生物化學(xué)試驗(yàn)常用緩沖液的配制方法

1、生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)常用緩沖液的配制方法1、0.2mol/L磷酸緩沖液*組份濃度0.2mol/L(pH6.0)*配制量1L*配置方法1.稱取磷酸氫二鈉.12水8.82g。2 .稱取磷酸二氫鈉.2水27.34g。3 .用去離子水溶解并定容至1L。室溫保存。注意：此為母液，使用時(shí)稀釋40倍使用。2、洗脫液*組份濃度0.15mol/L(含0.15mol/L氯化鈉的0.005mol/LpH6.0的磷酸緩沖液)*配制量10L*配置方法1.稱取氯化鈉87.66g。2 .用0.2mol/LpH6.0的磷酸緩沖液250mL溶解。3 .用去離子水稀釋至10L。室溫保存。3、0.3mol/L磷酸緩沖液*組份濃度0.3mo

2、l/L(pH7.8)*配制量0.5L*配置方法1.準(zhǔn)確稱取磷酸氫二鈉.12水49.150g。2.磷酸二氫鈉.2水2.000g。3.用去離子水溶解并定容至0.5L。室溫保存。注意：此為母液，使用時(shí)稀釋10倍使用。4、0.2mol/L*配置方法乙酸緩沖液*組份濃度0.2mol/L(pH4.6)*配制量2L1 .準(zhǔn)確稱取乙酸鈉.3水54.44g。2 .加入23mL冰乙酸，溶解。3 .用去離子水溶解并定容至2L。4 c保存。5、0.2mol/L配制量各1L*配置方法磷酸-檸檬酸緩沖液(1.母液A(0.2mol/LpH2.6、4.6、6.6)*組份濃度0.2mol/L的Na2HPO裕液)：稱取Na2HP

3、O4.12水143.256g,用去離子水定容至2L。2.用去離子水溶解定容至3.pH母液B(0.1mol/L2L。的檸檬酸溶液)：稱取檸檬酸.1水42.028gpH2.6、4.6、6.6的三種緩沖液如下表配制:4.66.64.值A(chǔ)(mD2.6109.0467.5727.5B(mD891.0532.5272.5按上表混勻后，4c保存。6、20XSSC*配置方法3.緩沖液*配制量1L(pH7.0)1 .準(zhǔn)確稱取175.2g氯化鈉。2 .準(zhǔn)確稱取88.2g檸檬酸鈉.2水。溶解于800mL去離子水中。4 .加入數(shù)滴10mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7.0。5 .加去離子水定容至1L。注意：按實(shí)驗(yàn)需

4、要可分裝后高壓滅菌。10XSSG5XSSG1XSSC可由20XSSC（故相應(yīng)稀釋得至上7、0.15mol/L氯化鈉-乙二胺四乙酸二鈉緩沖液（pH8.0）*組份濃度0.15mol/L*配制量1L*配置方法1.準(zhǔn)確稱取氯化鈉8.77g。2 .稱取乙二胺四乙酸二鈉37.2go3 .溶于800mL去離子水中。4 .用固體的氫氧化鈉調(diào)pH值為8.0。5 .加去離子水定容至1L。8、1/15mol/L的磷酸鹽緩沖液（pH7.6）*組份濃度0.15mol/L*配制量1L*配置方法1.溶液甲（1/15mol/L的KH2PO希液）：稱取KH2PO49.078g用去離子水溶解定容至1L。2 .溶液乙（1/15mo

5、l/L的Na2HPO裕液）：稱取Na2HPO4.2水11.876g（或磷酸氫二鈉.12水23.894g）用去離子水溶解定容至1L。3 .pH7.6磷酸鹽緩沖液：將和按1.4：8.6比例混合即可。9、5XTrisGlycineBuffer（SDSPAGE泳緩沖液）*組份濃度0.125MTris,1.25MGlycine,0.5%（w/v）SDS*配制量1L*配置方法1.稱取下列試劑，置于1L燒杯中。Tris15.1gGlycine94gSDS5.0g2 .加入約800mL的去離子水，攪拌溶解。3 .加去離子水將溶液定容至1L后，室溫保存。10、5XSDSPAGELoadingBuffer*組份濃

6、度250mMTrisHCl(pH6.8)10%(W/V)SDS0.5%(W/V)BPB50%(V/V)甘油5%（W/VB萌基乙醇*配制量5mL*配置方法1.量取下列試劑，置于10mL塑料離心管中。1MTrisHCl1.25mLSDS0.5gBPB25mg甘油2.5mL2.加入去離子水溶解后定容至5mL3.小份（500仙l/份）分裝后，于室溫保存。4. 使用前將25l的2-ME加到每小份中。5. 加入2M-E的LoadingBuffer可在室溫下保存一個(gè)月左右1、1MTrisHCl組份濃度1MTrisHCl(pH7.4,7.6,8.0)配制量1L*配置方法2.3.PH1.稱量121.1gTris

