各種滅菌法詳細(xì)介紹

1、各種滅菌法詳細(xì)介紹滅菌法系指用適當(dāng)?shù)奈锢砘蚧瘜W(xué)手段將物品中活的微生物殺滅或除去的方法。本法適用于 無(wú)菌制劑、原料、輔料及醫(yī)療器械等物品的滅菌。無(wú)菌物品是指物品中不含任何活的微生 物。然而，對(duì)于任何一批滅菌產(chǎn)品來(lái)說(shuō)，絕對(duì)無(wú)菌既無(wú)法保證也無(wú)法用試驗(yàn)來(lái)證實(shí)。物理 或化學(xué)手段滅菌試驗(yàn)表明：微生物的殺滅遵循對(duì)數(shù)規(guī)則，因此，已滅菌物品的無(wú)菌標(biāo)準(zhǔn)一 般以物品滅菌后微生物存活的概率-無(wú)菌保證水平SAL （Sterility Assurance Level）表示。 最終滅菌產(chǎn)品微生物存活的概率不得高于10-6。已滅菌產(chǎn)品達(dá)到的無(wú)菌保證水平可通過(guò)驗(yàn) 證確定。滅菌產(chǎn)品的無(wú)菌保證并不能依賴(lài)于最終產(chǎn)品的無(wú)菌檢驗(yàn)，而是取

2、決于生產(chǎn)過(guò)程中 采用合格的滅菌工藝、嚴(yán)格的GMP管理和良好的全面質(zhì)量保證體系。滅菌工藝的確定應(yīng) 綜合考慮被滅菌物品的性質(zhì)、滅菌方法的有效性和經(jīng)濟(jì)性、滅菌后物品的完整性和穩(wěn)定性 等因素。滅菌程序的驗(yàn)證是無(wú)菌保證的必要條件。滅菌程序經(jīng)驗(yàn)證后，方可交付正式使用。 驗(yàn)證內(nèi)容包括：撰寫(xiě)驗(yàn)證方案及制定評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)。確認(rèn)滅菌設(shè)備技術(shù)資料齊全、安裝 正確，并能處于正常運(yùn)行（安裝確認(rèn)）。確認(rèn)關(guān)鍵控制設(shè)備和儀表能在規(guī)定的參數(shù)范圍 內(nèi)正常運(yùn)行（運(yùn)行確認(rèn)）。采用滅菌物品或模擬物品進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)，確認(rèn)滅菌效果符 合規(guī)定（性能確認(rèn)）。匯總并完善各種文件和記錄，撰寫(xiě)驗(yàn)證報(bào)告。日常生產(chǎn)中，應(yīng) 對(duì)滅菌程序的運(yùn)行情況進(jìn)行監(jiān)控，確認(rèn)關(guān)鍵

3、參數(shù)（如溫度、壓力、時(shí)間、濕度、滅菌氣體 濃度及吸收的輻照吸收劑量等）均在驗(yàn)證確定的范圍內(nèi)。滅菌程序應(yīng)定期進(jìn)行再驗(yàn)證。當(dāng) 滅菌程序發(fā)生變更（包括滅菌物品裝載方式和數(shù)量的改變）時(shí)，應(yīng)進(jìn)行再驗(yàn)證。產(chǎn)品的無(wú) 菌保證與滅菌前產(chǎn)品被污染的程度及污染菌的特性相關(guān)。因此，應(yīng)嚴(yán)格監(jiān)控被滅菌品滅菌 前的微生物污染水平及污染菌的耐受性，并在生產(chǎn)的各個(gè)環(huán)節(jié)采取各種措施降低污染，確 保微生物污染控制在規(guī)定的限度內(nèi)。滅菌后，應(yīng)防止已滅菌物品被再次污染。任何情況下， 都應(yīng)要求容器及其密封系統(tǒng)確保產(chǎn)品在有效期內(nèi)符合無(wú)菌要求。滅菌方法常用的滅 菌方法有濕熱滅菌法、干熱滅菌法、氣體滅菌法、輻射滅菌法和過(guò)濾除菌法。可根據(jù)被滅 菌

