第四章`食用菌菌種生產(chǎn) 第一節(jié)`菌種生產(chǎn)流程和設(shè)備

1、一、生產(chǎn)流程一、生產(chǎn)流程 種菇（種木）選擇種菇（種木）選擇 種菇（種木）處理，孢子種菇（種木）處理，孢子收集收集 斜面培養(yǎng)基制備斜面培養(yǎng)基制備 分離培養(yǎng)分離培養(yǎng) 母種培養(yǎng)母種培養(yǎng) 原種培養(yǎng)基制備原種培養(yǎng)基制備 原種培養(yǎng)原種培養(yǎng) 栽培種培養(yǎng)基制備栽培種培養(yǎng)基制備 栽培種培養(yǎng)栽培種培養(yǎng)1 接種設(shè)備：接種設(shè)備：o 用于分離和擴(kuò)大各級菌種的專業(yè)設(shè)備用于分離和擴(kuò)大各級菌種的專業(yè)設(shè)備o 包括接種室、接種箱、超凈工作臺、包括接種室、接種箱、超凈工作臺、 接種工接種工具具要求：內(nèi)外兩間，面積適宜，容易搞清潔，能要求：內(nèi)外兩間，面積適宜，容易搞清潔，能進(jìn)行滅菌進(jìn)行滅菌內(nèi)間為接種工作間：內(nèi)間為接種工作間：56平方

2、米，門窗緊密，盡平方米，門窗緊密，盡量減少灰塵積累，內(nèi)置工作臺量減少灰塵積累，內(nèi)置工作臺外間為緩沖間：外間為緩沖間：23平方米，用于進(jìn)接種間前換平方米，用于進(jìn)接種間前換衣、帽、鞋，同時為內(nèi)間提供與外界相隔環(huán)境衣、帽、鞋，同時為內(nèi)間提供與外界相隔環(huán)境內(nèi)外間均為拉門，位置相互錯開內(nèi)外間均為拉門，位置相互錯開體積應(yīng)盡量小，利于徹底滅菌體積應(yīng)盡量小，利于徹底滅菌裝過濾空氣的通風(fēng)設(shè)施裝過濾空氣的通風(fēng)設(shè)施內(nèi)外間墻、地板、天花板、室內(nèi)用具應(yīng)盡量光內(nèi)外間墻、地板、天花板、室內(nèi)用具應(yīng)盡量光滑易擦洗滑易擦洗縮小的接種室縮小的接種室雙人、單人操作型雙人、單人操作型易消毒、規(guī)模受限制易消毒、規(guī)模受限制局部凈化設(shè)備局部

3、凈化設(shè)備o 空氣過濾除菌空氣過濾除菌無論接種箱還是凈化工作臺，均應(yīng)放在較干凈、無論接種箱還是凈化工作臺，均應(yīng)放在較干凈、空氣中塵埃少的環(huán)境中，最好置于接種室內(nèi)空氣中塵埃少的環(huán)境中，最好置于接種室內(nèi)接種針接種針接種環(huán)接種環(huán)接種刀接種刀接種鏟接種鏟鑷子鑷子接種器等接種器等放置接種后各級菌種，并提供適宜溫度和通氣放置接種后各級菌種，并提供適宜溫度和通氣條件，使菌絲生長良好的專用設(shè)備條件，使菌絲生長良好的專用設(shè)備培養(yǎng)架：以操作方便為宜培養(yǎng)架：以操作方便為宜,寬寬0.71.2米，層間米，層間40cm調(diào)溫：電爐、紅外線、暖氣管、門窗、抽風(fēng)機(jī)調(diào)溫：電爐、紅外線、暖氣管、門窗、抽風(fēng)機(jī)測溫：干濕球溫度計(jì)測溫：干

