PCR質(zhì)量控制2013.3.26

1、醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法（衛(wèi)醫(yī)發(fā)（衛(wèi)醫(yī)發(fā)200673200673號(hào)）號(hào)）醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理辦法醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理辦法（衛(wèi)辦（衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)醫(yī)政發(fā)20101942010194號(hào)）號(hào)）醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則 ISO15189(CNAS-CL02)ISO15189(CNAS-CL02)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在基因擴(kuò)增檢驗(yàn)領(lǐng)域的醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在基因擴(kuò)增檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用說明（應(yīng)用說明（CNAS-CL36CNAS-CL36）醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在病理學(xué)檢查領(lǐng)域的應(yīng)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則

2、在病理學(xué)檢查領(lǐng)域的應(yīng)用說明（用說明（CNAS-CL37CNAS-CL37）分析前分析前患者準(zhǔn)備、標(biāo)本（采集、運(yùn)送、驗(yàn)收、保存）、醫(yī)患者準(zhǔn)備、標(biāo)本（采集、運(yùn)送、驗(yàn)收、保存）、醫(yī)生報(bào)告單申請(qǐng)生報(bào)告單申請(qǐng)分析中分析中樣本分樣、儀器、檢測過程、結(jié)果的有效性判斷樣本分樣、儀器、檢測過程、結(jié)果的有效性判斷分析后分析后檢測報(bào)告、報(bào)告?zhèn)鬟f、結(jié)果的接收、結(jié)果解釋檢測報(bào)告、報(bào)告?zhèn)鬟f、結(jié)果的接收、結(jié)果解釋標(biāo)本采集時(shí)間對(duì)擴(kuò)增檢測結(jié)果的影響標(biāo)本采集時(shí)間對(duì)擴(kuò)增檢測結(jié)果的影響標(biāo)本的類型和采集量標(biāo)本的類型和采集量采樣及運(yùn)輸容器采樣及運(yùn)輸容器采樣質(zhì)量的評(píng)價(jià)采樣質(zhì)量的評(píng)價(jià)標(biāo)本采集中的防污染標(biāo)本采集中的防污染1 1、血清（漿）血清

3、（漿）：無特殊要求無特殊要求2 2、如用泌尿生殖道分泌物做如用泌尿生殖道分泌物做CTCT、NGNG項(xiàng)目：項(xiàng)目：應(yīng)在抗生素應(yīng)用前或停應(yīng)在抗生素應(yīng)用前或停藥兩周后采集標(biāo)本，如不能停用抗生素，應(yīng)于下次抗生素應(yīng)用藥兩周后采集標(biāo)本，如不能停用抗生素，應(yīng)于下次抗生素應(yīng)用前采集。前采集。3 3、如用、如用痰痰做做TBTB：應(yīng)在抗結(jié)核藥物應(yīng)用前或停藥兩周后采集標(biāo)本，應(yīng)在抗結(jié)核藥物應(yīng)用前或停藥兩周后采集標(biāo)本，如不能停用抗結(jié)核藥物，應(yīng)于下次抗結(jié)核藥物應(yīng)用前采集。如不能停用抗結(jié)核藥物，應(yīng)于下次抗結(jié)核藥物應(yīng)用前采集。 因?yàn)橐驗(yàn)镻CRPCR方法所檢測的靶物質(zhì)為核酸，不受標(biāo)本生物活性的方法所檢測的靶物質(zhì)為核酸，不受標(biāo)本生

4、物活性的限制，對(duì)于已經(jīng)死亡的病原體仍可檢測出來，即感染后在藥物限制，對(duì)于已經(jīng)死亡的病原體仍可檢測出來，即感染后在藥物治療有效的情況下，患處仍會(huì)有少量已死亡的病原體存在。治療有效的情況下，患處仍會(huì)有少量已死亡的病原體存在。 標(biāo)本的類型和采集量應(yīng)根據(jù)所測病原體而定。標(biāo)本的類型和采集量應(yīng)根據(jù)所測病原體而定。一般來說，如果樣本的量對(duì)病原體培養(yǎng)夠用的一般來說，如果樣本的量對(duì)病原體培養(yǎng)夠用的話，則其量亦足以用于核酸提取及其后的擴(kuò)增話，則其量亦足以用于核酸提取及其后的擴(kuò)增檢測。檢測。采樣所用的抗凝劑及相關(guān)試劑材料不應(yīng)對(duì)核酸擴(kuò)增及采樣所用的抗凝劑及相關(guān)試劑材料不應(yīng)對(duì)核酸擴(kuò)增及檢測過程造成干擾。如全血、骨髓和血

5、漿標(biāo)本，用檢測過程造成干擾。如全血、骨髓和血漿標(biāo)本，用EDTAEDTA抗凝，不使用肝素，因其是抗凝，不使用肝素，因其是 TaqTaq酶的強(qiáng)抑制劑，酶的強(qiáng)抑制劑，且在核酸提取過程中很難完全去除。且在核酸提取過程中很難完全去除。 使用玻璃器皿，必須為密閉的、必須經(jīng)高壓滅菌，使用玻璃器皿，必須為密閉的、必須經(jīng)高壓滅菌，以使可能存在的以使可能存在的RNaseRNase永久性失活。永久性失活。血液標(biāo)本：溶血、嚴(yán)重脂血等應(yīng)拒收血液標(biāo)本：溶血、嚴(yán)重脂血等應(yīng)拒收泌尿生殖道分泌物：鏡下觀察到上皮細(xì)胞存在。泌尿生殖道分泌物：鏡下觀察到上皮細(xì)胞存在。痰液：鏡下觀察上皮細(xì)胞很少，一般痰液：鏡下觀察上皮細(xì)胞很少，一般1