4、物品的特性采用一種或多種方法組合滅菌。只要產(chǎn)品允許，應(yīng)盡可能選用最終滅菌法（即 產(chǎn)品分裝至包裝容器后再滅菌）滅菌。若產(chǎn)品不適合采用最終滅菌法，可選用過(guò)濾除菌法 或無(wú)菌生產(chǎn)工藝達(dá)到無(wú)菌保證要求，只要可能，應(yīng)對(duì)非最終滅菌的產(chǎn)品作補(bǔ)充性滅菌處理 （如流通蒸汽滅菌）。一、濕熱滅菌法本法系指將物品置于滅菌柜內(nèi)利用高壓飽和蒸汽、過(guò)熱水噴淋等手段使微生物菌體中的蛋 白質(zhì)、核酸發(fā)生變性而殺滅微生物的方法。該法滅菌能力強(qiáng)，為熱力滅菌中最有效、應(yīng) 用最廣泛的滅菌方法。藥品、容器、培養(yǎng)基、無(wú)菌衣、膠塞以及其它遇高溫和潮濕不發(fā)生 變化或損壞的物品，均可用本法滅菌。流通蒸汽不能完全殺滅細(xì)菌抱子，一般可作為不耐 熱無(wú)菌產(chǎn)

5、品的輔助滅菌手段。濕熱滅菌條件通常采用121x20min或116x40min的程序，也可采用其它溫度和時(shí)間 參數(shù)。總之，必須保證物品滅菌后的SALS10-6。對(duì)熱穩(wěn)定的物品，可采用過(guò)度殺滅法， 其SAL應(yīng)勺0-12。熱敏感產(chǎn)品的標(biāo)準(zhǔn)滅菌時(shí)間F0可低于8min，但應(yīng)在生產(chǎn)全過(guò)程中，對(duì) 產(chǎn)品中污染的微生物嚴(yán)加監(jiān)控，并采取各種措施防止耐熱菌污染及降低微生物污染水平， 確保被滅菌產(chǎn)品達(dá)到無(wú)菌保證要求。采用濕熱滅菌時(shí)，被滅菌物品應(yīng)有適當(dāng)?shù)陌b和裝載方式，保證滅菌的有效性和均一性。濕熱滅菌工藝驗(yàn)證時(shí)，應(yīng)進(jìn)行熱分布試驗(yàn)、熱穿透試驗(yàn)和生物指示劑驗(yàn)證試驗(yàn)。以確定滅 菌柜空載及不同裝載時(shí)腔室中的熱分布狀況及可能存

6、在的冷點(diǎn);在空載條件下，確認(rèn)121 時(shí)腔室各點(diǎn)的溫度差值應(yīng)秘1；使用插入實(shí)際物品或模擬物品內(nèi)的溫度探頭，確認(rèn)滅菌 柜在不同裝載時(shí)，最冷點(diǎn)物品的標(biāo)準(zhǔn)滅菌時(shí)間(F0)達(dá)到設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)；用生物指示劑進(jìn)一 步確認(rèn)在不同裝載時(shí)冷點(diǎn)處的滅菌物品達(dá)到無(wú)菌保證水平。本法常用的生物指示劑為嗜熱 脂肪芽抱桿菌抱子(Spores of Bacillus stearothermophilus)。二、干熱滅菌法本法系指物品于干熱滅菌柜、隧道滅菌器等設(shè)備中、利用干熱空氣達(dá)到殺滅微生物或消除 熱原物質(zhì)的方法。適用于耐高溫但不宜用濕熱滅菌法滅菌的物品的滅菌，如玻璃器具、金 屬制容器、纖維制品、固體試藥、液狀石蠟等均可采用本法滅

