2010年下期食品微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)

1、食 品 微 生 物 學(xué) 實(shí) 驗(yàn) 指 導(dǎo) 目 錄食品微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室守則 2實(shí)驗(yàn)報(bào)告的撰寫要求 2實(shí)驗(yàn)一 普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造、性能及其使用方法 3實(shí)驗(yàn)二 培養(yǎng)基的準(zhǔn)備和滅菌 6實(shí)驗(yàn)三 酵母菌的形態(tài)觀察及微生物液體接種技術(shù) 10實(shí)驗(yàn)四 酵母菌的死活鑒別及固體培養(yǎng)接種技術(shù) 11實(shí)驗(yàn)五 利用血球計(jì)數(shù)板的微生物計(jì)數(shù)法 12實(shí)驗(yàn)六 微生物大小的測(cè)量 15實(shí)驗(yàn)七 霉菌的濕室載片培養(yǎng)及根霉曲霉毛霉青霉的形態(tài)觀察 17實(shí)驗(yàn)八 放線菌的插片培養(yǎng)及形態(tài)觀察 20實(shí)驗(yàn)九 細(xì)菌的簡(jiǎn)單染色及顯微鏡油鏡的使用、保養(yǎng)、細(xì)菌的革蘭氏染色 21實(shí)驗(yàn)十 利用毛霉有氧發(fā)酵生產(chǎn)豆制品 23實(shí)驗(yàn)十一 食品衛(wèi)生檢測(cè) 24實(shí)驗(yàn)十二 微生物菌

2、種的分離純化、培養(yǎng)、鑒定 28實(shí)驗(yàn)十三 微生物菌種保藏技術(shù) 28食品微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室守則  食品微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課的目的是：訓(xùn)練學(xué)生掌握微生物學(xué)最基本的操作技能；了解微生物學(xué)的基本知識(shí)；加深理和鞏固對(duì)自學(xué)和講課內(nèi)容的理解。通過實(shí)驗(yàn)不僅可以培養(yǎng)學(xué)生觀察、思考、分析問題和解決問題的能力；實(shí)事求是、嚴(yán)肅認(rèn)真的科學(xué)態(tài)度，以及良好的合作精神，同時(shí)也有宜于培養(yǎng)勤儉節(jié)約、愛護(hù)公物的良好作風(fēng)。 為了上好微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課，并保證安全，特提出如下注意事項(xiàng)： 1、每次實(shí)驗(yàn)前必須對(duì)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容進(jìn)行充分預(yù)習(xí)，以了解實(shí)驗(yàn)的目的、原理和方法，做到心中有數(shù)，思路清楚。 2、認(rèn)真及時(shí)做好實(shí)驗(yàn)記錄，對(duì)于當(dāng)時(shí)不能得到結(jié)果而需要連續(xù)觀

3、察的實(shí)驗(yàn)，則需記下每次觀察的現(xiàn)象和結(jié)果，以便分析。 3、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)保持整潔、勿高聲談話和隨便走動(dòng)，保持室內(nèi)安靜。 4、實(shí)驗(yàn)時(shí)小心仔細(xì)，全部操作應(yīng)嚴(yán)格按操作規(guī)程進(jìn)行，萬一遇有盛菌試管或瓶不慎打破、皮膚破傷或菌液吸入口中等意外情況發(fā)生時(shí)，應(yīng)立即報(bào)告指導(dǎo)教師，及時(shí)處理，切勿隱瞞。 5、實(shí)驗(yàn)過程中，切勿使酒精、乙醚、丙酮等易燃藥品接近火焰。如遇火險(xiǎn)，應(yīng)先關(guān)掉火源，再用濕布或沙土掩蓋滅火。必要時(shí)用滅火機(jī)。 6、使用顯微鏡或其他貴重儀器時(shí)，要求細(xì)心操作，特別愛護(hù)，使用完后做好儀器的使用登記.對(duì)消耗材料和藥品等要力求節(jié)約，用畢后仍放回原處。 7、每次實(shí)驗(yàn)需進(jìn)行培養(yǎng)的材料，應(yīng)標(biāo)明自己的組別及處理方法，放于教師

4、指定的地點(diǎn)進(jìn)行培養(yǎng)：實(shí)驗(yàn)室中的菌種和物品等，未經(jīng)教師許可，不得攜出室外：8、每次實(shí)驗(yàn)完畢后，必須把所用儀器抹凈放妥，及將自己所用的玻璃儀器洗干凈，然后將實(shí)驗(yàn)室收拾整齊。擦凈桌面，如有菌液污染桌面或其他地方時(shí)，可用3%來蘇爾液或5%石炭酸液覆蓋其上半小時(shí)后擦去。如系芽孢桿菌，應(yīng)適當(dāng)延長消毒時(shí)間：凡帶菌之工具(如吸管、玻璃刮捧等)在洗滌前須浸泡在3%來蘇爾液中進(jìn)行消毒： 9、每次實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,應(yīng)以實(shí)事求是的科學(xué)態(tài)度填入報(bào)告表格中，力求簡(jiǎn)明準(zhǔn)確，并連同思考題及時(shí)匯交教師批閱： 10、離實(shí)驗(yàn)室前一定要用肥皂將手手洗凈，注意關(guān)閉門窗、燈、火、煤氣等。實(shí)驗(yàn)報(bào)告的撰寫要求實(shí)驗(yàn)報(bào)告是反映學(xué)生實(shí)驗(yàn)過程和總結(jié)分析實(shí)

5、驗(yàn)結(jié)果的主要形式，也是確定學(xué)生實(shí)驗(yàn)成績的重要依據(jù)之一，必須以實(shí)事求是、嚴(yán)肅認(rèn)真的科學(xué)態(tài)度，按照指導(dǎo)書的要求按時(shí)完成。實(shí)驗(yàn)報(bào)告應(yīng)該簡(jiǎn)明扼要、敘述準(zhǔn)確、數(shù)據(jù)完整、繪圖清晰且寫實(shí)，應(yīng)有討論、有分析，結(jié)論明確。一般應(yīng)包括以下一些內(nèi)容：1、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目名稱；2、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵螅?3、實(shí)驗(yàn)原理；4、實(shí)驗(yàn)儀器及試劑:5、實(shí)驗(yàn)方法及步驟；6、實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄及計(jì)算:7、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析及問題討論:8、實(shí)驗(yàn)日期及時(shí)間。實(shí)驗(yàn)一 普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造、性能及其使用方法 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵螅?）了解顯微鏡的構(gòu)造及成像原理。2）掌握顯微鏡的使用方法和保養(yǎng)方法。 二、顯微鏡的構(gòu)造及原理：普通的光學(xué)顯微鏡由機(jī)械裝置和光學(xué)系統(tǒng)兩大 部分

6、組成，如下圖所示：1.鏡座 2.載物臺(tái) 3.鏡臂 4.棱鏡套 5.鏡筒 6.接目鏡 7.轉(zhuǎn)換器 8.接物鏡 9.聚光鏡 10.彩虹光圈 11.光圈固定器 12.聚光器升降螺旋 13.光源 14.細(xì)調(diào)旋紐 15.粗調(diào)旋紐 16.標(biāo)本夾顯微鏡構(gòu)造示意圖  （一）機(jī)械裝置部分： 1）鏡座：是顯微鏡的支架，由底座和鏡臂組成。 2）載物臺(tái)：又稱鏡臺(tái)，用于安放載玻片，其上安有玻片夾和玻片移動(dòng)器，調(diào)節(jié)移動(dòng)器上的螺旋可使載玻片前后左右移動(dòng)。鏡臺(tái)中央有一孔，稱通光孔，可使反光鏡上的光反射到物鏡中來。 3）鏡筒：是空心的園筒，長度為160mm，用于調(diào)整顯微鏡的長度和總的放大倍數(shù)，其上端連接目鏡，下端連接