6、02525個(gè)。個(gè)。標(biāo)本拒收原因分析，采取有效措施予以糾正標(biāo)本拒收原因分析，采取有效措施予以糾正實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)待測靶核酸的特性，對(duì)各種臨床標(biāo)本的運(yùn)送條件實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)待測靶核酸的特性，對(duì)各種臨床標(biāo)本的運(yùn)送條件（溫度、時(shí)間）作出相應(yīng)規(guī)定。（溫度、時(shí)間）作出相應(yīng)規(guī)定。靶核酸為靶核酸為DNADNA的標(biāo)本，如在無菌條件下，則可以在室溫下運(yùn)送，的標(biāo)本，如在無菌條件下，則可以在室溫下運(yùn)送，建議采集后建議采集后8h8h之內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室；之內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室；靶核酸為靶核酸為R RNANA的標(biāo)本，如在無菌條件下，可在室溫下運(yùn)送，如為的標(biāo)本，如在無菌條件下，可在室溫下運(yùn)送，如為較長時(shí)間，則應(yīng)在加冰條件下運(yùn)送，建議采集后較長時(shí)

7、間，則應(yīng)在加冰條件下運(yùn)送，建議采集后4h4h之內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)之內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室；室； 所有標(biāo)本采集后送至實(shí)驗(yàn)室之前，所有臨床標(biāo)本在采集后送至所有標(biāo)本采集后送至實(shí)驗(yàn)室之前，所有臨床標(biāo)本在采集后送至實(shí)驗(yàn)室前，均應(yīng)放實(shí)驗(yàn)室前，均應(yīng)放2 288臨時(shí)保存。臨時(shí)保存。淋病奈瑟菌有自溶的特性，標(biāo)本采集后應(yīng)立即送檢。淋病奈瑟菌有自溶的特性，標(biāo)本采集后應(yīng)立即送檢。 靶核酸靶核酸( (尤其是尤其是RNA)RNA)易受核酸酶的作用而迅速降解，因此標(biāo)本易受核酸酶的作用而迅速降解，因此標(biāo)本的保存對(duì)于核酸擴(kuò)增測定的有效性極為重要（避免反復(fù)凍融）的保存對(duì)于核酸擴(kuò)增測定的有效性極為重要（避免反復(fù)凍融）靶核酸為靶核酸為DNADNA的標(biāo)

8、本的標(biāo)本2-82-8保存保存1-31-3天，天，靶核酸為靶核酸為R RNANA的標(biāo)本應(yīng)的標(biāo)本應(yīng)2020下保存下保存2020下保存下保存1 1個(gè)月個(gè)月7070以下可長期保存以下可長期保存如為提取核酸后用于如為提取核酸后用于DNADNA擴(kuò)增分析的樣本，可于擴(kuò)增分析的樣本，可于10TE10TE緩沖液緩沖液mmolmmol/L Tris,1mmol/L EDTA(pH7.5/L Tris,1mmol/L EDTA(pH7.58.0)2-88.0)2-8下保存。下保存。 用于用于RNARNA擴(kuò)增分析的樣本，則應(yīng)于上述擴(kuò)增分析的樣本，則應(yīng)于上述 TETE緩沖液中緩沖液中-70-70保存。保存。 標(biāo)本接收建

9、議在三個(gè)測定區(qū)之外標(biāo)本接收建議在三個(gè)測定區(qū)之外接收的標(biāo)本應(yīng)收集在原始容器中，不能接受從接收的標(biāo)本應(yīng)收集在原始容器中，不能接受從其他檢測如生化、免疫檢驗(yàn)等分出來的標(biāo)本，其他檢測如生化、免疫檢驗(yàn)等分出來的標(biāo)本，因其有較大的發(fā)生標(biāo)本間污染的可能性因其有較大的發(fā)生標(biāo)本間污染的可能性 血清（漿）：血清（漿）：應(yīng)應(yīng)1 1小時(shí)內(nèi)分離血清，抗凝后小時(shí)內(nèi)分離血清，抗凝后4 4小時(shí)內(nèi)分離血漿，然后轉(zhuǎn)移至小時(shí)內(nèi)分離血漿，然后轉(zhuǎn)移至1.5ml1.5ml滅菌離心滅菌離心管中保存。若血清分離不充分，可管中保存。若血清分離不充分，可1500rpm1500rpm離心離心5min 5min 。如甘油三酯含量超過如甘油三酯含量超

10、過6mmol/L6mmol/L或肉眼可見血清或肉眼可見血清/ /血漿呈白色渾濁狀的標(biāo)本，應(yīng)血漿呈白色渾濁狀的標(biāo)本，應(yīng)413 000rpm413 000rpm離心離心15min,15min,吸取下層清亮血清或血漿轉(zhuǎn)移至吸取下層清亮血清或血漿轉(zhuǎn)移至1.5ml1.5ml滅菌離心管滅菌離心管中保存中保存 泌尿生殖道分泌物泌尿生殖道分泌物一次性采樣管（含保養(yǎng)液）一次性采樣管（含保養(yǎng)液）配套棉拭子（不含保養(yǎng)液）配套棉拭子（不含保養(yǎng)液） 痰液痰液結(jié)核分枝桿菌結(jié)核分枝桿菌DNADNA檢測標(biāo)本：用檢測標(biāo)本：用4%NaOH4%NaOH搖勻，室溫下放置搖勻，室溫下放置3030分鐘左右液化，分鐘左右液化，轉(zhuǎn)移至轉(zhuǎn)移至

