6.8磷酸緩沖溶液混合磷酸緩沖溶液混合)處理處理5 min； 30:1 Giemsa染色染色5 8 min； 自來(lái)水沖洗，空氣干燥；自來(lái)水沖洗，空氣干燥； 鏡檢，繪圖；鏡檢，繪圖；實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟帶型分析帶型分析 按核型分析方法將染色體編號(hào)進(jìn)行帶型分析，按核型分析方法將染色體編號(hào)進(jìn)行帶型分析，要求詳細(xì)記錄各染色體上各帶紋的位置、寬窄、要求詳細(xì)記錄各染色體上各帶紋的位置、寬窄、著色深淺和形狀。著色深淺和形狀。 繪制染色體模式圖，在各條染色體模式圖上標(biāo)繪制染色體模式圖，在各條染色體模式圖上標(biāo)出各條帶紋的位置、寬窄、深淺、形狀