7、轉(zhuǎn)換器。 4）轉(zhuǎn)換器：其上安裝三個(gè)物鏡，鏡檢時(shí)旋轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)換器即可換物鏡頭。注意轉(zhuǎn)換物鏡時(shí)。必須用手按住園盤旋轉(zhuǎn)，勿用手指直接推動(dòng)物鏡，以免使物鏡與轉(zhuǎn)換器之間的螺紋松脫而損壞顯微鏡。 5）調(diào)焦裝置：包括粗細(xì)調(diào)焦旋鈕，是調(diào)節(jié)鏡筒上下移動(dòng)的裝置。（二）光學(xué)系統(tǒng)部分：1）物鏡：又稱為鏡頭。有三個(gè)物鏡頭，二個(gè)干燥系物鏡，一個(gè)油系物鏡。物鏡上標(biāo)有主要參數(shù)，其含意是：例如：上排100/1.25是放大倍數(shù)為100倍，數(shù)值口徑為1.25，下排160/0.17是指鏡筒長為160mm，蓋玻片的厚度小于0.17mm。它是顯微鏡的最重要的部分。普通顯微鏡接物鏡的工作原理 2）目鏡：供眼睛觀察物像用的，它將物鏡放大的物像再放

8、大，配有三個(gè)目鏡，其上標(biāo)有放大倍數(shù)。顯微鏡的總放大倍數(shù)是目鏡放大倍數(shù)與物鏡放大倍數(shù)的乘積.3）聚光器：起聚集光線的作用，它可上下移動(dòng)以調(diào)節(jié)最適光度。其下方安裝有可變光圈,用以調(diào)節(jié)光的強(qiáng)度。4）反光鏡：安裝在鏡座上。它是一個(gè)有平凹兩個(gè)面的雙面鏡。其作用是采集外來光線，并且送入聚光器，一般采集自然光時(shí)用平面鏡，采集人工光源時(shí)用凹面鏡。 三、實(shí)驗(yàn)儀器及試劑： 雙目顯微鏡、二甲苯、擦鏡紙、固定片等四、實(shí)驗(yàn)方法及步驟：一）顯微鏡的使用方法：1、準(zhǔn)備工作：取出顯微鏡時(shí)，應(yīng)一手握鏡臂,一手托鏡座，輕拿輕放，切忌碰撞和猛震。顯微鏡應(yīng)放在離桌邊60mm左右的位置。再將登子的高低調(diào)節(jié)好，不得將顯微鏡傾斜。 2、采

9、光：將低倍鏡與鏡筒調(diào)節(jié)成一條直線，用雙眼向下看，同時(shí)調(diào)節(jié)電光源或反光鏡尋找光源。直至全視野有均勻的明亮度，效果最佳為至。也可同時(shí)調(diào)節(jié)聚光鏡和光圈。 3、放置標(biāo)本：上升鏡筒，將標(biāo)本片放在載物臺(tái)上，用玻片夾夾住，把標(biāo)本移動(dòng)至中央孔的位置。 4、調(diào)焦：眼睛看著低倍鏡頭，緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)旋鈕，使低倍物鏡頭下端接近于玻片。再用左眼看目鏡，慢慢調(diào)節(jié)粗調(diào)旋鈕使鏡筒上升（此時(shí)切勿向下調(diào)節(jié)，以防損壞物鏡頭），當(dāng)看到模糊物像時(shí)，再轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)調(diào)旋鈕，直至看到清晰圖像為止。 5、轉(zhuǎn)高倍鏡觀察：用手按住轉(zhuǎn)換器，慢慢地旋轉(zhuǎn)，當(dāng)聽到“咔嚓”一聲即表明物鏡已轉(zhuǎn)到正確位置上，再稍微調(diào)節(jié)一下細(xì)調(diào)旋鈕就可看到清晰圖像。這是因?yàn)轱@微鏡的成套

10、物鏡設(shè)計(jì)為共焦點(diǎn)。 二）顯微鏡的保養(yǎng)： 1、上升鏡筒，取下玻片。 2、清潔鏡筒，用擦鏡紙擦凈用過的物鏡和目鏡，如發(fā)現(xiàn)擦不凈時(shí)，用擦鏡紙沾少許二甲苯擦凈，最后用干凈的擦鏡紙擦去殘余的二甲苯，放入鏡頭盒內(nèi)收好。 3、清潔：擦凈顯微鏡的其它部位。4.將顯微鏡的物鏡轉(zhuǎn)成八字形，緩慢下降鏡筒，使物鏡擱在鏡臺(tái)上，反光鏡轉(zhuǎn)成垂直狀，聚光鏡降至最低位置，經(jīng)老師檢查合格，最后把顯微鏡放入箱內(nèi)收好。 五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄：繪出你所看到的標(biāo)本圖，并注明菌名、菌各部位名稱及放大倍數(shù)。 六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析及問題討論： 實(shí)驗(yàn)二 培養(yǎng)基的準(zhǔn)備和滅菌 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵螅?1、學(xué)習(xí)培養(yǎng)基的配制方法。 2、掌握高壓蒸汽滅菌的原理和方

11、法。 二、培養(yǎng)基的配制：培養(yǎng)基是人工配制的適合于微生物生長繁殖或積累代謝產(chǎn)物的營養(yǎng)基質(zhì)。其中含有碳源，氮源，無機(jī)鹽，生長因子和水等。并且要根據(jù)微生物的需求調(diào)節(jié)其酸堿度及培養(yǎng)基的狀態(tài)。所以學(xué)習(xí)培養(yǎng)基的配制是很重要的環(huán)節(jié)。三、實(shí)驗(yàn)儀器及培養(yǎng)基：高壓蒸汽滅菌鍋、恒溫培養(yǎng)箱、恒溫干燥箱、電爐、電子天平、250mL、100mL燒杯、試管、250mL三角瓶、營養(yǎng)瓊脂、馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）、馬鈴薯、蔗糖、葡萄糖等四、實(shí)驗(yàn)方法及步驟：一）其主要步驟是：玻璃儀器的清洗及干燥制做棉塞配制液體培養(yǎng)基（加凝固劑配制成固態(tài)培養(yǎng)基）調(diào)節(jié)酸堿度過濾、灌裝及包扎滅菌檢驗(yàn)。下面介紹重要的幾步操作。1、制做棉塞：試管和三角

12、瓶都需要做合適的棉塞，棉塞可起過濾作用，避免空氣中的微生物進(jìn)入容器內(nèi)。所用的棉花應(yīng)是透氣性很好的新鮮衣棉。制做棉塞時(shí)，要求棉花緊貼玻璃壁，沒有鄒紋和縫隙，松緊適宜。過緊易擠破管口和不易塞入，過松易掉落和污染。棉塞的長度約為管口直徑的23倍，棉塞應(yīng)有2/3塞進(jìn)管內(nèi)（見下圖）。2、配制液體培養(yǎng)基：培養(yǎng)基應(yīng)先配制成液態(tài)的。按配方準(zhǔn)確稱出各種原料，用總量的1/21/3的水將原料溶解，難溶的可稍加熱溶解。 3、配制固態(tài)培養(yǎng)基：按配方稱好凝固劑，用少量水調(diào)成糊狀，待液態(tài)培養(yǎng)基煮沸后，離開電爐將糊狀的凝固劑倒入內(nèi)混勻，并且補(bǔ)足配方所需的水，再加熱煮沸。4、調(diào)節(jié)酸堿度：培養(yǎng)基的酸堿度可用精密試紙或酸度計(jì)來測(cè)量

