高考生物三年真題專項(xiàng)匯編卷（2018-2020）考點(diǎn)二十五：基因工程和生物技術(shù)的安全性和倫理性問題.docx

1、高考生物三年真題專項(xiàng)匯編卷（2018-2020）考點(diǎn)二十五：基因工程和生物技術(shù)的安全性和倫理性問題（2018北京卷，5） I.用Xho I和/1兩種限制性核酸內(nèi)切懈分別處理同一 DNA片段，醉切位點(diǎn)及酶切產(chǎn)物分離結(jié)果如圖。以下敘述不正確的是（）Xho I Sal ISall Sal XhoAJ圖1酶切位點(diǎn)圖圖2電泳結(jié)果示意圖A.圖1中兩種酶識別的核昔酸序列不同B.圖2中酶切產(chǎn)物可用于構(gòu)建重組DNAC.泳道中是用Sal I處理得到的酶切產(chǎn)物D.圖中被（W切的DNA片段是單鏈DNA （2019江蘇卷，16）2.下列生物技術(shù)操作對遺傳物質(zhì)的改造，不會(huì)遺傳給子代的是（）將胰島素基因表達(dá)載體轉(zhuǎn)入大腸桿萌

2、，篩選獲得基因工程萌A. 將花青素代謝基因?qū)胫参矬w細(xì)胞，經(jīng)組織培養(yǎng)獲得花色變異的植株將腸乳糖酶基因?qū)肽膛Ｊ芫?，培育出產(chǎn)低乳糖牛乳的奶牛B. 將腺昔酸脫氨酶基因轉(zhuǎn)入白細(xì)胞后回輸患者體內(nèi)，進(jìn)行基因治療 （2019天津卷，9） 3.B基因存在丁水稻基因組中，其僅在體細(xì)胞（2）和精子中正常表達(dá),但在卵細(xì)胞中不轉(zhuǎn)錄。為研究B基因表達(dá)對卵細(xì)胞的影響，設(shè)計(jì)了如下實(shí)驗(yàn)。水稻B基因編碼蛋白的序列血基因卡那毒素抗性基因終止子潮篝素 抗性基因B-&融合基因二T-DNAN表達(dá)T-DNA農(nóng)桿菌U水愈組稻傷織鑒定玲選水稻幼苗鑒定篇選可在水稻卵細(xì)胞中啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄的啟動(dòng)子轉(zhuǎn)基因植株據(jù)圖回答:答案以及解析1. 答案：

3、D解析：本題結(jié)合電泳圖譜考查基因工程中限制酶的相關(guān)知識，包括限制酶的作用特點(diǎn)、功能、 作用對象等。不同的限制酶識別序列不同，A項(xiàng)正確；限制酶切割的產(chǎn)物可用于構(gòu)建重組 DNA, B項(xiàng)正確；泳道顯示四個(gè)條帶，是SWI處理后的酶切產(chǎn)物的電泳結(jié)果，泳道顯 示三個(gè)條帶，是X/??！咎幚砗蟮拿盖挟a(chǎn)物的電泳結(jié)果，C項(xiàng)正確：限制酶的作用特點(diǎn)是識別 特定DNA序列，并在DNA兩條鏈特定部位切割產(chǎn)生黏性末端或平末端，D項(xiàng)錯(cuò)誤。2. 答案：D解析：將腺昔酸脫氨前基因轉(zhuǎn)入白細(xì)胞后回輸患者體內(nèi)，進(jìn)行基因治療，該基因只是導(dǎo)入了 體細(xì)胞中，所以不遺傳。其余三項(xiàng)均可以遺傳給子代。故選D。3. 答案：（1） D（2）精子：cD

4、NA（3）;（4）BCD（5）B基因表達(dá)能使卵細(xì)胞不經(jīng)受精直接發(fā)育成胚解析：（1）B基因不能在水稻卵細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄，若含B基因的染色體缺失或B基因突變，這 種變異只發(fā)生在少數(shù)細(xì)胞中，那么大部分的卵細(xì)胞中仍會(huì)有B基因的轉(zhuǎn)錄，A、C錯(cuò)誤；DNA 聚合酶能催化DNA的合成，若失活則不能進(jìn)行DNA的復(fù)制，不會(huì)影響轉(zhuǎn)錄過程，B錯(cuò)誤; 若B基因啟動(dòng)子無法啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄，則轉(zhuǎn)錄過程無法進(jìn)行，D正確。（2）若要獲得B基因編碼蛋白的序列，可通過建立部分基因文庫（cDNA文庫）的方法， 從含有B基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNA的細(xì)胞中（即體細(xì)胞或精子中）獲取總RNA。（3）過程為重組質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌，過程為含有重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌侵染水稻細(xì)

