人類免疫缺陷病毒檢測試劑臨床研究注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則

1、附件3人類免疫缺陷病毒檢測試劑臨床研究注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則一、前言人類免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus，HIV）檢測試劑是指利用免疫學(xué)及分子生物學(xué)等方法原理對人血清、血漿或其他體液中的特定的HIV生物學(xué)標(biāo)記物，包括HIV 1型（HIV-1 ）p24抗原、HIV抗體、HIV核酸、HIV基因耐藥突變等進(jìn)行定量或定性分析的試劑。據(jù)體外診斷試劑注冊管理辦法（試行）（國食藥監(jiān)械2007229號）的分類原則，該類產(chǎn)品作為第三類體外診斷試劑（In Vitro Diagnostic,IVD）管理，屬高風(fēng)險管理產(chǎn)品。本指導(dǎo)原則制定的主要目的是讓申請人明確在注冊申報過程中對本

2、類試劑在臨床研究方面重點關(guān)注內(nèi)容，同時規(guī)范注冊申請人對于注冊申報資料中有關(guān)臨床研究資料的要求。本指導(dǎo)原則是對HIV檢測試劑臨床研究的一般性要求，申請人應(yīng)依據(jù)具體產(chǎn)品的特性對臨床研究資料的內(nèi)容進(jìn)行充實和細(xì)化。申請人還應(yīng)依據(jù)具體產(chǎn)品的特性確定其中的具體內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述其理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)。本指導(dǎo)原則只是針對HIV檢測試劑的特點，強(qiáng)調(diào)需重點考慮的問題，臨床試驗的基本要求應(yīng)符合體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則（國食藥監(jiān)械2007240號）的規(guī)定，包括臨床試驗協(xié)議、方案、報告的撰寫等。本指導(dǎo)原則不包括行政審批要求，不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行。本指導(dǎo)原則是申請人和技術(shù)審評人員的指導(dǎo)文件，如果有

3、能夠滿足適合的法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善、科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將進(jìn)行適時的調(diào)整。二、適用范圍HIV生物學(xué)標(biāo)記物是指機(jī)體在感染HIV后，在不同的感染階段出現(xiàn)的生物學(xué)標(biāo)記物，包括：HIV抗體、HIV-1p24抗原、HIV核酸、HIV基因耐藥突變等。就方法學(xué)而言，本指導(dǎo)原則主要適用于利用免疫印跡法、化學(xué)發(fā)光法、時間分辨免疫熒光法和微粒子酶聯(lián)免疫法、膠體金法等免疫學(xué)方法對HIV抗原和/或抗體進(jìn)行定量或定性檢測的體外診斷試

4、劑，以及應(yīng)用核酸檢測的方法（如實時熒光聚合酶鏈反應(yīng)等）對HIV 核酸（核糖核酸/脫氧核糖核酸）以及基因耐藥突變等進(jìn)行檢測和分析的體外診斷試劑，適用于首次注冊產(chǎn)品及申請許可事項變更的產(chǎn)品。本指導(dǎo)原則不適用于國家法定血源篩查用HIV檢測試劑。三、基本要求（一）臨床試驗方案及方案中應(yīng)關(guān)注的問題臨床試驗實施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計科學(xué)合理的臨床研究方案。各臨床研究機(jī)構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)基本一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預(yù)定的方案實施，不可隨意改動。整個試驗過程應(yīng)在臨床研究機(jī)構(gòu)的實驗室內(nèi)并由本實驗室的技術(shù)人員操作完成，申報單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外

5、，不得隨意干涉實驗進(jìn)程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。各臨床研究單位選用的對比試劑（包括與試劑配套的相應(yīng)儀器）應(yīng)完全一致，以便進(jìn)行合理的統(tǒng)計學(xué)分析。試驗方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。臨床試驗中所涉及的樣本類型應(yīng)與產(chǎn)品說明書一致，且每種樣本類型例數(shù)的選擇應(yīng)符合基本的統(tǒng)計學(xué)要求。1.臨床研究單位的選擇建議在選擇臨床單位時，綜合不同地區(qū)人種、流行病學(xué)背景、HIV的特性等因素選擇研究單位,臨床研究單位的實驗操作人員應(yīng)熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（儀器、試劑、質(zhì)控及操作程序等），熟悉臨床研究方案。在整個實驗中，擬申報產(chǎn)品（以下稱考核試劑）、對比試劑、