7、置于1L燒杯中。加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙?。按下表量加入濃鹽酸調(diào)節(jié)所需要的pH值。值濃HCl7.4約70mL7.6約60mL8.0約42mL4. 將溶解定容至1L。5. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因?yàn)門ris溶液的pH值隨溫度的變化差很大，溫度每升高1C,溶液的pH值大約降低0.03個(gè)單位。2、1.5MTrisHCl*組份濃度1.5MTrisHCl(pH8.8)*配制量1L*配置方法1.稱取181.7gTris置于1L燒杯中。2. 加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?. 用濃鹽酸調(diào)pH值至8.8。4. 將溶液定容至1L。5. 高溫高

8、壓滅菌后，室溫保存。注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因?yàn)門ris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高1C,溶液的pH值大約降低0.03個(gè)單位。3、10XTEBuffer7.6,8.0)*配制量*配置方法1M3.4.*組份濃度100mMTrisHCl,10mMEDTA(pH7.4,1L1.量取下列溶液，置于1L燒杯中。TrisHClBuffer(pH7.4,7.6,8.0)100mL500mMEDTA(pH8.0)20mL2.向燒杯中加入約800mL的去離子水，均勻混合。將溶液定至1L后，高溫高壓滅菌。室溫保存。4、3M醋酸鈉*組份濃度3M醋酸鈉(pH5.2)*配制量100mL*

9、配置方法1.40mL的去離子水?dāng)嚢枞芙?.3.4.稱取40.8gNaOAc.3H2cg于100200mL燒杯中，加入約加入冰乙酸調(diào)節(jié)pH值至5.2。加入去離子水將溶液定容至100mL高溫高壓滅菌后，室溫保存。5、PBSBuffer2mMKH2PO4*配置方法*組份濃度137mMNaCl,2.7mMKCl,10mMNa2HPO4配制量1L1.稱量下列試劑，置于1L燒杯中。NaCl8gKCl0.2gNa2HPO41.42gKH2PO40.27g2. 向燒杯中加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?. 滴加HCl將pH值調(diào)節(jié)至7.4,然后加入去離子水將溶液定容至1L。4. 高溫高壓滅菌后，室溫保

10、存。注意：上述PBSBuffer中無二價(jià)陽(yáng)離子，如需要，可在配方中補(bǔ)充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2。6、10M醋酸俊*組份濃度10M醋酸錢*配制量100mL*配置方法1.稱量77.1g醋酸俊置于100200mL燒杯中，加入約30mL的去離子水?dāng)嚢枞芙狻?. 加去離子水將溶液定容至100mL3. 使用0.22pm濾膜過濾除菌。4. 密封瓶口于室溫保存。注意：醋酸俊受熱易分解，所以不能高溫高壓滅菌。7、TrisHCl平衡苯酚*配置方法1.使用原料：大多數(shù)市售液化苯酚是清亮無色的，無需重蒸儲(chǔ)便可用于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。但有些液化苯酚呈粉紅色或黃色，應(yīng)避免使用。同時(shí)也應(yīng)避免使用結(jié)晶苯酚，結(jié)晶苯酚

11、必須在160c對(duì)其進(jìn)行重蒸儲(chǔ)除去諸如酶等氧化產(chǎn)物，這些氧化產(chǎn)物可引起磷酸二酯鍵的斷裂或?qū)е翿N母口DNA勺交聯(lián)等。因此，苯酚的質(zhì)量對(duì)DNARNA勺提取極為重要，我們推薦使用高質(zhì)量的苯酚進(jìn)行分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。2. 操作注意：苯酚腐蝕性極強(qiáng)，并可引起嚴(yán)重灼傷，操作時(shí)應(yīng)戴手套及防護(hù)鏡等。所有操作均應(yīng)在通風(fēng)櫥中進(jìn)行，與苯酚接觸過的皮膚部位應(yīng)用大量水清洗，并用肥皂和水洗滌，忌用乙醇。3. 苯酚平衡：因?yàn)樵谒嵝詐H條件下DNA配于有機(jī)相，因止匕使用苯酚前必須對(duì)苯酚進(jìn)行平衡使其pH值達(dá)到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：液化苯酚應(yīng)貯存于20C,此時(shí)的苯酚呈現(xiàn)結(jié)晶狀態(tài)。從冰柜中取出的苯酚首先在室溫下放置使其達(dá)到