5、胞，過程 中的T-DNA能整合到植物的染色體DNA上；過程在培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)基中應(yīng)加入R那霉素, 用于篩選含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌，不含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌由于沒有卡那霉素抗性基因，因此不 能在含卡那霉素的培養(yǎng)基中生長。（4）獲得轉(zhuǎn)基因植株的過程中，鑒定篩選方式有DNA分子雜交法、DNA-RNA分子雜交法、 抗原一抗體雜交法、個(gè)體接種實(shí)驗(yàn)，故可以用B基因中編碼蛋白的序列制備探針進(jìn)行DNA 分子雜交，因轉(zhuǎn)基因植株中只含有B基因中編碼蛋白的序列，故不能選用隨機(jī)斷裂的B基 因制備探針，A錯(cuò)誤，C正確；轉(zhuǎn)基因植株中含有Lw基因所有序列，故可以匕血基因?yàn)槟?板設(shè)計(jì)探針，B正確；熒光素是一種吸附指示劑，可對進(jìn)入細(xì)胞中的外

6、來物質(zhì)進(jìn)行檢測，若 卵細(xì)胞中含有外源基因片段即目的基因片段，則與其連接的基因表達(dá)產(chǎn)生的熒光素酶能 催化熒光素產(chǎn)生熒光，卵細(xì)胞就會(huì)發(fā)出熒光，D正確。（5）由題意可知，轉(zhuǎn)基因植株未受精的卵細(xì)胞"J.發(fā)育成胚，而正常植株未受精的卵細(xì)胞不 會(huì)發(fā)育為胚，可知轉(zhuǎn)入的B基因表達(dá)能使卵細(xì)胞不經(jīng)受精直接發(fā)育成胚。4. 答案：（1）限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶；轉(zhuǎn)化（2）RNA聚合酶與啟動(dòng)子的識別和結(jié)合；不發(fā)生；編碼直鏈淀粉合成酶的堿基序列中不含 啟動(dòng)子（3）逆轉(zhuǎn)錄（或反轉(zhuǎn)錄）：引物是根據(jù)Wx基因的一段己知序列設(shè)計(jì)合成的（或引物能與 阪基因的cDNA特異性結(jié)合）（4）品系3：品系3的Wv mRNA最少

7、，控制合成的直鏈淀粉合成酶最少，直鏈淀粉合成 量最少，糯性最強(qiáng)解析：（1）限制性內(nèi)切核酸酶能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定核苜酸序列，并且使每 一條鏈中特定部位的兩個(gè)核昔酸之間的磷酸二酯鍵斷開；DNA連接酶能將DNA片段拼接 起來。將能表達(dá)出基因編輯系統(tǒng)的DNA序列插入Ti質(zhì)粒構(gòu)建重組載體時(shí)，需要限制性內(nèi) 切核酸酶和DNA連接酶的參與。轉(zhuǎn)化是指目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)咆內(nèi)維 持穩(wěn)定和表達(dá)的過程。（2）啟動(dòng)子是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出 inRNA<. Wx基因啟動(dòng)子序列的改變影響了 RNA聚合酶與啟動(dòng)子的識別和結(jié)合，從而改變了 Wx基因的轉(zhuǎn)錄水平，使直鏈淀

8、粉合成酶基因的表達(dá)量改變。根據(jù)題干信息可知，基因編輯 系統(tǒng)是對啟動(dòng)子序列進(jìn)行定點(diǎn)編輯，由于編碼直鏈淀粉合成酶的堿基序列中不含啟動(dòng)于，所 以與野生型水稻相比，3個(gè)突變品系中Wx基因控制合成的直鏈淀粉合成酶的氨基酸序列沒 有發(fā)生變化。（3）用提取的各品系胚乳中的總RNA合成總cDNA的過程為逆轉(zhuǎn)錄，需要逆轉(zhuǎn)錄酶的參 與。由于引物能與Wx基因的cDNA特異性結(jié)合，故通過PCR技術(shù)可在總cDNA中專一性 地?cái)U(kuò)增出Wt基因的cDNAo（4）mRNA是蛋白質(zhì)合成的直接模板，根據(jù)題圖分析可知，4個(gè)品系中品系3的即t mRNA 量最低，控制合成的直鏈淀粉合成酶最少，直鏈淀粉合成量最少，糯性最強(qiáng)。5. 答案：（