4、濕球溫度計(jì) 照明：避免使用藍(lán)光照明：避免使用藍(lán)光 滅菌：紫外燈滅菌：紫外燈根據(jù)需要使溫度恒定在一定范圍內(nèi)根據(jù)需要使溫度恒定在一定范圍內(nèi),一般用于培一般用于培養(yǎng)斜面試管和少部分原種養(yǎng)斜面試管和少部分原種木材切片機(jī)木材切片機(jī)木片粉碎機(jī)木片粉碎機(jī)攪拌機(jī)攪拌機(jī)裝瓶裝袋機(jī)裝瓶裝袋機(jī)滅菌：將環(huán)境中的所有微生物殺死。滅菌：將環(huán)境中的所有微生物殺死。o 一般采用熱力滅菌設(shè)備一般采用熱力滅菌設(shè)備干熱滅菌設(shè)備干熱滅菌設(shè)備o 原理原理:利用干燥熱空氣進(jìn)行滅菌利用干燥熱空氣進(jìn)行滅菌灼燒滅菌：酒精燈灼燒滅菌：酒精燈電熱恒溫干燥箱：電熱恒溫干燥箱：160 12小時小時o 適宜玻璃器皿、金屬用具滅菌適宜玻璃器皿、金屬用具滅

5、菌利用潮濕熱空氣進(jìn)行滅菌利用潮濕熱空氣進(jìn)行滅菌高壓滅菌高壓滅菌o 手提式高壓滅菌鍋：手提式高壓滅菌鍋： 9瓶瓶o 立式高壓滅菌鍋：立式高壓滅菌鍋： 45瓶瓶o 臥室園形高壓滅菌鍋臥室園形高壓滅菌鍋 270瓶瓶o 臥式方形高壓滅菌鍋（消毒柜）臥式方形高壓滅菌鍋（消毒柜）500瓶瓶 121 20-60分鐘分鐘常壓滅菌：常壓滅菌：o 磚石磚石o 油桶油桶 o 蒸籠等蒸籠等 105 68小時小時容器容器o 750ml 無色、淺色菌種瓶無色、淺色菌種瓶o 聚丙烯菌種袋聚丙烯菌種袋消毒藥品消毒藥品o 甲醛甲醛o 75%灑精灑精o 高錳酸鉀高錳酸鉀o 漂白粉、來蘇兒漂白粉、來蘇兒交通方便、水電充足交通方便、

6、水電充足地勢干燥、環(huán)境干凈地勢干燥、環(huán)境干凈空氣清新、空氣清新、30米內(nèi)沒有畜禽圈舍、飼料倉庫、米內(nèi)沒有畜禽圈舍、飼料倉庫、排廢工廠排廢工廠有堆放、攤曬原料地有堆放、攤曬原料地帶開關(guān)插座帶開關(guān)插座帶開關(guān)插座紫外光管紫外光管紫外光管照明光管照明光管照明光管照明光管照明光管照明光管帶開關(guān)插座帶開關(guān)插座空調(diào)及抽氣機(jī)帶開關(guān)插座空調(diào)獨(dú)立電源路燈照明光管照明光管照明光管照明光管紫外光管紫外光管帶開關(guān)插座路燈開關(guān)一、母種培養(yǎng)基配制一、母種培養(yǎng)基配制1 配制原則配制原則o 營養(yǎng)成分含量與比例適合食用菌生長發(fā)育營養(yǎng)成分含量與比例適合食用菌生長發(fā)育o pH、EV適宜適宜o 有一定有一定pH緩沖能力緩沖能力PDA（

7、馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基）（馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基） 適合各種食用菌適合各種食用菌馬鈴薯馬鈴薯 200gG 20g瓊脂瓊脂(Agar) 20g 水水 1000mlpH自然自然適宜保藏菌種適宜保藏菌種MgSO4 0.5g K2HPO4 1g G 0.46g 蛋白胨蛋白胨 20gAgar 15g 水水 1000ml特別適合草菇菌絲生長特別適合草菇菌絲生長蘋果蘋果 100g（壓碎取汁）（壓碎取汁） 蔗糖蔗糖 20g瓊脂瓊脂 2g 水水 1000ml對平菇生長有利對平菇生長有利o 高梁粉高梁粉 30g o 瓊脂瓊脂 10go 水水 1000ml宜香菇、平菇、金針菇、木耳宜香菇、平菇、金針菇、木耳醬油醬油