13、。調(diào)節(jié)時(shí)可用10氫氧化鈉或10鹽酸進(jìn)行調(diào)節(jié)酸堿度，調(diào)節(jié)時(shí)要特別注意避免過頭再回調(diào)，因?yàn)檫@樣容易影響培養(yǎng)基的體積和滲透壓。最后檢查總體積是否足量，少了補(bǔ)充水份，多了稍加熱蒸發(fā)水份。5、過濾分裝：若有雜質(zhì)或固形物，用兩層紗布趁熱過濾（氣溫低要保溫過濾）。分裝時(shí)加入試管的量為試管長度的1/51/4.錐形瓶約為容積的1/31/2。分裝時(shí)不得使培養(yǎng)基沾污瓶口及試管口，以免浸濕棉塞，造成污染。（見下圖） 6、加棉塞：培養(yǎng)基分裝后，將做好的棉塞塞好，再包上一層防潮紙，用綿繩系好。在防潮紙上標(biāo)明培養(yǎng)基的名稱、制備組和姓名、日期等。準(zhǔn)備滅菌。 7、滅菌：采用高壓蒸汽滅菌：滅菌是指殺死一定環(huán)境中的所有微生物。高壓

14、蒸汽滅菌是濕熱滅菌的一種。其原理是通過加熱使微生物體內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固變性，達(dá)到殺菌的目的。蒸汽滅菌的優(yōu)點(diǎn)是蒸汽穿透力強(qiáng)，使蛋白質(zhì)易于凝固變性，另外滅菌過程中產(chǎn)生的蒸汽凝固在物體的表面，同時(shí)放出大量的潛熱，這種潛熱能迅速提高滅菌物體的溫度，縮短滅菌的全過程。是滅菌效果最好的一種方法。其操作過程如下： （1）在滅菌鍋內(nèi)加適量的水，再把用滅菌的物品放入鍋內(nèi)，蓋上鍋蓋，對(duì)稱地?cái)Q緊螺栓，以防漏氣。 （2）滅菌鍋開始加熱，同時(shí)打開排氣閥，待將鍋內(nèi)冷空氣完全排凈后排氣閥內(nèi)有熱氣排出35分鐘后將排氣閥關(guān)閉。至壓力表升至壓力為0.1MPa或溫度為121時(shí)開始計(jì)時(shí)。通過調(diào)節(jié)電源或調(diào)節(jié)排氣閥維持一定的壓力（溫度）。達(dá)

15、到滅菌時(shí)間后（20分鐘）停止加熱。(在滅菌過程中應(yīng)保持恒溫恒壓) （3）待壓力表降至0位后，再打開排氣閥，打開鍋取出滅菌物品。如試管要制成斜面時(shí)，待試管溫度降到5060時(shí)再擺成斜面，過早會(huì)產(chǎn)生較多的冷凝水。（4）最后將鍋內(nèi)的水倒出，以防生銹。8、檢驗(yàn)：檢驗(yàn)的目的是檢查配制的培養(yǎng)基滅菌是否徹底。將滅菌后的培養(yǎng)基置于37恒溫箱中保養(yǎng)2448小時(shí)，若無菌生長，證明滅菌徹底，可保存?zhèn)溆谩?二）實(shí)驗(yàn)步驟： 1）營養(yǎng)瓊脂（用于一般細(xì)菌培養(yǎng)）： 稱取Xg營養(yǎng)瓊脂。用量筒量取80蒸餾水于燒杯中，在電爐上煮沸，將燒杯拿下。其余的20蒸餾水，先將少量蒸餾水將營養(yǎng)瓊脂攪成糊狀后轉(zhuǎn)入煮沸的蒸餾水中，然后繼續(xù)加熱至煮沸

16、（加入營養(yǎng)瓊脂后一定要攪拌至煮沸），然后補(bǔ)足至YmL。分裝至試管（錐形瓶）塞好棉塞包扎后于12120分鐘高壓滅菌。如是試管,待培養(yǎng)基溫度降至5060后擺成斜面.冷卻后取23支置于37恒溫培養(yǎng)12天，確定無菌后方可使用。(具體要求見試劑標(biāo)簽)2）馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）（用于霉菌，酵母菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)）稱取Xg馬鈴薯葡萄糖瓊脂。其余操作同上。 3）配制馬鈴薯液體培養(yǎng)基： 馬鈴薯200g 蔗糖20g 水 1000mL 自然PH，121，滅菌20分鐘 制法：馬鈴薯去皮，切成塊煮沸30分鐘，然后紗布過濾，再加糖，熔化后補(bǔ)充至1000mL。吸取10mL裝入帶有產(chǎn)氣管的18×180mm的試管中。12

17、1，滅菌20分鐘 五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄: 將冷卻的培養(yǎng)基于37恒溫培養(yǎng)2448小時(shí)后，經(jīng)檢查培養(yǎng)基上是否有雜菌生長，證明滅菌是否徹底。六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析及問題討論實(shí)驗(yàn)三 酵母菌的形態(tài)觀察及微生物液體接種技術(shù) 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵? 1、通過觀察了解酵母菌的形態(tài)結(jié)構(gòu). 2、學(xué)習(xí)微生物液體接種培養(yǎng)技術(shù).二、實(shí)驗(yàn)原理: 酵母菌是單細(xì)胞的真菌,細(xì)胞較大,不必染色即可用顯微鏡觀察其形態(tài).特別是出芽生殖時(shí)的芽體形態(tài). 在微生物的研究工作中,為了使微生物不斷延續(xù)其生命需一次次地將接種到新的培養(yǎng)基中讓其繁殖.接種操作決不允許不需要的微生物進(jìn)入培養(yǎng)基造成污染.將污染降低到最低限度的接種技術(shù)稱為無菌操作技術(shù).這次實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)

18、在無菌操作條件下,用接種環(huán)或滴管等工具將菌種接到液體培養(yǎng)基中,再進(jìn)行培養(yǎng)的操作技術(shù)。三、實(shí)驗(yàn)材料及器材: 1、菌種:固體斜面培養(yǎng)24小時(shí)的酵母菌 2、培養(yǎng)基及試劑: 馬鈴薯液體培養(yǎng)基、馬鈴薯固體培養(yǎng)基、二甲苯、95乙醇等 3、器材: 雙目顯微鏡、接種環(huán)、試管、酒精燈濾紙、擦鏡紙、蓋玻片、載玻片、打火機(jī)等四、實(shí)驗(yàn)方法及步驟: 1、微生物液體產(chǎn)氣培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備:做好試管棉塞,于試管內(nèi)放入小產(chǎn)氣管(發(fā)酵管),小產(chǎn)氣管管口朝下,再加入10毫升麥芽汁液體培養(yǎng)基,貼上標(biāo)簽,寫好班次和學(xué)號(hào),于121下高壓蒸汽滅菌20分鐘,冷卻后備用.(每人二支)。2、由固體斜面菌種接到液體培養(yǎng)基的無菌接種技術(shù) 點(diǎn)燃酒精燈

19、,在酒精燈的上方將試管棉塞旋松(切勿將棉塞拔出),以便接種時(shí)易入拔出。 左手握二支試管,外則為固體斜面菌種管,內(nèi)則為液體待接種試管,液體管的管口向上傾斜,以防液體培養(yǎng)基流出。 右手拿接種環(huán),在火焰中將接種環(huán)燒紅滅菌.再用右手小拇指和無名指夾住棉塞(絕對(duì)不許將棉塞放在桌上),將試管上半部在火焰上方通過兩三次后,停在火焰上方.把燒紅的接種環(huán)伸入菌種試管內(nèi),先與試管壁接觸一會(huì)使之冷卻,再移至斜面挑取一環(huán)酵母菌,接入液體培養(yǎng)基中,攪拌一下取出. 接種完后將試管口在火焰中通過幾次,在塞上棉塞放于試管架上。 將接種環(huán)在火焰上燒紅,以殺死殘余的菌。培養(yǎng):檢查試管的棉塞是否塞緊,標(biāo)簽上的字是否清楚。然后置于2

