高二生物選修1生物技術(shù)實(shí)踐四川建議7課題課后答案

1、高二生物技術(shù)實(shí)踐討論、思考、結(jié)果分析與評價(jià)、課后習(xí)題答案專題1 傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用課題1 果酒和果醋和制作（一）旁欄思考題P41.你認(rèn)為應(yīng)該先沖洗葡萄還是先除去枝梗？為什么？答：應(yīng)該先沖洗，然后再除去枝梗，以避免除去枝梗時(shí)引起葡萄破損，增加被雜菌污染的機(jī)會(huì)。2.你認(rèn)為應(yīng)該從哪些方面防止發(fā)酵液被污染？提示：需要從發(fā)酵制作的過程進(jìn)行全面的考慮。例如，榨汁機(jī)、發(fā)酵裝置要清洗干凈；每次排氣時(shí)只需擰松瓶蓋、不要完全揭開瓶蓋等。3.制葡萄酒時(shí)，為什么要將溫度控制在1825 ？制葡萄醋時(shí)，為什么要將溫度控制在3035 ？答：溫度是酵母菌生長和發(fā)酵的重要條件。20 左右最適合酵母菌繁殖。因此需要將溫度控制在其

2、最適溫度范圍內(nèi)。而醋酸菌是嗜溫菌，最適生長溫度為3035 ，因此要將溫度控制在3035 。4.制葡萄醋時(shí)，為什么要適時(shí)通過充氣口充氣？答：醋酸菌是好氧菌，在將酒精變?yōu)榇姿釙r(shí)需要氧的參與，因此要適時(shí)向發(fā)酵液中充氣。（二）資料發(fā)酵裝置的設(shè)計(jì)討論題請分析此裝置中的充氣口、排氣口和出料口分別有哪些作用。為什么排氣口要通過一個(gè)長而彎曲的膠管與瓶身連接？結(jié)合果酒、果醋的制作原理，你認(rèn)為應(yīng)該如何使用這個(gè)發(fā)酵裝置？答：充氣口是在醋酸發(fā)酵時(shí)連接充氣泵進(jìn)行充氣用的；排氣口是在酒精發(fā)酵時(shí)用來排出CO2的；出料口是用來取樣的。排氣口要通過一個(gè)長而彎曲的膠管與瓶身連接，其目的是防止空氣中微生物的污染，其作用類似巴斯德的

3、鵝頸瓶。使用該裝置制酒時(shí)，應(yīng)該關(guān)閉充氣口；制醋時(shí)，應(yīng)將充氣口連接氣泵，輸入氧氣。（三）課題成果評價(jià)（一）果酒的制作是否成功發(fā)酵后取樣，通過嗅味和品嘗進(jìn)行初步鑒定。此外，還可用顯微鏡觀察酵母菌，并用重鉻酸鉀檢驗(yàn)酒精的存在。如果實(shí)驗(yàn)結(jié)果不理想，請學(xué)生分析失敗原因，然后重新制作。（二）果醋的制作是否成功首先通過觀察菌膜的形成、嗅味和品嘗進(jìn)行初步鑒定，再通過檢測和比較醋酸發(fā)酵前后的pH作進(jìn)一步的鑒定。此外，還可以通過在顯微鏡下觀察發(fā)酵液中是否有醋酸菌，并統(tǒng)計(jì)其數(shù)量作進(jìn)一步鑒定。（四）練習(xí)2.提示：大規(guī)模生產(chǎn)時(shí)需要進(jìn)行更為全面周詳?shù)目紤]，如原料的來源與選擇、菌種的培育與選擇、發(fā)酵的設(shè)備、發(fā)酵條件的自動(dòng)化

4、控制，以及如何嚴(yán)格控制雜菌污染；等等。此外，無論是葡萄酒或葡萄醋，實(shí)驗(yàn)時(shí)所檢測的發(fā)酵液，并非商品意義上的產(chǎn)品。在實(shí)際生產(chǎn)中還需沉淀過濾、滅菌裝瓶等獲得成品酒或醋。葡萄酒還需在一定設(shè)施和條件下（如橡木桶和地窖）進(jìn)行后續(xù)發(fā)酵，以獲得特定的風(fēng)味和色澤。3.提示：需考慮廠房、設(shè)備投資、原材料采購、工人人數(shù)及工資、產(chǎn)品種類、生產(chǎn)周期、銷售渠道、利潤等問題。專題二 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用課題一 實(shí)驗(yàn)室的微生物培養(yǎng)P15旁欄思考題：無菌技術(shù)除了用來防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？答：無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。P16旁欄思考題：請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如

5、果需要，請選擇合適的方法。（1） 培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2） 玻棒、試管、燒瓶和吸管（3） 實(shí)驗(yàn)操作者的雙手答：（1）、（2）需要滅菌；（3）需要消毒。 P17倒平板操作的討論1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50 左右時(shí)，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可以進(jìn)行倒平板了。2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？答：平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，

6、又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。P18平板劃線操作的討論1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的

7、數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。3.在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落。P19涂布平板操作的討論涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第2步應(yīng)如何進(jìn)行無菌操作？答：應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保證“無菌”。例如

8、，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍；等等。P20六、課題成果評價(jià)1.培養(yǎng)基的制作是否合格如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫12 d后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。2.接種操作是否符合無菌要求如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點(diǎn)，則說明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接種過程中，無菌操作還未達(dá)到要求，需要分析原因，再次練習(xí)。3.是否進(jìn)行了及時(shí)細(xì)致的觀察與記錄培養(yǎng)12 h與24 h后的大腸桿菌菌落的大小會(huì)有明顯不同，及時(shí)觀察記錄的同學(xué)會(huì)發(fā)現(xiàn)這一點(diǎn)，并能觀察到其他一些細(xì)