11、1.5ml1.5ml滅菌離心管，離心，去上清，留沉淀用于核酸提取。需注意的滅菌離心管，離心，去上清，留沉淀用于核酸提取。需注意的是液化時(shí)不能加熱，液化時(shí)間不能過長。是液化時(shí)不能加熱，液化時(shí)間不能過長。 非結(jié)核分枝桿菌非結(jié)核分枝桿菌DNADNA檢測標(biāo)本：痰標(biāo)本在室溫懸浮于滅菌生理鹽水中，充分檢測標(biāo)本：痰標(biāo)本在室溫懸浮于滅菌生理鹽水中，充分震蕩混勻，促使大塊黏狀物下沉，取上清離心，去上清，留沉淀用于核酸提震蕩混勻，促使大塊黏狀物下沉，取上清離心，去上清，留沉淀用于核酸提取。取。切記不能用切記不能用NaOHNaOH液化痰標(biāo)本液化痰標(biāo)本。 分冊(cè)建立儀器檔案分冊(cè)建立儀器檔案儀器卡、儀器運(yùn)行狀態(tài)標(biāo)識(shí)儀器卡

12、、儀器運(yùn)行狀態(tài)標(biāo)識(shí)定期維護(hù)保養(yǎng)定期維護(hù)保養(yǎng)定期校準(zhǔn)定期校準(zhǔn)/ /檢定檢定相同檢測項(xiàng)目在不同的儀器或系統(tǒng)上進(jìn)行檢測時(shí)，應(yīng)做比對(duì)相同檢測項(xiàng)目在不同的儀器或系統(tǒng)上進(jìn)行檢測時(shí)，應(yīng)做比對(duì) （2 2次次/ /年，每次至少年，每次至少2020份標(biāo)本，計(jì)算回歸方程，系統(tǒng)誤差應(yīng)份標(biāo)本，計(jì)算回歸方程，系統(tǒng)誤差應(yīng)7.5%7.5%）當(dāng)設(shè)備出現(xiàn)故障時(shí)當(dāng)設(shè)備出現(xiàn)故障時(shí) ： 1 1）應(yīng)立即停止使用，并加上明顯標(biāo)識(shí)）應(yīng)立即停止使用，并加上明顯標(biāo)識(shí) 2)2)修復(fù)的設(shè)備必須經(jīng)校準(zhǔn)、檢定（驗(yàn)證）或檢測滿足要求后方修復(fù)的設(shè)備必須經(jīng)校準(zhǔn)、檢定（驗(yàn)證）或檢測滿足要求后方 能再次投入使用能再次投入使用 3)3)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)檢查由于上述缺陷對(duì)以

13、前所進(jìn)行的檢測工作的影響，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)檢查由于上述缺陷對(duì)以前所進(jìn)行的檢測工作的影響， 并記錄相關(guān)分析、處理意見并記錄相關(guān)分析、處理意見 可校準(zhǔn)的項(xiàng)目實(shí)施校準(zhǔn)可校準(zhǔn)的項(xiàng)目實(shí)施校準(zhǔn)質(zhì)控品檢測結(jié)果在允許范圍內(nèi)質(zhì)控品檢測結(jié)果在允許范圍內(nèi)與其他儀器的檢測結(jié)果比較（與其他儀器的檢測結(jié)果比較（5 5個(gè)樣本，覆蓋測量范圍，個(gè)樣本，覆蓋測量范圍，至少至少4 4個(gè)樣本測量結(jié)果偏移個(gè)樣本測量結(jié)果偏移 7.5% 7.5% ）使用留樣再測結(jié)果進(jìn)行判別使用留樣再測結(jié)果進(jìn)行判別(5(5個(gè)樣本，覆蓋測量范圍，個(gè)樣本，覆蓋測量范圍，至少至少4 4個(gè)樣本測量結(jié)果偏移個(gè)樣本測量結(jié)果偏移 7.5% 7.5% ）需校準(zhǔn)儀器：溫度計(jì)、溫濕度

14、計(jì)、移液器、恒溫金屬浴、生物安全柜、高需校準(zhǔn)儀器：溫度計(jì)、溫濕度計(jì)、移液器、恒溫金屬浴、生物安全柜、高速冷凍離心機(jī)、擴(kuò)增儀、雜交儀、測序儀速冷凍離心機(jī)、擴(kuò)增儀、雜交儀、測序儀校準(zhǔn)單位資質(zhì)校準(zhǔn)單位資質(zhì)合格的校準(zhǔn)合格的校準(zhǔn)/ / 檢定報(bào)告檢定報(bào)告校準(zhǔn)周期：參照國家計(jì)量部門或生產(chǎn)廠商的要求進(jìn)行，廠家沒有規(guī)定的則校準(zhǔn)周期：參照國家計(jì)量部門或生產(chǎn)廠商的要求進(jìn)行，廠家沒有規(guī)定的則每年至少進(jìn)行一次每年至少進(jìn)行一次 內(nèi)部校準(zhǔn)的輔助設(shè)備，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)國家計(jì)量部門或生產(chǎn)廠商的規(guī)定制定內(nèi)部校準(zhǔn)的輔助設(shè)備，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)國家計(jì)量部門或生產(chǎn)廠商的規(guī)定制定內(nèi)部校準(zhǔn)操作規(guī)程和要求，并有內(nèi)部校準(zhǔn)的詳細(xì)記錄內(nèi)部校準(zhǔn)操作規(guī)程和要求

