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1、生物安全講義(上)暨南大學(xué)生態(tài)學(xué)系2014-3-5第一章 緒論第一節(jié) 生物安全一、涵義及特點(diǎn)1、 廣義的生物安全問(wèn)題是國(guó)家安全問(wèn)題的組成部分,是指與生物有關(guān)的各種因素對(duì)社會(huì)、經(jīng)濟(jì)、人類(lèi)健康及生態(tài)環(huán)境所產(chǎn)生的危害或潛在風(fēng)險(xiǎn)。(從轉(zhuǎn)基因作物、外來(lái)品種和傳入的動(dòng)植物害蟲(chóng),到生物多樣性侵蝕、跨界牲畜疾病的擴(kuò)散、戰(zhàn)爭(zhēng)有毒武器以及“瘋?!辈。?狹義的生物安全:主要指通過(guò)基因工程技術(shù)所產(chǎn)生的遺傳工程體及其產(chǎn)品的安全性問(wèn)題, 即現(xiàn)代生物技術(shù)的研究、開(kāi)發(fā)、應(yīng)用以及轉(zhuǎn)基因生物的跨國(guó)越境轉(zhuǎn)移可能對(duì)生物多樣性、生態(tài)環(huán)境和人類(lèi)健康產(chǎn)生潛在的不利影響。特別是各類(lèi)轉(zhuǎn)基因活生物體釋放到環(huán)境中,可能對(duì)生物多樣性構(gòu)成潛在威脅。

2、外來(lái)物種遷入導(dǎo)致對(duì)當(dāng)?shù)厣鷳B(tài)系統(tǒng)的不良改變或破壞;人為造成的環(huán)境劇烈變化危及生物的多樣性;科學(xué)研究開(kāi)發(fā)生產(chǎn)和應(yīng)用中,經(jīng)遺傳修飾的生物體和危險(xiǎn)的病原體等可能對(duì)人類(lèi)健康、生存環(huán)境造成的危害等。 2、生物安全的外來(lái)威脅(1)人類(lèi)和農(nóng)業(yè)生物的各種外來(lái)有害生物 這類(lèi)外來(lái)有害生物包括各種傳染病、害蟲(chóng)、真 菌、細(xì)菌、線蟲(chóng)、病毒和雜草等。古今中外由于外來(lái) 有害生物危害人類(lèi)健康和農(nóng)業(yè)生物的安全,給人類(lèi) 帶來(lái)的災(zāi)難是十分沉痛的。公元6 世紀(jì)下半葉,鼠 疫(plague) 病菌從非洲侵入中東,進(jìn)而到達(dá)歐洲,造 成約1 億人死亡,甚至導(dǎo)致了東羅馬 帝國(guó)的衰亡;

3、馬鈴薯晚疫病侵入歐洲,造成 了歷史上著名的大饑荒,奪去了數(shù)十萬(wàn)人的生命; 1984 年禽流感隨國(guó)外引進(jìn)的一只鸚鵡傳入北京,不得不撲殺40 萬(wàn)只雞,造成直接經(jīng)濟(jì)損失1000 萬(wàn)元 人民幣; 1996 年, 瘋牛病禍害英國(guó),直接經(jīng)濟(jì)損 失在156 億美元以上;2001 年口蹄 疫( Foot2and2mouth disease) 傳入英國(guó),進(jìn)而進(jìn)入歐 洲大陸,造成巨大損失。(2)外來(lái)生物入侵 外來(lái)生物入侵一般指非本地生物的定殖導(dǎo)致生物多樣性的下降甚至喪失,嚴(yán)重危害環(huán)境生物安全的現(xiàn)象,也有人稱(chēng) 之為“生物污染”。 雖然歷

4、史上有不少外來(lái)生物曾經(jīng)為人類(lèi)造福, 如美國(guó)種植的作物100 %均為外來(lái)物種,但外來(lái)生物入侵每年給人類(lèi)和環(huán)境造成的損失卻是巨大的。 據(jù)1999 年康奈爾大學(xué)公布的研究結(jié)果表明,美國(guó)由于外來(lái)有害生物和外來(lái)生物入侵所造成的直接經(jīng)濟(jì) 損失每年都達(dá)1226 億美元。據(jù)國(guó)家 環(huán)??偩值墓浪?我國(guó)由于部分外來(lái)有害生物和外 來(lái)生物入侵所造成的損失每年都在574 億元人民幣 以上。 (3)外來(lái)轉(zhuǎn)基因生物 隨著現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的發(fā)展,世界上出現(xiàn)了越來(lái) 越多的轉(zhuǎn)基因生物。轉(zhuǎn)基因生物是通過(guò)現(xiàn)代生物重組DNA 技術(shù)導(dǎo)入外源基因的生物,

5、因此從某種意 義上說(shuō)轉(zhuǎn)基因生物也是外來(lái)生物。正如核技術(shù)一 樣,轉(zhuǎn)基因技術(shù)存在著一定風(fēng)險(xiǎn),既可以造福人類(lèi)也 可以危害人類(lèi)。一些科學(xué)家認(rèn)為,轉(zhuǎn)基因生物有可 能對(duì)人類(lèi)健康、農(nóng)業(yè)生物和環(huán)境生物構(gòu)成極大的威 脅。    3、國(guó)際關(guān)注的幾個(gè)主要的生物安全問(wèn)題3.1. 轉(zhuǎn)基因生物對(duì)非目標(biāo)生物的影響3.2.增加目標(biāo)害蟲(chóng)的抗性和進(jìn)化速度3.3.雜草化3.4.對(duì)生物多樣性和生態(tài)環(huán)境的影響3.5.對(duì)人體健康的威脅和影響 二、生物安全性評(píng)價(jià)1、生物安全性評(píng)價(jià)的目的提供科學(xué)決策的依據(jù); 保障人類(lèi)健康和環(huán)境安全; 回答公眾疑問(wèn); 促

6、進(jìn)國(guó)際貿(mào)易,維護(hù)國(guó)家權(quán)益; 促進(jìn)生物技術(shù)可持續(xù)發(fā)展2、生物安全性評(píng)價(jià)的程序和方法2.1 安全性的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)國(guó)際無(wú)統(tǒng)一的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn);一般按照對(duì)人類(lèi)健康和環(huán)境的潛在危險(xiǎn)程度由低到高將生物技術(shù)的安全性分為4個(gè)安全等級(jí); 我國(guó)強(qiáng)調(diào)重點(diǎn)在基因工程,分為4個(gè)安全等級(jí)。2.2 安全等級(jí)的劃分程序安全性評(píng)價(jià)的程序和結(jié)果3、生物安全性評(píng)價(jià)的主要內(nèi)容 內(nèi)容包括對(duì)人類(lèi)健康的影響和對(duì)生態(tài)環(huán)境的影響兩個(gè)方面。3.1 受體生物的安全等級(jí)(一)符合下列條件之一的受體生物應(yīng)當(dāng)確定為安全等級(jí)I:1).對(duì)人類(lèi)健康和生態(tài)環(huán)境未曾發(fā)生過(guò)不利影響;2).演化成有害生物的可能性極小;3).用于特殊研究的短存活期受體生物,實(shí)驗(yàn)結(jié)束后在自 然環(huán)

7、境中存活的可能性極小。(二)對(duì)人類(lèi)健康和生態(tài)環(huán)境可能產(chǎn)生低度危險(xiǎn),但是通過(guò) 采取安全控制措施完全可以避免其危險(xiǎn)的受體生物,應(yīng) 當(dāng)確定為安全等級(jí)。 (三)對(duì)人類(lèi)健康和生態(tài)環(huán)境可能產(chǎn)生中度危險(xiǎn),但是通過(guò) 采取安全控制措施,基本上可以避免其危險(xiǎn)的受體生 物,應(yīng)當(dāng)確定為安全等級(jí)。 (四)對(duì)人類(lèi)健康和生態(tài)環(huán)境可能產(chǎn)生高度危險(xiǎn),而且在封 閉設(shè)施之外尚無(wú)適當(dāng)?shù)陌踩刂拼胧┍苊馄浒l(fā)生危險(xiǎn)的 受體生物,應(yīng)當(dāng)確定為安全等級(jí)。包括:1).可能與其它生物發(fā)生高頻率遺傳物質(zhì)交換的有害生 物;2).尚無(wú)有效技術(shù)防止其本身或其產(chǎn)物逃逸、擴(kuò)散的有害 生物;3).尚無(wú)有效技術(shù)保證其逃逸后,在對(duì)人類(lèi)健康和生態(tài)環(huán) 境產(chǎn)生不利影響之

8、前,將其捕獲或消滅的有害生物。3.2 基因操作對(duì)受體生物安全性的影響基因操作對(duì)受體生物安全等級(jí)的影響分為三種類(lèi)型,即: 增加受體生物的安全性;不影響受體生物的安全性;降低 受體生物的安全性。類(lèi)型1 增加受體生物安全性的基因操作 ,包括:去除某個(gè)(些)已知具有危險(xiǎn)的基因或抑制某個(gè) (些)已知具有危險(xiǎn)的基因表達(dá)的基因操作。類(lèi)型2 不影響受體生物安全性的基因操作,包括:1.改變受體生物的表型或基因型而對(duì)人類(lèi)健康和生態(tài)環(huán) 境沒(méi)有影響的基因操作;2.改變受體生物的表型或基因型而對(duì)人類(lèi)健康和生態(tài)環(huán) 境沒(méi)有不利影響的基因操作。類(lèi)型3 降低受體生物安全性的基因操作,包括:1.改變受體生物的表型或基因型,并可能

