實驗一、網(wǎng)織紅細胞計數(shù)血沉測定 第二組

1、實驗三實驗三 網(wǎng)織紅細胞計數(shù)、血網(wǎng)織紅細胞計數(shù)、血沉測定及白細胞計數(shù)沉測定及白細胞計數(shù)組員：王芳軍,劉巧艷，趙素云，胡博*一、網(wǎng)織紅細胞計數(shù)*目的目的 掌握網(wǎng)織紅細胞（Ret)試管法計數(shù)的原理及操作方法。*原理原理 網(wǎng)織紅細胞胞質(zhì)內(nèi)殘存少量核蛋白體及核糖核酸等嗜堿性物質(zhì)，經(jīng)煌焦油藍或新亞甲藍等染液活體活體染色后，呈藍色網(wǎng)狀或點狀結(jié)構(gòu)藍色網(wǎng)狀或點狀結(jié)構(gòu)，可與成熟紅細胞相區(qū)別。*器材 顯微鏡、試管、吸管、玻片、推片、香柏油、擦鏡紙、擦鏡液*試劑 新亞甲藍*標本 新鮮全血*操作步驟*1.加染液加染液 將Ret染液2滴加至小試管中，做好標記。*2.2.加血加血 在已加入染液的小試管內(nèi)注入新鮮全血2滴，

2、立即混勻。*3.3.染色染色 室溫下染色10-15min。*4.4.涂片制備涂片制備 取染色血1小滴推制成薄血涂片，自然干燥*5.5.觀察觀察 低倍鏡下選擇紅細胞分布均勻、著色好、背景清晰的部位進行計數(shù)。*6.6.計數(shù)計數(shù) 常規(guī)法：在油鏡下計數(shù)至少1000個紅細胞中的網(wǎng)織紅細胞。*7.7.計算計算 Ret百分數(shù)=（1000個RBC中的Ret數(shù)/1000）100%*8.8.結(jié)果報告結(jié)果報告 網(wǎng)織紅細胞百分數(shù)：X.X%*血涂片制備推片載玻片血液將推片勻速向前，勿停頓。涂片的厚薄取決于速度和角度。一張滿意的血涂片應厚薄均勻 頭 體 尾 涂片干燥后用鉛筆鉛筆在血涂片的頭部寫上姓名和編號李四B 1 2

3、3*參考區(qū)間成人、兒童：成人、兒童：0.5%-1.5%新新 生生 兒：兒：2.0%-6.0%*注意事項*1.1.試劑準備試劑準備 推薦使用新亞甲藍染液，試劑應定期配制，用前過濾。*2.2.染色染色 染液與血液比以1:1為宜,染色時間不能過短。試劑用后及時蓋好蓋子，以免揮發(fā)。*3.3.標本標本 應及時染色，及時測定。*4.4.計數(shù)計數(shù) 選擇紅細胞分布均勻，網(wǎng)織紅細胞著色好的、背景清晰的部位計數(shù)。應兼顧血片邊緣和尾部。5.觀察 選擇紅細胞分布均勻，網(wǎng)織紅細胞著色好的部位計數(shù)，凡含有兩個以上網(wǎng)織顆粒的細胞均應計為網(wǎng)織紅細胞。由于網(wǎng)織紅細胞體積較大，故應兼顧血片邊緣和尾部。應注意網(wǎng)織紅細胞與HbH包涵

4、體的鑒別，前者為藍綠色網(wǎng)織狀或點粒狀結(jié)構(gòu)，分布不均，后者為藍綠色圓形小體，均勻散在于整個紅細胞內(nèi)，一般在溫育10-60分鐘后出現(xiàn)。6.結(jié)果評價 （1）95%可信限法：網(wǎng)織紅細胞的95%可信區(qū)間是R2sxp.Sxp為標準誤，R為網(wǎng)織紅細胞百分數(shù)，N為所數(shù)紅細胞數(shù)。正常網(wǎng)織紅細胞在整個紅細胞中所占比例很低，但其絕對值卻是很高的。通過計算確定網(wǎng)織紅細胞計數(shù)的95%可信區(qū)間為0.028-0.052。對標本再計數(shù)一次，若結(jié)果落入此范圍內(nèi)，說明兩次計數(shù)無顯著性差異，若否，則應進行第三次計數(shù)。（2）比值法 R1，R2分別為兩次計數(shù)結(jié)果，N為網(wǎng)織紅細胞數(shù)。R2時結(jié)果可靠目的 掌握魏氏法測定血沉的原理及方法。原

5、理 將一定量的枸櫞酸鈉抗凝全血置于魏氏血沉管中，直立于血沉架上，由于紅細胞比重大于血漿，克服血漿阻力而下沉，1h后讀取上層血漿高度的毫米數(shù)，即為紅細胞沉降率。器材 魏氏管、血沉架、洗耳球。（血沉管）試劑 109mmol/L枸櫞酸鈉溶液。標本 外周血。二、血液沉降率測定（魏氏法）二、血液沉降率測定（魏氏法）1.1.采血采血 采靜脈血1.6ml加入含0.4ml 109mmol/L枸櫞酸鈉溶液抗凝劑的采血管中（即采血量到采血管2ml刻度線處） ，混勻。2.2.吸血吸血 混勻血吸入血沉管內(nèi)至刻度“0”處，拭去管外殘余血。3.3.立血沉管立血沉管 將血沉管直立于血沉架上。4.4.讀數(shù)讀數(shù) 1h末準確讀取

6、紅細胞下沉后露出的血漿高度。5.5.報告方式報告方式 XX mm/h操作步驟操作步驟參考值參考值 50歲：男性歲：男性 15mm/h15mm/h 女性女性 20mm/h20mm/h 50歲：男性歲：男性 20mm/h20mm/h 女性女性 30mm/h30mm/h 85歲：男性歲：男性 30mm/h0mm/h 女性女性 42mm/h42mm/h 兒童兒童: 10mm/hmm/h二、血液沉降率測定（魏氏法）二、血液沉降率測定（魏氏法）注意事項注意事項* 1.嚴格控制采血量，使抗凝劑與血液比例為1：4。* 2.血沉管應垂直放置，不得傾斜。 * 3.測量時，血沉架應避免直接光照、移動和振動。* 4.本實驗最適宜溫度為1825，