8、 50ml洋蔥煎汁洋蔥煎汁 100ml (500g洋蔥洋蔥+水水500ml煮沸煮沸30分鐘后補(bǔ)足水分鐘后補(bǔ)足水) 取濾液取濾液瓊脂瓊脂 20g水水 850ml稱量稱量調(diào)配調(diào)配o 馬鈴薯、洋蔥、稻草等，水煮馬鈴薯、洋蔥、稻草等，水煮30分，雙層紗分，雙層紗布過濾布過濾o 淀粉、易溶物質(zhì)，加少量水，調(diào)成糊狀（避淀粉、易溶物質(zhì)，加少量水，調(diào)成糊狀（避免成團(tuán)）免成團(tuán)）o 難溶物質(zhì)，加水、加熱、攪拌難溶物質(zhì)，加水、加熱、攪拌o 按食用菌所需按食用菌所需o 試紙測定試紙測定o 用用IN NaOH or IN HcL預(yù)濕預(yù)濕加入培養(yǎng)基加入培養(yǎng)基加熱攪溶加熱攪溶雙層紗布過濾雙層紗布過濾1/5試管（試管（5ml

9、）嚴(yán)禁沾試管口、上壁嚴(yán)禁沾試管口、上壁棉塞過濾空氣、防污染棉塞過濾空氣、防污染松緊適宜松緊適宜內(nèi)內(nèi)2/3 外外1/3牛皮紙包扎牛皮紙包扎高壓蒸汽滅菌鍋進(jìn)行高壓蒸汽滅菌鍋進(jìn)行0.05mPa 放汽閥打開放汽閥打開 0 00.05Pma 放汽閥打開放汽閥打開 00.15mPa 維持維持1520分分 0介紹組織分離法介紹組織分離法種菇選擇：種菇選擇：o 個體健壯個體健壯o 菇形典形美觀菇形典形美觀o 無病蟲害無病蟲害o 適度成熟適度成熟o 種菇處理：種菇處理：75%酒精擦表面（草菇）酒精擦表面（草菇）菌柄與菌蓋交界處取組織塊菌柄與菌蓋交界處取組織塊木耳經(jīng)無菌水沖洗，切成小塊放入培養(yǎng)基木耳經(jīng)無菌水沖洗，

10、切成小塊放入培養(yǎng)基純化培養(yǎng)純化培養(yǎng)o 將菌絲塊移入將菌絲塊移入PDA平板培養(yǎng)平板培養(yǎng)o若純：四周輻射狀生長，外緣整齊一致若純：四周輻射狀生長，外緣整齊一致o否則：邊緣參差不齊，色素分布不均勻否則：邊緣參差不齊，色素分布不均勻o將較一致的菌絲的前端，切割將較一致的菌絲的前端，切割新培養(yǎng)皿新培養(yǎng)皿大部分大部分2528草菇草菇 30一、配方與制配一、配方與制配1 木屑、竹屑培養(yǎng)基木屑、竹屑培養(yǎng)基木屑（闊葉樹）木屑（闊葉樹） 78% 麩皮或米糠麩皮或米糠 20% 蔗糖蔗糖 1% 石膏粉石膏粉 1%木生類菌：香菇、平菇、木耳、金針、猴頭、木生類菌：香菇、平菇、木耳、金針、猴頭、靈芝靈芝稱料稱料糖溶于水中

11、糖溶于水中混料混料加入糖水加入糖水6065%pH配方配方棉籽殼棉籽殼 78%麩皮麩皮 20%蔗糖蔗糖 1%石膏粉石膏粉 1%金針、平菇、風(fēng)尾菇、草菇、銀耳、木耳、猴金針、平菇、風(fēng)尾菇、草菇、銀耳、木耳、猴頭頭甘蔗渣甘蔗渣 75%麩皮或米糠麩皮或米糠 24%石膏粉石膏粉 1%平菇、風(fēng)尾菇、金針、毛木耳平菇、風(fēng)尾菇、金針、毛木耳稱料稱料棉籽殼或甘蔗渣堆棉籽殼或甘蔗渣堆1224小時（均勻吸水）小時（均勻吸水）輔料輔料6065% pH以小麥、高梁、玉米等為主料制作的培養(yǎng)為谷以小麥、高梁、玉米等為主料制作的培養(yǎng)為谷粒培養(yǎng)基粒培養(yǎng)基小麥小麥 98%碳酸鈣碳酸鈣 2%銀耳外、其它木生型、糞草型均適合銀耳外、