9、1）限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶；顯微注射；體外培養(yǎng)；胚胎移植（2）性別、年齡（3）相同；兩種上皮細(xì)胞都是體細(xì)胞，且來源于同一個(gè)受精卵（4）體外受精、胚胎移植解析：（1）步驟是基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程，該過程需要使用的工具酶有限制性核酸內(nèi) 切酶（限制酶）和DNA連接酶，用限制酶分別切割載體和目的基因，用DNA連接酶將目 的基因和載體連接起來。步驟和所代表的操作分別是顯微注射和體外培養(yǎng)。步驟是將 早期胚胎植入代孕母體內(nèi)，即胚胎移植。（2）乳腺生物反應(yīng)器需要處于育齡的雌性動(dòng)物，與乳腺生物反應(yīng)器相比，用膀胱生物反應(yīng) 器生產(chǎn)W的優(yōu)勢在于不受轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的性別和年齡的服制。（3）乳腺上皮細(xì)胞和膀胱上皮細(xì)胞

10、都是體細(xì)胞。一般來說，在同一動(dòng)物個(gè)體中，體細(xì)胞都 是由同個(gè)受精卵分裂、分化而來的，細(xì)胞在分裂、分化過程中，細(xì)胞核中染色體DNA所 含的遺傳信息一般是不變的，因此兩種上皮細(xì)胞的染色體DNA所含的遺傳信息相同。（4）據(jù)題述流程可知，胚胎工程中所用到的主要技術(shù)有體外受精、早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移 植等。6. 答案：（1）基因組文庫；cDNA文庫（2）解旋酶；加熱至90-95°C；氫鍵（3）7hg酶熱穩(wěn)定性高，而大腸桿菌DNA聚合酶在高溫下會(huì)失活解析：（1）基因工程中的基因文庫包括基因組文庫和cDNA文庫。（2）DNA解旋破壞的是氫鍵，但體內(nèi)和體外解旋的方式不同，前者依靠解旋酶，后者依靠 加熱至

11、90-95°C的高溫。（3）Taq醵又稱熱穩(wěn)定DNA聚合酶，與大腸桿菌體內(nèi)提取的DNA聚合（W相比，Tag懈熱 穩(wěn)定性好，高溫下不易失活。7. 答案：（1）體外重組的質(zhì)?？梢赃M(jìn)入受體細(xì)胞；真核生物基因可在原核細(xì)胞中表達(dá)（2）轉(zhuǎn)化；外殼蛋白（或噬菌體蛋白）；細(xì)菌（3）蛋白酶缺陷型；蛋白酶解析：（1）兩位科學(xué)家將非洲爪蟾核糖體蛋白基因與質(zhì)粒重組后導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞中并進(jìn) 行了表達(dá)，因此，該研究可以證明：質(zhì)?？梢宰鳛檩d體，真核細(xì)胞的基因在原核細(xì)胞中也可 以表達(dá)（不同生物共用一套密碼子）、體外重組的質(zhì)?？梢赃M(jìn)入受體細(xì)胞等。（2）目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程稱為轉(zhuǎn)

12、化，將質(zhì) 粒導(dǎo)入大腸桿菌時(shí)，常用的轉(zhuǎn)化方法是首先用Ca2+處理大腸桿萌細(xì)胞，使其處于感受態(tài)。 噬菌體DNA沒有侵染能力，體外重組的噬菌體DNA通常需與外殼蛋白組裝成完整噬菌體 才能完成侵染過程。噬菌體多寄生在細(xì)菌中，但不能寄生在心肌細(xì)胞和葉肉細(xì)胞中。（3）若要使蛋白質(zhì)不被降解，則大腸桿菌體內(nèi)不能存在蛋白酶，因此，實(shí)驗(yàn)中應(yīng)選用蛋白 酶缺陷型的大腸桿菌作為受體細(xì)胞。同理，在蛋白質(zhì)純化過程中，也不能使蛋白質(zhì)降解，因 此，應(yīng)添加蛋白酶抑制劑。8. 答案：（1）平（2）胸腺嗜味（T） ； DNA連接（3）B； A類菌落含有PO； C類菌落未轉(zhuǎn)入質(zhì)粒（4）乙、丙；目的基因反向連接解析：（1） EcoRV酶