7、菌。干熱滅菌條件一般為160170x120min以上、170180x60min以上或250x45mi n以上，也可采用其它溫度和時(shí)間參數(shù)?？傊瑧?yīng)保證滅菌后的產(chǎn)品其SALS10-6。干熱過(guò) 度殺滅后產(chǎn)品的SAL應(yīng)勺0-12,此時(shí)物品一般無(wú)需進(jìn)行滅菌前污染微生物的測(cè)定。250 45min的干熱滅菌也可除去無(wú)菌產(chǎn)品包裝容器及有關(guān)生產(chǎn)灌裝用具中的熱原物質(zhì)。采用干熱滅菌時(shí)，被滅菌物品應(yīng)有適當(dāng)?shù)陌b和裝載方式，保證滅菌的有效性和均一性。干熱滅菌法驗(yàn)證與濕熱滅菌法相同，應(yīng)進(jìn)行熱分布試驗(yàn)、熱穿透試驗(yàn)、生物指示劑驗(yàn)證試 驗(yàn)或細(xì)菌內(nèi)毒素滅活驗(yàn)證試驗(yàn)。以確認(rèn)滅菌柜中的溫度分布符合設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)、確定最冷點(diǎn) 位置、確認(rèn)

8、最冷點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)滅菌時(shí)間(Fh)能達(dá)到設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)并達(dá)到SAL要求。常用的生物指 示劑為枯草芽抱桿菌抱子(Spores of Bacillus subtilis)。細(xì)菌內(nèi)毒素滅活驗(yàn)證試驗(yàn)是證明除 熱原過(guò)程有效性的試驗(yàn)。一般將不小于1000單位的細(xì)菌內(nèi)毒素加入待去熱原的物品中， 證明該去熱原工藝能使內(nèi)毒素至少下降3個(gè)對(duì)數(shù)單位。細(xì)菌內(nèi)毒素滅活驗(yàn)證試驗(yàn)所用的細(xì) 菌內(nèi)毒素一般為大腸桿菌內(nèi)毒素(Escherichia coli endoxin)。驗(yàn)證時(shí)，一般采用最大裝 載方式。三、輻射滅菌法本法系指將滅菌產(chǎn)品置于適宜放射源輻射的Y射線或適宜的電子加速器發(fā)生的電子束中 進(jìn)行電離輻射而達(dá)到殺滅微生物的方法。本法最常用

9、的為60Co-y射線輻射滅菌。醫(yī)療器械、 容器、生產(chǎn)輔助用品、不受輻射破壞的原料藥及成品等均可用本法滅菌。采用輻射滅菌法滅菌的無(wú)菌產(chǎn)品其SAL應(yīng)勺0-6。丫射線輻射滅菌所控的參數(shù)主要是輻射 劑量(指滅菌物品的吸收劑量)。該劑量的制定應(yīng)考慮滅菌物品的適應(yīng)性及可能污染的微 生物最大數(shù)量及最強(qiáng)抗輻射力，所使用的劑量事先應(yīng)驗(yàn)證其有效性及安全性。常用的輻射 滅菌吸收劑量為25kGy。對(duì)最終產(chǎn)品、原料藥、某些醫(yī)療器材應(yīng)盡可能采用低輻射劑量滅 菌。滅菌前，應(yīng)對(duì)被滅菌物品微生物污染的數(shù)量和抗輻射強(qiáng)度進(jìn)行測(cè)定，以評(píng)價(jià)滅菌過(guò)程 賦予該滅菌物品的無(wú)菌保證水平。滅菌時(shí)，應(yīng)采用適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)或物理方法對(duì)滅菌物品吸收的輻射劑

10、量進(jìn)行監(jiān)控，以充分證實(shí) 滅菌物品吸收的劑量是在規(guī)定的限度內(nèi)。如采用與滅菌物品一起被輻射的放射性劑量計(jì)， 劑量計(jì)要置于規(guī)定的部位。在初安裝時(shí)劑量計(jì)應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)源進(jìn)行校正，并定期進(jìn)行再校正。60Co-Y射線輻射滅菌法驗(yàn)證時(shí)，除進(jìn)行生物指示劑驗(yàn)證試驗(yàn)外，還應(yīng)確認(rèn)空載和裝載時(shí)滅 菌腔內(nèi)的輻射劑量的分布圖、滅菌物品的吸收劑量及最大和最小吸收劑量的分布、滅菌物 品的均一性、滅菌腔內(nèi)物品的裝載方式等。常用的生物指示劑為短小芽抱桿菌抱子（Spore s of Bacillus pumilus）。四、氣體滅菌法本法系指用化學(xué)消毒劑形成的氣體殺滅微生物的方法。在充有滅菌氣體的高壓腔室內(nèi)進(jìn) 行。常用的化學(xué)消毒劑有環(huán)氧乙