9、對(duì)人類(lèi)健康或 生態(tài)環(huán)境產(chǎn)生不利影響的基因操作;2. 改變受體生物的表型或基因型,但不能確定對(duì)人類(lèi)健 康或生態(tài)環(huán)境影響的基因操作。3.3 遺傳工程體的安全等級(jí)根據(jù)受體生物的安全等級(jí)和基因操作對(duì)其安全等級(jí)的影響 類(lèi)型及影響程度,確定轉(zhuǎn)基因生物的安全等級(jí)。3.4 遺傳工程產(chǎn)品的安全等級(jí)一般是根據(jù)其月遺傳工程體的特性和安全性進(jìn)行比較來(lái)確定的,其分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)與受體生物的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)相同。3.5 基因工程安全性的綜合評(píng)價(jià)和建議三、生物安全控制措施1、生物安全控制措施的類(lèi)別物理控制措施,系指利用物理方法限制轉(zhuǎn)基因生物 及其產(chǎn)物在實(shí)驗(yàn)區(qū)外的生存及擴(kuò)散,如設(shè)置柵欄,防止轉(zhuǎn) 基因生物及其產(chǎn)物從實(shí)驗(yàn)區(qū)逃逸或被人或動(dòng)物攜帶至

10、實(shí)驗(yàn) 區(qū)外等?;瘜W(xué)控制措施,系指利用化學(xué)方法限制轉(zhuǎn)基因生物 及其產(chǎn)物的生存、擴(kuò)散或殘留,如生物材料、工具和設(shè)施 的消毒。生物控制措施,系指利用生物措施限制轉(zhuǎn)基因生物 及其產(chǎn)物的生存、擴(kuò)散或殘留,以及限制遺傳物質(zhì)由轉(zhuǎn)基 因生物向其它生物的轉(zhuǎn)移,如設(shè)置有效的隔離區(qū)及監(jiān)控 區(qū)、清除試驗(yàn)區(qū)附近可與轉(zhuǎn)基因生物雜交的物種、阻止轉(zhuǎn) 基因生物開(kāi)花或去除繁殖器官、或采用花期不遇等措施, 以防止目的基因向相關(guān)生物的轉(zhuǎn)移。環(huán)境控制措施,系指利用環(huán)境條件限制轉(zhuǎn)基因生物 及其產(chǎn)物的生存、繁殖、擴(kuò)散或殘留,如控制溫度、水 份、光周期等。規(guī)??刂拼胧?,系指盡可能地減少用于試驗(yàn)的轉(zhuǎn)基 因生物及其產(chǎn)物的數(shù)量或減小試驗(yàn)區(qū)的面積,

11、以降低轉(zhuǎn)基 因生物及其產(chǎn)物廣泛擴(kuò)散的可能性,在出現(xiàn)預(yù)想不到的后 果時(shí),能比較徹底地將轉(zhuǎn)基因生物及其產(chǎn)物消除。四、生物安全管理體系及實(shí)施原則1、生物安全管理的總體目標(biāo):通過(guò)制定政策和法律規(guī)定,確立相關(guān)的技術(shù)準(zhǔn)則,建立健全管理機(jī)構(gòu)并完善監(jiān)測(cè)和監(jiān)督機(jī)制,積極發(fā)展生物技術(shù)的研究與開(kāi)發(fā),切實(shí)加強(qiáng)生物安全的科學(xué)技術(shù)研究,有效地將生物技術(shù)可能產(chǎn)生地風(fēng)險(xiǎn)降低到最低限度,以最大限度地保護(hù)人類(lèi)健康和生態(tài)環(huán)境安全,促進(jìn)國(guó)家經(jīng)濟(jì)發(fā)展和社會(huì)進(jìn)步。2、中國(guó)對(duì)生物安全的關(guān)注2.1、中國(guó)對(duì)轉(zhuǎn)基因生物安全的法治管理 隨著21世紀(jì)經(jīng)濟(jì)全球化進(jìn)程的加快,轉(zhuǎn)基因生物的安全問(wèn)題將不僅是一國(guó)的問(wèn)題一地的問(wèn)題,而是涉及國(guó)民生活、國(guó)家利益甚

12、至國(guó)家安全的世界性科學(xué)、經(jīng)濟(jì)、政治和社會(huì)問(wèn)題,并直接關(guān)系到可持續(xù)發(fā)展以及后代子孫健康安全的大事。生物安全和環(huán)境安全都是國(guó)家安全及國(guó)家總體實(shí)力和國(guó)家競(jìng)爭(zhēng)力的重要內(nèi)容和組成部分。中國(guó)頒布的與生物安全相關(guān)的法律:1993,國(guó)家科委,基因工程安全管理辦法1996,農(nóng)業(yè)部,農(nóng)業(yè)生物基因工程管理實(shí)施辦法2000,國(guó)家出入境檢驗(yàn)檢疫局,進(jìn)口食品標(biāo)簽管理辦法2001,國(guó)務(wù)院304號(hào)令,農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物安全管理?xiàng)l例2002,中國(guó)出臺(tái)三項(xiàng)配套的實(shí)施細(xì)則,農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物安全評(píng)價(jià)管理辦法,農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物進(jìn)口安全管理辦法,農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物標(biāo)識(shí)管理辦法2.2、中國(guó)有關(guān)轉(zhuǎn)基因生物安全的基本對(duì)策1 )加強(qiáng)生物安全立法2)加強(qiáng)轉(zhuǎn)基

13、因生物及其產(chǎn)品的安全評(píng)估3 )重視有關(guān)生物安全的信息情報(bào)工作,特別是轉(zhuǎn)基因生物有關(guān)信息的傳播五、加強(qiáng)生物安全工作的對(duì)策健全完善生物安全管理法規(guī)體系;加強(qiáng)并理順生物安全管理機(jī)構(gòu)體系;支持鼓勵(lì)生物安全有關(guān)領(lǐng)域的科學(xué)研究工作;積極開(kāi)展生物安全事物的國(guó)際合作與交流;重視生物安全的科學(xué)普及和培訓(xùn)教育工作;第二節(jié) 動(dòng)植物檢疫的起源與發(fā)展一、動(dòng)植物檢疫的起源1、檢疫的萌芽14世紀(jì)中葉的歐洲,強(qiáng)制性隔離措施;2、人為傳播與災(zāi)難性動(dòng)植物疫情19世紀(jì)30年代的愛(ài)爾蘭,馬鈴薯晚疫?。晃瓒径?、非洲豬瘟3、早期的動(dòng)植物檢疫特征:運(yùn)用法律和行政的強(qiáng)制手段,禁止一切帶有危險(xiǎn)性動(dòng)物疫病和植物有害生物的動(dòng)植物及其產(chǎn)品的輸入,以

14、保護(hù)本國(guó)農(nóng)牧業(yè)的生產(chǎn)安全和人類(lèi)的身體健康二、動(dòng)植物檢疫的基本概念1、基本術(shù)語(yǔ)動(dòng)物疫?。褐傅氖菫楹蚩赡転楹?dòng)物及動(dòng)物產(chǎn)品的任何傳染病和寄生蟲(chóng)病。植物有害生物:泛指為害或可能為害植物及其產(chǎn)品的任何生物,即任何對(duì)植物或植物產(chǎn)品有害的植物、動(dòng)物或病原體的種、株系或生物型。檢疫性動(dòng)物疫病和植物有害生物:對(duì)受其威脅的地區(qū)具有潛在的經(jīng)濟(jì)重要性,但尚未在該地區(qū)發(fā)生,或雖已發(fā)生但分布未廣并正在進(jìn)行官方控制的動(dòng)物疫病和植物有害生物。動(dòng)植物檢疫:旨在防止檢疫性動(dòng)物疫病和植物有害生物的傳入、傳出和擴(kuò)散,或確保其官方控制的一切的活動(dòng)2、動(dòng)植物檢疫的主要目的防止危險(xiǎn)性動(dòng)物疫病和植物有害生物的傳入、傳出及擴(kuò)散;保護(hù)農(nóng)、林

15、、牧、漁業(yè)生產(chǎn)安全、人體健康以及生態(tài)環(huán)境;促進(jìn)國(guó)際及國(guó)內(nèi)經(jīng)濟(jì)貿(mào)易的發(fā)展。3、動(dòng)植物檢疫的實(shí)施范圍(1)動(dòng)植物和動(dòng)植物產(chǎn)品飼養(yǎng)、野生的動(dòng)物,包括通過(guò)貿(mào)易、科技合作、贈(zèng)送、援助等方式進(jìn)出境的動(dòng)物;旅客攜帶的進(jìn)境動(dòng)物,主要是伴侶動(dòng)物和觀賞動(dòng)物;郵寄進(jìn)境的動(dòng)物;過(guò)境動(dòng)物依法檢疫的動(dòng)物產(chǎn)品指來(lái)源于動(dòng)物未經(jīng)加工或雖經(jīng)加工但仍有可能傳播疾病的產(chǎn)品。包括通過(guò)貿(mào)易、科技合作、贈(zèng)送、援助等方式進(jìn)出境的動(dòng)物產(chǎn)品,主要是肉類(lèi)、毛類(lèi)以及皮張;旅客攜帶的進(jìn)境動(dòng)物產(chǎn)品;郵寄進(jìn)境的動(dòng)物產(chǎn)品依法檢疫的植物是指栽培植物、野生植物及其種子、種苗和其他繁殖材料等。包括通過(guò)貿(mào)易、科技合作、贈(zèng)送、援助等方式進(jìn)出境的植物;旅客攜帶的進(jìn)境植