13、切位點(diǎn)在酶所識別序列的中心軸線處，產(chǎn)生的是平末端。（2）DNA連接酶對平末端的連接效率較低，因此通常要將平末端改造成黏性末端后再進(jìn)行 連接。由于目的基因片段的兩端各自帶一個(gè)腺嘿吟脫氧核昔酸，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則，處 理后的質(zhì)粒兩端需要各添加一個(gè)堿基為胸腺嗜嚏的脫氧核甘酸;要將處理后的質(zhì)粒與目的基 因連接起來，需要用DNA連接酶。（3）由于四環(huán)素抗性基因中含有EcoR V酶識別的序列及切割位點(diǎn)，所以形成的重組質(zhì)粒 中四環(huán)素抗性基因已經(jīng)被破壞，而氨節(jié)育霉素抗性基因正常。根據(jù)表中結(jié)果可知，A【新落抗 氨茉青霉素和四環(huán)素，說明A菌落中導(dǎo)入的是P0質(zhì)粒：B菌落抗氨節(jié)青霉素而不抗四環(huán)素, 說明B菌落中導(dǎo)入

14、的是重組質(zhì)粒；C菌落既不抗氨茉青霉素，也不抗四環(huán)素，說明C菌落 中沒有導(dǎo)入質(zhì)粒。（4）由于處理后的P0質(zhì)粒的兩個(gè)末端都含一個(gè)胸腺嗜喧的脫氧核昔酸，而目的基因片段 的兩端各自帶一個(gè)腺嗦吟脫氧核苜酸，所以目的基因在和P0質(zhì)粒連接時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)兩種情 況：正向連接和反向連接。分析圖2可知，理論上可以選擇的引物組合有甲和丙、乙和丙兩 種情況。如果選擇甲和丙這對引物，則無論目的基因是否正確插入，擴(kuò)增的片段都是50 bp+300 bp+100 bp=450 bp,不符合要求；如果選擇乙和丙這對引物，正向連接和反向連接后 所得結(jié)果不同，所以應(yīng)選擇乙和丙這對引物進(jìn)行PCR鑒定。如果目的基因和P0質(zhì)粒反向連 接，

15、此時(shí)若加入引物甲和乙，則可以擴(kuò)增出300 bp+100 bp=400 bp的片段。9. 答案：（1）限制性內(nèi)切核酸（或限制）；核苜酸序列（2）磷酸二酯鍵；DNA單鏈；以DNA為模板的DNA鏈的延伸（3）B 解析：（1）根據(jù)題圖可知，步驟I是獲取目的DNA片段，所用的酶EcoR I是一種限制酶, 其能識別特定的核昔酸序列，并使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核昔酸之間的磷酸二酯鍵斷 開。（2）步驟II是將目的DNA片段連接成環(huán)狀，其中DNA連接酶的作用是催化相鄰核昔酸之 間的3七羥基和5，-磷酸間形成磷酸二酯鍵。PCR循環(huán)中，升高溫度到95。是為了打開氫鍵 使雙鏈解旋，獲得DNA單鏈，7hq DNA聚合

16、酶的作用是催化游離的脫氧核甘酸連接到引物 3,端，合成DNA子鏈。（3）引物的作用是使DNA聚合酶能夠從引物的3,端開始延伸DNA子鏈，因?yàn)镈NA的合 成方向總是從子鏈的5,端向3,端延伸，故為擴(kuò)增未知序列，選擇的與模板鏈相結(jié)合的引物應(yīng) 為 5'-TCATGAGCGCATAGTT-3'（引物）和 5'-GCAATGCGTAGCCTC3'（引物）。（4）分析題意可知，片段F的兩端為限制酶EcoR I切割后產(chǎn)生的黏性末端，因此其5,端序 列應(yīng)為AATT-, 3,端序列應(yīng)為-AATT, B正確。10. 答案：（l）EI和E4；甲的完整；甲和載體正確連接（2）轉(zhuǎn)錄：翻譯