15、，并有內(nèi)部校準(zhǔn)的詳細(xì)記錄校準(zhǔn)或檢定的設(shè)備，應(yīng)貼校準(zhǔn)或檢定標(biāo)貼，標(biāo)明其校準(zhǔn)或檢定狀態(tài)，并標(biāo)校準(zhǔn)或檢定的設(shè)備，應(yīng)貼校準(zhǔn)或檢定標(biāo)貼，標(biāo)明其校準(zhǔn)或檢定狀態(tài)，并標(biāo)明下次校準(zhǔn)或檢定的日期明下次校準(zhǔn)或檢定的日期 結(jié)構(gòu)：溫度控制及導(dǎo)熱系統(tǒng)、光路系統(tǒng)、結(jié)構(gòu)：溫度控制及導(dǎo)熱系統(tǒng)、光路系統(tǒng)、 檢測系統(tǒng)檢測系統(tǒng) 維護(hù)：維護(hù)： 75%75%乙醇定期清潔熱蓋和反應(yīng)槽或孔乙醇定期清潔熱蓋和反應(yīng)槽或孔 用無水乙醇清潔光路部分用無水乙醇清潔光路部分校準(zhǔn)：校準(zhǔn)： 校準(zhǔn)單位：廠家校準(zhǔn)單位：廠家 校準(zhǔn)周期：定期校準(zhǔn)、儀器搬動(dòng)校準(zhǔn)周期：定期校準(zhǔn)、儀器搬動(dòng) 校準(zhǔn)參數(shù)：光路部分、背景熒光、溫控部分（溫度準(zhǔn)校準(zhǔn)參數(shù)：光路部分、背景熒光、溫控

16、部分（溫度準(zhǔn)確度、均一性、溫度升降速率）確度、均一性、溫度升降速率） 維護(hù)：維護(hù)：75%75%乙醇擦拭加熱孔乙醇擦拭加熱孔校準(zhǔn)：校準(zhǔn)： 校準(zhǔn)單位：廠家、計(jì)量院、內(nèi)部校準(zhǔn)校準(zhǔn)單位：廠家、計(jì)量院、內(nèi)部校準(zhǔn) 溫度準(zhǔn)確度（溫度準(zhǔn)確度（11 ）（）（應(yīng)涵蓋試驗(yàn)過程中所涉及的溫度應(yīng)涵蓋試驗(yàn)過程中所涉及的溫度） 孔間溫度的均一性（孔間溫度的均一性（11 ）（內(nèi)部校準(zhǔn)應(yīng)規(guī)定測定孔的（內(nèi)部校準(zhǔn)應(yīng)規(guī)定測定孔的選擇、測量時(shí)間、各孔溫度偏差允許范圍）選擇、測量時(shí)間、各孔溫度偏差允許范圍）維護(hù)：維護(hù)： 75%75%乙醇擦拭乙醇擦拭校準(zhǔn)：校準(zhǔn)周期、外校（廠家、計(jì)量所）、校準(zhǔn)：校準(zhǔn)周期、外校（廠家、計(jì)量所）、 校準(zhǔn)量程校準(zhǔn)

17、量程（應(yīng)涵蓋試驗(yàn)過程中所涉及的量程）（應(yīng)涵蓋試驗(yàn)過程中所涉及的量程） 計(jì)量性能要求（容量允許誤差、測量重復(fù)性）計(jì)量性能要求（容量允許誤差、測量重復(fù)性）內(nèi)部校準(zhǔn)內(nèi)部校準(zhǔn)- -參照參照定量、可調(diào)移液器試行檢定規(guī)程定量、可調(diào)移液器試行檢定規(guī)程(JJG646-2006)(JJG646-2006) 注意：環(huán)境的要求注意：環(huán)境的要求 計(jì)量性能要求（標(biāo)稱容量、標(biāo)定點(diǎn)、容量允許誤差、測量計(jì)量性能要求（標(biāo)稱容量、標(biāo)定點(diǎn)、容量允許誤差、測量 重復(fù)性）重復(fù)性） 校準(zhǔn)點(diǎn)涵蓋試驗(yàn)過程中所涉及的量程校準(zhǔn)點(diǎn)涵蓋試驗(yàn)過程中所涉及的量程清潔清潔: : 75%75%乙醇擦拭乙醇擦拭, ,不宜用次氯酸鈉溶液清潔不宜用次氯酸鈉溶液清

18、潔檢定：有資質(zhì)的第三方檢測機(jī)構(gòu)檢定：有資質(zhì)的第三方檢測機(jī)構(gòu)檢定參數(shù)：檢定參數(shù)：高效過濾器完整性、流入氣流流速、下降高效過濾器完整性、流入氣流流速、下降氣流流速、氣流模式氣流流速、氣流模式 維護(hù)保養(yǎng)：維護(hù)保養(yǎng)：75%75%乙醇擦拭乙醇擦拭校準(zhǔn)：轉(zhuǎn)速、溫度校準(zhǔn)：轉(zhuǎn)速、溫度耗材耗材 帶濾芯吸頭、離心管爆管和抑制物質(zhì)檢帶濾芯吸頭、離心管爆管和抑制物質(zhì)檢試劑盒的質(zhì)檢試劑盒的質(zhì)檢 包括外觀質(zhì)檢和性能質(zhì)檢包括外觀質(zhì)檢和性能質(zhì)檢 選擇或更換試劑品牌：試劑性能評(píng)估選擇或更換試劑品牌：試劑性能評(píng)估 更換試劑批號(hào)：試劑批間差，應(yīng)評(píng)價(jià)核酸提取效率和更換試劑批號(hào)：試劑批間差，應(yīng)評(píng)價(jià)核酸提取效率和擴(kuò)增效率擴(kuò)增效率設(shè)置陰性