16、物;郵寄進(jìn)境的植物(2)裝載容器、包裝物和鋪墊材料(3)運(yùn)輸工具(4)其它檢疫物,包括動(dòng)物疫苗、血清、診斷液以及動(dòng)植物性廢棄物等三、國(guó)際動(dòng)植物檢疫現(xiàn)狀1、動(dòng)植物檢疫的基本類(lèi)型1) 環(huán)境優(yōu)越型,主要指島國(guó)和半島國(guó),如澳大利亞、新西蘭、日本和韓國(guó)等。特點(diǎn):嚴(yán)格控制人為傳播和入侵,進(jìn)境動(dòng)植物檢疫要求極為嚴(yán)格,出境檢疫相對(duì)寬松且根據(jù)進(jìn)口國(guó)要求出證。2)發(fā)達(dá)國(guó)家大陸型,主要指地理位置毗鄰的經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)國(guó)家,如美國(guó)和加拿大。特點(diǎn):相互間檢疫要求寬松,在對(duì)其他國(guó)家時(shí),進(jìn)境檢疫要求極為嚴(yán)格,出境檢疫相對(duì)寬松且根據(jù)進(jìn)口國(guó)要求出證。3) 經(jīng)濟(jì)共同體大陸型,主要指地理位置相鄰且構(gòu)成了經(jīng)濟(jì)共同體的國(guó)家,如歐洲經(jīng)濟(jì)共同體。

17、特點(diǎn):共同體間實(shí)施共同的檢疫原則和措施,相互間檢疫幾近取消,其進(jìn)境檢疫要求極為嚴(yán)格,出境檢疫相對(duì)寬松且根據(jù)進(jìn)口國(guó)要求出證。4)發(fā)展中國(guó)家大陸型,如中國(guó)、印度、智利、南非以及其它部分美洲、非洲國(guó)家。特點(diǎn):進(jìn)境檢疫以防止傳入為主,對(duì)特殊地區(qū)、特殊物品的檢疫非常嚴(yán)格,出境檢疫較為嚴(yán)格5)工商業(yè)城市型,如新加坡、香港等。特點(diǎn):在進(jìn)境檢疫中,對(duì)動(dòng)物、動(dòng)物產(chǎn)品以及種子種苗實(shí)施嚴(yán)格檢疫,對(duì)植物產(chǎn)品檢疫較寬松,出境檢疫相對(duì)寬松且根據(jù)進(jìn)口國(guó)要求出證。2、動(dòng)植物檢疫的基本屬性法制性、預(yù)防性、國(guó)際性和綜合性3、動(dòng)植物檢疫的發(fā)展特點(diǎn)動(dòng)植物檢疫的執(zhí)法更加嚴(yán)格;動(dòng)植物檢疫的范圍不斷擴(kuò)大;動(dòng)植物檢疫的政策及時(shí)調(diào)整;動(dòng)植物檢

18、疫的技術(shù)逐步提高;動(dòng)植物檢疫宣傳全面加強(qiáng)四、中國(guó)動(dòng)植物檢疫的發(fā)展動(dòng)植物檢疫的孕育與建立(19031948)動(dòng)植物檢疫的開(kāi)拓與進(jìn)?。?9491979)動(dòng)植物檢疫的改革與創(chuàng)新(1980年至今)第三節(jié) 動(dòng)植物檢驗(yàn)檢疫的一般程序動(dòng)植物檢驗(yàn)檢疫的一般程序:檢疫許可、檢疫申報(bào)、現(xiàn)場(chǎng)檢驗(yàn)和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)、檢疫處理、出證放行。1、檢疫許可1)含義:在輸入某些檢疫物時(shí),輸入單位向檢疫機(jī)關(guān)提出申請(qǐng),檢疫機(jī)關(guān)審查并決定是否批準(zhǔn)輸入的法定程序。2)主要作用 o 避免盲目進(jìn)境,減少經(jīng)濟(jì)損失;o 提出檢疫要求,加強(qiáng)預(yù)防傳入;o 依據(jù)貿(mào)易合同,進(jìn)行合理索賠。3)檢疫許可的類(lèi)型:一般許可,特殊許可特殊許可中,許可物主要指那些因科

19、學(xué)研究等特殊需要而引進(jìn)的國(guó)家規(guī)定的禁止進(jìn)境物。Ø 動(dòng)植物病原體、害蟲(chóng)及其它有害生物Ø 動(dòng)植物疫情流行國(guó)家地區(qū)的有關(guān)動(dòng)植物、動(dòng)植物產(chǎn)品和其它檢疫物Ø 動(dòng)物尸體Ø 土壤4)特殊檢疫許可的基本手續(xù):領(lǐng)取單證、報(bào)請(qǐng)批準(zhǔn)、批準(zhǔn)輸入重新辦理檢疫手續(xù)的情況:變更輸入物的品種或數(shù)量變更輸出國(guó)家或地區(qū)變更進(jìn)境口岸超過(guò)檢疫可審批有效期2、檢疫申報(bào)1)含義:檢疫物輸入或輸出時(shí)由貨主或代理人向檢疫機(jī)關(guān)及時(shí)聲明并申請(qǐng)檢疫的法律程序,由貨主或代理人和檢疫人員共同完成。2)基本手續(xù):一般由報(bào)檢員憑報(bào)檢員證向檢疫機(jī)關(guān)辦理手續(xù)。先填寫(xiě)報(bào)檢單,然后將報(bào)檢單、檢疫證書(shū)、產(chǎn)地證書(shū)、貿(mào)易合同、信

20、用證、發(fā)票等單證一起檢疫機(jī)關(guān)。3、現(xiàn)場(chǎng)檢驗(yàn)和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)(1)現(xiàn)場(chǎng)檢驗(yàn)1)基本含義:是檢疫人員在現(xiàn)場(chǎng)環(huán)境中對(duì)輸入或輸出的應(yīng)檢物進(jìn)行檢查和抽樣,并初步確認(rèn)是否符合相關(guān)檢疫要求的法定程序2)主要方法:現(xiàn)場(chǎng)檢查和抽樣是現(xiàn)場(chǎng)檢驗(yàn)的主要任務(wù),主要針對(duì)運(yùn)輸及裝載工具、貨物及存放場(chǎng)所、攜帶物及郵寄物等應(yīng)檢物進(jìn)行檢驗(yàn),經(jīng)現(xiàn)場(chǎng)檢驗(yàn)采集的樣品需送到實(shí)驗(yàn)室繼續(xù)進(jìn)行檢測(cè)。(2)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)1)基本含義:是借助實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備對(duì)檢疫樣品進(jìn)行動(dòng)物疫病和植物有害生物檢查、鑒定的法定程序2)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的主要方法動(dòng)物性樣品的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)主要內(nèi)容:確定樣品是否感染以及感染何種檢疫性動(dòng)物疾病。主要方法:病原檢驗(yàn)、血清學(xué)檢驗(yàn)、病理學(xué)檢驗(yàn)植物

21、性樣品的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)主要內(nèi)容:確定植物性樣品是否感染以及感染哪種檢疫性植物有害生物。主要方法:比重檢測(cè)、染色檢測(cè)、洗滌檢測(cè)等4、檢疫處理(1)基本含義:是檢疫機(jī)關(guān)根據(jù)檢驗(yàn)、檢測(cè)的結(jié)果以及相關(guān)規(guī)定,采取一定的方式對(duì)檢疫物實(shí)施處理的法定程序。(2)主要方式:退回或銷(xiāo)毀處理、除害處理除害技術(shù):常規(guī)消毒、熏蒸處理、輻照處理、熱冷處理5、出征放行(1)基本含義:是檢疫機(jī)關(guān)根據(jù)檢疫或除害處理的結(jié)果,判斷合格后簽發(fā)相關(guān)單證并決定準(zhǔn)予輸出、輸入的法定程序。(2)放行條件:經(jīng)檢疫合格或經(jīng)除害處理合格的進(jìn)出境檢疫物,進(jìn)境檢疫放行條件 由進(jìn)境口岸檢疫機(jī)關(guān)簽發(fā)檢疫通關(guān)單或在運(yùn)單加蓋檢疫放行章,準(zhǔn)許進(jìn)境。出境和過(guò)境檢疫放