11、烷、氣態(tài)過(guò)氧化氫、甲醛、臭氧O3）等，本法適用于在 氣體中穩(wěn)定的物品滅菌。采用氣體滅菌法時(shí)，應(yīng)注意滅菌氣體的可燃可爆性、致畸性和殘 留毒性。本法中最常用的氣體是環(huán)氧乙烷，一般與80%90%的惰性氣體混合使用。該法可用 于醫(yī)療器械，塑料制品等不能采用高溫滅菌的物品滅菌。含氯的物品及能吸附環(huán)氧乙烷的 物品則不宜使用。另外，使用氣態(tài)過(guò)氧化氫和臭氧O3）滅菌，因其無(wú)危害性殘留物，不 會(huì)對(duì)操作人員和環(huán)境造成危害，適合于空間和物品表面的滅菌。采用環(huán)氧乙烷滅菌時(shí)，滅菌柜內(nèi)的溫度、濕度、滅菌氣體濃度、滅菌時(shí)間是影響滅菌效果 的重要因數(shù)?？刹捎孟铝袦缇鷹l件：溫度 （54 ±10） ;相對(duì)濕度（60&#

12、177;10） % ;滅菌壓力8x105Pa ;滅菌時(shí)間90min 滅菌條件應(yīng)予驗(yàn)證。滅菌時(shí)，先將滅菌腔室先抽成真空，然后通入蒸汽使腔室內(nèi)達(dá)到設(shè)定 的溫濕度平衡的額定值，再通入經(jīng)過(guò)濾和預(yù)熱的環(huán)氧乙烷氣體。滅菌過(guò)程中，應(yīng)嚴(yán)密監(jiān)控腔 室的溫度、濕度、壓力、環(huán)氧乙烷濃度及滅菌時(shí)間。必要時(shí)使用生物指示劑監(jiān)控滅菌效果。 本法滅菌程序的控制具有一定難度，整個(gè)滅菌過(guò)程應(yīng)在技術(shù)熟練人員的監(jiān)督下進(jìn)行。滅菌 后，應(yīng)采取新鮮空氣置換，使殘留環(huán)氧乙烷和其他易揮發(fā)性殘?jiān)?。并?duì)環(huán)氧乙烷殘留 物和反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行監(jiān)控，以證明其不超過(guò)規(guī)定濃度，避免產(chǎn)生毒性。環(huán)氧乙烷滅菌法驗(yàn)證時(shí)，應(yīng)進(jìn)行如下試驗(yàn)：泄漏試驗(yàn)，以確認(rèn)滅菌腔室的密閉

13、性；生物指 示劑的驗(yàn)證試驗(yàn)，指示劑一般采用枯草芽抱桿菌抱子（Spores of Bacillus subtilis）；滅菌后 換氣次數(shù)的驗(yàn)證試驗(yàn)，確認(rèn)環(huán)氧乙烷及相應(yīng)的反應(yīng)產(chǎn)物含量在限定的范圍內(nèi)。驗(yàn)證設(shè)計(jì)時(shí)， 還應(yīng)考慮物品包裝材料和滅菌腔室中物品的排列方式對(duì)滅菌氣體的擴(kuò)散和滲透的影響。五、過(guò)濾除菌法本法系利用細(xì)菌不能通過(guò)致密具孔濾材的原理以除去氣體或液體中微生物的方法。常用于 熱不穩(wěn)定的藥品溶液或原料的除菌。除菌過(guò)濾器采用孔徑分布均勻的微孔濾膜作過(guò)濾材料，微孔濾膜分親水性和疏水性?xún)煞N。 濾膜材質(zhì)依過(guò)濾物品的性質(zhì)及過(guò)濾目的而定。藥品生產(chǎn)中采用的除菌濾膜孔徑一般不超過(guò) 0.22p m。過(guò)濾器不得對(duì)被