12、其它木生型、糞草型均適合稻谷稻谷 50%棉籽殼棉籽殼 40%麩皮麩皮 8%石膏粉石膏粉 2%平菇、風(fēng)尾菇平菇、風(fēng)尾菇麥粒：麥粒：o 清水或清水或0.1%多菌靈水浸泡多菌靈水浸泡1624小時，撈起，小時，撈起，攤開，底部無積水時，加輔料，調(diào)勻即可。攤開，底部無積水時，加輔料，調(diào)勻即可。稻谷：稻谷：o 冷水浸冷水浸23小時，煮開小時，煮開2030分，待大部分稍分，待大部分稍開裂，即可起鍋。瀝干拌料。開裂，即可起鍋。瀝干拌料。以畜糞和稻草為主料的培養(yǎng)基以畜糞和稻草為主料的培養(yǎng)基干稻草干稻草 63% 干牛糞干牛糞 25% 玉米粉玉米粉 4% 過磷酸鈣過磷酸鈣 3% 大豆粉大豆粉 3% 硫酸鎂硫酸鎂 2

13、%蘑菇、草菇蘑菇、草菇稻草切成稻草切成3cm長，浸透撈起，瀝干至不滴水長，浸透撈起，瀝干至不滴水混合混合堆制堆制20天，中間翻天，中間翻34次次以闊葉樹毛竹為主料配以輔料制成的培養(yǎng)基以闊葉樹毛竹為主料配以輔料制成的培養(yǎng)基.配方配方枝條枝條 1000go 麩皮或米糠麩皮或米糠 250go 石膏粉石膏粉 10go 營養(yǎng)液營養(yǎng)液 (蔗糖蔗糖1%，磷酸二氫鉀，磷酸二氫鉀0.1%，硫酸鎂，硫酸鎂0.1%）毛竹或枝條，截成毛竹或枝條，截成1012cm長，長，34mm寬，一寬，一頭削尖，曬干頭削尖，曬干浸入浸入0.1%多菌靈或多菌靈或0.1%高錳酸鉀液泡高錳酸鉀液泡30分鐘分鐘4050營養(yǎng)液中泡營養(yǎng)液中泡1

14、小時小時撈出瀝干撈出瀝干裝瓶（尖頭朝下，裝瓶（尖頭朝下，200支支/750ml瓶）瓶）上蓋上蓋1.5cm厚木屑培養(yǎng)基厚木屑培養(yǎng)基要求松緊適宜，瓶至頸，袋要求松緊適宜，瓶至頸，袋40%，洗凈瓶口、打園洞洗凈瓶口、打園洞,塞棉塞塞棉塞,滅菌滅菌無菌條件：每立方米無菌條件：每立方米10ml甲醛甲醛+5g高錳酸鉀，高錳酸鉀，24小時后開紫外燈小時后開紫外燈30分分1支母種支母種 56瓶栽培種瓶栽培種1瓶原種瓶原種 5080瓶栽培種瓶栽培種平菇平菇25 25-35 25-35天天 草菇草菇32 1 1周周3-53-5天內(nèi)直立放置天內(nèi)直立放置,然后然后倒臥疊放，適時轉(zhuǎn)動倒臥疊放，適時轉(zhuǎn)動（水分，菌絲生長均

15、勻）（水分，菌絲生長均勻）定期檢查，剔污定期檢查，剔污3 3個月內(nèi)必須使用個月內(nèi)必須使用最多不能超過半年最多不能超過半年1 1、母種質(zhì)量鑒定：、母種質(zhì)量鑒定：形態(tài)鑒定：形態(tài)鑒定：合適培養(yǎng)基，適宜溫度培養(yǎng)合適培養(yǎng)基，適宜溫度培養(yǎng), ,菌絲生長快，整齊，菌絲生長快，整齊，濃而健壯濃而健壯菌絲爬料快，滿袋快菌絲爬料快，滿袋快出菇時間適合周期出菇時間適合周期出菇多而整齊出菇多而整齊菇形美觀菇形美觀外觀要求外觀要求菌絲已長滿培養(yǎng)基，草菇有少量或沒有紅褐色菌絲已長滿培養(yǎng)基，草菇有少量或沒有紅褐色厚垣孢子，銀耳菌種在培養(yǎng)表面出現(xiàn)子實(shí)體或厚垣孢子，銀耳菌種在培養(yǎng)表面出現(xiàn)子實(shí)體或子實(shí)體原基子實(shí)體原基菌絲生長健壯

