食品工程畢業(yè)論文蘑菇多糖的提取

1、 畢業(yè)論文論文題目: 蘑菇多糖的提取 所在學(xué)院： 食品工程分院 專業(yè)班級： 學(xué)生： 指導(dǎo)教師： 二0一五年 四 月目 錄 題目 摘要及關(guān)鍵詞1前言12 材料與方法12.1 試驗材料與試驗方法12.2 主要儀器與試劑12.2.1測定方法 12.2.2蘑菇多糖的提取流程 23.結(jié)果與分析23.1熱水法提取蘑菇多糖的方案2提取的方法2提取的步驟33.2多糖提取率的計算34.討論34.1正交實驗確定最佳提取工藝3正交實驗確定微波輔助熱水提法最佳提取工藝34.2結(jié)論4參考文獻5致謝6蘑菇多糖的提取摘 要 :蘑菇多糖是從蘑菇子實體中提取的水溶性蛋白多糖，是其主要活性成分，蘑菇多糖是提高人體免疫力的首選營養(yǎng)

2、品。蘑菇多糖的主要藥理活性有：有較強的抗癌活性，是“三高”人群和癌癥患者的理想營養(yǎng)品。關(guān)鍵詞 :蘑菇多糖，提取The mushroom polysaccharide extractionAbstract: mushroom polysaccharide from mushroom polysaccharide extracted from fruit body of water-soluble protein, is the main active ingredient, mushroom polysaccharide is to improve the immunity of choice

3、for nutrition. Mushroom polysaccharides of the main pharmacological activities: strong anticancer activity, is the "three high" crowd ideal nutrition and cancerKeywords：Mushroom polysaccharide and extract1前言 蘑菇多糖對正常機體并無免疫促進作用，但能使荷瘤式或感染后的機體的免疫應(yīng)答得以提高。其制劑在動物體內(nèi)篩選試驗中未見直接抗癌效果，卻明顯促進體外淋巴細(xì)胞培養(yǎng)物的轉(zhuǎn)化作用

4、。曾經(jīng)發(fā)現(xiàn)胸腺切除的動物注射抗淋巴細(xì)胞血清后，可削弱蘑菇多糖的抗腫瘤活性，且它的作用還能被巨噬細(xì)胞抑制劑角叉菜膠和硅膠所削弱。所以說，蘑菇多糖是一種胸腺依賴型T細(xì)胞導(dǎo)向并有巨噬細(xì)胞參與的特殊免疫佐劑。它能識別脾臟及肝臟中抗原的巨噬細(xì)胞，促進淋巴細(xì)胞活化因子的產(chǎn)生，釋放各種輔助性T細(xì)胞因子，增強宿主腹腔巨噬細(xì)胞吞噬率，當(dāng)宿主機體注射蘑菇多糖數(shù)小時后，一些具生理活性的血清因子如急性期蛋白誘導(dǎo)因子、血管擴張和出血誘導(dǎo)因子、IL-1生成誘導(dǎo)因子、IL3和集落刺激因子的水平達到峰值。這些因子作用于淋巴細(xì)胞、肝細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞后，產(chǎn)生許多有效免疫應(yīng)答，同時導(dǎo)致胸腺內(nèi)的前體T細(xì)胞趨于成熟、分化、增殖并向釋

5、放。2材料與方法2.1 試驗材料與試劑原料：蘑菇試劑：蒸餾水，葡萄糖，苯酚，鋁片，3NaHCO 固體，濃硫酸，95%乙醇稀鹽酸，PH試紙，復(fù)合酶（木瓜蛋白酶：纖維素酶=2：1）2.2 主要儀器與設(shè)備 設(shè)備和儀器：100ml容量瓶，6個50ml容量瓶，玻璃棒，蒸餾裝置（溫度計、沸石、三口燒瓶、 冷凝管），燒杯若干，錐形瓶若干，棕色瓶一個，抽濾瓶，1、2、5、10ml吸液管，電子天平，真空干燥箱，恒溫水浴鍋，紫外分光光度計，粉碎機，40、60、80、100目的篩子， DL700-0.55×1.5超高壓等靜壓機（上海大隆高壓設(shè)備廠），真空泵，THZ-82A臺式恒溫振蕩器，臺式離心機2.2.