6、確認(rèn)試驗方法都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，同時按照試劑說明書的要求，定期對試驗所涉及的儀器進(jìn)行校準(zhǔn)，以最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。建議在不同的臨床單位使用同一批號考核試劑進(jìn)行臨床試驗，以便對數(shù)據(jù)進(jìn)行科學(xué)客觀的統(tǒng)計分析。2.新HIV檢測試劑的臨床研究新HIV檢測試劑（針對新標(biāo)志物的檢測試劑）主要包括兩類：定量檢測試劑和定性檢測試劑。對于這些無對比試劑可選擇的新HIV檢測試劑而言，其臨床研究應(yīng)選擇經(jīng)金標(biāo)準(zhǔn)方法確診的HIV感染人群和部分未感染HIV的正常人群，并與已有的相關(guān)標(biāo)記物和臨床進(jìn)展及轉(zhuǎn)歸進(jìn)行比較研究，驗證考核試劑的敏感性和特異性。對于定量檢測試劑同時還應(yīng)對其量值與臨床進(jìn)展?fàn)顩r、轉(zhuǎn)歸、

7、治療情況等的相關(guān)性進(jìn)行分析。3.已有同類產(chǎn)品上市的臨床研究選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市、臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為對比試劑，使考核試劑與之進(jìn)行對比試驗研究，證明本品與已上市產(chǎn)品等效或優(yōu)于已上市產(chǎn)品。在臨床研究中，與已有同類產(chǎn)品進(jìn)行比對時，往往會出現(xiàn)不一致的檢測結(jié)果。對于這些檢測結(jié)果不一致的樣本，應(yīng)采用金標(biāo)準(zhǔn)或其他方法再次進(jìn)行確認(rèn)或提供臨床診斷資料以進(jìn)一步明確樣本（采集樣本時受試者）所處的感染狀態(tài)，從而對考核試劑的性能進(jìn)行客觀科學(xué)的評價。對于定量檢測試劑，同時還應(yīng)該分析檢測量值的線性相關(guān)性、定量檢測結(jié)果與對比試劑檢測結(jié)果的一致性等。4.臨床研究對象選擇（1）總體要求根據(jù)體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)

8、原則（國食藥監(jiān)械2007240號）的要求， HIV檢測試劑，一般包括抗原和/或抗體（檢測）類試劑、核酸擴(kuò)增（檢測）類試劑，二者對于臨床研究的病例數(shù)并不相同。對于臨床試驗而言，抗原和/或抗體（檢測）類試劑需要至少1000例，核酸擴(kuò)增（檢測）類試劑至少500例。（2）基因型方面的考慮HIV病毒為逆轉(zhuǎn)錄病毒，其基因具有顯著的多樣性，不同的地區(qū)和民族， HIV流行的基因型不同。境內(nèi)流行的HIV主要為M組HIV-1（目前境內(nèi)尚未見N組和O組HIV-1的報道，HIV-2感染病例的報道極少），其基因型主要為B/B、BC重組型（包括CRF 07_BC重組型和CRF 08_BC重組型）以及AE重組型（CRF 0

9、1_AE重組型）。而且， HIV-1基因型具有一定的地域差異，不同地區(qū)流行的HIV基因型也不盡相同。因此，在選擇HIV感染者病例時，首先應(yīng)根據(jù)HIV流行的情況，選擇能代表我國不同地區(qū)流行基因型的HIV-1感染者病例，以對試劑檢測我國流行的HIV-1病毒的能力進(jìn)行客觀科學(xué)的評價，選擇的基因型應(yīng)至少包括上述三種主要的基因型。對于HIV-1感染者的病例數(shù)， HIV-1感染者病例數(shù)應(yīng)具有統(tǒng)計學(xué)意義。表1 不同HIV檢測試劑對于臨床樣本選擇的一些基本考慮方法例數(shù)陽性樣本干擾第三代發(fā)光類試劑至少1000HIV-1 400例對于我國流行的主要基因型（至少3種）每種不少于10例。經(jīng)過全面驗證的陽轉(zhuǎn)血清至少5套

10、。類風(fēng)濕因子（RF+）,HIV相關(guān)病毒，孕婦樣本等。第四代發(fā)光類試劑至少1000HIV-1 400例對于我國流行的主要基因型（至少3種）每種不少于10例。經(jīng)過全面驗證的陽轉(zhuǎn)血清盤至少10套。至少10份單獨抗原陽性樣本。類風(fēng)濕因子（RF+）, HIV相關(guān)病毒，孕婦樣本等。核酸檢測(NAT)（定量）至少500HIV-1 450例對于我國流行的主要基因型（至少3種）每種不少于30例，應(yīng)具有統(tǒng)計學(xué)意義?？共《局委熕幬铩IV相關(guān)病毒。核酸檢測(NAT)（定性）至少500HIV-1 300例對于我國流行的主要基因型（至少3種）每種不少于30例，應(yīng)具有統(tǒng)計學(xué)意義。抗病毒治療藥物、HIV相關(guān)病毒。免疫印記