17、（3）細(xì)胞核；去核卵母細(xì)胞（4）核 DNA解析：本題主要考查基因工程和細(xì)咆工程的相關(guān)知識。（1）據(jù)圖示信息分析：將L1-GFP融合基因（甲）插入質(zhì)粒時(shí)使用酶E1和E4進(jìn)行酶切， 既能保證L-GFP融合基因的完整，又能保證LI-GFP融合基因與載體的正確連接。（2）目的基因在受體細(xì)胞中的表達(dá)包括轉(zhuǎn)錄和翻譯兩個(gè)過程。（3）將體外培養(yǎng)的含有目的基因的動(dòng)物體細(xì)胞核移入該動(dòng)物的去核卵母細(xì)胞中，經(jīng)過體外 胚胎培養(yǎng)、胚胎移植等技術(shù)可獲得轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。（4）檢測目的基因是否存在于克隆牛的不同組織細(xì)胞中，采用PCR技術(shù)鑒定時(shí)，應(yīng)以該牛 不同組織細(xì)胞中的核DNA作為PCR模板。11. 答案：基因組DNA（2）5，；

18、使DNA片段能定向插入表達(dá)載體，減少自連；（4）8； 13（5）pH 為 8.5,緩沖液為 50 mmol/L Tris-HCl解析：本題考查基因工程的相關(guān)知識。(1) 利用PCR技術(shù)擴(kuò)增a-淀粉酶基因前，需先獲得細(xì)菌的基因組DNA。(2) 構(gòu)建重組DNA分子時(shí)，需用限制性核酸內(nèi)切酶處理目的基因和載體，故需要在引物 的5,端添加限制性酶識別序列，且常在兩條引物上設(shè)計(jì)添加不同的限制性酶切位點(diǎn)，這樣可 以使DNA片段按照定方向插入表達(dá)載體，防止目的基因或載體自身的黏性末端之間相互 連接以及目的基因與載體反向連接。(3) 利用PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增時(shí)，退火溫度的設(shè)定是成敗的關(guān)鍵，退火溫度過高會(huì)使引物無

19、法與模板的堿基配對，所以退火溫度的設(shè)定與引物有關(guān)；延伸時(shí)間的設(shè)定與擴(kuò)增片段的長度 有關(guān)。(4) 密碼子由mRNA上相鄰的3個(gè)堿基組成，所以該片段的24個(gè)堿基包含8個(gè)密碼子。 該片段后面的第-個(gè)堿基為U,所以后面的密碼子最多可能有4x4=16 (種),根據(jù)題干信 息及題中給出的mRNA序列可知，虛線框后第一個(gè)密碼子不可能是終止密碼子，所以實(shí)際 最多有13種密碼子。(5) 由表格數(shù)據(jù)可知，該a-淀粉酶活性最高的條件是pH為8.5,緩沖液為5()mmol/LTris-HClo12.答案：(l)PCR；多肽(或蛋白質(zhì))載體；總RNA(2) 非天然氨基酸(Uaa) ； D細(xì)胞解析：本題考查基因工程的基本

20、操作程序以及免疫等知識。(1) 在基因工程中，通過逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的DNA可以通過PCR技術(shù)擴(kuò)增。若基因內(nèi)個(gè)別編碼 氨基酸的序列被替換成編碼終止密碼子的序列，則會(huì)導(dǎo)致翻譯時(shí)肽鏈合成提前終止，因此改 造后的基因表達(dá)時(shí)不能合成完整長度的多肽鏈。(2) 將合成特殊tRNA的基因?qū)胨拗骷?xì)咆前需構(gòu)建基因表達(dá)載體，因此需將該基因與載 體連接。要鑒定宿主細(xì)胞中tRNA基因是否導(dǎo)入，需提取宿主細(xì)胞的總RNA,用標(biāo)記的目 的基因作探針，進(jìn)行分子雜交，若出現(xiàn)雜交帶，說明【RNA基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生了 tRNAo(3) 據(jù)(2)中信息，設(shè)計(jì)的特殊IRNA基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的tRNA能攜帶一個(gè)非天然氨基酸， 因此需將宿主細(xì)胞在含有這種