9、微的變化。這一步的要求主要是培養(yǎng)學(xué)生良好的科學(xué)態(tài)度與習(xí)慣。P20練習(xí)1.提示：可以從微生物生長需要哪些條件的角度來思考。例如，微生物的生長需要水、空氣、適宜的溫度，食品保存可以通過保持干燥、真空的條件，以及冷藏等方法來阻止微生物的生長。2.提示：可以從這三種培養(yǎng)技術(shù)的原理、操作步驟等方面分別進(jìn)行總結(jié)歸納。例如，這三種培養(yǎng)技術(shù)都需要為培養(yǎng)物提供充足的營養(yǎng)，但無土栽培技術(shù)的操作并不需要保證無菌的條件，而其他兩種技術(shù)都要求嚴(yán)格的無菌條件。3.提示：這是一道開放性的問題，答案并不惟一，重點(diǎn)在于鼓勵(lì)學(xué)生積極參與，從不同的角度思考問題。例如，正是由于證明了微生物不是自發(fā)產(chǎn)生的，微生物學(xué)才可能發(fā)展成為一門獨(dú)

10、立的學(xué)科；巴斯德實(shí)驗(yàn)中用到的加熱滅菌的方法導(dǎo)致了有效的滅菌方法的出現(xiàn)，而這一滅菌原理也適用于食品的保存等。課題二 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)P22旁欄思考題1.想一想，如何從平板上的菌落數(shù)推測出每克樣品中的菌落數(shù)？答：統(tǒng)計(jì)某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)，最好能統(tǒng)計(jì)3個(gè)平板，計(jì)算出平板菌落數(shù)的平均值，然后按課本旁欄的公式進(jìn)行計(jì)算。P22兩位同學(xué)用稀釋涂布平板法測定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)，在對應(yīng)稀釋倍數(shù)106的培養(yǎng)集中，得到以下兩種統(tǒng)計(jì)結(jié)果：1.第一位同學(xué)在該濃度下涂布了一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)為230；2.第二位同學(xué)在該濃度下涂布了三個(gè)平板第一位同學(xué)只涂布了一個(gè)平板，沒有設(shè)置重復(fù)組，因此結(jié)果不具

11、有說服力。第二位同學(xué)考慮到設(shè)置重復(fù)組的問題，涂布了3個(gè)平板，但是，其中1個(gè)平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與另2個(gè)相差太遠(yuǎn)，說明在操作過程中可能出現(xiàn)了錯(cuò)誤，因此，不能簡單地將3個(gè)平板的計(jì)數(shù)值用來求平均值。P22設(shè)置對照A同學(xué)的結(jié)果與其他同學(xué)不同，可能的解釋有兩種。一是由于土樣不同，二是由于培養(yǎng)基污染或操作失誤。究竟是哪個(gè)原因，可以通過實(shí)驗(yàn)來證明。實(shí)驗(yàn)方案有兩種。一種方案是可以由其他同學(xué)用與A同學(xué)一樣的土樣進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，如果結(jié)果與A同學(xué)一致，則證明A無誤；如果結(jié)果不同，則證明A同學(xué)存在操作失誤或培養(yǎng)基的配制有問題。另一種方案是將A同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進(jìn)行培養(yǎng)，作為空白對照，以證明培養(yǎng)基是否受到污染。通過

12、這個(gè)事例可以看出，實(shí)驗(yàn)結(jié)果要有說服力，對照的設(shè)置是必不可少的。P24旁欄思考題為什么分離不同的微生物要采用不同的稀釋度？測定土壤中細(xì)菌的總量和測定土壤中能分解尿素的細(xì)菌的數(shù)量，選用的稀釋范圍相同嗎？這是因?yàn)橥寥乐懈黝愇⑸锏臄?shù)量（單位：株/kg）是不同的，例如在干旱土壤中的上層樣本中：好氧及兼性厭氧細(xì)菌數(shù)約為2 185萬，放線菌數(shù)約為477萬，霉菌數(shù)約為23.1萬。因此，為獲得不同類型的微生物，就需要按不同的稀釋度進(jìn)行分離，同時(shí)還應(yīng)當(dāng)有針對性地提供選擇培養(yǎng)的條件。P25 結(jié)果分析與評價(jià)1培養(yǎng)物中是否有雜菌污染以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出菌落對照的培養(yǎng)皿在培養(yǎng)過程中沒有菌落生長，說明培養(yǎng)基沒有被雜菌

13、污染。牛肉膏培養(yǎng)基的菌落數(shù)目明顯大于選擇培養(yǎng)基的數(shù)目，說明選擇培養(yǎng)基已篩選出一些菌落。2樣品的稀釋操作是否成功如果得到了2個(gè)或2個(gè)以上菌落數(shù)目在30300的平板，則說明稀釋操作比較成功，并能夠進(jìn)行菌落的計(jì)數(shù)。3重復(fù)組的結(jié)果是否一致如果學(xué)生選取的是同一種土樣，統(tǒng)計(jì)的結(jié)果應(yīng)該接近。如果結(jié)果相差太遠(yuǎn)，教師需要引導(dǎo)學(xué)生一起分析產(chǎn)生差異的原因。P26練習(xí)2.提示：反芻動(dòng)物的瘤胃中含有大量的微生物，其中也包括分解尿素的微生物。由于瘤胃中的微生物多為厭氧菌，接觸空氣后會(huì)死亡，因此分離其中能分解尿素的微生物除了需要準(zhǔn)備選擇培養(yǎng)基外，還應(yīng)參照厭氧菌的培養(yǎng)方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。專題4 酶的研究與應(yīng)用課題1 探討加酶洗