22、行條件 由當(dāng)?shù)乜诎稒z疫機(jī)關(guān)簽發(fā)檢疫證書(shū),準(zhǔn)予出境第二章 現(xiàn)代生物技術(shù)一、生物技術(shù)發(fā)展概況1、 生物技術(shù)的定義生物技術(shù)是以現(xiàn)代生命科學(xué)理論為基礎(chǔ),利用生物體及其細(xì)胞的、亞細(xì)胞的和分子的組成部分,結(jié)合工程學(xué)、信息學(xué)等手段開(kāi)展研究及制造產(chǎn)品,或改造動(dòng)物、植物、微生物等,并使其具有所期望的品質(zhì)、特性,從而為社會(huì)提供商品和服務(wù)的綜合性技術(shù)體系。三個(gè)基本要素:采用現(xiàn)代生命科學(xué)的基礎(chǔ)理論和技術(shù)、應(yīng)用生物材料或生物系統(tǒng) 通過(guò)一定的工程系統(tǒng)(生產(chǎn)工藝、設(shè)備)、獲得產(chǎn)品或提供服務(wù)2、發(fā)展簡(jiǎn)況1970年,Smith和Kelly分離了第一個(gè)核酸限制性?xún)?nèi)切酶,使有目的的切割DNA有了可能;1972年,利用內(nèi)切酶和連接酶

23、,得到了第一個(gè)體外重組的DNA分子,從而建立了重組DNA技術(shù);1975年,淋巴細(xì)胞雜交瘤生產(chǎn)單克隆抗體技術(shù)問(wèn)世,為人類(lèi)及動(dòng)物疾病的診斷與治療提供新手段;1976年,世界上第一家應(yīng)用生物技術(shù)開(kāi)發(fā)新藥的公司Genetech公司建立,拉開(kāi)了現(xiàn)代生物技術(shù)新興產(chǎn)業(yè)發(fā)展的序幕;20世紀(jì)80年代以來(lái),生物技術(shù)發(fā)展很快,尤其是轉(zhuǎn)基因工程作物的商品化進(jìn)程迅速1983年,第一個(gè)轉(zhuǎn)基因生物煙草1986年,抗蟲(chóng)和抗除草劑的轉(zhuǎn)基因棉花首次進(jìn)入田間實(shí)驗(yàn)1987年,Calgene公司獲得可延長(zhǎng)水果保鮮期基因序列的專(zhuān)利1990年,出現(xiàn)第一個(gè)轉(zhuǎn)基因谷物1993年,美國(guó)FDA聲稱(chēng)轉(zhuǎn)基因作物不需專(zhuān)門(mén)監(jiān)管1994年,美國(guó)FDA批準(zhǔn)第

24、一個(gè)轉(zhuǎn)基因食品1994年,抗草甘膦轉(zhuǎn)基因大豆被批準(zhǔn)商業(yè)種植1995年止,美國(guó)加拿大共批準(zhǔn)35種轉(zhuǎn)基因作物可投入商業(yè)化生產(chǎn)種植轉(zhuǎn)基因作物商業(yè)化:遍布6大洲;2000年商業(yè)化種植面積比1996年翻了幾倍;預(yù)測(cè):2020年世界上80 -90的農(nóng)作物將是轉(zhuǎn)基因植物。3、當(dāng)代生命科學(xué)與生物技術(shù)發(fā)展的現(xiàn)狀和前景 在新的世紀(jì)里,生命科學(xué)的新發(fā)現(xiàn),生物技術(shù)的新突破,生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)的新發(fā)展將極大地改變?nèi)祟?lèi)及其社會(huì)發(fā)展的進(jìn)程。日益成熟的轉(zhuǎn)基因技術(shù)、克隆技術(shù)以及正在加速發(fā)展的基因組學(xué)技術(shù)和蛋白質(zhì)組技術(shù)、生物信息技術(shù)、生物芯片技術(shù)、干細(xì)胞組織工程等關(guān)鍵技術(shù),正在推動(dòng)生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)成為新世紀(jì)最重要的產(chǎn)業(yè)之一,深刻地改變?nèi)祟?lèi)

25、的醫(yī)療衛(wèi)生、農(nóng)業(yè)、人口和食品狀況。 (1)世界各國(guó)幾乎無(wú)一例外地將生命科學(xué)和生物技術(shù)放在重要位置 2002年美國(guó)在生物技術(shù)領(lǐng)域投入研究開(kāi)發(fā)資金已高達(dá)157億美元。日本政府2002年已明確提出生物技術(shù)立國(guó)戰(zhàn)略,并計(jì)劃五年內(nèi)將政府在生命科學(xué)和生物技術(shù)的研究預(yù)算增加一倍,達(dá)到8800億日元。歐盟已成立生物技術(shù)委員會(huì),在其2002年出臺(tái)的政策中,用于生物技術(shù)的研究費(fèi)用高達(dá)175億歐元,另有近600億歐元的風(fēng)險(xiǎn)投資,計(jì)劃在10年內(nèi)超過(guò)美國(guó)。新加坡制定了“5年躋身生物技術(shù)頂尖行列”的目標(biāo),將外匯儲(chǔ)備的5%-10%用于生物技術(shù)及產(chǎn)業(yè)的開(kāi)發(fā)。(2)全球生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)的三座金礦目前已經(jīng)日漸凸現(xiàn) 首先是基因技術(shù),利

26、用轉(zhuǎn)基因技術(shù)所得轉(zhuǎn)基因生物正創(chuàng)造新的奇跡。第二座金礦是新藥開(kāi)發(fā)。利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)開(kāi)發(fā)新藥,是目前最為熱門(mén)也是最為賺錢(qián)的領(lǐng)域之一。醫(yī)藥生物技術(shù)將從預(yù)防、疾病診斷、藥物制造、生物治療等方面全面提升醫(yī)藥衛(wèi)生科技水平,推進(jìn)第四次醫(yī)學(xué)科技革命。第三座金礦是在工業(yè)領(lǐng)域的應(yīng)用:生物技術(shù)在工業(yè)領(lǐng)域的應(yīng)用被業(yè)界稱(chēng)為“新的工業(yè)革命”,預(yù)計(jì)到2010年,全球化學(xué)產(chǎn)品中有五分之一將應(yīng)用生物制造的產(chǎn)品產(chǎn)值。(3)能源生物技術(shù)產(chǎn)(BT)有望以“綠金”代替“黑金” 目前石油期貨價(jià)格居高不下,已對(duì)世界經(jīng)濟(jì)發(fā)展產(chǎn)生影響,甚致對(duì)汽車(chē)銷(xiāo)售都產(chǎn)生了負(fù)面影響。全球生物質(zhì)能儲(chǔ)量為18000億噸,相當(dāng)于640億噸石油,利用生物技術(shù)將生物質(zhì)制

27、造成石油,這樣不僅可緩解石油短缺的壓力 ,還有利于改善環(huán)境,當(dāng)然這有一個(gè)過(guò)程,所以當(dāng)前首先要采取的還是節(jié)油措施等。(4)生物經(jīng)濟(jì)在21世紀(jì)會(huì)取代信息經(jīng)濟(jì)成為全球經(jīng)濟(jì)的主旋律 許多科學(xué)家認(rèn)為,以生命科學(xué)和生物技術(shù)研究開(kāi)發(fā)應(yīng)用為基礎(chǔ)的、建立在生物技術(shù)產(chǎn)品和產(chǎn)業(yè)之上的經(jīng)濟(jì)即生物經(jīng)濟(jì)在21世紀(jì)會(huì)取代信息經(jīng)濟(jì)成為全球經(jīng)濟(jì)的主旋律。美國(guó)“時(shí)代”周刊預(yù)言:2020年世界將進(jìn)入生物經(jīng)濟(jì)時(shí)代,不久的將來(lái),生物經(jīng)濟(jì)將10倍于信息經(jīng)濟(jì)。4、生物技術(shù)的顯著特點(diǎn)n 高技術(shù):高層次人才,高新技術(shù)手段,多學(xué)科滲透n 高投入:在國(guó)外,一個(gè)生物藥品平均要投入13億美元,并隨著開(kāi)發(fā)難度的增大,有逐步增高的趨勢(shì)n 長(zhǎng)周期:國(guó)際上,

28、一個(gè)新的生物藥品需要68年時(shí)間n 高風(fēng)險(xiǎn): 一個(gè)新藥品的開(kāi)發(fā),經(jīng)過(guò)一系列的程序-研發(fā)、中試、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、IIII期臨床實(shí)驗(yàn),上市和嚴(yán)格的藥政監(jiān)督管理。每一步都可能失敗,而前功盡棄n 高回報(bào): 開(kāi)發(fā)成功一個(gè)新的生物藥品, 回報(bào)很高。如美國(guó)Amgen公司,首次開(kāi)發(fā)上市的EPO、G-SCF到1997年的銷(xiāo)售額分別接近和達(dá)到20億美元5、現(xiàn)代生物技術(shù)的目的n 對(duì)生物體進(jìn)行改造,培育出具有優(yōu)良品質(zhì)的動(dòng)物、植物、微生物新品系。n 利用微生物、動(dòng)物、植物為反應(yīng)器對(duì)原料進(jìn)行加工,生產(chǎn)出人類(lèi)所需要的產(chǎn)品。n 進(jìn)行疾病的防治、診斷和治療。n 環(huán)境污染的檢測(cè)二、現(xiàn)代生物技術(shù)的主要內(nèi)容1、基因工程是當(dāng)前生物技術(shù)中影響最

