剪接因子PSF是一個(gè)大的復(fù)合體的一部分

1、剪接因子PSF是一個(gè)大的復(fù)合體的一部分，這個(gè)大的復(fù)合體是在前mRNA缺失的情況下組裝成的，它包含了所有的五種snRNPs（PCC復(fù)合體能在缺失pre-mRNA的情況下形成，含有PS橋口snRNPs）ABSTRACTPSF（polypyrimidinetractbindingprotein-associatedsplicingfactor,PSF蛋白是一種多功能的DNA/RNA結(jié)合蛋白，它能抑制原癌基因的表達(dá)，在人和小鼠中具有抑制腫瘤的作用）蛋白是一個(gè)很大的核蛋白，參與了包括轉(zhuǎn)錄、RNA剪接等眾多生理過程。PSF白被證實(shí)能直接與U5snRNA結(jié)合并且在許多被純化了的剪接復(fù)合體中被發(fā)現(xiàn)。在這篇文章

2、中，作者展示了當(dāng)hela細(xì)胞核提取物處于適于剪接的條件下時(shí)，PSF蛋白被發(fā)現(xiàn)作為一個(gè)很大的復(fù)合體的一部分，這個(gè)復(fù)合體包含了五種snRNPs和大部分已知的剪接因子。在4c下，不需要添加外源的pre-RNA該復(fù)合物就能形成，并且對鹽離子敏感。沉降實(shí)驗(yàn)和通過質(zhì)譜鑒定單獨(dú)的組分揭示了該復(fù)合體附著有許多核內(nèi)的因子，這些作用因子與剪接體組分重疊。INTRODUCTION大多數(shù)真核生物的基因都能被轉(zhuǎn)錄成pre-mRNA,pre-mRNA中含有被間隔序列（內(nèi)含子）隔斷的編碼序列（外顯子）。pre-mRNA的剪接過程就是在翻譯之前，含子被有效且準(zhǔn)確的切除，而外顯子被連接起來。剪接過程包括兩次連續(xù)的轉(zhuǎn)酯反應(yīng)。第一

3、步轉(zhuǎn)酯反應(yīng)包括5'端剪接位點(diǎn)的斷裂，產(chǎn)生一個(gè)與3'端內(nèi)含子相連的套馬索中間體。第二步反應(yīng)中外顯子被鏈接，內(nèi)含子套馬索被釋放。剪接過程的執(zhí)行需要剪接復(fù)合體，剪接復(fù)合體是一個(gè)由小核糖核蛋白顆粒（包括U1,U2,U4/U6和U5snRNAs及其他的非snRNP蛋白因子）組成的龐大復(fù)合體。snRNAs在剪接體的組裝和兩步轉(zhuǎn)酯反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。外顯子/內(nèi)含子定界的準(zhǔn)確性需要pre-mRNA、snRNAs和其他剪接因子之間的相互作用來實(shí)現(xiàn)0根據(jù)現(xiàn)有的細(xì)胞提取和體外剪接的研究，大多數(shù)現(xiàn)有的剪接體組裝的模型都表明一條明確的途徑，即需要ATP和pre-mRNA底物。剪接復(fù)合物的形成起始于U1s

4、nRNP識(shí)別5'剪接位點(diǎn)，然后U2snRNP輔助因子（U2AF）異質(zhì)二聚物結(jié)合聚喀噬區(qū)，由此形成獨(dú)立元件早期復(fù)合體（Ecomplex）。U2AF結(jié)合聚喀噬區(qū)能招募U2snRNP結(jié)合于分支點(diǎn)序列并形成Acomplex,當(dāng)U4/U6、U5三snRNP加入進(jìn)來，Acomplex轉(zhuǎn)變?yōu)锽complex。伴隨著一系列動(dòng)態(tài)的RNA/蛋白重新排列，Bcomplex轉(zhuǎn)變?yōu)镃complex,Ccomplex是一個(gè)短壽命的有活性的剪接體。每種獨(dú)立的剪接復(fù)合體都經(jīng)過不同的策略來純化和分析。這些復(fù)合體都含有大量的snRNP和非snRNPC蛋白，這些組分參與了剪接位點(diǎn)的識(shí)別、剪接體的組裝和調(diào)控剪接過程。近年來，