14、衣粉的洗滌效果一、基礎(chǔ)知識1加酶洗衣粉是指含有酶制劑的洗衣粉，目前常用的酶制劑有四類：蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纖維素酶。其中，應(yīng)用最廣泛、效果最明顯的是堿性蛋白酶和堿性脂肪酶。堿性蛋白酶能將血漬、奶漬等含有的大分子蛋白質(zhì)水解成可溶性的氨基酸或小分子的肽，使污跡從衣物上脫落。同樣道理，其他酶也是將大分子物質(zhì)分解為小分子物質(zhì)，從而使洗衣粉具有更好的去污能力。2、使用加酶洗衣粉時(shí)，影響酶活性的因素有溫度 、酸堿度、表面活性劑等，為此，科學(xué)家通過基因工程生產(chǎn)出了特殊的酶，并制成酶制劑，解決了這個(gè)問題。3、加酶洗衣粉可以降低表面活性劑和三聚磷酸鈉的用量，使洗滌劑朝低磷無磷的方向發(fā)展，減少對環(huán)境的污染。二

15、、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)例1探究普通洗衣粉和加酶洗衣粉對衣物污漬的洗滌效果實(shí)驗(yàn)原理：加酶洗衣粉中含有一種或多種酶，可以將相應(yīng)的大分子物質(zhì)分解為小分子物質(zhì)，從而使污跡容易從衣物上脫落，這是普通洗衣粉難以做到的。實(shí)驗(yàn)材料1000mL大燒杯2只，量筒，水浴鍋，2塊相同的污染布（同種布料、同樣大小、滴入等量、同種的污染物），玻璃棒，秒表、普通洗衣粉、加酶洗衣粉等。實(shí)驗(yàn)過程：取2只1000mL大燒杯，編號為1、2。用量筒分別量取500mL蒸餾水分別放入2只燒杯中，將燒杯放入400C的水浴鍋中保溫。將2塊相同的污染布分別同時(shí)放入2只燒杯中浸泡相同時(shí)間，然后分別同時(shí)在1、2號燒杯中加入等量的普通洗衣粉和加酶洗衣粉。用玻

16、璃棒同時(shí)、同樣強(qiáng)度攪拌相同時(shí)間。觀察并記錄1、2號燒杯中污染布上的污跡殘留情況。 （注：或分別將污跡洗凈，記錄洗滌所需時(shí)間。）實(shí)例2探討溫度對加酶洗衣粉洗滌的影響實(shí)驗(yàn)原理：酶的活性受溫度影響，在最適溫度時(shí)，酶的活性最高，高于或低于最適溫度時(shí)，酶的活性下降。實(shí)驗(yàn)材料 1000mL大燒杯4只、量筒、冰箱、水浴鍋、4塊相同的污染布（同種布料、同樣大小、滴入等量、同種的污染物），玻璃棒，秒表、加酶洗衣粉等。實(shí)驗(yàn)過程：取4只1000mL燒杯，編號為1、2、3、4。用量筒分別量取500mL蒸餾水放入4只燒杯中，將燒杯分別放在50C、150C、250C、350C的冰箱或水浴鍋中保溫。將4塊相同的污染布同時(shí)放

17、入4只燒杯中浸泡相同時(shí)間，然后分別同時(shí)加入等量的同種加酶洗衣粉。用玻璃棒同時(shí)、同樣強(qiáng)度充分?jǐn)嚢柘嗤瑫r(shí)間。觀察并記錄1、2、3、4號燒杯中污染布上的污跡殘留情況。（注：或分別將污跡洗凈，記錄洗滌所需時(shí)間。）實(shí)例3不同種類的加酶洗衣粉對同一污漬的洗滌效果實(shí)驗(yàn)原理：不同種類的加酶洗衣粉所加的酶不同，而酶具有特異性，所以對不同污漬的洗滌效果不同。實(shí)驗(yàn)材料1000mL大燒杯5只、量筒、水浴鍋、5塊相同的污染布（同種布料、同樣大小、滴入等量、同種的奶漬、油漬或番茄汁），玻璃棒，秒表、5種洗衣粉（蛋白酶洗衣粉、脂肪酶洗衣粉、淀粉酶洗衣粉、復(fù)合酶洗衣粉和普通洗衣粉）等。實(shí)驗(yàn)過程：（注：每個(gè)實(shí)驗(yàn)小組的污染布是同

18、一類型的，若某小組的拿到的是滴入奶漬的污染布，請?jiān)O(shè)計(jì)該小組的實(shí)驗(yàn)步驟。）取5只1000mL燒杯，編號為1、2、3、4、5。用量筒分別量取500mL蒸餾水放入5只燒杯中，并將燒杯放在400C的水浴鍋中保溫。將4塊滴入奶漬的污染布同時(shí)放入5只燒杯中浸泡相同時(shí)間，然后分別在1、2、3、4、5號燒杯中同時(shí)分別加入等量的蛋白酶洗衣粉、脂肪酶洗衣粉、淀粉酶洗衣粉、復(fù)合酶洗衣粉和普通洗衣粉。用玻璃棒同時(shí)、同樣強(qiáng)度充分?jǐn)嚢柘嗤瑫r(shí)間。觀察并記錄1、2、3、4、5號燒杯中污染布上的污跡殘留情況，填入下表。（注：或分別將污跡洗凈，記錄洗滌所需時(shí)間。）組別污漬類型洗衣粉類型蛋白酶洗衣粉脂肪酶洗衣粉淀粉酶洗衣粉復(fù)合酶洗

19、衣粉普通洗衣粉1奶漬2油漬3番茄汁結(jié)果分析 思考：將不同小組的實(shí)驗(yàn)結(jié)果都作統(tǒng)計(jì)并記入上表后，可以得到哪些結(jié)論？【教材答案】（一）旁欄思考題1查閱資料，看看普通洗衣粉中包含哪些化學(xué)成分？提示：普通洗衣粉中通常包含有：表面活性劑、水軟化劑、堿劑、漂白劑等成分，有的洗衣粉中還含有增白劑、香精和色素，以及填充劑等。2在本課題中你打算使用什么方法和標(biāo)準(zhǔn)判斷洗滌效果？提示：可在洗滌后比較污物的殘留狀況，如：已消失、顏色變淺、面積縮小等，最好能進(jìn)行定量的比較。（二）練習(xí)1.答：列表比較如下。  普通洗衣粉加酶洗衣粉相同點(diǎn)表面活性劑可以產(chǎn)生泡沫，可以將油脂分子分散開；水軟化劑可以分散污垢；等等。不同