6、1 測定方法 1、標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液的配制 精密稱取105干燥至恒重的葡萄糖100.0mg，加蒸餾水溶解并定容于100ml容量瓶中，搖勻，配成濃度為1mg/ml標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液備用。 2、5%苯酚試劑的配制。 苯酚水浴加熱溶解后稱取100g，加鋁片0.1g(先用1：6的鹽酸除去鋁片表面氧化鋁后，再稱量使用)，加入碳酸氫鈉30g，蒸餾，收集178-182的餾分，取餾出液7.5g，加入蒸餾水150mL，得5.0的苯酚溶液，置于棕色瓶中備用。 3、標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 以葡萄糖作為標(biāo)準(zhǔn)品，采用苯酚硫酸比色法，用紫外分光光度計測定多糖含量。 精密吸取已配制的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.5，1，1.5，2，2.5，3ml置于

7、6個50ml容量瓶中，加蒸餾水至刻度線，搖勻。精密吸取2ml，分別加入5%苯酚溶液1ml，搖勻，迅速加入5ml濃硫酸，振搖5min，置沸水浴上加熱15min，然后置冷水浴中冷卻30min，以溶劑蒸餾水為空白作對照，在400600nm內(nèi)掃描，最大吸收波長為490nm。 在490nm處，測吸光值，以濃度為縱坐標(biāo)，吸光值為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品濃度Y（ug/ml）與吸光值X的回歸方程：Y=15.336X-0.0298，R2=0.9997。在2.515.0 ug/ml范圍內(nèi)呈線性關(guān)系2.2.2 蘑菇多糖的提取流程蘑菇多糖屬于極性大分子化合物，其特定的結(jié)構(gòu)與免疫活性密切相關(guān)。一般認(rèn)為:增

8、加多糖溶解度有利于提高其生理活性;中等相對分子質(zhì)量多糖的活性超過過高的或過低的相對分子質(zhì)量多糖;可溶于熱水的多糖被證實有抗腫瘤活性。目前蘑菇多糖的提取多采用熱水及稀堿溶液，避免在強酸、堿溶液中進行，否則極易造成多糖中糖苷鍵斷裂及構(gòu)象變化。常用的分離純化方法大致經(jīng)過沸水浸提、乙醇沉淀、透析及柱層析等步驟。成分功能蘑菇多糖是從優(yōu)質(zhì)蘑菇子實體中提取的有效活性成分，蘑菇多糖中的活性成分是具有分支的- (1-3)-D-葡聚糖，主鏈由-(1-3)-連接的葡萄糖基組成，沿主鏈隨機分布著由-(1-6)連接的葡萄糖基，呈梳狀結(jié)構(gòu)。研究表明蘑菇的活性多糖成分-(1-3)-D- 葡聚糖對抑制異源的、同源的、甚至是遺

9、傳性的腫瘤都有效。分子式:(c6h10o5)n ，分子量:4080萬。蘑菇的主要成分是多糖類和不飽和脂肪酸，還含有大量的可轉(zhuǎn)變?yōu)榫S生素D的麥角甾醇和菌甾醇，經(jīng)熱水提取的蘑菇多糖可調(diào)節(jié)人休內(nèi)有免疫功能的T細(xì)胞活性，可降低甲基膽蒽誘發(fā)腫瘤的能力。香菇對癌細(xì)胞有強烈的抑制作用，對小白鼠肉瘤180的抑制率為97.5%，對艾氏癌的抑制率為80%。蘑菇還含有雙鏈核糖核酸，能誘導(dǎo)產(chǎn)生干擾素，具有抗病毒能力。功能主治:不能手術(shù)或復(fù)發(fā)性胃癌、肝癌、膀胱癌，使用本品能緩解癥狀，提高病人免疫功能，糾正微量元素失調(diào)。蘑菇含有水溶性鮮味物質(zhì)，可用作食品調(diào)味品，其主要成分是5'-烏苷酸等核酸成分。香味成分主要蘑菇

10、酸分解生成的香菇精(lentionione)。所以蘑菇是人們重要的食用、藥用菌和調(diào)。3 結(jié)果與分析3.1熱水法提取蘑菇多糖的方案 原料：蘑菇。 試劑：0.5%NaOH，95%乙醇，蒸餾水。 設(shè)備和儀器：燒杯（若干），玻璃棒，溫度計，錐形瓶（若干），漏斗，水浴鍋，稱量天平，THZ-82A臺式恒溫振蕩器,臺式離心機，紫外線分光光度計。 3.1.1 提取的方法：1、粉碎度對提取率的影響 分別稱取40、60、80、100目的蘑菇粉5g，放入到250mL的錐形瓶中，加入蒸餾水100ml，混合均勻后置于90水浴鍋中，水浴提取2h，提取兩次，提取結(jié)束，冷卻至室溫，將兩次提取液混合后過濾，取2ml濾液分別加入

11、5%苯酚溶液1ml，搖勻，迅速加入5ml濃硫酸，振搖5min，置沸水浴上加熱15min，然后置冷水浴中冷卻30min，即以溶劑蒸餾水為空白作對照，在490nm處用分光光度計測吸光值，計算多糖提取率，得到粉碎度與提取率的關(guān)系。 3.1.2提取的步驟： 2、料液比對提取率的影響稱取80目的蘑菇粉5g六份，放入到250mL的錐形瓶中，分別加入蒸餾水75、100、125、150、175、200ml，混合均勻后置于90水浴鍋中，水浴提取2h，提取兩次，提取結(jié)束，冷卻至室溫，將兩次提取液混合后過濾，取2ml濾液分別加入5%苯酚溶液1ml，搖勻，迅速加入5ml濃硫酸，振搖5min，置沸水浴上加熱15min，