29、大、發(fā)展最迅速、最具突破性的領(lǐng)域,基礎(chǔ)是DNA重組技術(shù),包括建立重組DNA和cDNA文庫(kù)、基因克隆、用限制性?xún)?nèi)切酶剪切DNA和重組DNA、基因轉(zhuǎn)化、基因表達(dá)檢測(cè)、分子雜交、DNA測(cè)序、基因敲除、基因敲入等內(nèi)容,其延伸還包括對(duì)基因產(chǎn)物蛋白質(zhì)的修飾和改造研究方面?;蚬こ萄芯康睦碚撘罁?jù):(1)不同基因具有相同的物質(zhì)基礎(chǔ), 即具有遺傳功能的特定核苷酸序列的DNA片斷(2)基因是可切割的 作為DNA分子上一個(gè)特定核苷酸序列的基因,允許從DNA分子上一個(gè)一個(gè)完整地切割下來(lái)。(3)基因是可轉(zhuǎn)移地 攜帶基因地DNA分子可以在不同染色體間進(jìn)行跳躍,或者在生物體內(nèi)地染色體DNA上移動(dòng),甚至可以在不同染色體間進(jìn)行

30、跳躍,插入到靶DNA分子中。由此表明基因是可以轉(zhuǎn)移地,而且是可以重組地。(4)多肽與基因間存在對(duì)應(yīng)關(guān)系 普遍認(rèn)為,一種多肽就有一種相對(duì)應(yīng)地基因。因此,基因地轉(zhuǎn)移或重組最終可以根據(jù)其表達(dá)產(chǎn)物多肽地性質(zhì)來(lái)考察。(5)遺傳密碼是通用的 一系列三聯(lián)密碼子同氨基酸之間的對(duì)應(yīng)關(guān)系,在所有生物中是相同的。也就是說(shuō),重組的DNA分子不管導(dǎo)入什么樣的生物細(xì)胞中,只有具備轉(zhuǎn)錄翻譯的條件,均能轉(zhuǎn)錄翻譯出同樣的氨基酸。(6)基因可以通過(guò)復(fù)制靶遺傳信息傳遞給下一代 經(jīng)重組的基因一般來(lái)說(shuō)是能傳代的,可以獲得相對(duì)穩(wěn)定的轉(zhuǎn)基因生物基因工程的主要內(nèi)容或(步驟):1)、從復(fù)雜的生物有機(jī)體基因組中,經(jīng)過(guò)酶切消化或PCR擴(kuò)增等步驟,

31、分離出帶有目的基因的DNA片段。2)、在體外,將帶有目的基因的外源DNA片段連接到能夠自我復(fù)制的并具有選擇記號(hào)的載體分子上,形成重組DNA分子。3)、將重組DNA分子轉(zhuǎn)移到適當(dāng)?shù)氖荏w細(xì)胞(亦稱(chēng)寄主細(xì)胞),并與之一起增殖。4)、從大量的細(xì)胞繁殖群體中,篩選出獲得了重組DNA分子的受體細(xì)胞克隆。5)、從這些篩選出來(lái)的受體細(xì)胞克隆,提取出已經(jīng)得到擴(kuò)增的目的基因,供進(jìn)一步分析研究使用。6)、將目的基因克隆到表達(dá)載體上,導(dǎo)入寄主細(xì)胞,使之在新的遺傳背景下實(shí)現(xiàn)功能表達(dá),產(chǎn)生出人類(lèi)所需要的物質(zhì)。 2、細(xì)胞工程是建立在細(xì)胞生物學(xué)和遺傳學(xué)基礎(chǔ)上綜合發(fā)展起來(lái)的,其目的是在細(xì)胞水平上改造遺傳結(jié)構(gòu)和形狀,培養(yǎng)新的細(xì)胞

32、群體、生物個(gè)體或株系。細(xì)胞培養(yǎng)或組織培養(yǎng)是細(xì)胞工程的核心技術(shù),其應(yīng)用對(duì)象有微生物和動(dòng)植物。主要包括動(dòng)物細(xì)胞工程和植物細(xì)胞工程(1)動(dòng)物細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基本概念n 培養(yǎng)液的成分:葡萄糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、維生素和動(dòng)物血清等n 原代培養(yǎng):?jiǎn)蝹€(gè)細(xì)胞 傳至十代左右n 傳代培養(yǎng):經(jīng)原代培養(yǎng)的細(xì)胞 傳40到50代。n 細(xì)胞株:10到40、50代的細(xì)胞,遺傳物質(zhì)沒(méi)發(fā)生改變。n 細(xì)胞系:超過(guò)50代的細(xì)胞,遺傳物質(zhì)發(fā)生改變,可無(wú)限增殖。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用v 生產(chǎn)有價(jià)值的蛋白質(zhì)制品,(如病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體、動(dòng)物激素)v 檢測(cè)有毒物質(zhì)v 用于某些器官移植單克隆抗體(monoclonal a

33、ntibody, McAb):由單一克隆B細(xì)胞雜交瘤產(chǎn)生的,只識(shí)別抗原分子某一特定抗原決定簇的特異性抗體。特點(diǎn)是具有高度均一性。單克隆抗體的應(yīng)用n 主要用于疾病的診斷、治療和預(yù)防。與常規(guī)抗體相比,具有特異性強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)。如;各種癌癥、肝炎病毒、SARS病毒、細(xì)菌及血吸蟲(chóng)等數(shù)百種疾病的診斷;n 在疾病治療方面,單克隆抗體猶如人體衛(wèi)士,能識(shí)別“自己”與“異己”,一旦發(fā)現(xiàn) 致病因素便與之結(jié)合將其殺死。若在單抗上帶上抗癌藥物制成“生物導(dǎo)彈”,將藥物定向帶到癌細(xì)胞所在部位,既消滅了癌細(xì)胞又不會(huì)傷害健康細(xì)胞。3、微生物工程又稱(chēng)發(fā)酵工程,是最早實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化的生物技術(shù)。利用微生物可以用于生產(chǎn)對(duì)人類(lèi)有用的許

34、多產(chǎn)品,如食物飲料、乙醇、抗生素、藥物等;微生物工程還在可開(kāi)發(fā)再生資源、廢棄物資源化無(wú)害化的凈化工程、清潔工藝、凈化環(huán)境等方面有廣闊用途。4、酶工程 酶工程是基于利用酶的催化作用,通過(guò)適當(dāng)反應(yīng)器生產(chǎn)生物催化劑。其主要研究包括酶的固定化技術(shù)、酶結(jié)構(gòu)的改造和酶反應(yīng)器等方面;生化工程與酶工程關(guān)系緊密,它講生化反應(yīng)與化學(xué)工程結(jié)合,使生化反應(yīng)產(chǎn)物實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。 酶工程的主要內(nèi)容n 酶的分離純化n 酶與細(xì)胞的固定化技術(shù)及反應(yīng)器n 酶制劑的發(fā)酵生產(chǎn)n 酶分子化學(xué)修飾、遺傳突變及結(jié)構(gòu)改造n 酶抑制劑與激活劑開(kāi)發(fā)與研究n 人工設(shè)計(jì)與合成模擬酶及酶分子5、基因組計(jì)劃引起的的新興生物技術(shù)影響深遠(yuǎn)的人類(lèi)基因組計(jì)劃的

35、實(shí)施衍生出一系列嶄新的生物技術(shù),包括全自動(dòng)核酸測(cè)序技術(shù),結(jié)構(gòu)和功能基因組技術(shù),雙向凝膠電泳和測(cè)序質(zhì)譜,從整體水平上研究細(xì)胞蛋白質(zhì)的組成及其活動(dòng)的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù),生物芯片技術(shù),生物信息學(xué)等。三、生物技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域n 醫(yī)藥: 生物制藥;基因治療;人工器官n 農(nóng)業(yè)和畜牧業(yè) 轉(zhuǎn)基因植物:抗病蟲(chóng)害新品種、抗逆新品種、 高品質(zhì)新品種 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物:生產(chǎn)有用蛋白質(zhì)和高品質(zhì)的畜產(chǎn)品 生物反應(yīng)器:利用動(dòng)植物細(xì)胞或組織作為生物反應(yīng)器,直接生產(chǎn)有用蛋白質(zhì)n 輕工與食品: 新型食品;營(yíng)養(yǎng)食品;保健食品;輕工用酶 n 環(huán)境: 污染治理;廢物利用;污染物生物降解四、我國(guó)生物技術(shù)發(fā)展概況(一)我國(guó)生命科學(xué)和生物技術(shù)發(fā)展的戰(zhàn)略