14、濾過(guò)成分有吸附作用，也不能釋放物質(zhì)，不得有纖維脫落，禁 用含石棉的過(guò)濾器。濾器和濾膜在使用前應(yīng)進(jìn)行潔凈處理，并用高壓蒸汽進(jìn)行滅菌或作在 線滅菌。更換品種和批次應(yīng)先清洗濾器，再更換濾膜。過(guò)濾過(guò)程中無(wú)菌保證與過(guò)濾液體的初始生物負(fù)荷及過(guò)濾器的對(duì)數(shù)下降值LRV（Log Reduct ion Value）有關(guān)。LRV系指規(guī)定條件下，被過(guò)濾液體過(guò)濾前的微生物數(shù)量與過(guò)濾后的微生 物數(shù)量比的常用對(duì)數(shù)值。即：LRV=lgN0- LgN式中N0為產(chǎn)品除菌前的微生物數(shù)量。N為產(chǎn)品除菌后的微生物數(shù)量。LRV用于表示過(guò)濾器的過(guò)濾除菌效率，對(duì)孔徑為0.22p m的過(guò)濾器而言，要求每1cm2有 效過(guò)濾面積的LRV應(yīng)不小于7

15、。因此過(guò)濾除菌時(shí)，被過(guò)濾產(chǎn)品總的污染量應(yīng)控制在規(guī)定 的限度內(nèi)。為保證過(guò)濾除菌效果，可使用兩個(gè)過(guò)濾器串連過(guò)濾，或在灌裝前用過(guò)濾器進(jìn)行 再次過(guò)濾。在過(guò)濾除菌中，一般無(wú)法對(duì)全過(guò)程中過(guò)濾器的關(guān)鍵參數(shù)（濾膜孔徑的大小及分布，濾膜的 完整性及LRV）進(jìn)行監(jiān)控。因此，在每一次過(guò)濾除菌前后均應(yīng)作濾器的完整性試驗(yàn)，即 氣泡點(diǎn)試驗(yàn)或壓力維持試驗(yàn)或氣體擴(kuò)散流量試驗(yàn)。確認(rèn)濾膜在除菌過(guò)濾過(guò)程中的有效性和 完整性。除菌過(guò)濾器的使用時(shí)間不應(yīng)超過(guò)一個(gè)工作日，否則應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證。過(guò)濾系統(tǒng)的驗(yàn)證包括過(guò)濾系統(tǒng)對(duì)過(guò)濾液體的適應(yīng)性、過(guò)濾材料對(duì)溶液的污染程度、過(guò)濾 器的規(guī)格、過(guò)濾器的滅菌方法、過(guò)濾系統(tǒng)的完整性試驗(yàn)、生物指示劑試驗(yàn)、過(guò)濾液體的

16、微 生物含量控制及過(guò)濾時(shí)間、過(guò)濾器的使用壽命等。上述試驗(yàn)大部分可由濾器的生產(chǎn)廠商來(lái) 進(jìn)行。微生物挑戰(zhàn)性試驗(yàn)常用的生物指示劑為缺陷假單胞菌（尸se，do機(jī)m，s diminuta）。通過(guò)過(guò)濾除菌法達(dá)到無(wú)菌的產(chǎn)品應(yīng)嚴(yán)密監(jiān)控其生產(chǎn)環(huán)境的潔凈度，建議在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行 過(guò)濾操作。相關(guān)的設(shè)備、包裝容器、塞子及其它物品應(yīng)采用適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行滅菌，并防止 再污染。六、無(wú)菌生產(chǎn)工藝無(wú)菌生產(chǎn)工藝系指必須在無(wú)菌控制條件下生產(chǎn)無(wú)菌制劑的方法，無(wú)菌分裝及無(wú)菌凍干是最 常見(jiàn)的無(wú)菌生產(chǎn)工藝。后者在工藝過(guò)程中須采用過(guò)濾除菌法。無(wú)菌生產(chǎn)工藝應(yīng)嚴(yán)密監(jiān)控其生產(chǎn)環(huán)境的潔凈度，并應(yīng)在無(wú)菌控制的環(huán)境下進(jìn)行過(guò)濾操作。 相關(guān)的設(shè)備、包裝容器、