21、非天然氨基酸的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，以便該特殊IRNA基因轉(zhuǎn) 錄產(chǎn)生的tRNA能夠與非天然氨基酸結(jié)合。特殊IRNA基因轉(zhuǎn)錄需要RNA聚合酶參與，識 別其啟動(dòng)子的酶是宿主的RNA聚合酶。（4）病毒活疫苗能夠侵入宿主細(xì)胞，引起機(jī)體的細(xì)胞免疫，因此與滅活疫苗相比，病毒活 疫苗的優(yōu)勢之一是其可以引起細(xì)胞免疫，增強(qiáng)免疫保護(hù)效果。（1）B基因在水稻卵細(xì)胞中不轉(zhuǎn)錄，推測其可能的原因是卵細(xì)胞中 （單選）。A.含B基因的染色體缺失B.DNA聚合酶失活C.B基因發(fā)生基因突變D.B基因的啟動(dòng)子無法啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄（2）從水稻體細(xì)胞或中提取總RNA,構(gòu)建文庫，進(jìn)而獲得B基因編碼蛋白的序列。將該序列與基因（表達(dá)的熒光素酶能催化熒光

22、素產(chǎn)生熒光）連接成融合基因（表達(dá)的蛋白質(zhì)能保留兩種蛋白質(zhì)各自的功能），然后構(gòu)建重組表達(dá)載體。（3）在過程、轉(zhuǎn)化篩選時(shí)，過程中T-DNA整合到受體細(xì)胞染色體DNA上，過程在培養(yǎng)基中應(yīng)加入卡那霉素。（4）獲得轉(zhuǎn)基因植株過程中，以下鑒定篩選方式正確的是 （多選）。A. 將隨機(jī)斷裂的B基因片段制備成探針進(jìn)行DNA分子雜交以Luc基因?yàn)槟０逶O(shè)計(jì)探針進(jìn)行DNA分子雜交B. 以B基因編碼蛋白的序列為模板設(shè)計(jì)探針與從卵細(xì)胞提取的mRNA雜交檢測加入熒光素的卵細(xì)胞中是否發(fā)出熒光（5）從轉(zhuǎn)基因植株未成熟種子中分離出胚，觀察到細(xì)胞內(nèi)僅含一個(gè)染色體組，判定該胚是 由未受精的卵細(xì)咆發(fā)育形成的，而一般情況下水稻卵細(xì)胞在未

23、受精時(shí)不進(jìn)行發(fā)育，由此表明（2020,全國新高考I卷，25） 4.水稻胚乳中含直鏈淀粉和支鏈淀粉，直鏈淀粉所占比例越 小糯性越強(qiáng)?？蒲腥藛T將能表達(dá)出基因編輯系統(tǒng)的DNA序列轉(zhuǎn)入水稻，實(shí)現(xiàn)了對直鏈淀粉 合成酶基因（也1基因）啟動(dòng)子序列的定點(diǎn)編輯，從而獲得了 3個(gè)突變品系。（1）將能表達(dá)出基因編輯系統(tǒng)的DNA序列插入Ti質(zhì)粒構(gòu)建重組載體時(shí)，所需的皆是，重組載體進(jìn)入水稻細(xì)胞并在細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程稱為。（2）根據(jù)啟動(dòng)子的作用推測，Wx基因啟動(dòng)子序列的改變影響了,從而改變了 Wx基因的轉(zhuǎn)錄水平。與野生型水稻相比，3個(gè)突變品系中心基因控制合成的直鏈淀粉合成酶 的氨基酸序列（填“發(fā)生"或“

24、不發(fā)生”）改變，原因是。（3）為檢測啟動(dòng)子變化對I四基因表達(dá)的影響，科研人員需要檢測1四基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的mRNA （1四mRNA）的量。檢測時(shí)分別提取各品系胚乳中的總RNA,經(jīng)過程獲得總cDNA。通過PCR技術(shù)可在總cDNA中專一性的擴(kuò)增出I吸基因的cDNA,原因是（4）各品系I誑mRNA量的檢洲結(jié)果如圖所示，據(jù)圖推測糯性最強(qiáng)的品系為,原因是:1.51.00.5野生型品系1品系2品系3（2020全國III卷，38） 5.W是一種具有特定功能的人體蛋白質(zhì)。某研究小組擬仿照制備乳腺生物反應(yīng)器的研究思路，制備一種膀胱生物反應(yīng)器來得W,基本過程如圖所示。腺生物反應(yīng)器的研究思路，制備一種膀胱生物反應(yīng)器來得