20、8恒溫箱中培養(yǎng)2448小時(shí)。 3、酵母菌形態(tài)的觀察: 制片:取潔凈的玻片一塊.在其中央滴一滴蒸餾水,用接種環(huán)以無菌操作的方式從固體斜面上挑取少量的酵母菌,與載玻片上的水滴混勻,涂成一薄層.取干凈蓋玻片一塊,小心地將蓋玻片一端與菌液接觸,然后緩慢地將蓋玻片放下,用手輕輕地壓一下將氣泡壓去,再用濾紙吸去多余的菌液。顯微鏡觀察:將制好的酵母菌片置于顯微鏡下,先用低倍鏡找到酵母菌,再轉(zhuǎn)入高倍鏡下仔細(xì)觀察酵母菌的整體形態(tài),出芽酵母菌的形態(tài),菌體內(nèi)的液泡及內(nèi)含物.將光圈調(diào)小還可看到酵母菌體外的莢膜物質(zhì)。請(qǐng)將以上所觀察到的酵母菌的形態(tài)繪制于實(shí)驗(yàn)記錄。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄： 1、酵母菌形態(tài)的觀察結(jié)果記錄：繪制出你

21、所看到的酵母菌形態(tài)結(jié)構(gòu)圖,請(qǐng)注明放大倍數(shù)、菌的名稱及菌體各部位名稱。2、記錄酵母菌液體接種結(jié)果及結(jié)論。 六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析及問題討論：實(shí)驗(yàn)四 酵母菌的死活鑒別及固體培養(yǎng)接種技術(shù)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵? 1、學(xué)習(xí)掌握鑒別酵母菌死活的染色原理和方法。 2、觀察上次實(shí)驗(yàn)酵母菌產(chǎn)氣液體培養(yǎng)的結(jié)果。二、實(shí)驗(yàn)原理: 用稀釋美蘭染液可進(jìn)行酵母菌死活的鑒別.美蘭是一種弱氧化劑,氧化態(tài)時(shí)為蘭色,還原態(tài)時(shí)呈無色.被染成蘭色的為死菌,無色的為活菌.這是因?yàn)榛罴?xì)胞新陳代謝旺盛,具有還原能力,染液進(jìn)入細(xì)胞后即被還原成無色,而死細(xì)胞無還原能力.但染液濃度過高或染色時(shí)間過久,超出了活細(xì)胞的承受能力,會(huì)使菌體死亡.影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的。

22、三、實(shí)驗(yàn)材料和器材: 1、菌種:液體培養(yǎng)的酵母菌. 2、染液:0.1%美蘭染液. 3器皿:顯微鏡、滴管、酒精燈、打火機(jī)等.四、實(shí)驗(yàn)方法及步驟:1、觀察酵母菌產(chǎn)氣結(jié)果:觀察小試管中是否有氣泡產(chǎn)生。2、固體斜面接種方法（見下圖）:在酒精燈下無菌操作,將接種環(huán)伸入待接試管斜面的基部,緩慢地走之字圖形地接種,然后放入28恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2448小時(shí)。3、酵母菌的死活鑒別:先滴一滴0.1%美蘭染液于干凈的載玻片中央,無菌操作取一環(huán)酵母菌與0.1%美蘭染液混合均勻,染色30秒1分鐘蓋上蓋玻片,用濾紙吸掉多余的染色液，鏡檢。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄: 1、記錄酵母菌死活鑒別結(jié)果。 2、記錄酵母菌固體接種結(jié)果（包括菌

23、落形狀,色澤,質(zhì)地,氣味,透明度等:）。六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析及問題討論: 實(shí)驗(yàn)五 利用血球計(jì)數(shù)板的微生物計(jì)數(shù)法 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵? 1、學(xué)習(xí)利用血球計(jì)數(shù)板對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)的原理和方法。 2、學(xué)習(xí)固體斜面接種方法。二、實(shí)驗(yàn)原理: 利用血球計(jì)數(shù)板在顯微鏡下直接計(jì)數(shù),是一種常用的微生物計(jì)數(shù)方法.此法是將單細(xì)胞微生物的菌懸液或孢子懸液,注入血球計(jì)數(shù)板與蓋玻片之間的計(jì)數(shù)室中,在顯微鏡下在進(jìn)行計(jì)數(shù)的.由于計(jì)數(shù)室的容積是一定的,所以可根據(jù)顯微鏡下觀察的微生物的數(shù)量計(jì)算出單位體積內(nèi)的微生物總數(shù)。 血球計(jì)數(shù)扳的構(gòu)造 a.平面圖(中間平臺(tái)分為兩半，各刻有一個(gè)方格網(wǎng))b.側(cè)面圖(中間平臺(tái)與蓋玻片之間有高度為0.1mm

24、的間隙)血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)網(wǎng)的分區(qū)和分格血球計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室如下圖所示,其中央為計(jì)數(shù)室,通常有兩種規(guī)格25×16型或16×25型.常用的為25×16型,其長和寬各為1mm,蓋上蓋玻片后,其間的距離為0.1mm,因此計(jì)數(shù)室的容積為0.1立方毫米.細(xì)胞數(shù)（CFU/mL）=50000×A×B式中：A5個(gè)中方格中細(xì)胞總數(shù)B菌液的稀釋倍數(shù)三、實(shí)驗(yàn)材料和器材: 1、酵母菌斜面菌種:稀釋100倍的酵母菌菌懸液. 2、器材:雙目顯微鏡、酒精燈、接種針、血球計(jì)數(shù)板、血紅蛋白吸管、10mL塑料離心管等。四、實(shí)驗(yàn)方法及步驟: 1、酵母菌菌懸液的計(jì)數(shù)和酵母菌菌懸液中出芽率的

25、計(jì)數(shù): 取一塊干凈的血球計(jì)數(shù)板,在顯微鏡下用低倍鏡找到中央計(jì)數(shù)室.上升鏡筒,將蓋玻片蓋在計(jì)數(shù)室上. 用吸管吸取酵母菌菌懸液(先將菌液搖勻一下),將滴管在血球計(jì)數(shù)板和蓋玻片之間的縫隙間靠一下,菌懸液即被吸入計(jì)數(shù)室內(nèi),用手輕壓蓋玻片,以免溶液過多而改變了計(jì)數(shù)室的體積,用濾紙吸取多余的菌液,靜止一會(huì),讓菌體自然沉降并且穩(wěn)定下來. 計(jì)數(shù):分別統(tǒng)計(jì)五個(gè)中方格的酵母菌的數(shù)量和出芽的酵母菌數(shù)量.應(yīng)取計(jì)數(shù)室對(duì)角線上的五個(gè)中方格或取計(jì)數(shù)室右上,右下,左上,左下,中央的五個(gè)中方格.壓線的菌以取上不取下,取左不取右的菌計(jì)數(shù). 計(jì)完后取下蓋玻片,用蒸餾水洗凈血球計(jì)數(shù)板,用濾紙吸干凈水份后,蓋上干凈的蓋玻片,再滴菌液,

26、于顯微鏡下重復(fù)計(jì)數(shù)三次.五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄及計(jì)算: 1、計(jì)數(shù)。 測(cè)定次數(shù)中 方 菌格編 數(shù)號(hào)第一次第二次1酵母菌出 芽2酵母菌出 芽 3酵母菌出 芽 4酵母菌出 芽 5酵母菌出 芽 平均值酵母菌出芽率3、計(jì)算:每毫升菌液中含酵母菌的個(gè)數(shù)（采用兩位有效數(shù)字，及10的指數(shù)表示、要有計(jì)算過程）。4、計(jì)算:每毫升菌液中含出芽的酵母菌的個(gè)數(shù)（同上）及出芽率。六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析及問題討論: 實(shí)驗(yàn)六 微生物大小的測(cè)量 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵? 了解測(cè)微尺的構(gòu)造和原理,學(xué)習(xí)接目測(cè)微尺的校正方法及微生物大小的測(cè)定。二、實(shí)驗(yàn)原理: 微生物細(xì)胞的大小是微生物形態(tài)特征之一。也是分類鑒定的依據(jù)之一。其大小的測(cè)量是在顯微鏡下用接