16、，絨狀菌絲多，分布均勻，色澤菌絲生長健壯，絨狀菌絲多，分布均勻，色澤符合，該菌類菌絲的色澤符合，該菌類菌絲的色澤無雜菌污染、無雜色出現(xiàn)無雜菌污染、無雜色出現(xiàn)母種轉(zhuǎn)管母種轉(zhuǎn)管45次內(nèi)。次內(nèi)。常溫下，常溫下，3個月內(nèi)有效。個月內(nèi)有效。（滿瓶后存放時間）草菇、風(fēng)尾菇最好（滿瓶后存放時間）草菇、風(fēng)尾菇最好1個月內(nèi)個月內(nèi)使用。使用。依不同食用菌依不同食用菌重量要求重量要求400克克/瓶瓶 斜面低溫保藏：斜面低溫保藏：o 4左右左右 6個月轉(zhuǎn)管個月轉(zhuǎn)管草菇：草菇：5死亡，死亡，1012保存保存o 用牛皮紙包扎試管口，再用黑紙密封試管用牛皮紙包扎試管口，再用黑紙密封試管o 干凈、陰涼的環(huán)境中保存，干凈、陰涼

17、的環(huán)境中保存，10-12 C為宜，為宜，3-4月轉(zhuǎn)管一次月轉(zhuǎn)管一次o 溫度不能低于溫度不能低于5 C，培養(yǎng)基中瓊脂用量可適，培養(yǎng)基中瓊脂用量可適當(dāng)加大，以增加保存期當(dāng)加大，以增加保存期把液體石蠟裝入三角瓶內(nèi)，塞上棉塞，高壓蒸把液體石蠟裝入三角瓶內(nèi)，塞上棉塞，高壓蒸汽滅菌汽滅菌1小時，放入小時，放入30 C左右的溫箱內(nèi)培養(yǎng)左右的溫箱內(nèi)培養(yǎng)24小小時，再滅菌時，再滅菌1小時，放入小時，放入40 C環(huán)境中，使水份蒸環(huán)境中，使水份蒸發(fā)，至石蠟透明發(fā)，至石蠟透明倒入斜面菌種試管內(nèi)，淹過斜面倒入斜面菌種試管內(nèi)，淹過斜面1cm然后直立于試管架上放在常溫條件下保藏，然后直立于試管架上放在常溫條件下保藏，1-2

18、年轉(zhuǎn)管一次。年轉(zhuǎn)管一次。倒去液體石蠟，用無菌水沖洗斜面倒去液體石蠟，用無菌水沖洗斜面2-3次，挑取次，挑取少許菌絲接入斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)，至菌絲長滿少許菌絲接入斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)，至菌絲長滿斜面即可用于生產(chǎn)。斜面即可用于生產(chǎn)。不倒去石蠟，直接用接種針從斜面上挑取少量不倒去石蠟，直接用接種針從斜面上挑取少量菌絲接入斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)，菌種仍可繼續(xù)保菌絲接入斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)，菌種仍可繼續(xù)保藏。藏。麥粒泡麥粒泡812小時，稍瀝干，裝入大試管小時，稍瀝干，裝入大試管塞好棉塞，滅菌塞好棉塞，滅菌1小時小時-2837置置24小時小時-滅菌滅菌1小時小時接種接種長滿后于干燥器干燥長滿后于干燥器干燥1個月個月4或涼爽、干燥、干凈處，或涼爽、干燥、干凈處，1年以上年以上使用時，在每支斜面培養(yǎng)基上接入一粒麥粒，使用時，在每支斜面培養(yǎng)基上接入一粒麥粒，培養(yǎng)至菌絲長滿斜面即可培養(yǎng)至菌絲長滿斜面即可1 衰退衰退優(yōu)良性狀退化，典型癥狀變異，質(zhì)量負(fù)變優(yōu)良性狀退化，典型癥狀變異，質(zhì)量負(fù)變 預(yù)防衰退措施預(yù)防衰退措施o 控制菌種傳代次數(shù)控制菌種傳代次數(shù)o 采用有效的菌種保藏方法采用有效的菌種保藏方法o 創(chuàng)造菌