5、對一些復(fù)合體的鑒定研究似乎與之前關(guān)于剪接復(fù)合體的形成相悖。這些復(fù)合體包括酵母Cwf/Cwc復(fù)合體、lnRNP復(fù)合體、一個(gè)大于150S的包含U2/U4/U5/U6的復(fù)合體，能與U2和U6配對、從啤酒發(fā)酵的酵母菌中提取的五snRNP、從Hela細(xì)胞核提取的五snRNP復(fù)合物。這些復(fù)合物間功能上的聯(lián)系還需要進(jìn)一步的研究，但是已經(jīng)知道的是他們中的任何一種都不能單獨(dú)地發(fā)揮剪接作用。PSF蛋白大小為100kDa,PSF白在剪接過程的許多步驟中都發(fā)揮作用，但是其確切作用還有待研究。PSF白能在剪接復(fù)合體的早期（H、A、B）、晚期（C）、U4/U6.U5三snRNP和U5snRNP中一起純化出來，并且在核散斑

6、中被發(fā)現(xiàn)，與許多剪接因子定位在一起。PSF®白的由一個(gè)N端富含甘氨酸的區(qū)域，一個(gè)富含脯氨酸/谷氨酰胺（P/Q）的區(qū)域，兩個(gè)RNA識(shí)別基序（RRMs）和C端的兩個(gè)細(xì)胞核定位信號(hào)組成。p54nrb蛋白（鼠同源蛋白）與PSF白有十分相似的結(jié)構(gòu)域并且能夠結(jié)合PSF®白。PSF和p54nrb的結(jié)合能與RNA聚合酶II的C端結(jié)構(gòu)域（CTD）相互作用，然后與轉(zhuǎn)錄/剪接復(fù)合體結(jié)合5'剪接位點(diǎn)，接著繼續(xù)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄和剪接。除了參與剪接過程，PSF®白還參與了眾多的細(xì)胞核內(nèi)事件。PSF蛋白在許多情況下能作為轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，例如在調(diào)控生長因子來刺激基因表達(dá)，又可以作為共抑制因子通過S

7、in3A招募脫乙?；福℉DACs）然后誘導(dǎo)沉默，還能在cAMP的刺激下作為復(fù)合體的一部分激活人CYP17基因的啟動(dòng)子。PSF®白還能調(diào)控拓?fù)洚悩?gòu)酶I的活性，或者作為間斷的雙鏈DNA修復(fù)因子，或者在細(xì)胞核中保留超編輯的RNA。最近的研究表明，PSF白能抑制HIV-1gag/pol和envmRNAs的表達(dá)（典型的逆轉(zhuǎn)錄病毒的基因組的RNA基因組長度約為7000-10000個(gè)核昔酸，攜帶三個(gè)基因：gap（groupassociatedantigen）,pol和env。gag基因編碼病毒顆粒內(nèi)的核心蛋白），包括基質(zhì)、衣殼三個(gè)蛋白。pol基因編碼蛋白酶、整合酶和逆轉(zhuǎn)錄酶。env基因編碼被摸蛋

8、白，病毒RNA經(jīng)拼接翻譯成一條多肽鏈，經(jīng)蛋白酶切割后成2個(gè)蛋白，即表面蛋白和跨膜蛋白），通過順式激活不穩(wěn)定性原件（INS）來靶向降解。在之前的研究中，作者已經(jīng)揭示了PSF®白和P54nrb與U5snRNA的相互作用。通過PSF寺異的抗體進(jìn)行免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)（IP）來進(jìn)一步分析這種相互作用，在這篇文章中，作者提取了Hela細(xì)胞處于剪接狀態(tài)細(xì)胞核提取物并進(jìn)行了五種UsnRNPs與PSF蛋白的co-IP實(shí)驗(yàn)（不考慮額外的pre-mRNA）。作者該狀態(tài)的細(xì)胞核提取物在體外進(jìn)行了沉淀分析實(shí)驗(yàn)，通過這個(gè)實(shí)驗(yàn)確定了在剪接過程中會(huì)形成一個(gè)包含PSF蛋白和多種sn-RNP的大型復(fù)合體。在這些復(fù)合物中，最

