細(xì)胞活體染色技術(shù)

1、1細(xì)胞活體染色技術(shù)實(shí)驗(yàn)七實(shí)驗(yàn)七生物工程周新宇2實(shí)驗(yàn)?zāi)康腨學(xué)習(xí)細(xì)胞活體染色的方法。Y觀察動(dòng)、植物活細(xì)胞內(nèi)線粒體，液泡系的形態(tài)、數(shù)量與分布。3實(shí)驗(yàn)原理 活體染色是利用某些無毒或毒活體染色是利用某些無毒或毒性較小的染色劑，在不影響細(xì)胞生性較小的染色劑，在不影響細(xì)胞生命活動(dòng)的情況下顯示細(xì)胞的天然構(gòu)命活動(dòng)的情況下顯示細(xì)胞的天然構(gòu)造，更具真實(shí)性?；钚匀旧址譃樵?，更具真實(shí)性。活性染色又分為體內(nèi)活體染色和體外活體染色。體內(nèi)活體染色和體外活體染色。 4Y活體染色分為體內(nèi)活染和活體染色分為體內(nèi)活染和體外活染兩種。前者是將體外活染兩種。前者是將染料注射于生物體內(nèi)，染染料注射于生物體內(nèi)，染色后再取材觀察。后者是色后

2、再取材觀察。后者是取材后，對(duì)離體的活細(xì)胞取材后，對(duì)離體的活細(xì)胞進(jìn)行染色。為保持離體細(xì)進(jìn)行染色。為保持離體細(xì)胞的正常存活，染色時(shí)需胞的正常存活，染色時(shí)需供給細(xì)胞以正常的溫度，供給細(xì)胞以正常的溫度，滲透壓，滲透壓，PHPH等。等。 活體染色5較為常見的活體染色劑Y詹納斯綠B(Janus green B)Y中性紅Y臺(tái)盼藍(lán)(trypan blue)6詹納斯綠B(Janus green B)Y 能夠染能夠染活活線粒體為藍(lán)色，主要是由線粒體為藍(lán)色，主要是由于線粒體內(nèi)膜上的細(xì)胞色素酶系使染于線粒體內(nèi)膜上的細(xì)胞色素酶系使染料始終保持在氧化狀態(tài)料始終保持在氧化狀態(tài)( (即有色狀態(tài)即有色狀態(tài)) )，在周圍的細(xì)胞質(zhì)

3、內(nèi)，這些染料被還原在周圍的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，這些染料被還原為無色的色基為無色的色基( (即無色狀態(tài)即無色狀態(tài)) )。 一定要注意一定要注意，只有具有，只有具有活性的活性的細(xì)細(xì)胞色素胞色素C C氧化酶才能夠把詹納斯綠氧化酶才能夠把詹納斯綠B B氧氧化，從而使它顯出顏色化，從而使它顯出顏色7中性紅Y 中性紅是中性紅是液泡系液泡系的特殊的特殊活體活體染染色劑，它可將不同發(fā)育時(shí)期的液色劑，它可將不同發(fā)育時(shí)期的液泡染成不同深度的泡染成不同深度的紅色紅色，在細(xì)胞，在細(xì)胞處于生活狀態(tài)下細(xì)胞質(zhì)和核不被處于生活狀態(tài)下細(xì)胞質(zhì)和核不被染色，該染料對(duì)液泡系具有一定染色，該染料對(duì)液泡系具有一定專一性專一性。8臺(tái)盼藍(lán)(trypa

4、n blue)Y 臺(tái)盼藍(lán)臺(tái)盼藍(lán)(trypan blue)是一種是一種偶氮類酸性染料，它可以通過偶氮類酸性染料，它可以通過死亡細(xì)胞的質(zhì)膜而使細(xì)胞著色，死亡細(xì)胞的質(zhì)膜而使細(xì)胞著色，但不能通過活細(xì)胞的質(zhì)膜，故但不能通過活細(xì)胞的質(zhì)膜，故可用臺(tái)盼藍(lán)鑒別活細(xì)胞與死細(xì)可用臺(tái)盼藍(lán)鑒別活細(xì)胞與死細(xì)胞。胞。 9實(shí)驗(yàn)用品l材料：黃豆根尖、洋蔥、小鼠。材料：黃豆根尖、洋蔥、小鼠。l器械：顯微鏡、鑷子、刀片、器械：顯微鏡、鑷子、刀片、剪刀、解剪刀、解剖針、剖針、 表面皿、載玻片、蓋玻片、吸管、表面皿、載玻片、蓋玻片、吸管、收水紙等。收水紙等。l試劑：試劑：RingerRinger氏液氏液 1 130003000中性紅溶