11、（WB）至少1000HIV抗體初篩陽性600例，其中確診病例不少于80%。對于我國流行的主要基因型（至少3種）每種不少于10例。類風(fēng)濕因子（RF+）, 相關(guān)病毒。膠體金類至少1000HIV-1 400例對于我國流行的主要基因型（至少3種）每種不少于10例。類風(fēng)濕因子（RF+）, 相關(guān)病毒，孕婦樣本等。基因耐藥突變至少500HIV-1 450例對于我國流行的主要基因型（至少3種）每種不少于30例，應(yīng)具有統(tǒng)計學(xué)意義。蛋白酶基因區(qū)存在典型的耐藥突變的樣本至少100例。逆轉(zhuǎn)錄酶基因區(qū)存在典型的耐藥突變的樣本至少300例?？共《局委熕幬铩⑾嚓P(guān)病毒。注：陽轉(zhuǎn)血清盤檢測結(jié)果的評價，應(yīng)參考國內(nèi)、國際的相關(guān)規(guī)定

12、或文獻(xiàn)進(jìn)行評價。對于HIV-1 O組、HIV-2感染病例，也應(yīng)進(jìn)行適當(dāng)驗證，樣本應(yīng)經(jīng)過科學(xué)的驗證和確認(rèn)，考慮到此類樣本的不易獲得性，樣本可來源于HIV感染者，也可來源于經(jīng)過科學(xué)驗證的血清盤。（3）不同感染階段的考慮 HIV感染機(jī)體后，在不同的時期機(jī)體的免疫反應(yīng)不同，其代表的生物學(xué)標(biāo)記物、標(biāo)記物的濃度也不同，樣本選擇時，對于樣本滴度應(yīng)含有一定數(shù)量的低滴度/弱陽性樣本。（4）臨床樣本量的考慮臨床研究應(yīng)選擇部分正常健康人群樣本和干擾樣本（交叉反應(yīng)樣本），比較正常組、干擾組和感染組結(jié)果，以便對申報產(chǎn)品的臨床性能做出科學(xué)的分析。建議對抗原和抗體類試劑，其健康人群例數(shù)的選擇以不超過500例為宜，陽性樣本數(shù)

13、應(yīng)符合表1要求，其余為干擾樣本。對核酸檢測類試劑（定性），其健康人群例數(shù)的選擇以不超過150例為宜，陽性樣本數(shù)應(yīng)符合表1要求，其余為干擾樣本。對核酸檢測類試劑（定量），其健康人群例數(shù)的選擇以不超過30例為宜，陽性樣本數(shù)應(yīng)符合表1要求，其余為干擾樣本。對于新型試劑或臨床意義有待進(jìn)一步明確的試劑，可適當(dāng)增加正常樣本數(shù)?？傮w而言，本類試劑臨床試驗的樣本例數(shù)，無論是正常組、干擾組和HIV感染組，每一組受試者的最小入選人數(shù)須滿足統(tǒng)計學(xué)分析的基本要求。檢測的樣本量在每一個臨床研究單位應(yīng)盡可能均勻分布，包括正常組、干擾組和HIV感染組。（5）干擾（交叉反應(yīng)）樣本的考慮考慮到我國HIV感染的特殊情況以及HIV

14、的傳播特點，建議在臨床研究中選擇臨床病例時，應(yīng)選擇部分HIV相關(guān)病毒（如乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒）感染的病例，以評價考核試劑的特異性。（樣本種類見表2）表2 用于干擾（交叉反應(yīng)）研究的樣本/型人類嗜T細(xì)胞病毒（HTLV-/）巨細(xì)胞病毒（CMV）甲型流感病毒EB病毒（EBV）甲型肝炎病毒（HAV）系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）乙型肝炎病毒（HBV）類風(fēng)濕因子（RF）丙型肝炎病毒（HCV）抗核抗體（ANA）以上特異性樣本可根據(jù)產(chǎn)品特性進(jìn)行適當(dāng)選擇。5.體液樣本的考慮對于口腔粘膜滲出液、尿液等體液樣本，無論考核試劑采用何種檢驗方法，均應(yīng)采用來自同一患者的血液樣本進(jìn)行同源對比試驗，應(yīng)含有一定數(shù)量的低滴度/