36、機(jī)遇 在近代歷史上,中國(guó)曾經(jīng)幾次與世界科技革命的發(fā)展機(jī)遇失之交臂,留下諸多遺憾和教訓(xùn)。今天,生命科學(xué)和生物技術(shù)作為新興的尖端科技領(lǐng)域,無(wú)論對(duì)發(fā)達(dá)國(guó)家還是對(duì)發(fā)展中國(guó)家來(lái)說(shuō)都是一次全新的選擇,這對(duì)我國(guó)來(lái)說(shuō)更是十分難得的戰(zhàn)略機(jī)遇??梢哉J(rèn)為,生命科學(xué)和生物技術(shù)將成為我國(guó)最有希望后來(lái)居上并實(shí)現(xiàn)跨越發(fā)展的高科技創(chuàng)新及產(chǎn)業(yè)領(lǐng)域(二)研究開(kāi)發(fā)進(jìn)展 1、我國(guó)生物技術(shù)發(fā)展的特點(diǎn)v 整體水平居發(fā)展中國(guó)家領(lǐng)先地位,關(guān)鍵領(lǐng)域接近發(fā)達(dá)國(guó)家水平。v 生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)初具規(guī)模:20種藥物上市、100種藥物正在臨床試驗(yàn)階段、10種有望成為I類(lèi)新藥、轉(zhuǎn)基因棉花4000萬(wàn)畝。v 形成了一批研究開(kāi)發(fā)基地和產(chǎn)業(yè)化基地,并有了一支高素質(zhì)的

37、研究隊(duì)伍。v 開(kāi)始了從跟蹤到自主創(chuàng)新的轉(zhuǎn)變,從實(shí)驗(yàn)室探索到產(chǎn)業(yè)化的轉(zhuǎn)變,從單項(xiàng)技術(shù)突破到技術(shù)與產(chǎn)業(yè)整體協(xié)調(diào)發(fā)展的轉(zhuǎn)變。(三)我國(guó)發(fā)展生物技術(shù)的優(yōu)勢(shì)制度優(yōu)勢(shì);生物資源豐富;人才優(yōu)勢(shì);產(chǎn)業(yè)優(yōu)勢(shì);市場(chǎng)優(yōu)勢(shì)(四)我國(guó)生物技術(shù)發(fā)展中的薄弱點(diǎn)1. 人才缺乏、尤其是尖子人才的缺乏2. 產(chǎn)品的創(chuàng)新性有待提高 3. 生產(chǎn)技術(shù)支撐產(chǎn)業(yè)有待加強(qiáng)4. 生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)裝備落后的局面有待改變5. 上游與下游銜接問(wèn)題有待解決(五)下一步發(fā)展措施加強(qiáng)對(duì)生物技術(shù)的領(lǐng)導(dǎo);制定中國(guó)生物技術(shù)與產(chǎn)業(yè)化發(fā)展綱要;加大生物技術(shù)支持力度;引進(jìn)優(yōu)秀人才;加強(qiáng)國(guó)際交流與合作第三章 轉(zhuǎn)基因植物的生物安全性第一節(jié) 轉(zhuǎn)基因植物的生物安全性運(yùn)用重組DNA

38、技術(shù)將外源基因整合于受體植物基因組、改變其遺傳組成后產(chǎn)生的植物及其后代,叫轉(zhuǎn)基因植物。通常至少含有一種非近源物種或種的遺傳基因,比如其它植物種、病毒、細(xì)菌、動(dòng)物甚至人類(lèi)的基因。一、轉(zhuǎn)基因植物的獲得n 基本步驟u 獲得目的基因u 受體細(xì)胞培養(yǎng):如植物愈傷組織等u 目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞u 培養(yǎng)轉(zhuǎn)化細(xì)胞u 篩選、培植、鑒定(一)轉(zhuǎn)基因植物獲得的基本要素和步驟獲得轉(zhuǎn)基因植物共包含三個(gè)要素:植物受體、目的基因和轉(zhuǎn)化方法。轉(zhuǎn)化后還需要進(jìn)行選擇和一系列的鑒定,從而獲得轉(zhuǎn)化植株。能高效表達(dá)外源基因的遺傳學(xué)上純合穩(wěn)定的轉(zhuǎn)化體是植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)進(jìn)行育種的目的。實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo)需要考慮上述3個(gè)要素。1、植物受體外植體(e

39、xplant):植物的外植體是指用于遺傳操作的植物的某一器官或部分,通過(guò)離體組織培養(yǎng)可以再生成完整的新植株,在轉(zhuǎn)基因?qū)嶒?yàn)中用于作為外源基因轉(zhuǎn)入的受體。因?yàn)楦鞣N植物本身的特點(diǎn),用于作為外植體的植物部分有很大差異。自轉(zhuǎn)基因工作以來(lái),人們采用過(guò):幼花穗,幼葉、子葉節(jié),葉盤(pán),幼芽生長(zhǎng)點(diǎn),成熟種子胚,未成熟種子幼胚,花粉及小胞子及來(lái)源于植物幼嫩組織的原生質(zhì)體等大部分植物的器官。由于植物細(xì)胞具有全能性的特點(diǎn),上述作為外植體的一部分植物細(xì)胞,在適當(dāng)培養(yǎng)基、激素和一定溫度光照條件下,可以發(fā)育成完整的新植株。它們都可以作為植物轉(zhuǎn)基因的受體進(jìn)行轉(zhuǎn)基因遺傳操作。因?yàn)椴煌参锏牟煌庵搀w對(duì)組織培養(yǎng)的反應(yīng)不同,以何種外

40、植體作轉(zhuǎn)基因受體,有很大區(qū)別。需要根據(jù)各自的目的進(jìn)行試驗(yàn),以選取最佳的轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)。2、外源基因的制備轉(zhuǎn)基因的基因來(lái)源可以是植物,也可以是動(dòng)物或微生物。為了獲得高水平的表達(dá)效果,要將目的基因進(jìn)行重組改造,以適應(yīng)植物轉(zhuǎn)基因工作的需要。通常是將分離出的目的基因整合到某個(gè)載體上,轉(zhuǎn)化大腸桿菌或農(nóng)桿菌。轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌的外源基因通常直接用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化技術(shù)進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化;采用基因強(qiáng)轉(zhuǎn)化技術(shù),需要將含有目的基因的大腸桿菌進(jìn)行培養(yǎng),然后制備大量目的基因,用于轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)。高效表達(dá)載體的構(gòu)建,啟動(dòng)子、增強(qiáng)序列的選擇、載體和菌種的不同,都對(duì)轉(zhuǎn)基因的最后結(jié)果產(chǎn)生重要影響,這里不作深入介紹。、篩選植物轉(zhuǎn)基因?qū)嶒?yàn)過(guò)程中,不論采用那

41、一種技術(shù)。常常只能轉(zhuǎn)化植物外植體的一部分,或是組織的一小部分,或是細(xì)胞群體的一小部分。要使已經(jīng)轉(zhuǎn)入外源基因的這部分組織或細(xì)胞發(fā)育成完整的純合轉(zhuǎn)化體,都要對(duì)經(jīng)過(guò)遺傳轉(zhuǎn)化的群體進(jìn)行篩選,使轉(zhuǎn)入外源基因的組織或細(xì)胞在選擇壓力下正常生長(zhǎng)發(fā)育,而抑制未轉(zhuǎn)化部分的生長(zhǎng),直到死亡。選擇的基本原理是使未轉(zhuǎn)化的組織或細(xì)胞,在含有選擇劑的培養(yǎng)基上新陳代謝受阻而停止生長(zhǎng),最后死亡。選擇劑通常為抗生素或殺草劑。選擇過(guò)程一般為3-4個(gè)周期,每個(gè)周期為3-4周。因?yàn)闉檫x擇過(guò)程是一個(gè)慢性致死過(guò)程,在第一次選擇時(shí),轉(zhuǎn)化與未轉(zhuǎn)化細(xì)胞均能生長(zhǎng);將第一次選擇過(guò)的愈傷組織分成小塊,轉(zhuǎn)到新配置的培養(yǎng)基上進(jìn)行第二次選擇,在本次選擇后期可

42、以看到明顯差異,有的生長(zhǎng)正常,有些生長(zhǎng)緩慢,生長(zhǎng)正常的愈傷組織即含有轉(zhuǎn)化的部分;將第二次選擇結(jié)束時(shí)生長(zhǎng)正常的愈傷組織分成小塊轉(zhuǎn)到新配置的培養(yǎng)基上進(jìn)入第三次選擇,此時(shí)來(lái)源于同一愈傷組織的若干塊愈傷組織若全部生長(zhǎng)正常,表明它們已是純合的轉(zhuǎn)化體,選擇到此結(jié)束,將這些純合的轉(zhuǎn)化體轉(zhuǎn)到分化培養(yǎng)基進(jìn)行植株再生。再生培養(yǎng)基上是否仍然含有選擇劑根據(jù)抗性愈傷組織的數(shù)量而定,以獲得足夠數(shù)量的再生苗為原則。如果再生苗數(shù)量大,在再生培養(yǎng)基上可以繼續(xù)加選擇劑;如果抗性愈傷組織的數(shù)量小,為安全考慮,可以不加選擇劑。4、鑒定對(duì)轉(zhuǎn)基因?qū)嶒?yàn)獲得的抗性再生植株(或愈傷組織)需要進(jìn)行分子生物學(xué)和生物學(xué)功能的鑒定。(1)分子生物學(xué)鑒