9、大的復(fù)合體表現(xiàn)出非特異性的結(jié)合，然而作者分離出來一個(gè)稍小的包含PSFS白的復(fù)合體（PSF-containingcomplex,PCC）,該復(fù)合體包含五種snRNPs而且其沉淀后的體積與成熟的剪接復(fù)合體十分相似。有趣的是該復(fù)合體在4c形成并且其組裝不需要外源的pre-mRNA,這表明形成該復(fù)合物很可能不需要ATP。通過質(zhì)譜分析分析有/無pre-mRNA組裝成的該復(fù)合體，揭示了該復(fù)合體組分中有十分相似的蛋白，但通過對剪接狀態(tài)的細(xì)胞核提取物進(jìn)行IP實(shí)驗(yàn)都沒有檢測到這些蛋白。作者的結(jié)果表明在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中大型預(yù)先形成的剪接復(fù)合體的存在。MATERIALSANDMETHODS體外轉(zhuǎn)錄與剪接體外轉(zhuǎn)錄剪接和

10、剪接實(shí)驗(yàn)和之前報(bào)道的一致。對衍生自腺病毒的剪接底物RNA(AdML)用BamHI切割得到線狀的RNA,然后用T7RNA連接酶轉(zhuǎn)錄得到正義鏈，用EcoRI沒切后用SP6RNA連接酶得到反義鏈。在30c時(shí)對Hela細(xì)胞核提取物進(jìn)行體外剪接反應(yīng)，在細(xì)胞核提取物的最后一步用BufferD透析(20mMTris,pH8,100mMKCl,0.2mMEDTA,0.5mMDTT,20%glycerol)。剪接條件是將提取物用12mMTris-HCl,pH7.9,60mMKCl,0.12mMEDTA,0.5mMATP,20mM磷酸肌酸,2mMMgCl2,and0.5mMDTT處理，區(qū)別是一組加入了5-10ng

11、的pre-mRNA底物。剪接產(chǎn)物用15%的尿素(8M尿素)PAGE膠鑒定。剪接復(fù)合體在不同時(shí)間點(diǎn)的形成用4%native膠(不加SDS、疏基乙醇等變性劑，使生物大分子在電泳過程中保持其天然的形狀和電荷)檢測。PCC的形成Hela細(xì)胞核提取物用12mMTris-HCl,pH7.9,60mMKCl,0.12mMEDTA,0.5mMATP,20mM磷酸肌酸，2mMMgCl2,and0.5mMDTT處理為剪接條件，添加或不添加體外轉(zhuǎn)錄的pre-mRNA,然后在冰上或者30c孵育0-15分鐘。從Hela細(xì)胞核提取物中去除外源性的Poly(A)RNA300加fiHela細(xì)胞核提取物用buffer500(2

12、0mMTris-HCl,pH7.9,500mMKCl,0.2mMEDTA,0.5mMDTT,and1mMPMSF)處理，在30C下與10mgoligo-dT纖維素柱孵育30分鐘。反應(yīng)后的溶液進(jìn)行離心，取上清液在4c用bufferD(20mMTris-HCl,pH7.9,100mMKCl,0.2mMEDTA,0.5mMDTT,5%甘油)透析2小時(shí)。IP抗SPR禺聯(lián)蛋白ASepharose如參考文獻(xiàn)所述處理。30d的Hela細(xì)胞核提取物(約150g)處理成適于剪接狀態(tài)形成PCC,作為對照，30d的核提取物在用bufferD透析時(shí)用bufferD稀釋來維持相同的蛋白濃度。孵育過后，用50小IPbuf

13、fer(60%BufferD包含1mMPMSF和0.01%NP40)稀釋，4c搖床搖30分鐘后最大轉(zhuǎn)速離心30秒，去除沉淀。接著用200d的IPbuffer進(jìn)一步稀釋，加入25d的抗PSH禺聯(lián)蛋白ASepharose于4c下孵育1小時(shí)。孵育過后用低鹽的washbuffer（20mMTris-HCl,pH7.9,100mMKCl,0.2mMEDTA,and0.005%NP-40）或者高鹽的washbuffer（20mMTris-HCl,pH7.9,250mMKCl,0.2mMEDTA,and0.005%NP-40）洗三次。IP后的RNA通過石碳酸/氯仿從瓊脂糖中提取出來，接著用8M15%的尿素-