27、目測(cè)微尺來測(cè)量。由于在目鏡中觀測(cè)到的是顯微鏡放大后的物像,又因?yàn)榉糯蟊稊?shù)不同時(shí),目鏡測(cè)微尺每格實(shí)際代表的長度也隨之變化,因此目鏡測(cè)微尺在使用前必須用標(biāo)準(zhǔn)物鏡尺進(jìn)行校正。 接目測(cè)微尺是一塊圓形玻璃片,其中央尺等分成100格。 物鏡測(cè)微尺又稱標(biāo)準(zhǔn)尺.是一塊中央刻有精確刻度的載玻片,放在載物臺(tái)上使用的,專用于校正接目測(cè)微尺。常用的是0.01mm物鏡測(cè)微尺。是將長1毫米的直線等分成100個(gè)小格,每格長度即為0.01mm(10微米)。三、實(shí)驗(yàn)材料和器皿： 1、菌種：固體斜面培養(yǎng)的酵母菌。 2、器皿：顯微鏡、臺(tái)燈、酒精燈、物鏡物鏡測(cè)微尺、 目鏡測(cè)微尺、載玻片、蓋玻片等。四、實(shí)驗(yàn)方法及步驟： 1、校正目鏡測(cè)

28、微尺：將目鏡頭上的透鏡旋下，把目鏡測(cè)微尺裝入鏡筒內(nèi)，在顯微鏡里看到目鏡測(cè)微尺的刻度。將物鏡測(cè)微尺放在載物臺(tái)上，有刻度的一面朝上，切勿放反了。調(diào)整光線后，先在低倍鏡下找到物鏡測(cè)微尺的尺子。然后轉(zhuǎn)高倍鏡觀察到兩把尺子，調(diào)節(jié)目鏡測(cè)微尺，使兩把尺的刻度線平行。再調(diào)節(jié)物鏡測(cè)微尺，使目鏡測(cè)微尺的一條刻度線與物鏡測(cè)微尺上的一條刻度線重合，再尋找另一重合線，分別數(shù)出物鏡測(cè)微尺及目鏡測(cè)微尺的格數(shù)。以此計(jì)算在此放大倍數(shù)下目鏡測(cè)微尺每一小格所代表的實(shí)際長度。例如：物鏡測(cè)微尺的10格內(nèi)含有目鏡測(cè)微尺共45格，此物鏡測(cè)微尺內(nèi)有10小格，所以目鏡測(cè)微尺每小格代表的實(shí)際長度10格×10微米÷45格2.2

29、微米。 2、測(cè)量微生物菌體的大小：將物鏡測(cè)微尺取下，把自制的酵母菌水浸片放于載物臺(tái)上，通過旋轉(zhuǎn)目鏡筒的方法測(cè)出酵母菌菌體的長和寬，應(yīng)測(cè)量510個(gè)菌體（先數(shù)格數(shù)，后計(jì)算）。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄及計(jì)算： 1、校正目鏡測(cè)微尺數(shù)據(jù)記錄： 放大倍數(shù)：目鏡測(cè)微尺的格數(shù)： 物鏡測(cè)微尺的格數(shù)： 目鏡測(cè)微尺每小格代表的實(shí)際長度（微米）2、結(jié)果記錄：酵母菌編號(hào)酵母菌占目鏡測(cè)微尺的格數(shù)計(jì) 算（微米）1長寬2長寬3長寬4長寬5長寬6長寬7長寬8長寬9長寬10長寬 3、總結(jié)：酵母菌的平均長度為 。平均寬度為 。 最大的酵母菌的長為 。其寬度為 。 最小的酵母菌的長為 。其寬度為 。六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析及問題討論：實(shí)驗(yàn)七霉菌的濕

30、室載片培養(yǎng)及根霉曲霉毛霉青霉的形態(tài)觀察 根霉菌一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵螅?1、學(xué)習(xí)濕室載片培養(yǎng)霉菌的方法。 2、掌握根霉的形態(tài)結(jié)構(gòu)及制片方法。二、實(shí)驗(yàn)原理： 霉菌的結(jié)構(gòu)在制片過程中易被破壞，因而影響觀察，所以采用濕室載片培養(yǎng)法進(jìn)行培養(yǎng)，此法便于將生長完好的霉菌菌落載片直接置于顯微鏡的低倍鏡下觀察。 霉菌的菌絲較粗大，細(xì)胞容易收縮變形，因此采用乳酸石炭酸美蘭溶液作為介質(zhì)進(jìn)行制片。此溶液具有不使細(xì)胞變形，可殺菌防腐，不易干燥，能保持較長時(shí)間，又有一定的染色能力。 通過觀察掌握根霉的菌絲是無隔膜的，并且生有特殊的匍匐菌絲和假根，氣生菌絲成簇生長，一般不分枝，頂端長有孢子囊。在高倍鏡下仔細(xì)觀察孢子囊的結(jié)構(gòu)分

31、為孢子囊梗，囊托，囊軸，囊衣，和孢子。根霉主要用于釀酒和生產(chǎn)各種有機(jī)酸。三、實(shí)驗(yàn)材料和器皿： 1、菌種：根霉菌種。 2、培養(yǎng)基：葡萄糖豆芽汁培養(yǎng)基。 3、試劑：95乙醇、石炭酸、甘油、棉蘭、二甲苯。 4、器材：雙目顯微鏡、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)箱、臺(tái)燈、載玻片、濾紙、蓋玻片等。四、實(shí)驗(yàn)方法及步驟： 1、濕式載片培養(yǎng)根霉： （1）準(zhǔn)備：在培養(yǎng)皿底部先放一張濾紙，濾紙上放二塊載玻片，蓋好蓋，用紙包扎好，經(jīng)160干熱滅菌3小時(shí)后。冷卻后備用。 干熱滅菌法： 主要是指熱空氣滅菌，即把待滅菌的物體均勻地放在恒溫干燥箱內(nèi)，加熱至160-170維持2小時(shí)即可達(dá)到滅菌目的（有水的物質(zhì)，不可用此法）。 

32、0;  將包扎好的待滅菌物（培養(yǎng)皿，吸管，試管）放入干燥箱內(nèi)，（注意不能放得太擠，以免妨礙空氣流通，不得使器皿于與烘箱的內(nèi)層地板直接接觸）。關(guān)上門，接通電源，待溫度上升至160-170時(shí)（注意勿使溫度過高,超過170，器皿外的包扎紙、棉花會(huì)被烤焦燃燒），借調(diào)節(jié)器的自動(dòng)控制，保持此溫度2個(gè)小時(shí)，滅菌結(jié)束后，關(guān)閉電源，待溫度降至60以下方可開門(否則玻璃器皿會(huì)因驟冷而爆裂和包扎材料起火燃燒)，取出無菌器皿，待用。 如果是為了烘干玻璃器皿，溫度為120持續(xù)30min即可。 用此法滅菌時(shí)，絕不能用油、蠟紙包扎物品。 （2）接種：在無菌操作條件下，先用滴管取加熱溶解了的培養(yǎng)基滴加在載

33、玻片上，冷卻片刻使培養(yǎng)基凝固后，再用滴管吸取根霉菌懸液均勻地加在培養(yǎng)基上，然后用無菌水把培養(yǎng)皿內(nèi)的濾紙打濕，以保持培養(yǎng)皿內(nèi)有一定的濕度，蓋上蓋子，在培養(yǎng)皿的底座側(cè)面貼上標(biāo)簽，寫好班次和學(xué)號(hào)。 （3）培養(yǎng)：將接種的培養(yǎng)皿置于培養(yǎng)箱中于28恒溫培養(yǎng)23天。 2、觀察： （1）肉眼觀察：打開培養(yǎng)皿蓋，觀察根霉的菌落形態(tài)，氣味，質(zhì)地如何。、 （2）低倍鏡觀察：取出載玻片，用濾紙將載玻片底部的水擦拭干凈，直接放在載物臺(tái)上，用低倍鏡仔細(xì)觀察根霉的整體形態(tài)繪圖如下（并注明放大倍數(shù)）： （3）高倍鏡觀察：另取一塊干凈的載玻片，于其中央滴一滴乳酸石炭酸美蘭染液，從菌落的邊緣取少量帶有孢子的菌絲放入染液中，輕輕挑