43、定將提供轉(zhuǎn)基因后的植物組織或再生植株外源基因存在與否、基因拷貝數(shù)及表達(dá)水平等。PCR、Southern hybridyzation、Northern hybridyzation、ELISA、Western immunoblot等分子生物學(xué)技術(shù)經(jīng)常用來(lái)進(jìn)行轉(zhuǎn)基因植株的鑒定。Polymerase chain reaction(PCR)技術(shù)是最常使用的分子生物學(xué)技術(shù)之一,可以對(duì)大量樣品進(jìn)行初步檢測(cè)。但值得注意的是PCR鑒定的陽(yáng)性結(jié)果,只說(shuō)明在被檢測(cè)的樣品中含有與PCR引物非常相似的同源DNA序列,不能說(shuō)明模板DNA是來(lái)源于樣品還是其它污染;也不能說(shuō)明檢測(cè)到的DNA序列是否整合進(jìn)被轉(zhuǎn)化植物的基因組。盡

44、管如此,PCR技術(shù)仍是人們檢測(cè)轉(zhuǎn)基因植物分子生物學(xué)鑒定的第一步,并廣泛用于對(duì)轉(zhuǎn)基因當(dāng)代篩選和后代分離比例的分析。Southern hybridyzation技術(shù)可以確定外源基因是否整合在基因組上及轉(zhuǎn)入外源基因的拷貝數(shù)。此方法比PCR檢測(cè)結(jié)果可靠,但耗費(fèi)時(shí)間和物力。一般是用PCR技術(shù)先初測(cè),PCR檢測(cè)陽(yáng)性樣品,再用Southern hybridyzation技術(shù)進(jìn)一步檢測(cè),以最后確定外源基因轉(zhuǎn)入狀態(tài)、整合狀態(tài)和基因拷貝數(shù)量。Northern hybridyzation技術(shù)是用來(lái)檢測(cè)外源基因表達(dá)狀況的方法。ELISA和Western immunoblot是用抗體檢測(cè)轉(zhuǎn)入基因蛋白產(chǎn)物的技術(shù)??梢詫?duì)蛋

45、白產(chǎn)物進(jìn)行定性和定量檢測(cè),敏感度高。ELISA技術(shù)簡(jiǎn)單易于操作;Western immunoblot雖然步驟多,但能得到關(guān)于蛋白產(chǎn)物大小的信息。(2)生物學(xué)功能鑒定是對(duì)導(dǎo)入的外源基因應(yīng)當(dāng)表達(dá)的生物學(xué)功能的檢測(cè)。分子生物學(xué)鑒定只能給出外源基因是否轉(zhuǎn)入獲得的植株中及其整合狀況和拷貝數(shù),并不能由此得出生物學(xué)功能的信息。因此對(duì)轉(zhuǎn)化植株有必要進(jìn)行是否具有已轉(zhuǎn)入基因的生物學(xué)功能的鑒定。比如轉(zhuǎn)抗蟲(chóng)基因的玉米,應(yīng)當(dāng)用轉(zhuǎn)化植株及其葉片進(jìn)行殺蟲(chóng)效果的試驗(yàn);轉(zhuǎn)抗白粉病的水稻植株應(yīng)當(dāng)用白粉病的病源菌對(duì)轉(zhuǎn)化植株接種,然后觀察抗病效果??傊?,轉(zhuǎn)化植株生物學(xué)功能的測(cè)定以轉(zhuǎn)入外源基因預(yù)期的功能來(lái)設(shè)計(jì)檢測(cè)方法,對(duì)獲得的轉(zhuǎn)基因植

46、株進(jìn)行評(píng)價(jià)。(3)遺傳學(xué)鑒定遺傳學(xué)鑒定包括兩部分:遺傳穩(wěn)定性和轉(zhuǎn)化植株后代的分離比例。遺傳穩(wěn)定性的鑒定一般是對(duì)轉(zhuǎn)入的外源基因在以后的5-6代中進(jìn)行跟蹤,以確定轉(zhuǎn)入的外源基因在轉(zhuǎn)化植株中是否能穩(wěn)定的傳遞給后代。常常用分子生物學(xué)的方法如PCR技術(shù),對(duì)后代進(jìn)行分析。轉(zhuǎn)化植株后代基因分離比例的檢測(cè)可以提供轉(zhuǎn)入的外源基因整合信息,如果呈3:1分離,說(shuō)明外源基因是符合染色體遺傳的單基因,15:1可能是同時(shí)轉(zhuǎn)入2個(gè)拷貝基因的染色體遺傳。由遺傳學(xué)鑒定獲得的信息,將使我們從轉(zhuǎn)化群體中選出能夠?qū)⑼庠椿蚍€(wěn)定傳遞具有單拷貝的個(gè)體,它們才是在生產(chǎn)中可能有用的轉(zhuǎn)化體,進(jìn)入育種序。(二)常用的植物轉(zhuǎn)基因方法1、農(nóng)桿菌介導(dǎo)

47、法 農(nóng)桿菌是普遍存在于土壤中的一種革蘭氏陰性細(xì)菌,它能在自然條件下趨化性地感染大多數(shù)雙子葉植物的受傷部位,并誘導(dǎo)產(chǎn)生冠癭瘤或發(fā)狀根。根癌農(nóng)桿菌和發(fā)根農(nóng)桿菌中細(xì)胞中分別含有Ti質(zhì)粒和Ri質(zhì)粒,其上有一段T-DNA,農(nóng)桿菌通過(guò)侵染植物傷口進(jìn)入細(xì)胞后,可將T-DNA插入到植物基因組中。因此,農(nóng)桿菌是一種天然的植物遺傳轉(zhuǎn)化體系。人們將目的基因插入到經(jīng)過(guò)改造的T-DNA區(qū),借助農(nóng)桿菌的感染實(shí)現(xiàn)外源基因向植物細(xì)胞的轉(zhuǎn)移與整合,然后通過(guò)細(xì)胞和組織培養(yǎng)技術(shù),再生出轉(zhuǎn)基因植株。2基因槍介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法:利用火藥爆炸或高壓氣體加速(這一加速設(shè)備被稱(chēng)為基因槍?zhuān)瑢藥康幕虻腄NA溶液的高速微彈,直接送入完整的植物組

48、織和細(xì)胞中,然后通過(guò)細(xì)胞和組織培養(yǎng)技術(shù),再生出植株,選出其中轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性植株即為轉(zhuǎn)基因植株。與農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化相比,基因槍法轉(zhuǎn)化的一個(gè)主要優(yōu)點(diǎn)是不受受體植物范圍的限制,其載體質(zhì)粒的構(gòu)建也相對(duì)簡(jiǎn)單,它是目前轉(zhuǎn)基因研究中應(yīng)用較為廣泛的方法。3、花粉管通道法:在授粉后向子房注射含目的基因的DNA溶液,利用植物在開(kāi)花、受精過(guò)程中形成的花粉管通道,將外源DNA導(dǎo)入受精卵細(xì)胞,并進(jìn)一步地被整合到受體細(xì)胞的基因組中, 隨著受精卵的發(fā)育而成為帶轉(zhuǎn)基因的新個(gè)體。該方法于20世紀(jì)80年代初期由我國(guó)學(xué)者周光宇提出,我國(guó)目前推廣面積最大的轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉就是用花粉管通道法培育出來(lái)的。該法的最大優(yōu)點(diǎn)是不依賴(lài)組織培養(yǎng)人工再生植株,技

49、術(shù)簡(jiǎn)單,不需要裝備精良的實(shí)驗(yàn)室,常規(guī)育種工作者易于掌握。 以根瘤農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化雙子葉植物葉片為例1.將表面消毒的葉片切成小塊2.小塊在過(guò)夜培養(yǎng)并稀釋到一定濃度的根癌農(nóng)桿菌液中浸泡幾分鐘,以便讓根癌農(nóng)桿菌感染葉片切塊的傷口。3.從菌液中撈出小塊,培養(yǎng)基中培養(yǎng)2天。4.在含頭孢霉素選擇培養(yǎng)基中篩選轉(zhuǎn)化細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),轉(zhuǎn)化的細(xì)胞分化出芽。5.將芽轉(zhuǎn)入含有抗生素的生根培養(yǎng)基上,誘導(dǎo)生根。6.將完整的轉(zhuǎn)基因植株移栽到土壤中。二、轉(zhuǎn)基因植物的分類(lèi)1、抗除草劑轉(zhuǎn)基因植物 將抗除草劑基因轉(zhuǎn)入栽培作物,可以更有效地使用除草劑除治田間雜草,保護(hù)作物免除藥害,從而增產(chǎn)增收?,F(xiàn)在從植物和微生物中已克隆出多種抗不同類(lèi)型除草

50、劑地基因。其作用原理如下:1)、通過(guò)除草劑作用的靶酶過(guò)量產(chǎn)生來(lái)進(jìn)行解毒。如5烯醇丙酮酸草酸3磷酸合成酶地過(guò)量表達(dá),可使植物對(duì)草甘膦產(chǎn)生抗性。2)、改變除草劑作用靶物的敏感性。如aroA基因所編碼的EPSP對(duì)草甘膦敏感性降低,導(dǎo)入植物后可使轉(zhuǎn)基因植物產(chǎn)生抗性。3)、降解除草劑的基因。這類(lèi)基因大多來(lái)自土壤微生物,如bar基因編碼的草丁膦乙酰轉(zhuǎn)移酶,他們可解除巴斯達(dá)、雙丙氨膦等韓草丁膦的除草劑毒性,降解2,4滴的tfdA基因和水解溴苯睛的bxn基因,在整合于植物基因組后,也能使植株分別對(duì)除草劑2,4滴和溴苯睛產(chǎn)生抗性。2、抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物(1)Bt殺蟲(chóng)蛋白基因Bt殺蟲(chóng)蛋白基因編碼蘇云金芽孢桿菌的伴孢晶

