超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法快速測(cè)定生物樣品中莽草毒素

1、G3論文發(fā)表專家一0J國(guó)學(xué)朮發(fā)叢網(wǎng)超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法快速測(cè)定生物樣品中莽草摘要建立了超高效液相色譜三重四極桿質(zhì)譜法檢測(cè)血漿、尿液、嘔吐物和藥材中八角屬植物有毒倍半萜內(nèi)酯標(biāo)志物莽草毒素的檢測(cè)方法。血漿樣品經(jīng)多重機(jī)制雜質(zhì)吸附萃取凈化柱萃取，尿液樣品經(jīng)硅藻土柱吸附叔丁基甲醚萃取、植物樣品經(jīng)叔丁基甲醚液液萃取，以水和甲醇為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，在uplcbehc18林上實(shí)現(xiàn)分I；紜采用負(fù)肉fesims/msmrm方式檢測(cè)。一次進(jìn)樣分析時(shí)間為5min。血漿和尿液中的平均加標(biāo)回收率分別為92.6%100.3%和101%-118%相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為3.8%11呀口6.4%17%(n=6);定量限(s

2、/n=10)分別為2.0和1.0?symbolmag/l。本方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、靈敏，適合于莽草毒素中毒樣品的測(cè)定。關(guān)鍵詞超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜；莽草毒素；血漿；尿液；生物樣品1引言八角茴香為木蘭科植物八角茴香(illiciumverumhook.f.)的果實(shí)，有溫陽(yáng)，散寒，理氣等功效，用于治療寒疝腹痛、腎虛腰痛、脘腹冷痛等病癥，民間常用作烹飪調(diào)料。由于同屬植物果實(shí)的形態(tài)相似，八角茴香有許多偽品，如紅茴香、莽草、野八角等，有的具有毒性，誤用會(huì)引起中毒1,2*特別足H本莽E(論文發(fā)表專家illiciumanisatuml.）毒性較大。同屬多種植物中曾分離出莽草毒素（anisatin）、新莽草毒素（n

3、eoanisatin）和偽莽草毒素（pseudoanisatin）等倍半萜內(nèi)酯類成分3,4,并證實(shí)莽草毒素為丫姒棊酸受體卄寛爭(zhēng)性扌古抗劑5,6小鼠腹腔注射可引起驚厥、死亡，ld50為0.76mg/kg體重7飲兀八角茴否茶引起的中毒事件在歐美國(guó)家也時(shí)有報(bào)道8，為了控制八角茴香品質(zhì)和鑒別偽品，可采用熱解析氣質(zhì)聯(lián)用法測(cè)定揮發(fā)汕特征成分9.!采用熒光顯微鏡和掃描電鏡進(jìn)行顯微結(jié)構(gòu)鑒別10丨采用pcr技術(shù)分析核酸片段11!采用薄層層析法對(duì)植物中黃酮類和酸性成分進(jìn)行分析，結(jié)合液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定莽草毒素12:上述力法屮.僅lcms/ms方法可對(duì)引起中毒的主要成分莽草毒素進(jìn)行定量測(cè)定。本研究建立了upl

4、cms/ms快速測(cè)定生物樣品中莽草毒素的檢測(cè)方法，并應(yīng)用于實(shí)際樣品的測(cè)定，方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確和靈敏。2實(shí)驗(yàn)部分2.1儀器與試劑aquityuplcquattropremierxe超高效液相色譜串聯(lián)丿頁(yè)譜儀，配電噴霧源，masslynx4.1工作站（美國(guó)waters公司）;brukeravanee500mhz超導(dǎo)核磁共振儀（瑞士bruker公司）；mr32i大容量高速冷凍離心機(jī)（法國(guó)jouan公司）；ultraturraxt25型論文發(fā)表專家一m國(guó)學(xué)朮友叢網(wǎng)勻質(zhì)機(jī)（德國(guó)ikawerke公司）；205旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士burch公司）;2510超聲波清洗機(jī)（美國(guó)branson公司）；ms2旋渦混旋

5、器（德國(guó)ika公司）；nevap氮吹儀（12孔，美國(guó)organomation公司）；tdz5ws自動(dòng)平衡離心機(jī)（湘儀離心機(jī)儀器有限公司）；gradienta10millq超純水器（法國(guó)millipore公司）。乙腈和甲醇（hplc級(jí)，德國(guó)merck公司），叔丁基甲醚（hplc級(jí)，美國(guó)tedia公司）。cleanertmasb管（60mg/1ml）、cleanertmasa管（60mg/1ml）、cleanert蛋白沉淀管（1ml）和cleanertsle管（200mg/3ml）（人津陳納艾杰爾科技公“八角茴香，紅茴香（市售人2.2莽草毒素標(biāo)準(zhǔn)品制備150g紅茴香果實(shí)經(jīng)石油醚脫脂、甲醇提取，濃縮提取物除去甲醇，殘?jiān)苡谒?，再用乙酸乙酯萃取，萃取物?jīng)硅膠柱多次層析，氯仿川呻（97：3,v/v）洗脫，得無(wú)色針晶（30mg）,2.3色譜和質(zhì)譜條件acquityuplcbehc18