34、開菌絲，蓋上蓋玻片，輕壓一下除去氣泡，用濾紙吸去多余的染液，用高倍鏡觀察根霉的菌絲結(jié)構(gòu)和孢子結(jié)構(gòu)繪圖如下（并注明放大倍數(shù)）：五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄： 1、肉眼觀察結(jié)果： 2、繪出低倍鏡觀察根霉的整體形態(tài)圖、并注明菌名、菌各部位名稱及放大倍數(shù)。 3、繪出高倍鏡觀察根霉的菌絲結(jié)構(gòu)和孢子結(jié)構(gòu)圖、并注明菌名、菌各部位名稱及放大倍數(shù)。六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析及問題討論：毛霉菌 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求：1、熟悉毛霉的濕室載片的培養(yǎng)方法2、觀察毛霉的細(xì)胞結(jié)構(gòu)二、實(shí)驗(yàn)原理：霉菌中的毛霉也是采用濕室載片培養(yǎng)法。其菌絲比根霉要細(xì)些，也是無隔膜的。菌絲的分枝有兩個(gè)類型：一種為單軸式，即無分枝。另一種為假軸狀分枝。菌絲頂端都生有球形的

35、孢子囊，囊壁上常有針狀的草酸鈣結(jié)晶，囊壁很薄，孢子成熟飛出后留下的殘跡稱為囊領(lǐng)。囊內(nèi)有囊軸，形狀不一。囊軸與孢子梗之間無囊托。毛霉的營養(yǎng)菌絲生長到一定時(shí)期能形成厚垣孢子，這是一種休眠體。三、實(shí)驗(yàn)材料與器材：1、菌種：毛霉斜面菌種。2、培養(yǎng)基：馬鈴薯固體培養(yǎng)基。3、試劑：95乙醇、石炭酸、甘油、棉蘭、二甲苯等。4、器材:濕室載片培養(yǎng)裝置、無菌操作系列裝置、顯微鏡等。四、實(shí)驗(yàn)方法及步驟：1、準(zhǔn)備濕室：每人二套，包扎好后進(jìn)行干熱滅菌。2、接種培養(yǎng)：注意無菌操作、控制濾紙的濕度。3、肉眼觀察毛霉的菌絲 。4、低倍鏡觀察毛霉的整體形態(tài)。5、高倍鏡觀察毛霉的形態(tài)。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄：1、肉眼觀察毛霉的菌絲呈

36、 色。特征是 。2、繪出低倍鏡觀察毛霉的整體形態(tài)圖、并注明菌名、菌各部位名稱及放大倍數(shù)。3、繪出高倍鏡觀察毛霉的形態(tài)結(jié)構(gòu)圖、并注明菌名、菌各部位名稱及放大倍數(shù)。六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析及問題討論曲霉菌一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求：通過培養(yǎng)和觀察進(jìn)一步熟悉曲霉的形態(tài)結(jié)構(gòu)及用途二、實(shí)驗(yàn)原理：曲霉的菌絲與根霉、毛霉不同。營養(yǎng)菌絲具有隔膜，是多核多細(xì)胞的。營養(yǎng)菌絲的足細(xì)胞向上長出成束的氣生菌絲，其頂端生有的孢子稱為分生孢子。分生孢子的結(jié)構(gòu)為：無隔膜的分生孢子梗、頂囊、初生梗、次生梗和孢子。幼年的分生孢子結(jié)構(gòu)在高倍鏡下可清楚地看見。三、實(shí)驗(yàn)材料與器材：1、菌種：曲霉斜面菌種。2、培養(yǎng)基：馬鈴薯固體培養(yǎng)基。3、試劑：95乙

37、醇、石炭酸、甘油、棉蘭、二甲苯等。4.器材:濕室載片培養(yǎng)裝置、無菌操作系列裝置、顯微鏡等。四、實(shí)驗(yàn)方法及步驟：1、準(zhǔn)備濕室：每人二套，包扎好后進(jìn)行干熱滅菌。2、接種培養(yǎng)：注意無菌操作、控制濾紙的濕度。3、肉眼觀察曲霉的菌落： 4、低倍鏡觀察曲霉的菌落形態(tài)。5、高倍鏡觀察曲霉的菌落形態(tài)。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄：1、肉眼觀察曲霉的菌落：生長初期為 。生長后期為 。2、繪出低倍鏡觀察曲霉的整體形態(tài)圖、并注明菌名、菌各部位名稱及放大倍數(shù)。3、繪出高倍鏡觀察曲霉的形態(tài)結(jié)構(gòu)圖、并注明菌名、菌各部位名稱及放大倍數(shù)。六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析及問題討論曲霉菌一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求：1、熟練掌握霉菌的濕室載片培養(yǎng)。2、了解青霉的形

38、態(tài)結(jié)構(gòu)及用途。二、實(shí)驗(yàn)原理：青霉的菌絲是有隔膜，為多細(xì)胞多核的霉菌。菌絲的首端形成掃帚狀分枝，頂部著生分生孢子，分生孢子的結(jié)構(gòu)由孢子梗、副枝、梗基、小梗、和孢子組成。青霉除用于食品工業(yè)外，還主要用于醫(yī)藥工業(yè)中。三、實(shí)驗(yàn)材料與器材：1、菌種：青霉斜面菌種。2、培養(yǎng)基：馬鈴薯固體培養(yǎng)基。3、試劑：95乙醇、石炭酸、甘油、棉蘭、二甲苯等。4、器材:濕室載片培養(yǎng)裝置 無菌操作系列裝置 顯微鏡等。四、實(shí)驗(yàn)方法及步驟：1、準(zhǔn)備濕室：每人二套，包扎好后進(jìn)行干熱滅菌。2、接種培養(yǎng)：注意無菌操作、控制濾紙的濕度。3、肉眼觀察青霉的菌落形態(tài)： 4.低倍鏡下觀察到青霉的菌落形態(tài)繪圖如下（并注明放大倍數(shù)）。5高倍鏡下

39、觀察青霉的菌絲和菌落。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄：1、肉眼觀察青霉的菌落形態(tài)：菌絲為 。孢子為 。2、繪出高倍鏡觀察青霉的形態(tài)結(jié)構(gòu)圖、并注明菌名、菌各部位名稱及放大倍數(shù)。六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析及問題討論：實(shí)驗(yàn)八 放線菌的插片培養(yǎng)及形態(tài)觀察一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵螅?、學(xué)習(xí)放線菌的濕室插片培養(yǎng)的方法。2、熟悉放線菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)及應(yīng)用。二、實(shí)驗(yàn)原理：放線菌是一類單細(xì)胞絲狀的原核微生物。由菌絲和孢子組成。菌絲分為營養(yǎng)菌絲和氣生菌絲兩部分。氣生菌絲的頂端分化成孢子絲。孢子絲和孢子隨隨種屬不同而呈不同的形狀和色澤，以此作為放線菌的分類依據(jù)。放線菌的菌絲很細(xì)，直徑為0.21.2微米之間，無隔膜、分枝繁茂、成熟后呈不同的色澤。放線