20、點(diǎn)酶可以將大分子有機(jī)物分解為小分子有機(jī)物，小分子有機(jī)物易于溶于水，從而與纖維分開。2.答：不合適。因?yàn)榻z綢的主要成分是蛋白質(zhì)，它會(huì)被加酶洗衣粉中的蛋白酶分解，損壞衣物。課題2 酵母細(xì)胞的固定化課題背景1、問題：酶對環(huán)境條件敏感，易失活；溶液中的酶很難回收，不能再次利用，提高了生產(chǎn)成本；反應(yīng)后的酶會(huì)混合在產(chǎn)物中，如不除去，會(huì)影響產(chǎn)品質(zhì)量。設(shè)想：將酶固定在不溶于水的載體上。優(yōu)點(diǎn)：使酶既能與反應(yīng)物接觸，又能與產(chǎn)物分離，同時(shí)，固定在載體上的酶還可以反復(fù)利用。2、問題：一種酶只能催化一種化學(xué)反應(yīng)，而在生產(chǎn)實(shí)踐中，很多產(chǎn)物的形成都是通過一系列的酶促反應(yīng)才能得到的。設(shè)想：將合成酶的細(xì)胞直接固定。優(yōu)點(diǎn)：成本更

21、低，操作更容易。一、基礎(chǔ)知識（一）固定化酶的應(yīng)用實(shí)例1、高果糖漿是指果糖含量為42%左右的糖漿，能將葡萄糖轉(zhuǎn)化為果糖的酶是葡萄糖異構(gòu)酶。2、使用固定化酶技術(shù)，將這種酶固定在一種顆粒狀的載體上，再將這些酶顆粒裝到一個(gè)反應(yīng)柱內(nèi)，柱子底端裝上分布著許多小孔的篩板。酶顆粒無法通過篩板的小孔，而反應(yīng)溶液卻可以自由出入。生產(chǎn)過程中，將葡萄糖溶液從反應(yīng)柱的上端注入，使葡萄糖溶液流過反應(yīng)柱，與固定化葡萄糖異構(gòu)酶接觸，轉(zhuǎn)化成果糖，從反應(yīng)柱的下端流出。反應(yīng)柱能連續(xù)使用半年，大大降低了生產(chǎn)成本，提高了果糖的產(chǎn)量和質(zhì)量。（二）固定化細(xì)胞技術(shù)1、固定化酶和固定化細(xì)胞是利用物理或化學(xué)方法將酶或細(xì)胞固定在一定空間內(nèi)的技術(shù)，

22、包括包埋法、化學(xué)結(jié)合法和物理吸附法。2、一般來說，酶更適合采用化學(xué)結(jié)合法和物理吸附法固定，而細(xì)胞多采用包埋法固定化。這是因?yàn)榧?xì)胞體積比酶分子的體積大；體積大的細(xì)胞難以被吸附或結(jié)合，而個(gè)小的酶容易從包埋材料中漏出。3、包埋法法固定化細(xì)胞，即將微生物細(xì)胞均勻地包埋在不溶于水的不溶于水的載體中。常用的載體有明膠、瓊脂糖、海藻酸鈉、醋酸纖維素和聚丙烯酰胺等。二、實(shí)驗(yàn)操作（一）制備固定化酵母細(xì)胞1酵母細(xì)胞的活化活化就是處于休眠狀態(tài)的微生物重新恢復(fù)正常的生活狀態(tài)。2配制物質(zhì)的量的濃度為0.05mol/L的CaCl2溶液3配制海藻酸鈉溶液加熱溶化海藻酸鈉時(shí)要注意小火間斷加熱，重復(fù)幾次，并不斷攪拌，直到海藻酸

23、鈉融化為止。如果加熱太快，海藻酸鈉會(huì)發(fā)生焦糊。4海藻酸鈉溶液與酵母菌細(xì)胞混合 將海藻酸鈉溶液冷卻至室溫，加入已活化的海藻酸鈉溶液，進(jìn)行充分?jǐn)嚢?，使其混合均勻，在轉(zhuǎn)移至注射器中。5固定化酵母細(xì)胞以恒定的速度緩慢地將注射器中的溶液滴加到剛配制好的CaCl2溶液中，并浸泡30min（時(shí)間）左右。（二）用固定化酵母細(xì)胞發(fā)酵1將固定好的酵母細(xì)胞（凝膠珠）用蒸餾水沖洗2-3次。2將10%葡萄糖溶液轉(zhuǎn)移至錐形瓶中，加入固定好的酵母細(xì)胞，置于25下發(fā)酵24h（時(shí)間）。三、結(jié)果分析與評價(jià)（一）觀察凝膠珠的顏色和形狀如果制作的凝膠珠顏色過淺、呈白色，說明海藻酸鈉濃度濃度偏低，該種凝膠珠包埋的酵母細(xì)胞數(shù)目少，影響實(shí)