14、PAGE膠分離。剪接產(chǎn)物和snRNAs能通過磷相儀（phosphorimager,用于在宏陣列實(shí)驗(yàn)中檢測放射性同位素磷的放射信號(hào)強(qiáng)度的實(shí)驗(yàn)設(shè)備）和銀染的方法各自觀察到。當(dāng)用質(zhì)譜分析大規(guī)模提純的PCC時(shí)，90醫(yī)的核提取物應(yīng)用75醫(yī)的抗偶聯(lián)瓊脂糖A（或者用等量的蛋白瓊脂糖A作對為對照）進(jìn)行每一步反應(yīng)，IP過后的蛋白應(yīng)用8M尿素-50mMTris-HCl（pH=8.0）洗脫.質(zhì)譜分析用多維液相色譜和串聯(lián)質(zhì)譜法來確定PCC的蛋白組分的方法如參考文獻(xiàn)所述。從串聯(lián)質(zhì)譜法得到的數(shù)據(jù)與美國國家生物技術(shù)信息中心的人的子集的非冗余蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對。比對結(jié)果如參考文獻(xiàn)所述。梯度沉淀PCC和剪接復(fù)合體適于剪接狀態(tài)

15、的Hela細(xì)胞核提取物（添加/不添力口AdMLpre-mRNA）在30c孵育15分鐘以形成PCCo在沉淀分析實(shí)馬中，每一步200醫(yī)的體積都要加10%-30%的蔗糖（或者5%-20%的甘油），這一梯度含有2mMMgCl2,0.5mMDTT,60%bufferD,1mMPMSF,5mMNaFand0.01%NP-40。在4c用54000g離心3,4或者12.5小時(shí)，收集每一分層。RNA通過石碳酸/氯仿從每一層中提取出來后通過8M15%的尿素-PAGE膠分離。剪接產(chǎn)物和snRNAs能通過磷相儀和銀染的方法各自觀察到。各組分的蛋白可以通過10%的SDS-PAGE膠分離，轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上，使用抗PS

16、F的抗體或者抗U5-116的抗體檢測。RESULTS在未添加外源pre-mRNA的情況下，對剪接狀態(tài)的Hela細(xì)胞核提取物進(jìn)行co-IP試驗(yàn)?zāi)艿玫剿械奈宸NUsnRNPs。在之前的研究中，作者揭示了PSF和p54nrb能與U5snRNA上一個(gè)保守的莖環(huán)1b結(jié)合，當(dāng)核提取物處于剪接狀態(tài)時(shí)，能檢測到這兩種蛋白以及其他的U5特異性因子都募集到生物素標(biāo)記的U5snRNAs上。當(dāng)使用PSFFt異性的抗體進(jìn)一步研究它與U5snRNPA的作用時(shí)，作者發(fā)現(xiàn)五種snRNPs都會(huì)被IP沉淀下來，U1,U2,U4,U5和U6在IP后的顆粒中有著接近的化學(xué)計(jì)量。在IP試驗(yàn)中所用的核提取物中含有AdMLpre-mRNA

17、。剪接底物和中間體與PSF的共沉淀能力與PSF與剪接復(fù)合體的共沉淀能力一致。出乎意料的是的當(dāng)在剪接狀態(tài)下不加入AdMLpre-mRNA,IP實(shí)驗(yàn)只能得到類似但不相同的結(jié)果。作為對照，對不在剪接狀態(tài)的核提取物進(jìn)行IP實(shí)驗(yàn)，只有U1和U2被PSFB體沉淀下來。用bufferD透析核提取物，在調(diào)整為剪接狀態(tài)的過程中，要降低鹽離子的濃度，添加MgCl2和ATP再生系統(tǒng)。在調(diào)整到剪接狀態(tài)中的每一個(gè)變量，作者都進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)檢測其作用，并發(fā)現(xiàn)降低鹽離子的濃度是其中區(qū)別最大的一個(gè)變量。總的來說，對核提取物在體外進(jìn)行剪接時(shí)，降低鹽離子的濃度，不論是否添加外源的pre-mRNA,PSF®白都能與五種snR

18、NPs結(jié)合。不添加pre-mRNA就能在剪接狀態(tài)的Hela細(xì)胞核提取物中形成包含PS橋口多種snRNP復(fù)合體。為了確定PSF到底是與單獨(dú)的snRNP作用還是與包含五種snRNPs的復(fù)合體作用，作者進(jìn)行了沉淀分析實(shí)驗(yàn)。作者做了兩組實(shí)驗(yàn)，一組為Hela細(xì)胞核提取物，一組為調(diào)整為剪接狀態(tài)的核提取物但不添加pre-mRNA,將他們分別在30c下孵育15分鐘后用10%-30%的蔗糖梯度(54000g,3h)分離。第一組中，PS林HU5snRNP特異性蛋白U5-116位于沉淀物中的頂層，這一層只有極少或者沒有與PSF結(jié)合的大于U4/U6.U5三snRNP。在第二組中，PS林口U5-116的分布發(fā)生了變化。