12、然后置冷水浴中冷卻30min，即以溶劑蒸餾水為空白作對照，在490nm處用分光光度計測吸光值，計算多糖提取率，得到粉碎度與提取率的關(guān)系。 3、提取溫度對提取率的影響 稱取80目的蘑菇粉5g，放入到250mL的錐形瓶中，加入蒸餾水100ml，混合均勻后置于65、75、80、85、90、95、100水浴鍋中，水浴提取2h，提取兩次，提取結(jié)束，冷卻至室溫，將兩次提取液混合后過濾，取2ml濾液分別加入5%苯酚溶液1ml，搖勻，迅速加入5ml濃硫酸，振搖5min，置沸水浴上加熱15min，然后置冷水浴中冷卻30min，即以溶劑蒸餾水為空白作對照，在490nm處用分光光度計測吸光值，計算多糖提取率，得到粉

13、碎度與提取率的關(guān)系。 4、提取時間對提取率的影響 稱取80目的蘑菇粉5g五份，放入到250mL的錐形瓶中，加入蒸餾水100ml，混合均勻后置于90水浴鍋中，水浴提取2、3、4、5、6h，提取結(jié)束，冷卻至室溫，將兩次提取液混合后過濾，取2ml濾液分別加入5%苯酚溶液1ml，搖勻，迅速加入5ml濃硫酸，振搖5min，置沸水浴上加熱15min，然后置冷水浴中冷卻30min，即以溶劑蒸餾水為空白作對照，在490nm處用分光光度計測吸光值，計算多糖提取率，得到粉碎度與提取率的關(guān)系。 5、提取次數(shù)對提取率的影響 稱取80目的蘑菇粉5g四份，放入到250mL的錐形瓶中，加入蒸餾水100ml，混合均勻后置于9

14、0水浴鍋中，水浴提取2h，提取1、2、3、4次，提取結(jié)束，冷卻至室溫，將兩次提取液混合后過濾，取2ml濾液分別加入5%苯酚溶液1ml，搖勻，迅速加入5ml濃硫酸，振搖5min，置沸水浴上加熱15min，然后置冷水浴中冷卻30min，即以溶劑蒸餾水為空白作對照，在490nm處用分光光度計測吸光值，計算多糖提取率，得到粉碎度與提取率的關(guān)系。3.2 多糖提取率的計算 多糖=總糖-還原糖 多糖提取率（%）=多糖量/子實體干重*100%4. 討論4.1正交實驗確定最佳提取工藝4.1.1正交實驗確定微波輔助熱水提法最佳提取工藝 影響微波輔助熱水提取蘑菇多糖提起率的因素主要料液化比、提時間、微波處理時間、提

15、溫度等，以下采用正交法確定微波輔助熱水提取蘑菇多糖的最適條件，結(jié)果見表1。通過以下正交實驗可以得出微波輔助熱水提法最佳提取工藝條件。表1微波輔助熱水提取蘑菇多糖正交實驗結(jié)果如圖表1由極差分析結(jié)果，影響蘑菇多糖提取率因素的主次順序為：D>C>B>A,即提溫度>微波處理時間>提時間>液化比，最優(yōu)水平為A3B2C2D2微波輔助提取蘑菇多糖最佳提取條件為：料液比1：25，提溫度80，提時間3H，在此條件下蘑菇多糖提取得率可達7.70%。4.2結(jié)論通過微波輔助熱水提取法提蘑菇多糖的單因素實驗表明，當(dāng)提的料液比為1:20-1:30，提時間為3h-5h,提溫度為80-85

16、，微波輔助時間為3min-4min，提取次數(shù)為1次時，蘑菇多糖的提取效果較好。在此基礎(chǔ)上，對料液比、提時間、微波處理時間、提溫度4個因素在3個水平上進行了實驗。結(jié)果表明，微波輔助提取蘑菇多糖最佳提取條件為：料液比1：25，提溫度80，提時間3H，在此條件下蘑菇多糖提取得率可達7.70%。參考文獻1李珺;鐘耀廣;劉長江;蘑菇多糖的分離純化方法研究進展J;北方園藝;2008年12期.2蔣志國;杜琪珍;盛利燚;制備型高速逆流色譜分離純化蘑菇多糖J;分析化學(xué);2009年03期 .3李艷,王兆梅,郭祀遠(yuǎn);生物活性多糖高級結(jié)構(gòu)的研究方法進展J;廣東化工;2005年08期.4 賀正芳，食品的酶促褐變及其控制

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