24、驗(yàn)效果；如果形成的凝膠珠不是圓形或橢圓形，則說明海藻酸鈉濃度濃度偏高，制作失敗，需要再作嘗試。（二）觀察發(fā)酵的葡萄糖溶液利用固定的酵母細(xì)胞發(fā)酵產(chǎn)生酒精，可以看到產(chǎn)生了很多氣泡，同時(shí)會(huì)聞到酒味。四、課題延伸工業(yè)生產(chǎn)中，細(xì)胞的固定化技術(shù)是在嚴(yán)格無菌的條件下進(jìn)行的?！窘滩拇鸢浮烤毩?xí)1.答：直接使用酶、固定化酶和固定化細(xì)胞催化的優(yōu)缺點(diǎn)如下表所示。類型優(yōu)點(diǎn)不足直接使用酶催化效率高，低耗能、低污染等。對環(huán)境條件非常敏感，容易失活；溶液中的酶很難回收，不能被再次利用，提高了生產(chǎn)成本；反應(yīng)后酶會(huì)混在產(chǎn)物中，可能影響產(chǎn)品質(zhì)量。固定化酶酶既能與反應(yīng)物接觸，又能與產(chǎn)物分離，同時(shí)，固定在載體上的酶還可以被反復(fù)利用。一

25、種酶只能催化一種化學(xué)反應(yīng)，而在生產(chǎn)實(shí)踐中，很多產(chǎn)物的形成都通過一系列的酶促反應(yīng)才能得到的。固定化細(xì)胞成本低，操作更容易。固定后的酶或細(xì)胞與反應(yīng)物不容易接近，可能導(dǎo)致反應(yīng)效果下降等。3.提示：可以從酶的結(jié)構(gòu)的多樣性，對理化條件的敏感程度等角度思考?！局R拓展】1、酵母細(xì)胞的活化。在缺水的狀態(tài)下，微生物會(huì)處于休眠狀態(tài)。活化就是讓處于休眠狀態(tài)的微生物重新恢復(fù)正常的生活狀態(tài)。酵母細(xì)胞所需要的活化時(shí)間較短，一般需要0.51 h，教師需要提前做好準(zhǔn)備。此外，酵母細(xì)胞活化時(shí)體積會(huì)變大，因此活化前應(yīng)該選擇體積足夠大的容器，以避免酵母細(xì)胞的活化液溢出容器外。2、加熱使海藻酸鈉溶化是操作中最重要的一環(huán)，涉及到實(shí)驗(yàn)

26、的成敗，教師一定要提醒學(xué)生按照教材的提示進(jìn)行操作。海藻酸鈉的濃度涉及到固定化細(xì)胞的質(zhì)量。如果海藻酸鈉濃度過高，將很難形成凝膠珠；如果濃度過低，形成的凝膠珠所包埋的酵母細(xì)胞的數(shù)目少，影響實(shí)驗(yàn)效果。3、剛形成的凝膠珠應(yīng)在CaCl2溶液中浸泡一段時(shí)間，以便形成穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)。檢驗(yàn)?zāi)z珠的質(zhì)量是否合格，可以使用下列方法。一是用鑷子夾起一個(gè)凝膠珠放在實(shí)驗(yàn)桌上用手?jǐn)D壓，如果凝膠珠不容易破裂，沒有液體流出，就表明凝膠珠的制作成功。二是在實(shí)驗(yàn)桌上用力摔打凝膠珠，如果凝膠珠很容易彈起，也能表明制備的凝膠珠是成功的。專題5 DNA 和蛋白質(zhì)技術(shù)課題1 DNA的粗提取與鑒定一、基礎(chǔ)知識（一）提取DNA的方法提取生物大分

27、子的基本思路是選用一定的物理或化學(xué)方法分離具有不同物理或化學(xué)性質(zhì)的生物大分子。對于DNA的粗提取而言，就是要利用DNA與RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等在物理和化學(xué)性質(zhì)方面的差異，提取DNA，去除其他成分。（1）DNA的溶解性：l DNA和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同，利用這一特點(diǎn)，選擇適當(dāng)?shù)柠}濃度就能使DNA充分溶解，而使雜質(zhì)沉淀，或者相反，以達(dá)到分離目的。l 此外，DNA不溶于酒精溶液，但是細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)則溶于酒精。利用這一原理，可以將DNA與蛋白質(zhì)進(jìn)一步的分離。（2）DNA對酶、高溫和洗滌劑的耐受性：蛋白酶能水解蛋白質(zhì)，但是對DNA沒有影響。大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受6080

28、oC的高溫，而DNA在80以上才會(huì)變性。洗滌劑能夠瓦解細(xì)胞膜，但對DNA沒有影響。（二）DNA的鑒定在沸水裕條件下，DNA遇二苯胺會(huì)被染成藍(lán)色，因此二苯胺可以作為鑒定DNA的試劑。二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)（一）實(shí)驗(yàn)材料的選取 凡是含有DNA的生物材料都可以考慮，但是使用DNA含量相對較高的生物組織，成功的可能性更大。（二）破碎細(xì)胞，獲取含DNA的濾液 動(dòng)物細(xì)胞的破碎比較容易，以雞血細(xì)胞為例，在雞血細(xì)胞液中加入一定量的蒸餾水，同時(shí)用玻璃棒攪拌，過濾后收集濾液即可。如果實(shí)驗(yàn)材料是植物細(xì)胞，需要先用洗滌劑溶解細(xì)胞膜。例如，提取洋蔥的DNA時(shí)，在切碎的洋蔥中加入一定的洗滌劑和食鹽，進(jìn)行充分的攪拌和研磨，過濾后收集

29、研磨液。（三）去除濾液中的雜質(zhì) 方案一 利用DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度的不同，通過控制NaCl溶液的濃度去除雜質(zhì)。方案二 直接在濾液中加入嫩肉粉，反應(yīng)1015min，嫩肉粉中的木瓜蛋白酶能夠分解蛋白質(zhì)。方案三 將濾液放在6075的恒溫水浴箱保溫1015min，注意嚴(yán)格控制溫度范圍。（四）DNA的析出與鑒定 1、將處理后的溶液過濾，加入與濾液體積相等的、冷卻的酒精溶液（體積分?jǐn)?shù)為95%），靜置23min，溶液中會(huì)出現(xiàn)白色絲狀物，這就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一個(gè)方向攪拌，卷起絲狀物，并用濾紙吸取上面的水分。2、取兩支20ml的試管，各加入物質(zhì)的量濃度為2mol/L的NaCl溶液5m

