生物起搏種子細(xì)胞篩選及HCN通道電藥理學(xué)實驗研究課件ppt課件

1、小園形、亮的細(xì)胞從組織移植塊中爬出箭頭所示小園形、亮的細(xì)胞從組織移植塊中爬出箭頭所示200200 左圖，分選前流式細(xì)胞儀檢測培育細(xì)胞左圖，分選前流式細(xì)胞儀檢測培育細(xì)胞c-kit陽性率陽性率右圖，用流式細(xì)胞儀分選經(jīng)右圖，用流式細(xì)胞儀分選經(jīng) c-kit 標(biāo)志的細(xì)胞標(biāo)志的細(xì)胞流式細(xì)胞儀鑒定分選后流式細(xì)胞儀鑒定分選后CD34、CD45的陽性率的陽性率分選后的單個細(xì)胞左圖，培育后簇集式增殖、心球樣細(xì)胞團(tuán)構(gòu)成右圖分選后的單個細(xì)胞左圖，培育后簇集式增殖、心球樣細(xì)胞團(tuán)構(gòu)成右圖200在光學(xué)顯微鏡下在光學(xué)顯微鏡下(左圖左圖)、熒光顯微鏡下右圖察看剛分選、熒光顯微鏡下右圖察看剛分選的同一批的同一批c-kit+細(xì)胞細(xì)

2、胞400051015200100000200000300000心尖部細(xì)胞心尖部細(xì)胞心臟中部細(xì)胞心臟中部細(xì)胞心房 細(xì)胞心房 細(xì)胞 ? ?時間 (d)細(xì) 胞數(shù) 量051015200100000200000300000雌性雄性時間 (d)細(xì) 胞 數(shù) 量分選后分選后4周用抗周用抗cTnI, SMA and CD31抗體檢測培育細(xì)胞抗體檢測培育細(xì)胞免疫表型免疫表型A,300; B-C,200A AC CB B0.00.51.01.5GATA-4HCN 2HCN 4at week 2at week 4at week 8 * *#relative mRNA expressionRT-PCR方法分析分選細(xì)胞不

3、同培育時間的方法分析分選細(xì)胞不同培育時間的GATA-4, HCN2和和HCN4的的mRNA表達(dá)表達(dá) * P 0.05, # P 0.01, 培育培育8周組周組 vs 培育培育4周組周組 用抗用抗cTnI, GATA4抗體檢測經(jīng)抗體檢測經(jīng)5-Aza誘導(dǎo)后誘導(dǎo)后CSCs分化的免疫表型分化的免疫表型A,200; B,400用抗用抗HCN4抗體檢測經(jīng)抗體檢測經(jīng)5-Aza誘導(dǎo)后誘導(dǎo)后CSCs分化細(xì)胞表達(dá)分化細(xì)胞表達(dá)HCN4蛋白情況蛋白情況A,400; B,200不同濃度不同濃度5-aza誘導(dǎo)后的細(xì)胞在誘導(dǎo)后的細(xì)胞在4周時表達(dá)周時表達(dá)GATA-4, cTnI和和HCN4蛋白情況蛋白情況 . 10uM組與前

4、兩組比較，組與前兩組比較， # P 0.055-Aza誘導(dǎo)濃度誘導(dǎo)濃度010203040cTnIGATA4HCN405uM10uM#熒光 染 色 陽性 率RT-PCR技術(shù)分析在不同濃度技術(shù)分析在不同濃度5-aza誘導(dǎo)后的細(xì)胞在不同培育時間的誘導(dǎo)后的細(xì)胞在不同培育時間的GATA-4, HCN2和和HCN4 mRNA表達(dá)表達(dá) 0.00.20.40.60.81.0GATA-4HCN2HCN4#Brelative mRNA expressionRT-PCR技術(shù)分析在不同濃度技術(shù)分析在不同濃度5-aza誘導(dǎo)后的培育細(xì)胞在不同培育時間的誘導(dǎo)后的培育細(xì)胞在不同培育時間的GATA-4, HCN2和和HCN4 mRNA表達(dá)表達(dá). P 0.05, # P 0.01, 2組組 vs 3組或組或4組組 體外培育條件下可以獲得體外培育條件下可以獲得c-kit+ C D 3 4 - C D 4 5 - C S C s不同部位不同性別來源不同部位不同性別來源CSCs的增殖的增殖 才干存在差別才干存在差別c-kit+CSCs具有向心肌樣和竇房結(jié)樣具有向心肌樣和竇房結(jié)樣 細(xì)胞分化的才干細(xì)胞分化的才干10M 5-Aza有加強(qiáng)上述分化的作用有加強(qiáng)上述分化的作用ASCsBMSCs細(xì)胞形狀學(xué)流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞外表標(biāo)志物增殖才干比較5-AZa誘導(dǎo)倒置