實(shí)驗(yàn)一 還原糖和總糖含量的測(cè)定

1、 實(shí)驗(yàn)一 還原糖和總糖含量的測(cè)定（3,5-二硝基水楊酸比色法）一目的1.掌握還原糖定量測(cè)定的基本原理；2.學(xué)習(xí)比色定糖法的基本操作；3.熟悉分光光度計(jì)的使用方法。二原理 在堿性的條件下，還原糖與3,5-二硝基水楊酸共熱，3,5-二硝基水楊酸被還原為3-氨基-5-硝基水楊酸（棕紅色物質(zhì)）,還原糖的量與棕紅色物質(zhì)顏色深淺的程度成一定的比例關(guān)系，在540nm波長(zhǎng)下測(cè)定棕紅色物質(zhì)的消光值，查對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算，便可分別樣品中還原糖和總糖的含量。三儀器.試劑和材料1.儀器：（1）25ml刻度試管 （2）玻璃漏斗 （3）三角瓶 （4）100ml容量瓶3個(gè) （5）刻度吸管（1ml,2ml,3ml） （6）恒溫

2、水浴 （7）沸水浴 （8）電子天平 （9）分光光度計(jì)2.試劑；（1）1mg/ml葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液 （2）3,5-二硝基水楊酸試劑 （3）碘碘化鉀溶液 （4）酚酞指示劑 （5）6ml/L HCI （6）6ml/L NaOH3.材料：食用面粉四操作步驟1.制作葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線：取7支25ml刻度試管，編號(hào)，按如下操作。操作項(xiàng)目 管 號(hào)0 1 2 3 4 5 6葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液（ml）0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2蒸餾水（ml）2 1.8 1.6 1.4 1.2 1 0.8 3,5-二硝基水楊酸（ml）1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5吸光度（A540）0.000 0.

3、081 0.217 0.331 0.467 0.575 0.648 將各管搖勻，在沸水中加熱5min，取出后立即放入盛有冷水的燒杯中冷卻至室溫，再以蒸餾水定容至25min，用試管塞塞住試管口，顛倒混勻。在540nm波長(zhǎng)下，用0號(hào)試管調(diào)零，分別讀取16號(hào)管的吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)，葡萄樣毫克數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.樣品中還原糖和總糖含量的測(cè)定（1）樣品中還原糖的提?。簻?zhǔn)確稱取3g使用面粉，放在100ml三角瓶中，先以少量蒸餾水調(diào)成糊狀，然后加50ml蒸餾水，攪勻，置于50恒溫水中保溫20min，使還原糖浸出。過(guò)濾，用20ml蒸餾水定容至刻度，混勻，作為還原糖待測(cè)液。（2）樣品中總糖的水解

4、和提?。簻?zhǔn)確稱取1g使用面粉。放在100ml的三角瓶中，加入10ml 6mol/L HCI及15ml蒸餾水，置于水浴中加熱水解30min。待三角瓶中水解液冷卻后，加入1滴酚酞指示劑。以6mol/LNaOH中和至微紅色，過(guò)濾，再用少量蒸餾水沖洗三角瓶及濾紙，將濾紙全部收集砸100ml的容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，混勻。精確吸取10ml定容過(guò)的水解液，移入另一100ml的容量瓶中，以水稀釋定容，混勻，作為總糖待測(cè)液。（3）顯色和比色，取4支25ml刻度試管，編號(hào)，按下表的量操作。操作項(xiàng)目還原糖測(cè)定管號(hào)總糖測(cè)定管號(hào)還原糖待測(cè)液（ml）1100總糖待測(cè)液（ml）0011蒸餾水（ml）00113,5-二硝基水楊酸（ml）1.51.51.51.5吸光度（A540）0.3030.2980.4100.414吸光度（A540）平均值0.301 0.421五、注意事項(xiàng)：標(biāo)準(zhǔn)曲線制作與樣品含糖量測(cè)定應(yīng)同時(shí)進(jìn)行，一起顯色和比色。六、結(jié)果處理（1）由管、吸光度平均值在葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的還原糖毫克數(shù)為：0.167mg由管、吸光度平均值在葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的還原糖毫克數(shù)為：0.235mg（2）計(jì)算樣品中還原糖和總糖的百分含量如下： 還原糖=0.557 總糖=0.235七、問(wèn)題討