40、菌生長緩慢，菌絲分枝相互交錯(cuò)纏繞，形成的菌落有的質(zhì)地致密干燥，有的粘著力不強(qiáng)為粉質(zhì)結(jié)構(gòu)。所以通常采用濕室插片培養(yǎng)方法，使放線菌的菌絲沿著培養(yǎng)基與蓋玻片的交界處向蓋玻片上生長蔓延并且附著在蓋玻片上。待其生長成熟后取出蓋玻片，經(jīng)染色即可看到完整結(jié)構(gòu)的放線菌菌落形態(tài)和菌絲、孢子絲、孢子的形態(tài)。三、實(shí)驗(yàn)材料和器材：1、菌種：放線菌斜面菌種。2、培養(yǎng)基：馬鈴薯固體培養(yǎng)基或高氏一號(hào)瓊脂培養(yǎng)基。3、試劑：呂氏美蘭染色液。4.器材:濕室插片培養(yǎng)裝置、無菌操作系列裝置、雙目顯微鏡等。四、實(shí)驗(yàn)方法及步驟：1、準(zhǔn)備工作：準(zhǔn)備一套培養(yǎng)皿，包扎好后于160滅菌2小時(shí)，滅菌后冷卻后備用。2、接種培養(yǎng)：在無菌操作條件下，將

41、經(jīng)加熱溶解后的培養(yǎng)基冷至50后倒入培養(yǎng)皿中（大約2030mL/每皿），等至完全冷卻后的培養(yǎng)基，在將放線菌的菌懸液加至培養(yǎng)基上，然后將蓋玻片斜插培養(yǎng)基中（如下圖所示），置于28恒溫培育箱中培養(yǎng)3天左右。3、肉眼觀察放線菌的菌落。4、低倍鏡觀察放線菌的菌落形態(tài)。5、高倍鏡觀察放線菌的的氣生菌絲、孢子絲和孢子形態(tài)。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄：1、肉眼觀察：放線菌的菌落呈 色， 氣味， 質(zhì)地為 。2、繪出低倍鏡觀察放線菌的菌落形態(tài)圖、并注明菌名、菌各部位名稱及放大倍數(shù)。3、繪出高倍鏡觀察放線菌的氣生菌絲、孢子絲和孢子形態(tài)圖、并注明菌名、菌各部位名稱及放大倍數(shù)。六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析及問題討論：實(shí)驗(yàn)九 細(xì)菌的簡(jiǎn)單染色及

42、顯微鏡油鏡的使用、保養(yǎng)、細(xì)菌的革蘭氏染色 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求：1、掌握油鏡的使用保養(yǎng)方法。2、掌握細(xì)菌的涂片和簡(jiǎn)單染色技術(shù)。3、掌握細(xì)菌的革蘭氏染色的原理和方法。二、實(shí)驗(yàn)原理：細(xì)菌個(gè)體很小，在高倍鏡下也看不清楚，需放大一千倍以上才能觀察其形態(tài)，故要使用油鏡頭觀察。油鏡頭是在使用時(shí)，在物鏡與標(biāo)本之間加一種折射率與玻璃折射率幾乎相等的香柏油作為介質(zhì)，以達(dá)到所需的放大倍數(shù)。細(xì)菌細(xì)胞小而透明，含水量較高，在油鏡下觀察細(xì)胞幾乎與背景無反差，所以觀察細(xì)菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)，必須對(duì)它們進(jìn)行染色，以便于剛觀察。因細(xì)菌的蛋白質(zhì)等電點(diǎn)較低，其生長在堿性和中性溶液中細(xì)胞帶負(fù)電荷，所以通常用堿性染料（如美蘭、結(jié)晶紫、復(fù)紅、孔

43、雀綠）使其細(xì)胞著色。革蘭氏染色法可將細(xì)菌氏分別革蘭氏陽性菌（G）和革蘭氏陰性菌（G）兩大類，是細(xì)菌學(xué)上最常用的鑒別性染色法。革蘭氏染色是使用幾種不同的染料對(duì)細(xì)菌進(jìn)行染色。先進(jìn)草酸結(jié)晶紫初染，次經(jīng)碘液媒染，再用95%酒精脫色處理，最后用蕃紅液復(fù)染。如果細(xì)菌能保持結(jié)晶紫碘復(fù)合物的顏色而不被酒精脫色，則菌體呈蘭紫色，為革蘭氏陽性菌。如果細(xì)菌體內(nèi)的結(jié)晶紫碘復(fù)合物的顏色被酒精脫去，而復(fù)染上蕃紅的顏色，則菌體呈紅色，為革蘭氏陰性菌。此染色法之所以能將細(xì)菌區(qū)為G和G兩類，是由于這兩類菌的細(xì)胞壁成分不同所決定的。G菌的細(xì)胞壁較薄，含有的脂類物質(zhì)較高，肽聚糖的含量較低，酒精處理時(shí)溶解了脂類物質(zhì)，使細(xì)胞壁穿孔，通

44、透性增大，在水洗時(shí)將細(xì)胞內(nèi)原有的結(jié)晶紫碘復(fù)合物沖走而脫色，再用蕃紅復(fù)染就被染成了紅色。G菌由于細(xì)胞壁厚，其中含有肽聚糖的量高，脂類含量低，用酒精處理時(shí)，使細(xì)胞壁脫水，肽聚糖層的孔眼縮小，通透性降低，結(jié)晶紫碘復(fù)合物被色在細(xì)胞內(nèi)，而不會(huì)在水洗時(shí)被沖走，所以在復(fù)染時(shí)蕃紅染液進(jìn)不去，菌體最終仍呈蘭紫色。三、實(shí)驗(yàn)材料和器材：1、菌種：白葡萄球菌、枯草桿菌、大腸桿菌2、培養(yǎng)基：營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基3、染色液：A:呂氏美蘭染色液B:革蘭氏一液：1%結(jié)晶紫酒精溶液。C:革蘭氏二液：路哥氏碘液。D:革蘭氏三液：95%酒精溶液。E:革蘭氏四液：2.5%蕃紅酒精溶液。4、試劑：、香柏油、95乙醇、二甲苯等5、器材：雙

45、目顯微鏡、酒精燈、接種環(huán)、打火機(jī)、載玻片等四、實(shí)驗(yàn)方法及步驟：一）細(xì)菌的簡(jiǎn)單染色及顯微鏡油鏡的使用、保養(yǎng)1、涂片：于干凈的載玻片中央滴一小滴無菌水，在無菌操作條件下，用接種環(huán)挑取少量細(xì)菌與無菌水充分混勻，涂成極薄的菌膜。（菌要挑少些，涂片要薄些，否則不易觀察）2、干燥：涂片后置室溫自然干燥。3、固定：手持載玻片的一端，有菌膜的一面朝上，通過酒精燈火焰上方34次。（用手背皮膚接觸涂片反面，以不燙手為宜）以使細(xì)菌粘附在載玻片上更牢固。4、染色：于菌膜上滴加呂氏美蘭染液（以蓋滿菌膜為準(zhǔn)），染色12分鐘。5、水洗：傾去染色液，用洗瓶中的蒸餾水自玻片的一端輕輕沖洗，直至流下的水無色為止（切勿使水直沖菌膜

46、處。）6、干燥：自然干燥或用濾紙輕輕蓋在菌膜部位以吸去水份（切勿擦去菌體）。7、鏡檢：先在低倍鏡下找到菌斑。將顯微鏡筒向上移，再于菌斑處滴1滴香柏油，再將油鏡頭輕輕移下與載玻片接觸。然后用目鏡觀察。此時(shí)鏡筒僅僅稍微向上移動(dòng)，看到菌斑后，在稍微調(diào)節(jié)細(xì)螺旋，即可看到細(xì)菌的形態(tài)。8、油鏡頭的清潔：觀察完畢后，取下油鏡頭，先用擦鏡紙擦去香柏油，在用滴有二甲苯的擦鏡紙擦凈鏡頭，最后用干凈的擦鏡紙?jiān)俨羶翮R頭。做好儀器使用登記即可。二）細(xì)菌的革蘭氏染色1、制片：取二塊干凈的載玻片，各靠一小滴無菌水，以無菌操作規(guī)程分別挑取大腸桿菌和枯草桿菌少量，涂布于對(duì)應(yīng)的載玻片上與無菌水混勻，涂成極薄的菌膜。自然干燥后再通