19、對(duì)照、低值陽性對(duì)照設(shè)置陰性對(duì)照、低值陽性對(duì)照試劑不合格試劑不合格 1)1)低值陽性對(duì)照和標(biāo)準(zhǔn)品均未檢出，或低值陽性對(duì)照未檢出而標(biāo)準(zhǔn)品檢出率大低值陽性對(duì)照和標(biāo)準(zhǔn)品均未檢出，或低值陽性對(duì)照未檢出而標(biāo)準(zhǔn)品檢出率大幅下降，表示試劑失效或檢測靈敏度大幅下降。幅下降，表示試劑失效或檢測靈敏度大幅下降。 2)2)低值陽性對(duì)照未檢出，標(biāo)準(zhǔn)品檢測正常，提示樣品提取液存在問題。重復(fù)新低值陽性對(duì)照未檢出，標(biāo)準(zhǔn)品檢測正常，提示樣品提取液存在問題。重復(fù)新舊提取液陽性對(duì)照實(shí)驗(yàn)，確定提取液失效問題。舊提取液陽性對(duì)照實(shí)驗(yàn)，確定提取液失效問題。 3) 3) 陰性對(duì)照有擴(kuò)增，排除其他污染可能性后，提取液存在污染可能。陰性對(duì)照有擴(kuò)

20、增，排除其他污染可能性后，提取液存在污染可能。 4)4)低值陽性對(duì)照檢出，標(biāo)準(zhǔn)品未檢出或擴(kuò)增曲線明顯系統(tǒng)性低值陽性對(duì)照檢出，標(biāo)準(zhǔn)品未檢出或擴(kuò)增曲線明顯系統(tǒng)性CTCT值偏大值偏大5 5個(gè)循環(huán)個(gè)循環(huán)以上，提示陽性標(biāo)準(zhǔn)品存在問題。以上，提示陽性標(biāo)準(zhǔn)品存在問題。試劑合格試劑合格 陰性對(duì)照無擴(kuò)增、低值陽性質(zhì)控品檢出陰性對(duì)照無擴(kuò)增、低值陽性質(zhì)控品檢出 或高、低兩個(gè)臨床樣本檢測結(jié)果在或高、低兩個(gè)臨床樣本檢測結(jié)果在0.4log100.4log10范圍內(nèi)，可接受范圍內(nèi)，可接受目的目的 監(jiān)測和控制實(shí)驗(yàn)室常規(guī)工作的精密度，監(jiān)測和控制實(shí)驗(yàn)室常規(guī)工作的精密度，即實(shí)驗(yàn)室測定的批內(nèi)和批間重復(fù)性即實(shí)驗(yàn)室測定的批內(nèi)和批間重復(fù)性

21、IQCIQC結(jié)果決定了實(shí)驗(yàn)室即時(shí)測定結(jié)果的可靠性結(jié)果決定了實(shí)驗(yàn)室即時(shí)測定結(jié)果的可靠性和有效性和有效性來源來源: :第三方、試劑盒自帶、自制第三方、試劑盒自帶、自制使用使用: : 1) 1)凍干質(zhì)控品復(fù)溶時(shí)，要確保所用溶劑的質(zhì)量；當(dāng)溶凍干質(zhì)控品復(fù)溶時(shí)，要確保所用溶劑的質(zhì)量；當(dāng)溶劑為焦碳酸二乙酯（劑為焦碳酸二乙酯（DEPCDEPC）水時(shí)，在操作中應(yīng)盡量在）水時(shí)，在操作中應(yīng)盡量在通風(fēng)的條件下進(jìn)行，并避免接觸皮膚。因通風(fēng)的條件下進(jìn)行，并避免接觸皮膚。因DEPCDEPC是一種是一種潛在的致癌物質(zhì)潛在的致癌物質(zhì). .它可滅活各種蛋白質(zhì)，是它可滅活各種蛋白質(zhì)，是RNARNA酶的強(qiáng)酶的強(qiáng)抑制物。抑制物。 2)

22、2)凍干質(zhì)控品復(fù)溶時(shí)，所加溶劑的量要準(zhǔn)確凍干質(zhì)控品復(fù)溶時(shí)，所加溶劑的量要準(zhǔn)確 3)3)凍干質(zhì)控品復(fù)溶時(shí)應(yīng)輕輕搖勻，切忌劇烈振搖凍干質(zhì)控品復(fù)溶時(shí)應(yīng)輕輕搖勻，切忌劇烈振搖 4 4）避免反復(fù)凍融）避免反復(fù)凍融 5 5）自制室內(nèi)質(zhì)控品應(yīng)監(jiān)測檢測全過程）自制室內(nèi)質(zhì)控品應(yīng)監(jiān)測檢測全過程 定性檢測定性檢測已知弱陽性質(zhì)控樣本（基質(zhì)與待測標(biāo)本相同）：至少帶至少帶1 1份，監(jiān)測核酸提取和擴(kuò)份，監(jiān)測核酸提取和擴(kuò)增檢測的有效性增檢測的有效性已知陰性質(zhì)控樣本（基質(zhì)與待測標(biāo)本相同）：至少帶至少帶1 1份，判斷核酸提取過程中份，判斷核酸提取過程中是否發(fā)生污染是否發(fā)生污染( (實(shí)驗(yàn)室的以前擴(kuò)增產(chǎn)物的污染、標(biāo)本間的交叉污染、強(qiáng)