30、l，將絲狀物放入其中一支試管中，用玻璃棒攪拌，使絲狀物溶解。然后，向兩支試管中各加入4ml的二苯胺試劑?；旌暇鶆蚝?，將試管置于沸水中加熱5min，待試管冷卻后，比較兩支試管溶液顏色的變化，看看溶解有DNA的溶液是否變藍(lán)。實(shí)例：用雞血細(xì)胞液粗提取DNA并鑒定（蘇教版必修2）步驟操作圖示1、提取雞血細(xì)胞的細(xì)胞核物質(zhì)將制備好的雞血細(xì)胞液（已在課前配好）510mL，注入到50ml燒杯中。向燒杯中加入蒸餾水20mL，同時(shí)用玻璃棒沿一個(gè)方向快速攪拌5min，然后，用放有紗布的漏斗將血細(xì)胞過濾至1000mL的燒杯中，取其濾液。2、溶解細(xì)胞核內(nèi)的DNA將物質(zhì)的量濃度為2molL的NaCl溶液40 mL加入到濾

31、液中，并作玻璃棒沿一個(gè)方向攪拌1min，使其混合均勻，這時(shí)DNA在溶液中呈溶解狀態(tài)。3、析出含DNA的粘稠物沿?zé)瓋?nèi)壁緩緩加入蒸餾水，同時(shí)用玻璃棒沿一個(gè)方向不停地輕輕攪拌，這時(shí)燒杯中有絲狀物出現(xiàn)。繼續(xù)加入蒸餾水，溶液中出現(xiàn)的黏稠物會(huì)越來越多。當(dāng)黏稠物不再增加時(shí)停止加入蒸餾水。4、濾取含DNA的粘稠物用放多層紗布的漏斗，過濾溶液至1000 mL的燒杯中。取紗布上的黏稠物。5、將DNA的粘稠物再溶解取一個(gè)50 mL燒杯，向燒杯內(nèi)注入物質(zhì)的量濃度為2molL的NaCl溶液20 mL。用鈍頭鑷子將紗布上的黏稠物夾至NaCl溶液中，用玻璃棒沿一個(gè)方向不停地?cái)嚢?min，使黏稠物盡可能多地溶解于溶液中。6

32、、過濾含DNA的氯化鈉溶液取一個(gè)100 mL燒杯，用放有兩層紗布的漏斗過濾以上溶液。取其濾液（DNA溶于濾液中）。7、提取含雜質(zhì)較少的DNA在上述濾過的溶液中，加入冷卻的、體積分?jǐn)?shù)為95的酒精溶液50 mL（加入時(shí)動(dòng)作要慢），并作用玻璃棒沿一個(gè)方向攪拌，溶液中會(huì)出現(xiàn)含雜質(zhì)較少的絲狀物。當(dāng)玻璃棒上出現(xiàn)絲狀物纏繞時(shí)，繼續(xù)慢慢攪拌，至不再增加時(shí)，用玻璃棒將絲狀物卷起，并用濾紙吸取上面的水分。8、DNA的鑒定取兩支20 mL的試管，各加入物質(zhì)的量濃度為0.015molL的NaCl溶液5mL，將絲狀物放入其中一支試管中，用玻璃棒攪拌，使絲狀物溶解。然后，向兩支試管中各加入4 mL的二苯胺試劑?；旌暇鶆蚝?/p>

33、，將試管置于沸水中加熱5min，等試管冷卻后，觀察并且比較兩支試管中溶液顏色的變化。三、操作提示1、以血液為實(shí)驗(yàn)材料時(shí)，每100ml血液中需要加入3g檸檬酸鈉，防止血液凝固。2、加入洗滌劑后，動(dòng)作要輕緩、柔和，否則容易產(chǎn)生大量的泡沫，不利于后續(xù)步驟地操作。加入酒精和用玻璃棒攪拌時(shí)，動(dòng)作要輕緩，以免加劇DNA分子的斷裂，導(dǎo)致DNA分子不能形成絮狀沉淀。3、二苯胺試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用，否則會(huì)影響鑒定的效果。四、課題成果評價(jià)1、是否提取出了DNA觀察你提取的DNA顏色，如果不是白色絲狀物，說明DNA中的雜質(zhì)較多；二苯胺鑒定出現(xiàn)藍(lán)色說明實(shí)驗(yàn)基本成功，如果不呈現(xiàn)藍(lán)色，可能所提取的DNA含量低，或是實(shí)驗(yàn)操作中出

34、現(xiàn)錯(cuò)誤，需要重新制備。2、分析DNA中的雜質(zhì)本實(shí)驗(yàn)提取的DNA粗制品有可能仍然含有核蛋白、多糖、RNA等雜質(zhì)。3、不同實(shí)驗(yàn)方法的比較對于不同的實(shí)驗(yàn)方法，本課題可以采用分組的方法進(jìn)行研究。首先選取不同的實(shí)驗(yàn)材料，其次同種材料還可以采用不同方法，從多方面比較實(shí)驗(yàn)結(jié)果，如DNA的多少、顏色，二苯胺顯色的深淺等，看看哪種實(shí)驗(yàn)材料、哪種提取方法的效果更好。五、課題延伸本課題使用的洗滌劑是多組分的混合物，在嚴(yán)格的科學(xué)實(shí)驗(yàn)中很少使用。實(shí)驗(yàn)室提取高純度的DAN時(shí)，通常使用十六烷基三甲基溴化銨（CTAB）、十二烷基硫酸鈉（SDS）或吐溫等化學(xué)試劑?！窘滩拇鸢浮浚ㄒ唬┡詸谒伎碱}1為什么加入蒸餾水能使雞血細(xì)胞破裂？