25、W,基本過程如圖所示?；卮鸩妨袉栴}：（1）步驟中需要使用的工具酶有。步驟和所代表的操作分別是和。步驟稱為。（2）與乳腺生物反應(yīng)器相比，用膀胱生物反應(yīng)器生產(chǎn)W的優(yōu)勢在于不受轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的 （答出2點(diǎn)即可）的限制。（3）-般來說，在同一動(dòng)物個(gè)體中，乳腺上皮細(xì)胞與膀胱上皮細(xì)胞的細(xì)胞核中染色體DNA所含的遺傳信息 （填“相同”或“不同"），原因是°（4）從上述流程可知，制備生物反應(yīng)器涉及胚胎工程，胚胎工程中所用到的主要技術(shù)有（答出2點(diǎn)即可）。（2019全國I卷，38） 6.基因工程中可以通過PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因。回答下列問題。（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因

26、文庫中獲得?；蛭膸彀ê?。（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了 DNA雙鏈分子中的°（3）目前在PCR反應(yīng)中使用酶而不使用大腸桿菌DNA聚合酶的主要原因是（2018全國I卷,38） 7.回答下列問題:（1）博耶（H.Boyer）和科恩（S.Coben）將非洲爪蟾核糖體蛋白基因與質(zhì)粒重組后導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞中進(jìn)行了表達(dá)，該研究除證明了質(zhì)粒可以作為載體外，還證明了 （答出兩點(diǎn)即可）o（2）體外重組的質(zhì)?？赏ㄟ^Ca2+參與的方法導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞；而體外重組

27、的噬菌體DNA通常需與組裝成完整噬菌體后，才能通過侵染的方法將重組的噬菌體DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞，在細(xì)菌、心肌細(xì)胞、葉肉細(xì)胞中，可作為重組噬菌體宿主細(xì)胞的是（3）真核生物基因（目的基因）在大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)表達(dá)時(shí)，表達(dá)出的蛋白質(zhì)可能會(huì)被降解, 為防止蛋白質(zhì)被降解，在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)選用的大腸桿菌作為受體細(xì)胞，在蛋白質(zhì)純化的過程中應(yīng)添加的抑制劑。（2019江蘇卷，33）8.圖I是某基因工程中構(gòu)建重組質(zhì)粒的過程示意圖，載體質(zhì)粒P0具有四環(huán)素抗性基因（*）和氨節(jié)青霉素抗性基因Camp1）。請回答下列問題：圖1.GATl ATC（1）EcoR V酶切位點(diǎn)為 E八，EcoR V酶切出來的線性載體Pl為.CTA TAG.

28、末端。（2）用Taq DNA聚合能進(jìn)行PCR擴(kuò)增獲得的目的基因片段，其兩端各自帶有一個(gè)腺喋吟脫氧核苜酸。載體PI用酶處理，在兩端各添加了一個(gè)堿基為的脫氧核苜酸，形成P2； P2和目的基因片段在酶作用下，形成重組質(zhì)粒P3。（3）為篩選出含有重組質(zhì)粒P3的菌落，采用含有不同抗生素的平板進(jìn)行篩選，得到A、B、C三類菌落，其生長情況如下表（“ + ”代表生長，代表不生長）。根據(jù)表中結(jié)果判斷, 應(yīng)選擇的菌落是 （填表中字母）類，另外兩類菌落質(zhì)粒導(dǎo)入情況分別是、f'*、菌落類型平板類型ABC無抗生素+氫苯青霉素+-四環(huán)素+.-氨節(jié)青霉素+四環(huán)素+.-（4）為鑒定篩選出的菌落中是否含有正確插入目的基

29、因的重組質(zhì)粒，擬設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR鑒定。圖2所示為甲、乙、丙3條引物在正確重組質(zhì)粒中的相應(yīng)位置，PCR鑒定時(shí)應(yīng)選擇的一對引物是。某學(xué)生嘗試用圖中另外一對引物從某一菌落的質(zhì)粒中擴(kuò)增出了400 bp片段，原因是o（2020江蘇卷，33）9.如果己知一小段DNA的序列，可采用PCR的方法，簡捷地分析出己知序列兩側(cè)的序列，具體流程如圖（以EcoR 酶切為例）：I KW混合的DNA片段未知序列染色體DNA GA ATTC C TTAA；qJ未如序列3'5'環(huán)狀l）、Ani擴(kuò)增| 7曲I）、A聚合的II連接1 DNA連接醵 已知序列PCR引物EcoRW灣序、分析PCR產(chǎn)物3,片段F的完整序