23、陽性標(biāo)實(shí)驗(yàn)室的以前擴(kuò)增產(chǎn)物的污染、標(biāo)本間的交叉污染、強(qiáng)陽性標(biāo)本氣溶膠經(jīng)加樣器導(dǎo)致污染、強(qiáng)陽性標(biāo)本經(jīng)操作者手導(dǎo)致污染本氣溶膠經(jīng)加樣器導(dǎo)致污染、強(qiáng)陽性標(biāo)本經(jīng)操作者手導(dǎo)致污染 翻蓋離心管在翻蓋離心管在較高溫度溫育時(shí)蓋子崩開、擴(kuò)增反應(yīng)試劑的污染較高溫度溫育時(shí)蓋子崩開、擴(kuò)增反應(yīng)試劑的污染 定量檢測定量檢測已知高、中、低質(zhì)控品（基質(zhì)與待測標(biāo)本相同）已知陰性質(zhì)控樣本（基質(zhì)與待測標(biāo)本相同）室內(nèi)質(zhì)控品在擴(kuò)增儀中的排列順序：不宜固定位置室內(nèi)質(zhì)控品在擴(kuò)增儀中的排列順序：不宜固定位置, ,盡盡可能監(jiān)測每一個(gè)孔擴(kuò)增有效性可能監(jiān)測每一個(gè)孔擴(kuò)增有效性板上雜交和膜上斑點(diǎn)印跡雜交的質(zhì)控：在板上雜交和板上雜交和膜上斑點(diǎn)印跡雜交的

24、質(zhì)控：在板上雜交和斑點(diǎn)雜交時(shí)，陽性和陰性質(zhì)控應(yīng)該在同一板或膜上與斑點(diǎn)雜交時(shí)，陽性和陰性質(zhì)控應(yīng)該在同一板或膜上與病人標(biāo)本平行進(jìn)行分析，這可排除不同反應(yīng)中因使用病人標(biāo)本平行進(jìn)行分析，這可排除不同反應(yīng)中因使用不同雜交條件所致的對(duì)結(jié)果的錯(cuò)誤解釋。不同雜交條件所致的對(duì)結(jié)果的錯(cuò)誤解釋。暫定均值的建立：暫定均值的建立：20d20d內(nèi)得到內(nèi)得到2020個(gè)數(shù)值，或至少在個(gè)數(shù)值，或至少在5d5d內(nèi)，每天作內(nèi)，每天作不少于不少于4 4次重復(fù)檢測獲得次重復(fù)檢測獲得2020個(gè)數(shù)值。對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行離群值檢驗(yàn)（剔個(gè)數(shù)值。對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行離群值檢驗(yàn)（剔除超過除超過3s3s外的數(shù)據(jù)），計(jì)算出均值，作為暫定均值。外的數(shù)據(jù)），計(jì)算出均值，作

25、為暫定均值。若使用定值質(zhì)控品，若使用定值質(zhì)控品，均值必須在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)使用自己現(xiàn)行的測定均值必須在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)使用自己現(xiàn)行的測定方法進(jìn)行確定方法進(jìn)行確定，質(zhì)控品說明書上的原有標(biāo)定值只能作參考。，質(zhì)控品說明書上的原有標(biāo)定值只能作參考。常規(guī)均值的建立：以最初常規(guī)均值的建立：以最初2020個(gè)數(shù)據(jù)和三至五個(gè)月在控?cái)?shù)據(jù)匯集個(gè)數(shù)據(jù)和三至五個(gè)月在控?cái)?shù)據(jù)匯集的所有數(shù)據(jù)計(jì)算的累積平均數(shù)作為質(zhì)控品有效期內(nèi)的常規(guī)均值，的所有數(shù)據(jù)計(jì)算的累積平均數(shù)作為質(zhì)控品有效期內(nèi)的常規(guī)均值，并以此作為以后室內(nèi)質(zhì)控圖的均值。并以此作為以后室內(nèi)質(zhì)控圖的均值。符符 號(hào)號(hào) 定定 義義1 12S2S 一個(gè)質(zhì)控測定值超出一個(gè)質(zhì)控測定值超出2s2s控制限

26、?？刂葡?。1 13S3S 一個(gè)質(zhì)控測定值超出一個(gè)質(zhì)控測定值超出3s3s控制限?？刂葡?。2 22S2S 兩個(gè)連續(xù)的質(zhì)控測定值同時(shí)超出兩個(gè)連續(xù)的質(zhì)控測定值同時(shí)超出+2s+2s或或2s2s控制限?？刂葡?。R R4S4S 同一批測定中，兩個(gè)不同濃度質(zhì)控物的測定值之間同一批測定中，兩個(gè)不同濃度質(zhì)控物的測定值之間 的差值超出的差值超出4s4s控制限?？刂葡蕖? 41S1S 四個(gè)連續(xù)的質(zhì)控測定值同時(shí)超出四個(gè)連續(xù)的質(zhì)控測定值同時(shí)超出+1s+1s或或1s1s控制限?？刂葡蕖?010X X 十個(gè)連續(xù)的質(zhì)控測定值同時(shí)處于均值的同一側(cè)。十個(gè)連續(xù)的質(zhì)控測定值同時(shí)處于均值的同一側(cè)。LeveyLevey-Jennings-

27、Jennings質(zhì)控圖方法質(zhì)控圖方法 LeveyLevey-Jennings-Jennings質(zhì)控圖結(jié)合質(zhì)控圖結(jié)合WestgardWestgard多規(guī)則質(zhì)控方法多規(guī)則質(zhì)控方法 “即刻法即刻法”質(zhì)控方法質(zhì)控方法 根據(jù)常規(guī)條件下的變異（根據(jù)常規(guī)條件下的變異（RCVRCV）計(jì)算中的平均值和）計(jì)算中的平均值和SDSD確定質(zhì)控線，確定質(zhì)控線，一般以一般以X X2S2S為告警限，為告警限，X X3S3S為失控限，將所得質(zhì)控結(jié)果標(biāo)在一為失控限，將所得質(zhì)控結(jié)果標(biāo)在一張質(zhì)控圖上，簡單明了。但如果以張質(zhì)控圖上，簡單明了。但如果以X X2S2S為失控限，假失控概率為失控限，假失控概率太高，通常不能接受；以太高，通常