12、室溫，然后在68C水浴中使苯酚充分溶解。加入羥基唾咻(8Quinolinol)至終濃度0.1%。該化合物是一種還原劑、RNAB的不完全抑制劑及金屬離子的弱螯合劑，同時(shí)因其呈黃色。有助于方便識(shí)別有機(jī)相。加入等體積的1MTrisHCl(pH8.0),使用磁力攪拌器攪拌15分鐘，靜置使其充分分層后，除去上層水相。重復(fù)操作步驟。加入等體積的0.1MTrisHCl(pH8.0),使用磁力攪拌器攪拌15分鐘，靜置使其充分分層后，除去上層水相。重復(fù)操作步驟，稍微殘留部分上層水相。使用pH試紙確認(rèn)有機(jī)相的pH值大于7.8。將苯酚置于棕色玻璃瓶中4C避光保存。8、苯酚/氯仿/異戊醇*配置方法1.說明：從核酸樣品

13、中除去蛋白質(zhì)時(shí)常常使用苯/酚/氯仿/異戊醇(25:24:1)。氯仿可使蛋白質(zhì)變性并有助于液相與有機(jī)相的分離，而異戊醇則有助于消除抽提過程中出現(xiàn)的氣泡。2.配置方法：將TrisHCl平衡苯酚與等體積的氯仿/異戊醇(24:1)均勻混合后，移入棕色玻璃瓶中4c保存。9、10%(WMSDS*組份濃度10%(W/VSDS*配制量100mL*配置方法1.稱量10g高純度的SDS置于100200mL杯中，加入約80mL的去離子水，68c加熱溶解。2.滴加數(shù)滴濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.2。3.將溶液定容至100mL,室溫保存。10、2NNaOH*組份濃度2NNaOH*配制量100mL*配置方法1.量取80mL去離

14、子水置于100200mL塑料燒杯中(NaO曲解過程中大量放熱，有可能使玻璃燒杯炸裂)。2 .稱取8gNaOH小心地逐漸加入到燒杯中，邊加邊攪拌。3 .待NaOHl全溶解后，用去離子水將溶液體積定容至100mL4.將溶液轉(zhuǎn)移至塑料容器中后，室溫保存。11、2.5NHCl*組份濃度2.5NHCl*配制量100mL*配置方法1.在78.4mL的去離子水中加入21.6mL的濃鹽酸(11.6N),均勻混合。2.室溫保存。12、5MNaCl*組份濃度5MNaCl*配制量1L*配置方法1.稱取292.2gNaCl置于1L燒杯中，加入約800mL的去離子水后攪拌溶解。2.加去離子水將溶液定容至1L后，適量分成

15、小份。3.高溫高壓滅菌后,4c保存。13、20%(WMGlucose葡萄糖*組份濃度20%(WN)Glucose*配制量100mL*配置方法1.稱取20gGlucose置于100200mL燒杯中，力口入約80mL的去離子水后，攪拌溶解。2 .加去離子水將溶液定容至100mL3 .局溫(Ml壓火菌后，4c保存。14、SolutionI*組份濃度25mMTrisHCl(pH8.0),10mMEDTA50mMGlucose(質(zhì)粒提取用)*配制量1L*配置方法1.量取下列溶液，置于1L燒杯中。1MTrisHCl(pH8.0)25mL0.5MEDTA(pH8.0)20mL20%Glucose(1.11M

16、)45mLdH2O910mL2.高溫高壓滅菌后，4c保存。3.使用前每50mL的SoliutionI中加入2mL的RNaseA(20mg/mD。15、SolutionII*組份濃度250mMNaOH1%(WMSDS(質(zhì)粒提取用)*配制量500mL*配置方法1.量取下列溶液置于500mL杯中。10%SDS50mL2NNaOH50mL2.加滅菌水定容至500mL充分混勻。3. 室溫保存。此溶液保存時(shí)間最好不要超過一個(gè)月。注意：SDS!產(chǎn)生氣泡，不要?jiǎng)×覕嚢琛?6、SolutionIII*組份濃度3MKOAc5MCH3COOH(質(zhì)粒提取用)*配制量500mL*配置方法1.量取下列溶液置于500mL杯中。KOAc147gCH3COOH57.5mL2. 加入300mL去離子水后攪拌溶解。3.加去離子水將溶液定容至500mL4. 高溫高壓滅菌后，4c保存。17、0.5MEDTA*組份濃度0.5MEDTA(pH8.0)*配制量1L*配置方法1.稱取186.1gNa2EDTA.2H2Qg于1L燒杯中。2.加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢琛?. 用NaOH3節(jié)pH值值8.0(約20gNaOH。注意：pH值至8.0時(shí)，EDTA才能完全溶解。4. 加去離子水將溶液定容至1L。5 .適量分成小份后，高溫高壓