17、塞子及其它物品應(yīng)采用適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行滅菌，并防止被再次污染。無(wú)菌生產(chǎn)工藝過(guò)程的無(wú)菌保證應(yīng)通過(guò)培養(yǎng)基無(wú)菌灌裝摸擬試驗(yàn)驗(yàn)證，試驗(yàn)結(jié)果的陽(yáng)性率不 得超過(guò)0.1%（置信度取95%）。在生產(chǎn)過(guò)程中，應(yīng)嚴(yán)密監(jiān)控生產(chǎn)環(huán)境的無(wú)菌空氣質(zhì)量、操作 人員的素質(zhì)、各物品的無(wú)菌性。無(wú)菌生產(chǎn)工藝應(yīng)定期進(jìn)行驗(yàn)證，包括對(duì)環(huán)境空氣過(guò)濾系統(tǒng)有效性驗(yàn)證及培養(yǎng)基模擬灌裝 試驗(yàn)。生物指示劑生物指示劑系一類(lèi)特殊的活微生物制品?？捎糜诖_認(rèn)滅菌設(shè)備的性能、滅菌程序的驗(yàn)證、 生產(chǎn)過(guò)程滅菌效果的監(jiān)控等。用于滅菌驗(yàn)證中的生物指示劑一般是細(xì)菌的抱子。1 .制備生物指示劑用微生物的基本要求不同的滅菌方法使用不同的生物指示劑，制備生物指示劑所選用的微生物

18、必須具備以下特 性：(1) (1) 菌種的耐受性應(yīng)大于需滅菌產(chǎn)品中所有可能污染微生物的耐受性。(2) (2) 菌種應(yīng)無(wú)致病性。(3) (3) 菌株應(yīng)穩(wěn)定。存活期長(zhǎng)，易于保存。(4)易于培養(yǎng)。若使用休眠抱子，生物指示劑中休眠抱子含量要在90%以上。1. 1.生物指示劑的制備生物指示劑的制備應(yīng)按一定的程序進(jìn)行，制備前，需先確定所用微生物的特性，如D值(微生物的耐熱參數(shù)，系指一定溫度下，將微生物殺滅90%所需的時(shí)間，以分表 示)值等。菌株應(yīng)用適宜的培養(yǎng)基(如產(chǎn)抱子的培養(yǎng)基)進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)物應(yīng)制成懸浮液， 其中抱子的數(shù)量應(yīng)占優(yōu)勢(shì)，抱子應(yīng)懸浮于無(wú)營(yíng)養(yǎng)的液體中保存。生物指示劑中包含一定數(shù)量的一種或多種抱子

19、，可制成多種形式，通常是將一定數(shù)量的抱 子附著在無(wú)生命的載體上，如濾紙條、玻片、不銹鋼、塑料制品等；抱子懸浮液也可密封 于安甑中；有的生物指示劑還配有培養(yǎng)基系統(tǒng)。生物指示劑應(yīng)選用合適的材料包裝，并設(shè) 定有效期。載體和包裝材料在保護(hù)生物指示劑不被污染和損耗的同時(shí)，還應(yīng)保證滅菌劑穿透 并能與生物指示劑充分接觸。載體和包裝應(yīng)設(shè)計(jì)原則是便于貯存、運(yùn)輸、取樣、轉(zhuǎn)移接種。 有些生物指示劑可直接將抱子接種至液體滅菌物或具有與其相似的物理和化學(xué)特性的替 代品中。使用替代品時(shí)，應(yīng)用數(shù)據(jù)證明二者的等效性。1. 2.生物指示劑的應(yīng)用在滅菌程序的驗(yàn)證中，盡管可通過(guò)滅菌過(guò)程某些參數(shù)的監(jiān)控來(lái)評(píng)估滅菌效果，但生物指示 劑的