28、不能接受；以X X3S3S為失控限假失控概率低，但誤差為失控限假失控概率低，但誤差檢出能力不強(qiáng)。檢出能力不強(qiáng)。 xl l 。XXX10X10 只要有只要有3 3個(gè)以上的數(shù)據(jù)即可決定是否有異常值的存在。個(gè)以上的數(shù)據(jù)即可決定是否有異常值的存在。將連續(xù)的質(zhì)控測定值按從小到大排列，即將連續(xù)的質(zhì)控測定值按從小到大排列，即x x1 1、x x2 2、x x3 3、x x4 4、x x5 5、x x6 6、x xn n（x x1 1為最小值，為最小值，x xn n為最大值）；為最大值）； 計(jì)算均值和標(biāo)準(zhǔn)差計(jì)算均值和標(biāo)準(zhǔn)差(s);(s);按下述公式計(jì)算按下述公式計(jì)算SISI上限上限和和SISI下限下限值；值；

29、 SISI上限上限= =（x x最大值最大值 均值）均值）/s/s SI SI下下限限= =（均值（均值 x x最小值最小值 ）/s/s將將SISI上限上限和和SISI下限下限值與值與SISI值表中的數(shù)值比較。值表中的數(shù)值比較。 n nn n3s3s n n2s 2s n nn n3s3s n n2s2s 3 1.15 1.15 12 2.55 2.29 3 1.15 1.15 12 2.55 2.29 4 1.49 1.46 13 2.61 2.3 4 1.49 1.46 13 2.61 2.3 5 1.75 1.67 14 2.66 2.37 5 1.75 1.67 14 2.66 2.3

30、7 6 1.94 1.82 15 2.71 2.41 6 1.94 1.82 15 2.71 2.41 7 2.10 1.94 16 2.75 2.4 7 2.10 1.94 16 2.75 2.4 8 2.22 2.03 17 2.79 2.47 8 2.22 2.03 17 2.79 2.47 9 2.32 2.11 18 2.82 2.50 9 2.32 2.11 18 2.82 2.50 10 2.41 2.18 19 2.85 2.53 10 2.41 2.18 19 2.85 2.53 11 2.48 2.23 20 2.88 2.56 11 2.48 2.23 20 2.88 2

31、.56SISI上限上限和和SISI下限下限值均值均 n3s對(duì)應(yīng)的值時(shí)，說明該質(zhì)控測定對(duì)應(yīng)的值時(shí)，說明該質(zhì)控測定值的變化已超出值的變化已超出3s3s，屬，屬“失控失控”。優(yōu)點(diǎn)：對(duì)于檢測項(xiàng)目開展次數(shù)少的實(shí)驗(yàn)室可進(jìn)行質(zhì)控優(yōu)點(diǎn)：對(duì)于檢測項(xiàng)目開展次數(shù)少的實(shí)驗(yàn)室可進(jìn)行質(zhì)控缺點(diǎn)：繁瑣缺點(diǎn)：繁瑣 初始階段的質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)，前初始階段的質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)，前3 3個(gè)質(zhì)控值的個(gè)質(zhì)控值的CVCV對(duì)隨后的結(jié)果對(duì)隨后的結(jié)果影響大。影響大。前前2020個(gè)數(shù)據(jù)使用即刻法，可對(duì)第個(gè)數(shù)據(jù)使用即刻法，可對(duì)第3 32020個(gè)數(shù)據(jù)進(jìn)行質(zhì)控判斷個(gè)數(shù)據(jù)進(jìn)行質(zhì)控判斷第第2121個(gè)數(shù)據(jù)開始使用常規(guī)質(zhì)控方法進(jìn)行質(zhì)控判斷個(gè)數(shù)據(jù)開始使用常規(guī)質(zhì)控方法進(jìn)行質(zhì)控判斷及

32、時(shí)查找原因，采取糾正措施及時(shí)查找原因，采取糾正措施填寫失控原因分析報(bào)告填寫失控原因分析報(bào)告相關(guān)負(fù)責(zé)人決定報(bào)告是否可發(fā)放相關(guān)負(fù)責(zé)人決定報(bào)告是否可發(fā)放核酸提取中的隨機(jī)誤差。如核酸提取中的丟失、有機(jī)溶劑核酸提取中的隨機(jī)誤差。如核酸提取中的丟失、有機(jī)溶劑的去除不徹底、標(biāo)本中擴(kuò)增抑制物的殘留等。的去除不徹底、標(biāo)本中擴(kuò)增抑制物的殘留等。 儀器的問題。如擴(kuò)增儀孔間溫度的不均一性、孔內(nèi)溫度與儀器的問題。如擴(kuò)增儀孔間溫度的不均一性、孔內(nèi)溫度與所示溫度的不一致性等。所示溫度的不一致性等。試劑的問題。如試劑的問題。如TaqTaq酶和酶和/ /或逆轉(zhuǎn)錄酶的失活、探針的純度或逆轉(zhuǎn)錄酶的失活、探針的純度及標(biāo)記效率和核酸提

33、取試劑的效率等。及標(biāo)記效率和核酸提取試劑的效率等。擴(kuò)增產(chǎn)物的擴(kuò)增產(chǎn)物的“污染污染” 臨床標(biāo)本的核酸提取過程中發(fā)生的標(biāo)本間的交叉臨床標(biāo)本的核酸提取過程中發(fā)生的標(biāo)本間的交叉 “污染污染”. .嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室分區(qū)嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室分區(qū)使用帶使用帶“濾芯濾芯”的吸頭的吸頭設(shè)立設(shè)立“陰性陰性”質(zhì)控（與標(biāo)本同時(shí)處理）質(zhì)控（與標(biāo)本同時(shí)處理）使用防使用防“污染污染”（含（含UNGUNG）的）的PCRPCR試劑試劑臨床臨床“假陽性假陽性”問題：病原微生物如結(jié)核桿菌經(jīng)藥物治療問題：病原微生物如結(jié)核桿菌經(jīng)藥物治療后已死亡，但后已死亡，但PCRPCR仍可為陽性，故治療結(jié)束后至少兩周內(nèi)不仍可為陽性，故治療結(jié)束后至少兩周內(nèi)不宜做