35、答：蒸餾水對于雞血細(xì)胞來說是一種低滲液體，水分可以大量進(jìn)入血細(xì)胞內(nèi)，使血細(xì)胞脹裂，再加上攪拌的機(jī)械作用，就加速了雞血細(xì)胞的破裂（細(xì)胞膜和核膜的破裂），從而釋放出DNA。2加入洗滌劑和食鹽的作用分別是什么？答：洗滌劑是一些離子去污劑，能溶解細(xì)胞膜，有利于DNA的釋放；食鹽的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解。3如果研磨不充分，會(huì)對實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生怎樣的影響？答：研磨不充分會(huì)使細(xì)胞核內(nèi)的DNA釋放不完全，提取的DNA量變少，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，導(dǎo)致看不到絲狀沉淀物、用二苯胺鑒定不顯示藍(lán)色等。4此步驟獲得的濾液中可能含有哪些細(xì)胞成分？答：可能含有核蛋白、多糖和RNA等雜質(zhì)。5為什么反復(fù)地溶解與析出DNA，

36、能夠去除雜質(zhì)？答：用高鹽濃度的溶液溶解DNA，能除去在高鹽中不能溶解的雜質(zhì)；用低鹽濃度使DNA析出，能除去溶解在低鹽溶液中的雜質(zhì)。因此，通過反復(fù)溶解與析出DNA，就能夠除去與DNA溶解度不同的多種雜質(zhì)。6方案二與方案三的原理有什么不同？答：方案二是利用蛋白酶分解雜質(zhì)蛋白，從而使提取的DNA與蛋白質(zhì)分開；方案三利用的是DNA和蛋白質(zhì)對高溫耐受性的不同，從而使蛋白質(zhì)變性，與DNA分離。（二）討論題圖5-1是DNA在NaCl溶液中的溶解度曲線，請根據(jù)曲線圖，思考下面的問題1在什么濃度下，DNA的溶解度最?。緿NA在NaCl溶液中的溶解度是如何變化的？答：在NaCl溶液濃度為0.14mol/L時(shí)， D

37、NA的溶解度最小；當(dāng)NaCl溶液濃度低于0.14mol/L時(shí)，隨著NaCl溶液濃度的升高，DNA的溶解度降低；當(dāng)NaCl溶液濃度高于0.14mol/L時(shí)，隨著NaCl溶液濃度的升高，DNA的溶解度升高。2如何通過控制NaCl溶液的濃度使DNA在鹽溶液中溶解或析出？答：根據(jù)DNA在0.14mol/L NaCl溶液中溶解度最小的特性，一般先用較高濃度2mol/L的NaCl溶液使DNA溶解，然后再用蒸餾水稀釋至0.14mol/L使DNA析出。（三）練習(xí)1答：提取DNA的第一步是材料的選取，其目的是一定要選取DNA含量較高的生物材料，否則會(huì)由于實(shí)驗(yàn)過程中或多或少的損失而造成檢測的困難；第二步是DNA的

38、釋放和溶解，這一步是實(shí)驗(yàn)成功與否的關(guān)鍵，要盡可能使細(xì)胞內(nèi)的DNA全部溶解；第三步是DNA的純化，即根據(jù)DNA的溶解特性、對酶及高溫的耐受性的不同等特性，最大限度地將DNA與雜質(zhì)分開；最后一步是對DNA進(jìn)行鑒定，這是對整個(gè)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果的檢測。2答：提取蛋白質(zhì)比提取DNA的難度大。這是因?yàn)?，與DNA相比，蛋白質(zhì)對溫度、鹽濃度、pH等條件要敏感得多，很容易失活；并且蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)多種多樣，理化性質(zhì)各不相同，使得蛋白質(zhì)的提取沒有一種統(tǒng)一的方法，只能根據(jù)特定蛋白質(zhì)的特性摸索提取的條件，設(shè)計(jì)特定的方法。【知識拓展】1制備雞血細(xì)胞液時(shí)，為什么要在新鮮的雞血中加入檸檬酸鈉？答：制備雞血細(xì)胞液時(shí)，要在新鮮的雞血

39、中加入抗凝劑檸檬酸鈉，防止血液凝固。其原理是檸檬酸鈉能與血漿中Ca2+發(fā)生反應(yīng)，生成檸檬酸鈣絡(luò)合物，血漿中游離的Ca2+大大減少，血液便不會(huì)凝固。2雞血離心或靜置沉淀后，為什么要棄出上清液？答：因?yàn)樯锨逡菏茄獫{，沒有血細(xì)胞。DNA主要存在于試管底部的雞血細(xì)胞的細(xì)胞核中，所以提取雞血中的DNA時(shí)，要除去血液中的上清液。3盛放雞血細(xì)胞液的容器最好是塑料容器，為什么？答：雞血細(xì)胞破碎以后釋放出的DNA，容易被玻璃容器吸附，由于細(xì)胞內(nèi)DNA的含量本來就比較少，再被玻璃容器吸附去一部分，提取到的DNA就會(huì)更少。因此，實(shí)驗(yàn)過程中最好使用塑料的燒杯和試管，這樣可以減少提取過程的DNA的損失。4為什么析出DN

40、A時(shí)要用冷卻的酒精？答：預(yù)冷的酒精溶液具有以下優(yōu)點(diǎn)。一是抑制核酸水解酶的活性，防止DNA 降解；二是降低分子運(yùn)動(dòng)，易于形成沉淀析出；三是低溫有利于增加DNA分子的柔韌性，減少斷裂。課題2 血紅蛋白的提取和分離一、基礎(chǔ)知識（一）凝膠色譜法1、凝膠色譜法也稱做分配色譜法，是根據(jù)相對分子質(zhì)量大小分離蛋白質(zhì)的有效方法。2、凝膠實(shí)際上是一些微小的多孔球體，這些小球體大多數(shù)是由多糖類化合物構(gòu)成的，如葡聚糖或瓊脂糖。3、在小球體內(nèi)部有許多貫穿的通道，相對分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)分子通過凝膠時(shí)速度不同，相對分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程較長，移動(dòng)速度較慢；而相對分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)無法進(jìn)入凝膠內(nèi)