20、被殺滅程度，則是評(píng)價(jià)一個(gè)滅菌程序有效性最直觀的指標(biāo)?？墒褂檬惺鄣臉?biāo)準(zhǔn)生物指 示劑，也可使用由日常生產(chǎn)污染菌監(jiān)控中分離的最耐受微生物制備的抱子。在生物指示劑 驗(yàn)證試驗(yàn)中，需確定抱子在實(shí)際滅菌條件下的耐受性，并測(cè)定抱子的純度和數(shù)量。驗(yàn)證時(shí)， 生物指示劑的微生物用量應(yīng)比日常檢出的微生物污染量大，耐受性強(qiáng)，以保證滅菌程序有 更大的安全性。在最終滅菌法中，生物指示劑應(yīng)放在滅菌柜的不同部位。并避免指示劑直 接接觸到被滅菌物品。生物指示劑按設(shè)定的條件滅菌后取出，分別置培養(yǎng)基中培養(yǎng)，確定 生物指示劑中的抱子是否被完全殺滅。過(guò)度殺滅產(chǎn)品滅菌驗(yàn)證一般不考慮微生物污染水平，可采用市售的生物指示劑。對(duì)滅菌 手段耐受性

21、差的產(chǎn)品，設(shè)計(jì)滅菌程序時(shí)，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)預(yù)計(jì)在該生產(chǎn)工藝中產(chǎn)品微生物污染的 水平，選擇生物指示劑的菌種和抱子數(shù)量。這類(lèi)產(chǎn)品的無(wú)菌保證應(yīng)通過(guò)監(jiān)控每批滅菌前的 微生物污染的數(shù)量、耐受性和滅菌程序驗(yàn)證所獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行評(píng)估4.常用生物指示劑(1)濕熱滅菌法：濕熱滅菌法最常用的生物指示劑為嗜熱脂肪芽抱桿菌抱子(Spores ofB acillus stearothermophilus,如 NCTC 10 007、NCIMB 8157、ATCC 7953)。D 值為 1.5 3.0min,每片(或每瓶)活抱子數(shù)5x1055x106個(gè)，在121、19min下應(yīng)被完全殺滅。 此外，還可使用生抱梭菌抱子(Spores

22、 of Clostridium sporogenes 如 NCTC 8594、NCIMB 8053、ATCC 7955), D 值為 0.40.8min。(2)干熱滅菌法：干熱滅菌法最常用的生物指示劑為枯草芽抱桿菌抱子(Spores of Bacill us subtilis，如 NCIMB 8058、ATCC 9372)。D 值大于 1.5min,每片活抱子數(shù) 5x1055x 106個(gè)。去熱原驗(yàn)證時(shí)使用大腸桿菌內(nèi)毒素(Escherichia coli endoxin),加量不小于100 0細(xì)菌內(nèi)毒素單位。輻射滅菌法：輻射滅菌法最常用的生物指示劑為短小芽抱桿菌抱子(Spores of Baci

23、llus pumilus,如 NCTC 10 327、NCIMB 10 692、ATCC 27 142)。每片活抱子數(shù) 107108,置于放射劑量25kGy條件下，D值約3kGy。但應(yīng)注意滅菌產(chǎn)品中所負(fù)載的微生物可能比 短小芽抱桿菌抱子顯示更強(qiáng)的抗輻射力。因此短小芽抱桿菌抱子可用于監(jiān)控滅菌過(guò)程，但 不能用于滅菌輻射劑量的建立。(4)氣體滅菌法：環(huán)氧乙烷滅菌最常用的生物指示劑為枯草芽抱桿菌抱子(Spores of Bacil lussubtilis，如NCTC 10 073、ATCC 9372)。氣態(tài)過(guò)氧化氫滅菌最常用的生物指示劑為嗜熱 脂肪芽抱桿菌抱子(Spores of Bacillus s