15、弱陽性樣本（不少于20例）。檢測血液樣本用對比試劑的檢測性能應(yīng)盡量高于考核試劑，對于對比試驗研究中測定結(jié)果不符的樣本應(yīng)采用金標(biāo)準(zhǔn)方法對血液樣本進(jìn)行確認(rèn)試驗。6.凍存與新鮮樣本的考慮陽性凍存樣本例數(shù)應(yīng)小于陽性樣本總例數(shù)的90，陽性新鮮樣本例數(shù)應(yīng)大于陽性樣本總例數(shù)的10。7.抗體確認(rèn)試劑的考慮樣本的選擇：見表1初篩呈陽性。對比試劑的選擇：應(yīng)選擇確認(rèn)試劑進(jìn)行比對試驗。不一致和不確定樣本的確認(rèn)：應(yīng)進(jìn)行患者隨訪檢測（4周后）或采用其他方法進(jìn)行驗證。8.統(tǒng)計學(xué)分析對臨床試驗結(jié)果的統(tǒng)計應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計方法。對于定性試劑，應(yīng)分析考核試劑的陽性符合率、陰性符合率、總體符合率及其95%（或99%）的置信區(qū)間、考核

16、試劑和對比試劑的一致性（如kappa值）。如利用陽轉(zhuǎn)血清盤對試劑檢測早期感染的能力進(jìn)行評價，可參考世界衛(wèi)生組織（WHO）對HIV抗體試劑（和/或HIV抗原抗體試劑）的評價報告，分析考核試劑的陽轉(zhuǎn)血清相對敏感性系數(shù)，或采用其他適宜的方法進(jìn)行分析評價，并提供詳細(xì)的評價方案、評價方案的依據(jù)、統(tǒng)計方法等具體信息。對定量試劑，應(yīng)分析考核試劑陽性符合率、陰性符合率、總體符合率及其95%（或99%）的置信區(qū)間、考核試劑和對比試劑的一致性（如kappa值）等之外，還應(yīng)該分析考核試劑與對比試劑的相關(guān)性、線性回歸、定量準(zhǔn)確性及一致性（如Bland-Altman 模型），同時按基因型（核酸檢測試劑）對樣本進(jìn)行分組分

17、析考核試劑與對比試劑的相關(guān)性、線性回歸、定量準(zhǔn)確性及一致性（如Bland-Altman 模型）等。對于對比實驗的等效性研究，可采用考核試劑和對比試劑兩組檢測結(jié)果的相關(guān)及線性回歸分析，應(yīng)重點觀察相關(guān)系數(shù)（r值）、回歸方程斜率及y軸截距等指標(biāo)。對于統(tǒng)計方法的選擇可以考慮多種方法，而不用過于強(qiáng)調(diào)一種方法。在臨床研究方案中應(yīng)明確統(tǒng)計檢驗假設(shè)，即評價考核試劑與對比試劑是否等效的標(biāo)準(zhǔn)。 9.結(jié)果差異樣本的驗證在數(shù)據(jù)收集過程中，對于兩種試劑的檢測結(jié)果有明顯差異的樣本，應(yīng)采用金標(biāo)準(zhǔn)或其他方法再次進(jìn)行確認(rèn)（如HIV-1 p24抗原、HIV-1核糖核酸檢測試劑、蛋白質(zhì)印記試劑等），對患者所處的HIV-1感染狀態(tài)進(jìn)

18、行鑒別，同時結(jié)合患者的臨床表征對差異原因及可能結(jié)果進(jìn)行分析，必要時應(yīng)按照全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范(2009)的要求進(jìn)行隨訪。（二）臨床試驗（總結(jié)）報告撰寫根據(jù)體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則（國食藥監(jiān)械2007240號）的要求，臨床試驗報告應(yīng)該對試驗的整體設(shè)計及各個關(guān)鍵點給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對整個臨床試驗實施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法。建議在臨床試驗總結(jié)報告中對以下內(nèi)容進(jìn)行詳述。1.臨床試驗總體設(shè)計及方案描述（1）臨床試驗的整體管理情況、臨床研究單位的選擇、對比試劑及所用儀器基本情況介紹。（2）病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)、不同病種的預(yù)期選擇例數(shù)。（3）樣本類型，樣本的收集、處理及保存等。（4）統(tǒng)計學(xué)方法、統(tǒng)計軟件、評價統(tǒng)計結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)。2.具體的臨床試驗情況（1）對各研究單位的病例數(shù)、病種分布情況進(jìn)行總合，以列表或圖示方式給出具體例數(shù)及百分比。（2）質(zhì)量控制：如試驗人員培訓(xùn)、儀器日常維護(hù)、儀器校準(zhǔn)、質(zhì)控品運行情況等。（3）具體試驗過程，樣本檢測、數(shù)據(jù)收集、樣本長期保存、結(jié)果不一致樣本的驗證鑒別等。3