41、部的通道，只能在凝膠外部移動(dòng)，路程較短，移動(dòng)速度較快。相對分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)分子因此得以分離。（二）緩沖溶液1、緩沖溶液的作用是能夠抵制外界酸或堿對溶液PH的影響，維持PH基本不變。2、緩沖溶液通常由12種緩沖劑溶解于水中配制而成的。3、生物體內(nèi)進(jìn)行的各種生物化學(xué)反應(yīng)都是在一定的pH下進(jìn)行的，為了能夠在實(shí)驗(yàn)條件下準(zhǔn)確模擬生物體內(nèi)的過程，必須保持體外的pH與體內(nèi)的基本一致。（三）電泳1、電泳是指帶電粒子在電場的作用下發(fā)生遷移的過程。2、許多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解離的基團(tuán)，在一定的pH下，這些基團(tuán)會(huì)帶上正電或負(fù)電。在電場的作用下，這些帶電分子會(huì)向著與其所帶電荷相反的電極移動(dòng)。

42、電泳利用了待分離樣品中各分子帶電性質(zhì)的差異以及分子本身的大小、形狀的不同，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而實(shí)現(xiàn)樣品中各種分子的分離。3、兩種常用的電泳方法是瓊脂糖凝膠電泳和聚丙烯酰胺凝膠電泳，在凝膠中加入SDS，電泳速率完全取決于分子大小，因此，在測定蛋白質(zhì)分子量時(shí)通常使用SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳。二、實(shí)驗(yàn)操作蛋白質(zhì)的提取和分離一般分為四步：樣品處理、粗分離、純化和純度鑒定。（一）樣品處理1、紅細(xì)胞的洗滌：洗滌紅細(xì)胞的目的是去除雜蛋白，采集的血樣要及時(shí) 分離紅細(xì)胞，分離時(shí)采用低速短時(shí)間離心（500r/min），然后用膠頭吸管吸出上層透明的黃色血漿，將下層暗紅色的紅細(xì)胞倒入燒杯，再加入五倍體積

43、的生理鹽水（質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.9%），緩慢攪拌10min，低速短時(shí)間離心，如此重復(fù)洗滌三次，直至上清液中沒有黃色，表明紅細(xì)胞已洗滌干凈。2、血紅蛋白的釋放：在蒸餾水和甲苯作用下，紅細(xì)胞破裂釋放出血紅蛋白。3、分離血紅蛋白溶液：將攪拌好的混合溶液離心（2000r/min）后，試管中的溶液分為4層。第一層為無色透明的甲苯層，第2層為白色薄層固體，是脂溶性物質(zhì)的沉淀層，第3層是紅色透明液體，這是血紅蛋白的水溶液，第4層是其他雜質(zhì)的暗紅色沉淀物。將試管中的液體用濾紙過濾，除去脂溶性沉淀層，于分液漏斗中靜置片刻后，分出下層的紅色透明液體。（二）粗分離：透析取1mL的血紅蛋白溶液裝入透析袋中，將透析袋放入盛有

44、300mL的物質(zhì)的量的濃度為20mmol/L的磷酸緩沖液（PH7.0）中，透析12h。透析可以去除樣品中分子量較小的雜質(zhì)，或用于更換樣品的緩沖液。（三）純化：凝膠色譜操作1、制作凝膠色譜柱2、裝填凝膠色譜柱裝填前將色譜柱垂直固定在支架上。因?yàn)楦傻哪z和用緩沖液平衡好的凝膠的體積相差很大，所以裝柱前需要根據(jù)色譜柱的內(nèi)體積計(jì)算所需要的凝膠量。裝填時(shí)凝膠要一次性緩慢倒入色譜柱內(nèi)，裝填時(shí)要輕輕敲動(dòng)色譜柱，使凝膠裝填均勻，色譜柱內(nèi)不得有氣泡存在，一旦發(fā)現(xiàn)，必須重裝。裝填完后，立即連接緩沖液洗脫瓶，在約50cm高的操作壓下，用300mL物質(zhì)的量濃度為20mmol/L的磷酸緩沖液（PH7.0）充分洗滌平衡凝

45、膠12h，使凝膠裝填緊密。3、樣品的加入和洗脫準(zhǔn)備：打開色譜柱下端的流出口，使柱內(nèi)凝膠面上的的緩沖液與凝膠面平齊，關(guān)閉出口。加樣：用吸管小心地將1mL透析后的樣品加到色譜柱的頂端，注意不要破壞凝膠面。加樣后打開下端出口，直到樣品完全進(jìn)入凝膠層后，關(guān)閉下端出口。洗脫：小心加入物質(zhì)的量的濃度為20mmol/L的磷酸緩沖液（PH7.0）到適當(dāng)高度，連接緩沖液洗脫瓶，打開下端出口進(jìn)行洗脫。待紅色的蛋白質(zhì)接近色譜柱底端時(shí)，用試管收集。（四）純度鑒定：SDS-聚丙稀酰胺凝膠電泳三、操作提示1、 紅細(xì)胞的洗滌 洗滌次數(shù)、離心速度與離心時(shí)間十分重要。洗滌次數(shù)過少，無法除去血漿蛋白；離心速度過高和時(shí)間過長會(huì)使白細(xì)胞等一同沉淀，達(dá)不到分離的效果。2、色譜柱填料的處理 商品凝膠使干燥的顆粒，使用前需直接放在洗脫液中膨脹。為了加速膨脹，可以將加入洗脫液的濕凝膠用沸水浴加熱，逐漸升溫至接近沸騰，通常只需12h。這種方法不但節(jié)約時(shí)間，而且可以除去