24、tearothermophilus,如 NCTC 10 007、NCIMB 81 57、ATCC 7953)。每片活抱子數(shù)1x1065x106個(gè)。環(huán)氧乙烷滅菌中，枯草芽抱桿菌抱子 D值大于2.5min,在環(huán)氧乙烷濃度為600mg/L,相對(duì)濕度為60%,溫度為54下滅菌，6 0min應(yīng)被殺滅。過(guò)濾除菌法：過(guò)濾除菌法最常用的生物指示劑為缺陷假單胞菌(Pseudomonas diminuta, 如ATCC19 146),用于濾膜孔徑為0.22pm的濾器；黏質(zhì)沙雷菌(Serratin marcescens)(ATCC 14 756),用于濾膜孔徑為0.45pm的濾器。有效期。載體和包裝材料在保護(hù)生物指

25、示劑不被污染和損耗的同時(shí)，還應(yīng)保證滅菌劑穿透 并能與生物指示劑充分接觸。載體和包裝應(yīng)設(shè)計(jì)原則是便于貯存、運(yùn)輸、取樣、轉(zhuǎn)移接種。 有些生物指示劑可直接將抱子接種至液體滅菌物或具有與其相似的物理和化學(xué)特性的替 代品中。使用替代品時(shí)，應(yīng)用數(shù)據(jù)證明二者的等效性。1. 2.生物指示劑的應(yīng)用在滅菌程序的驗(yàn)證中，盡管可通過(guò)滅菌過(guò)程某些參數(shù)的監(jiān)控來(lái)評(píng)估滅菌效果，但生物指示 劑的被殺滅程度，則是評(píng)價(jià)一個(gè)滅菌程序有效性最直觀的指標(biāo)?？墒褂檬惺鄣臉?biāo)準(zhǔn)生物指 示劑，也可使用由日常生產(chǎn)污染菌監(jiān)控中分離的最耐受微生物制備的抱子。在生物指示劑 驗(yàn)證試驗(yàn)中，需確定抱子在實(shí)際滅菌條件下的耐受性，并測(cè)定抱子的純度和數(shù)量。驗(yàn)證時(shí)，

26、 生物指示劑的微生物用量應(yīng)比日常檢出的微生物污染量大，耐受性強(qiáng)，以保證滅菌程序有 更大的安全性。在最終滅菌法中，生物指示劑應(yīng)放在滅菌柜的不同部位。并避免指示劑直 接接觸到被滅菌物品。生物指示劑按設(shè)定的條件滅菌后取出，分別置培養(yǎng)基中培養(yǎng)，確定 生物指示劑中的抱子是否被完全殺滅。過(guò)度殺滅產(chǎn)品滅菌驗(yàn)證一般不考慮微生物污染水平，可采用市售的生物指示劑。對(duì)滅菌 手段耐受性差的產(chǎn)品，設(shè)計(jì)滅菌程序時(shí)，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)預(yù)計(jì)在該生產(chǎn)工藝中產(chǎn)品微生物污染的 水平，選擇生物指示劑的菌種和抱子數(shù)量。這類(lèi)產(chǎn)品的無(wú)菌保證應(yīng)通過(guò)監(jiān)控每批滅菌前的 微生物污染的數(shù)量、耐受性和滅菌程序驗(yàn)證所獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行評(píng)估。4.常用生物指示劑(1)濕熱滅菌法：濕熱滅菌法最常用的生物指示劑為嗜熱脂肪芽抱桿菌抱子(Spores ofB acillus stearothermophilus,如 NCTC 10 007、NCIMB 8157、ATCC 7953)。D 值為 1.5 3.0min,每片(或每瓶)活抱子數(shù)5X1055X106個(gè)，在121、19min下應(yīng)被完全殺滅。 此外，還可使用生抱梭菌抱子(Spores of Clostridium s