47、過酒精燈進(jìn)行熱固定。2、初染：于菌膜上滴加結(jié)晶紫染液，以蓋滿菌膜為宜，染色1-2 min后傾去染液，用蒸餾水輕輕沖洗至流下無色為止，甩去載玻片上的殘余水。3、媒染：滴加碘液染色1-2min，用蒸餾水沖洗干凈。4、脫色：滴加95%酒精液脫色30秒鐘（準(zhǔn)確計(jì)時(shí)），用蒸餾水沖洗干凈。5、復(fù)染：滴加蕃紅液染色1-2min，用蒸餾水沖洗干凈最后自然干燥。6、鏡檢： 五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄：1、簡(jiǎn)單染色結(jié)果記錄繪出你所觀察到的細(xì)菌形態(tài)圖，并注明菌名、菌各部位名稱及放大倍數(shù)。2、革蘭氏染色結(jié)果記錄:1、在顯微鏡油鏡頭下觀察大腸桿菌被染成 色，枯草桿菌被染成 色。2、結(jié)論：大腸桿菌屬于革蘭氏 菌，枯草桿菌屬于革蘭氏

48、 菌。六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析及問題討論：實(shí)驗(yàn)十 利用毛霉有氧發(fā)酵生產(chǎn)豆制品一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求：1、學(xué)習(xí)利用毛霉發(fā)酵生產(chǎn)豆制品的原理和工藝過程。2、觀察豆制品發(fā)酵過程中的變化。二、實(shí)驗(yàn)原理：毛霉分布很廣，常見的主要有高大毛霉、總狀毛霉、魯氏毛霉等。它們都能產(chǎn)生蛋白質(zhì)水解酶、淀粉水解酶、脂肪水解酶。也就是分解大豆的能力很強(qiáng)。即在煮熟后冷卻的黃豆上接種毛霉，經(jīng)過前發(fā)酵培養(yǎng)和繁殖，分泌蛋白酶、淀粉酶、谷氨酰胺酶等復(fù)雜酶系，然后在長時(shí)間后發(fā)酵中與黃豆調(diào)料中的酶系、酵母、細(xì)菌等協(xié)同作用，使黃豆蛋白質(zhì)緩慢水解，生成多種氨基酸，加之由微生物代謝產(chǎn)生的各種有機(jī)酸與醇類作用生成酯，形成細(xì)膩、鮮香的特色。三、實(shí)驗(yàn)材料、儀

49、器及試劑：1、菌種：毛霉斜面菌種。2、培養(yǎng)基（料）：馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）、無菌水、黃豆、白酒、食鹽、五香粉、姜、辣椒、保鮮膜、95乙醇、酵母膏等。3、儀器和器具：培養(yǎng)皿、試管、牛皮紙、粗棉線、鍋、方盤、500mL三角瓶、接種針、顯微鏡、恒溫培養(yǎng)箱、恒溫干燥箱、蒸餾水器、恒溫恒濕培養(yǎng)箱、無菌操作臺(tái)、高壓滅菌鍋等。四、實(shí)驗(yàn)方法及步驟：1、一星期前配制好馬鈴薯斜面培養(yǎng)基。2、第一天1）按無菌操作規(guī)程進(jìn)行毛霉試管斜面接種，置于培養(yǎng)箱中25培養(yǎng)23天。2）培養(yǎng)皿進(jìn)行包扎及滅菌。3）原料處理：將黃豆中的霉變的黃豆、泥土雜質(zhì)等除去，后洗凈，用清水浸泡一夜。將辣椒烘干磨成粉末狀備用。3、第二天1）

50、將黃豆加適量水，放在電爐上煮沸，保持沸騰30min。在接種室內(nèi)將煮好的黃豆趁熱分裝于培養(yǎng)皿內(nèi)，自然冷卻，倒掉多余的水。2）按無菌操作規(guī)程將毛霉菌接入培養(yǎng)皿中，充分混勻后，貼上標(biāo)簽，寫上班級(jí)及學(xué)號(hào)，放入恒溫恒濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)23天。3）將菌種試管煮沸消毒后洗凈上交。4、第三天1）肉眼觀察：檢驗(yàn)每個(gè)平皿中毛霉生長情況，如有雜菌的經(jīng)老師認(rèn)證后棄取不要。2）鏡檢：于平皿中取少量菌制片染色后，于顯微鏡的高倍鏡下觀察是否有雜菌污染。認(rèn)為不合格的經(jīng)老師認(rèn)證后決定棄取。3）調(diào)味：將發(fā)酵好的黃豆轉(zhuǎn)入方盤中，按比例放好各種調(diào)味品攪拌均勻，再轉(zhuǎn)入205mL的燒杯中，于杯中加2030mL白酒，用保鮮膜封口，貼好標(biāo)簽。4

51、）陳釀：將產(chǎn)品置于食品柜中陳釀一周后即可食用。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄1）肉眼觀察結(jié)果：2）鏡檢結(jié)果：3）產(chǎn)品的感官檢驗(yàn)結(jié)果：六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析及問題討論實(shí)驗(yàn)十一 食品衛(wèi)生檢測(cè)A:食品中細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求：1、學(xué)習(xí)食品衛(wèi)生檢測(cè)中細(xì)菌總數(shù)測(cè)定的原理。2、學(xué)習(xí)平板菌落計(jì)數(shù)的操作原理和方法。二、實(shí)驗(yàn)原理：食品中的細(xì)菌總數(shù)，能正確反應(yīng)出食品被污染活菌的數(shù)量。在食品衛(wèi)生細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)中，是一項(xiàng)重要衛(wèi)生指標(biāo)。用來判斷食品被污染的程度。食品中細(xì)菌總數(shù)是指一克或一毫升的食品樣品，經(jīng)處理在一定條件下進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)后，所得的活細(xì)菌數(shù)。此法的特點(diǎn)是能測(cè)出樣品中含有活菌的數(shù)量。通常采用平板菌落計(jì)數(shù)法來進(jìn)行測(cè)定。平板菌落

52、計(jì)數(shù)法是將樣品制成一系列不同濃度的稀釋液，使樣品中的細(xì)菌分散成單個(gè)菌落，而存在于溶液中，再取一定量的稀釋液進(jìn)行接種，使其均勻地分布在培養(yǎng)皿的培養(yǎng)基上生長，經(jīng)24小時(shí)左右的培養(yǎng)，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目。一般認(rèn)為每一個(gè)菌落是由一個(gè)細(xì)菌細(xì)胞繁殖后形成的，以此即可計(jì)算出食品樣品中所存在的活菌數(shù)量。三、實(shí)驗(yàn)材料和器材：1、樣品：被污染的啤酒。2、培養(yǎng)基：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。3、器材：培養(yǎng)皿、試管、移液管、電爐、雙目顯微鏡、恒溫培養(yǎng)箱、無菌操作臺(tái)、高壓滅菌鍋、恒溫干燥箱等四、實(shí)驗(yàn)方法及步驟：第一天：a) 配制培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)酸堿度，裝瓶后滅菌/b) 器材包扎滅菌：將所需用的試管，移液管。培養(yǎng)皿等等玻璃器皿按教師教的方法包扎好，再進(jìn)行電熱干燥滅菌。第二天： 1、樣品處理：先把試管放在試管架子上，于試管上貼標(biāo)簽編號(hào)，于每支試管中加入無菌水9mL，然后吸取啤酒樣品1mL(取樣前應(yīng)將啤酒樣中加幾粒玻璃珠充分搖勻)加入1號(hào)試管中混勻（加樣品時(shí)移液管不得碰到試管內(nèi)的無