51、體蛋白(ICP)。BT殺蟲(chóng)蛋白可分為-外毒素、-外毒素、-內(nèi)毒素和虱因子,其中用于轉(zhuǎn)基因植物的主要是-內(nèi)毒素。-內(nèi)毒素被敏感昆蟲(chóng)幼蟲(chóng)取食后,在其消化道內(nèi)消化酶的作用下,蛋白被水解釋放出約Mr 60×10370×103的活性毒蛋白分子(toxin)。毒蛋白與昆蟲(chóng)中腸上皮細(xì)胞上的特異性受體結(jié)合,并發(fā)生作用而使細(xì)胞膜穿孔。消化道細(xì)胞內(nèi)的離子濃度和滲透壓平衡遭到破壞,使上皮細(xì)胞裂解,最終導(dǎo)至昆蟲(chóng)死亡。 (2)動(dòng)物產(chǎn)生的昆蟲(chóng)毒素基因蝎昆蟲(chóng)毒素:可專(zhuān)一作用于昆蟲(chóng)細(xì)胞膜離子通道,對(duì)哺乳動(dòng)物無(wú)害或毒性很小。蜘蛛毒素:37個(gè)核苷酸的小肽,將該肽的基因?qū)霟煵莺?,轉(zhuǎn)基因煙草表現(xiàn)出明顯的抗蟲(chóng)作用

52、。(3)植物來(lái)源的各種抗蟲(chóng)基因蛋白酶抑制劑:能削弱或阻斷蛋白酶對(duì)食物中蛋白質(zhì)的消化,使昆蟲(chóng)產(chǎn)生厭食反應(yīng),最終導(dǎo)致昆蟲(chóng)非正常發(fā)育和死亡。植物凝集素:是一類(lèi)能特異識(shí)別并可逆結(jié)合糖類(lèi)復(fù)合物的非免疫性球蛋白。當(dāng)它被昆蟲(chóng)吞食至消化道時(shí),與昆蟲(chóng)腸道周?chē)?xì)胞壁膜糖蛋白相結(jié)合,影響營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收,同時(shí)還可能在消化道內(nèi)誘發(fā)病灶,使害蟲(chóng)得病甚至死亡。目前應(yīng)用得較多的外源凝集素主要有豌豆外源凝集素、雪花蓮凝集素、半夏外源凝集素3、抗病轉(zhuǎn)基因植物(1)抗病毒轉(zhuǎn)基因植物來(lái)自病毒的抗性基因、來(lái)自植物的抗性基因1)衣殼蛋白基因1985年Beachy等將煙草花葉病毒(TMV)外殼蛋白基因轉(zhuǎn)入煙草細(xì)胞,轉(zhuǎn)基因后代植株顯示了對(duì)T

53、MV的明顯抗性??赡軝C(jī)制:v 阻止病毒脫毒;v 衣殼蛋白與病毒RNA互作或與寄主的RNA互作,影響翻譯;v 衣殼蛋白對(duì)病毒在細(xì)胞細(xì)胞間和更長(zhǎng)距離傳播的干擾。 2)病毒復(fù)制酶基因病毒非結(jié)構(gòu)蛋白基因也可能使植物獲得抗性,研究表明,表達(dá)有各種缺失、序列改變的病毒復(fù)制酶修飾基因,以及完整的野生型復(fù)制酶基因的轉(zhuǎn)基因植物,均具抗病毒性。3)病毒核內(nèi)蛋白酶基因在對(duì)PVY基因組研究中發(fā)現(xiàn),核內(nèi)蛋白酶a基因轉(zhuǎn)化煙草后,獲得對(duì)PVY具有高度抗性的轉(zhuǎn)基因株系。4)病毒衛(wèi)星RNA病毒衛(wèi)星RNA能有效地與病毒基因組RNA爭(zhēng)奪RNA復(fù)制酶,由于它分子小,復(fù)制周期短,因此隨著復(fù)制循環(huán)地增加,病毒基因組的復(fù)制必然要受到極大的

54、干擾。(2)抗真菌轉(zhuǎn)基因植物1)植物或細(xì)菌的幾丁質(zhì)酶基因和â1,3葡聚糖酶基因幾丁質(zhì)和â1,3葡聚糖是大多數(shù)病原真菌細(xì)胞壁的主要成分之一。上述兩種酶可分別降解它們,可以用他們對(duì)抗植物的真菌病原。2)核糖體滅活蛋白基因來(lái)自植物,對(duì)控制病原真菌十分有效3)導(dǎo)入防衛(wèi)基因增強(qiáng)植物的抗病性在植物抗性中,抗病基因產(chǎn)物只是一個(gè)效應(yīng)因子,它是通過(guò)激活防衛(wèi)反應(yīng)起抗病作用的。因此可以直接導(dǎo)人植物防衛(wèi)基因,使其在植物中表達(dá),從而提高植物抗病能力。(3)抗細(xì)菌轉(zhuǎn)基因植物1)殺菌肽基因殺菌肽為30多個(gè)氨基酸殘基組成的小肽,具有廣泛的殺菌譜,對(duì)革蘭氏陽(yáng)性和陰性菌都有抗性。2) 溶菌酶基因溶菌酶是廣泛存

55、在于自然界的酶,能特異性的水解細(xì)菌細(xì)胞壁的肽葡聚糖。轉(zhuǎn)雞卵溶菌酶基因的煙草植株可以抗幾種細(xì)菌病害。 3)來(lái)自病原菌自身的抗菌基因植物病原菌產(chǎn)生的致病毒素是重要的致病因子。如果能從病原菌和其他微生物中分離并克隆降解毒素的基因,并將之導(dǎo)入植物使之正確表達(dá)產(chǎn)物,便能使轉(zhuǎn)基因植物具備抵抗產(chǎn)生毒素的病原菌的侵染。4、抗環(huán)境脅迫的轉(zhuǎn)基因植物環(huán)境脅迫:指對(duì)植物生存不利的環(huán)境,主要有溫度、水分和化學(xué)物脅迫。不利自然環(huán)境條件每年為農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成巨大的損失,提高植物抗御不良自然環(huán)境條件的基因工程,成為轉(zhuǎn)基因研究的另一熱點(diǎn)。目前對(duì)植物抗御逆境在分子水平上已揭示有關(guān)的機(jī)理,并分離出與植物抗逆境的相關(guān)基因,使抗逆植物基因

56、工程快速發(fā)展。但抗逆植物基因工程的進(jìn)展尤其商業(yè)化應(yīng)用還有一定難度。這主要是由于植物抗御逆境的能力是一個(gè)非常復(fù)雜過(guò)程,還需大量的研究工作以充分揭示機(jī)理;另外,這一過(guò)程常常是多基因參與的。目前這一領(lǐng)域的研究工作主要在抗旱、耐鹽鹼和耐低溫等方面。5、植物發(fā)育調(diào)節(jié)基因工程(1)控制果實(shí)成熟的轉(zhuǎn)基因植物乙烯是植物果實(shí)成熟時(shí)重要的內(nèi)源激素,通過(guò)控制乙烯合成的關(guān)鍵酶可延長(zhǎng)某些水果和蔬菜瓜果的保鮮期。(2)雄性不育基因工程控制受粉基因工程方法能克服現(xiàn)有細(xì)胞質(zhì)雄性不育制種技術(shù)的缺點(diǎn)。(3)改良品質(zhì)的轉(zhuǎn)基因工程種子中的淀粉、油分、蛋白質(zhì)的組成和含量,決定其品質(zhì)的優(yōu)劣,由于不同的應(yīng)用目的對(duì)淀粉、油分、蛋白質(zhì)的品質(zhì)有

57、不同的要求,品質(zhì)改良的目的具有多元性。應(yīng)用轉(zhuǎn)基因技術(shù)進(jìn)行品質(zhì)改良主要集中在作物的淀粉含量及其組成成分、油脂含量和油脂成分,提高不飽和脂肪酸比例,以及改變脂肪酸碳鏈長(zhǎng)度和提高蛋白質(zhì)和必須氨基酸的含量等方面。三、轉(zhuǎn)基因植物的安全性評(píng)價(jià)(一) 轉(zhuǎn)基因植物安全性評(píng)價(jià)的必要性Ø 轉(zhuǎn)基因植物中導(dǎo)入的外源基因通常來(lái)源于非近源種,甚至可以是人工合成的基因。由于受到基因互作、基因多效性等因素的影響,很難精確地預(yù)測(cè)該基因在新的遺傳背景中可能產(chǎn)生的表型效應(yīng)和副作用。Ø 轉(zhuǎn)基因植物的大面積釋放,就有可能使得原先小范圍內(nèi)不大可能發(fā)生的潛在危險(xiǎn)得以表現(xiàn),比如通過(guò)基因流破壞生態(tài)平衡。Ø 有關(guān)生物安全的管理法規(guī)還不完善,執(zhí)行中受到了來(lái)自企業(yè)、科研單位及有關(guān)組織等多方面的反彈,因而有必要通過(guò)客觀的

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