30、列請據(jù)圖回答問題:（I）步驟【用的EcoR I是種.酶,它通過識別特定的.切割特定位點(diǎn)。（2）步驟【用的DNA連接酶催化相鄰核昔酸之間的3，-羥基與5七磷酸間形成.PCR循環(huán)中，升溫到95 °C是為了獲得.;Taq DNA聚合酶的作用是催化（3）若如表所列為已知的DNA序列和設(shè)計(jì)的一些PCR引物，步驟III選用的PCR引物必須是 （從引物®中選擇，填編號）。DNA序列（虛線處省略了部分核昔酸序列）己知序列5Z -AACTATGCGCTC ATGA-GCAATGCGTAGCCTCT-3' HI 1 Hill Hill Illi III IIIIIH 3'-TT

31、GATACGCGAGTACTCGT TACGCATCGGAGA-5 ,PCR引物 5 七 AACTATGCGCTCATGA-3， 5,-GCAATGCGTAGCCTCT-3,(3)5,-AGAGGCTACGCATTGC-3, 5'-TCATGAGCGCATAGTT-3'（4）對PCR產(chǎn)物測序，經(jīng)分析得到了片段F的完整序列。卜冽DNA單鏈序列中（虛線處省略了部分核甘酸序列)，結(jié)果正確的是。A.5' - AACTATGCG -AGCCCTT -3' B.5' _ AATTCCATG CTGAATT -3'C. 5' - GCAATGCGT T

32、CGGGAA - 3' D.5' _ TTGATACGC CGAGTAC - 3'（2018全國II卷，38） 10.某種熒光蛋白（GFP）在紫外光或藍(lán)光激發(fā)下會(huì)發(fā)出綠色熒光， 這-特性可用于檢測細(xì)胞中目的基因的表達(dá)。某科研團(tuán)隊(duì)將某種病毒的外殼蛋白（L1）基 因連接在GPP基因的5,末端，獲得了 L1-GFP融合基因（簡稱為甲），并將其插入質(zhì)粒P0, 構(gòu)建了真核表達(dá)載體P】，其部分結(jié)構(gòu)和酶切位點(diǎn)的示意圖如卜，圖中E1E4四種限制酶產(chǎn) 生的黏性末端各不相同。啟動(dòng)子L基因CFP基因終止子11 '"t 11問答下列問題：（1）據(jù)圖推斷，該團(tuán)隊(duì)在將甲插入質(zhì)粒P

33、0時(shí)，使用了兩種限制酶，這兩種酶是。使用這兩種酶進(jìn)行酶切是為了保證，也是為了保證。（2）將P1轉(zhuǎn)入體外培養(yǎng)的牛皮膚細(xì)胞后，若在該細(xì)胞中觀察到了綠色熒光，則說明ZJ基因在牛的皮膚細(xì)胞中完成了和過程。（3）為了獲得含有甲的牛，該團(tuán)隊(duì)需要做的工作包括：將能夠產(chǎn)生綠色熒光細(xì)胞的移入牛的中、體外培養(yǎng)、胚胎移植等。（4）為了檢測甲是否存在于克隆牛的不同組織細(xì)胞中，某同學(xué)用PCR方法進(jìn)行鑒定，在鑒定時(shí)應(yīng)分別以該牛不同組織細(xì)胞中的（填“niRNA” “總RNA”或“核DNA” ）作為PCR模板。（2018江蘇卷，32） 11.為生產(chǎn)具有特定性能的a-淀粉酶，研究人員從某種海洋細(xì)菌中克隆 了 a-淀粉酶基因（1 656個(gè)堿基對），利用基因工程大量制備a-淀粉酶，實(shí)驗(yàn)流程如圖。請回 答下列問題：利用PCR技術(shù)擴(kuò)增Q-淀粉酶基因前，需先獲得細(xì)菌的o(1) 為了便于擴(kuò)增的DNA片段與表達(dá)載體連接，