19、游離蛋白位于頂層，PS林口U5-116能在所有梯度中分離出來。最重的組分顆粒位于梯度的最下層，即使當(dāng)轉(zhuǎn)速和時(shí)間減少了也不會(huì)改變，這表明這些復(fù)合體表現(xiàn)出非特異性的結(jié)合，這與之前描述的復(fù)合體有類似的地方。然而，在組分6-11中，有包含了PSF勺復(fù)合體與哺乳動(dòng)物中的剪接復(fù)合體有相似的大小(用ADMLpre-mRNA的最大值最為指示)。包含五種snNRPs的組分的化學(xué)計(jì)量與上面IP的結(jié)果一致。通過進(jìn)一步的沉淀分析分離出了一個(gè)獨(dú)特的組分，它分為四層：頂層的游離蛋白，U4/U6.U5三snRNP層，與哺乳動(dòng)物剪接復(fù)合體(60S)大小接近的組分層，最底層的非特異性集合層。PCC的形成在4C。作者接下來進(jìn)行了

20、IP實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步分析PCC復(fù)合體的形成，分別在有和沒有pre-mRNA的參與下和不同的時(shí)間點(diǎn)。當(dāng)有五種snRNPs存在時(shí)，有無pre-mRNA存在下都能形成PCC,即使是在加入了反義RNA轉(zhuǎn)錄本的陰性對照著。有意思的是，不論組裝正在進(jìn)行或者在冰上反應(yīng)，所有的五種snRNPs都能被分離出來而且他們的量都與在30C孵育了5-15分鐘的量相同。由于在冰上ATP水解釋放的能量是最少的，這說明復(fù)合體的形成似乎很大程度上與ATP無關(guān)。在有pre-mRNA參與下的組裝反應(yīng)中，剪接并不影響五種snRNP的IP。剪接分析的早期顯示了剪接體的形成，剪接產(chǎn)物的形成(mRNA和離題的套馬索)超過15分鐘后才能檢測到。最

21、為對照，在所有時(shí)間點(diǎn)用PSFB體對snRNP進(jìn)行IP試驗(yàn)的條件都相同，包括在冰上開始的時(shí)候。這表有至少有三種可能性：第一，PCC可能與剪接過程無關(guān)；第二，PCC可以代替外源的pre-mRNA;第三，PCC可能預(yù)先存在于核提取物中并且隨后組裝為pre-mRNA的底物。Hela細(xì)胞核提取物中去除外源Poly(A)RNAPCC的形成。為了說明外源pre-mRNA在復(fù)合物的組裝中是否有作用，作者對Hela細(xì)胞核提取物用oligo-dT硝酸纖維素去除了外源的Poly(A)RNAo然后用在剪接條件下用PSFB體對核提取物中形成的PCC進(jìn)行IP試驗(yàn)分析。如Figure5所示，去除外源pre-mRNA的提取物

22、中，所有的五種snRNP都能被IP下來，無論隨后的步驟中是否加入了pre-mRNA底物。為了確定去除了pre-mRNA并沒有影響剪切的活性，作者對去除和普通的核提取物進(jìn)行了體外剪接實(shí)驗(yàn)。在去除組中，剪接的效率有輕微的降低，但用IP拉下來snRNP量與之保持一致，也略有降低。因此，去除Poly(A)RNA的核提取物并不會(huì)顯著影響PCC復(fù)合體的形成，但值得注意的是處理后的提取物中會(huì)有殘留的內(nèi)源性pre-mRNA。在有無pre-mRNA下形成的PCC中的蛋白含量十分相似。PCC中存在五種UsnRNPs表明它可能等同于哺乳動(dòng)物和酵母中提取的五snRNP復(fù)合體。與釀酒酵母中的五snRNP類似，當(dāng)增加了鹽

23、離子的濃度，PCC復(fù)合體也變得不穩(wěn)定了。作者用IP拉下了PCC復(fù)合體并對用多維液相色譜偶聯(lián)串聯(lián)質(zhì)譜進(jìn)行分析，雖然這可能導(dǎo)致非特異性蛋白的結(jié)合，比較在剪接狀態(tài)的兩種條件下（有無pre-mRNA底物）分離得到的蛋白的組成。作為對照，沒有PS啦體的樣品可以確保沒有非特異性的蛋白。因?yàn)镻CC復(fù)合體不在標(biāo)準(zhǔn)的核提取物（非剪接狀態(tài)）中形成，又在250mMKCl中解離，因此對標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài)的Hela細(xì)胞核提取物進(jìn)行IP過后用高鹽buffer洗脫，可以出去不相關(guān)的蛋白，雖然也會(huì)除去一些hnRNPs,PSF乍用因子，熱休克蛋白，核糖體蛋白和一些在剪接過程中和RNA加工中未知功能的蛋白。與預(yù)期的一致，用了減去策略后分離