5、液中性紅溶液 1 150005000詹納斯綠詹納斯綠B B 臺(tái)盼藍(lán)染色液臺(tái)盼藍(lán)染色液 香柏油、二甲苯、蒸餾水等香柏油、二甲苯、蒸餾水等10實(shí)驗(yàn)方法1. 1. 液泡系的中性紅活體染色液泡系的中性紅活體染色11液泡系的中性紅染色點(diǎn)經(jīng)觀察12撕取洋蔥鱗莖內(nèi)表皮一小塊撕取洋蔥鱗莖內(nèi)表皮一小塊于載玻片上的于載玻片上的1/5000 Janus 1/5000 Janus green Bgreen B染色染色30min30min吸去染液，滴一滴吸去染液，滴一滴RingerRinger液液蓋上蓋玻片進(jìn)行鏡檢蓋上蓋玻片進(jìn)行鏡檢 .線粒體的活體染色 用植物細(xì)胞觀察線粒體的活體染色13 取鼠肝邊緣較薄的肝組織一小塊，

6、取鼠肝邊緣較薄的肝組織一小塊， 放入盛有放入盛有RingerRinger氏液的表面皿中洗氏液的表面皿中洗去血液。將肝組織洗凈后吸去血液，去血液。將肝組織洗凈后吸去血液，加入加入1 150005000詹納斯綠詹納斯綠B B染液染色染液染色3030分鐘，注意不可將組織塊完全淹沒。分鐘，注意不可將組織塊完全淹沒。染色后撕開組織塊，這樣溶液中就染色后撕開組織塊，這樣溶液中就會(huì)有一些細(xì)胞或細(xì)胞群。用吸管吸會(huì)有一些細(xì)胞或細(xì)胞群。用吸管吸取溶液，放在載玻片的取溶液，放在載玻片的RingerRinger氏液氏液中。中。墊兩根短頭發(fā)墊兩根短頭發(fā)，加蓋玻片，即，加蓋玻片，即可鏡檢。用可鏡檢。用油鏡觀察油鏡觀察活染

7、色的線?；钊旧木€粒體標(biāo)本，要不斷地來回轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)調(diào)焦體標(biāo)本，要不斷地來回轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)調(diào)焦螺旋，使蓋玻片上下慢慢移動(dòng)。使螺旋，使蓋玻片上下慢慢移動(dòng)。使材料總是得到氧氣，線粒體的染色材料總是得到氧氣，線粒體的染色才顯得非常清楚。才顯得非常清楚。 用動(dòng)物細(xì)胞觀察線粒體的活體染色用動(dòng)物細(xì)胞觀察線粒體的活體染色14 3.人口腔粘膜上皮細(xì)胞線粒體的超活染色觀察清潔載玻片放在清潔載玻片放在3737恒溫水浴鍋的恒溫水浴鍋的金屬板上金屬板上滴滴2 2滴滴1/5000 Janus green B1/5000 Janus green B染液染液用牙簽口腔頰粘膜處稍用力刮取上用牙簽口腔頰粘膜處稍用力刮取上皮細(xì)胞皮細(xì)胞刮下的粘液狀物放大載玻片的染液刮下的粘液狀物放大載玻片的染液滴中滴中染色染色10l5min(10l5min(注意不可使染液干注意不可使染液干燥，必要時(shí)可再加滴染液燥，必要時(shí)可再加滴染液) )蓋上蓋玻片蓋上蓋玻片, ,顯微鏡下觀察顯微鏡下觀察口腔黏膜上皮細(xì)胞及線粒體 15人口腔上皮細(xì)胞的線粒體分布在實(shí)驗(yàn)過程中在實(shí)驗(yàn)過程中務(wù)必保持所取的務(wù)必保持所取的材料的活性。通材料的活性。通常，需要把生物常，需要把生物材料置于材料置于的冰水浴低的冰水浴低溫