24、得到了許多單獨(dú)的蛋白。如Table1所示，這些蛋白能分為七類：snRNP蛋白（UsnRNP特異性蛋白和Sm蛋白（血清粘蛋白，由粘多糖和蛋白質(zhì)結(jié)合的復(fù)合蛋白）；剪接因子；hnRNPs（核內(nèi)不均一核糖核蛋白，RNApolii轉(zhuǎn)錄物與三種hnRNA蛋白A,B,C復(fù)合形成hnRNP顆粒，hnRNPC輔助RNA加工）；RNA解旋酶；絲氨酸/蘇氨酸激酶；轉(zhuǎn)錄因子；其他RNA加工因子（mRNA穩(wěn)定性，mRNA輸出，mRNA3端加工）。在分離得到的蛋白質(zhì)中，60%的蛋白都與pre-mRNA的剪接相關(guān)，而且其中的大多數(shù)都能從剪接復(fù)合體中提純出來。更重要的是，在兩種條件下得到的蛋白存在一致性。DISCUSSION

25、PCC復(fù)合體是一個(gè)多snRNP的復(fù)合體。作者前面已經(jīng)證實(shí)了，剪接狀態(tài)下的Hela細(xì)胞核提取物能形成包含PSRg白和多種snRNP的PCC復(fù)合體。將核提取物調(diào)整到剪接狀態(tài)的關(guān)鍵過程是降低鹽離子和MgCl2的濃度和ATP再生系統(tǒng)。PCC的大小與剪接體類似，包含五種剪接snRNPs和其他非snRNP的剪接因子。用PSF寺異性抗體進(jìn)行蔗糖梯度沉淀實(shí)驗(yàn)和co-IP實(shí)驗(yàn)，他們都證明了PCC的形成不需要外源的pre-mRNA,而且組裝PCC似乎不依賴于ATP的水解。從PCC中分離鑒定出了約100種的蛋白因子，其中60%的蛋白為已知的剪接復(fù)合體的組分或者功能與剪接相關(guān)。雖然PCC與完全組裝/有活性的剪接復(fù)合體

26、十分相似，但他們在兩種方式上存在明顯的區(qū)別。首先，有活性的剪接復(fù)合體不在4c下組裝且需要ATP的水解提供能量。其次，許多剪接體蛋白，如必要的剪接因子、加帽蛋白（CBP）、Prp16和Prp17都不能從PCC中分離出來。這可能是由于在提純的過程中一些蛋白因子被洗脫出去了，或者是由于技術(shù)上的難題不能由質(zhì)譜技術(shù)分離出來。剪接裝置和PCCo在過去的二十年間，一些實(shí)驗(yàn)室研究了剪接復(fù)合體和剪接相關(guān)的微粒。如上文所訴，之前的研究表明了剪接復(fù)合體從頭組裝后逐步去除內(nèi)含子。然而，如今有些復(fù)合體并不適用于這個(gè)模型，例如酵母中的Cwf/Cwc復(fù)合體、InRNP復(fù)合體（能與U2和U6堿基配對且沉降系數(shù)大于150S）、含有U2/U4/U5/U6的假的剪接復(fù)合體、釀酒酵母中的五snRNP復(fù)合體、Hela細(xì)胞核提取物中的五snRNP復(fù)合體（PScomplex）。之前的研究認(rèn)為一些上面的復(fù)合體的作用是儲(chǔ)存snRNP,但如今的研究者認(rèn)為他們可以作為功能性復(fù)合體。與PCC最相似的為釀酒酵母中的五snRNP復(fù)合體和Hela細(xì)胞核提取物中的五snRNP復(fù)合體。這三種復(fù)合體都在低鹽離子濃度下形成并且包含五種snRNP。在不添加外源RNA的Hela細(xì)胞核提取物中能分離出PS復(fù)合體，PS復(fù)合體（200S）比PCC復(fù)合體大得多且其蛋白組分還未