34、宜做PCRPCR檢測。檢測。避免由于來自于標(biāo)本的血紅蛋白、肝素、某些激素或來避免由于來自于標(biāo)本的血紅蛋白、肝素、某些激素或來自標(biāo)本處理中的去垢劑、有機(jī)溶劑的抑制作用的措施：自標(biāo)本處理中的去垢劑、有機(jī)溶劑的抑制作用的措施：純化核酸；標(biāo)本重復(fù)雙份測定；稀釋標(biāo)本純化核酸；標(biāo)本重復(fù)雙份測定；稀釋標(biāo)本定期對(duì)擴(kuò)增儀的溫度控制和加熱模塊中熱傳導(dǎo)的一致性定期對(duì)擴(kuò)增儀的溫度控制和加熱模塊中熱傳導(dǎo)的一致性進(jìn)行檢查和校準(zhǔn)進(jìn)行檢查和校準(zhǔn)在在PCRPCR試劑準(zhǔn)備區(qū)配置反應(yīng)混合液，先將試劑準(zhǔn)備區(qū)配置反應(yīng)混合液，先將dNTPdNTP、引物、酶和緩沖液混合后，再、引物、酶和緩沖液混合后，再分裝；分裝；配制反應(yīng)體系時(shí)，應(yīng)注意移

35、液器的使用方法，所有的液體都要緩慢加至管底，配制反應(yīng)體系時(shí)，應(yīng)注意移液器的使用方法，所有的液體都要緩慢加至管底，不要加至管壁，所有液體的混勻要用振蕩器進(jìn)行，不能用移液器吹打，反應(yīng)不要加至管壁，所有液體的混勻要用振蕩器進(jìn)行，不能用移液器吹打，反應(yīng)體系配制完畢后低速離心數(shù)秒，避免產(chǎn)生氣泡體系配制完畢后低速離心數(shù)秒，避免產(chǎn)生氣泡分裝的試劑注意冷藏，防止酶試劑失活及有機(jī)大分子降解分裝的試劑注意冷藏，防止酶試劑失活及有機(jī)大分子降解優(yōu)先選擇含優(yōu)先選擇含UNGUNG的試劑盒的試劑盒試劑經(jīng)充分溶解后混勻，離心后再開蓋，保持試劑均勻性試劑經(jīng)充分溶解后混勻，離心后再開蓋，保持試劑均勻性擴(kuò)增管、樣品處理管及吸頭等實(shí)

36、驗(yàn)用品，均需高壓滅菌擴(kuò)增管、樣品處理管及吸頭等實(shí)驗(yàn)用品，均需高壓滅菌標(biāo)本處理應(yīng)在標(biāo)本制備區(qū)指定的生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)前應(yīng)打開風(fēng)機(jī)標(biāo)本處理應(yīng)在標(biāo)本制備區(qū)指定的生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)前應(yīng)打開風(fēng)機(jī)5-5-10min10min，待柜內(nèi)空氣凈化并氣流穩(wěn)定后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，待柜內(nèi)空氣凈化并氣流穩(wěn)定后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作為防止標(biāo)本間交叉污染，在打開離心管前宜短暫離心為防止標(biāo)本間交叉污染，在打開離心管前宜短暫離心如遇吸棄上清步驟的提取方法，離心時(shí)應(yīng)注意離心管的方向，吸棄上清如遇吸棄上清步驟的提取方法，離心時(shí)應(yīng)注意離心管的方向，吸棄上清時(shí)不要碰到沉淀部分，以免造成提取效率降低。時(shí)不要碰到沉淀部分，以免造成提取效率降

37、低。標(biāo)本處理嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作，應(yīng)做到處理時(shí)間充分，保證標(biāo)標(biāo)本處理嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作，應(yīng)做到處理時(shí)間充分，保證標(biāo)本中的本中的DNADNA或或RNARNA完全釋放；完全釋放；將提取的核酸加到反應(yīng)體系中后，應(yīng)將純化好的剩余核酸樣本凍存，以將提取的核酸加到反應(yīng)體系中后，應(yīng)將純化好的剩余核酸樣本凍存，以免在擴(kuò)增檢測時(shí)出現(xiàn)意外需要重新檢測。在結(jié)果確定后再將這些樣本按免在擴(kuò)增檢測時(shí)出現(xiàn)意外需要重新檢測。在結(jié)果確定后再將這些樣本按生物污染廢棄物進(jìn)行處理。生物污染廢棄物進(jìn)行處理。擴(kuò)增條件一致的不同檢測項(xiàng)目同時(shí)擴(kuò)增時(shí)不得使用同一套標(biāo)準(zhǔn)品。擴(kuò)增條件一致的不同檢測項(xiàng)目同時(shí)擴(kuò)增時(shí)不得使用同一套標(biāo)準(zhǔn)品。

38、擴(kuò)增后的擴(kuò)增管不能在擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)打開處理，應(yīng)用一次性手套包擴(kuò)增后的擴(kuò)增管不能在擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)打開處理，應(yīng)用一次性手套包好遠(yuǎn)離好遠(yuǎn)離PCRPCR實(shí)驗(yàn)室的洗滌間消毒處理；實(shí)驗(yàn)室的洗滌間消毒處理；工作結(jié)束后，必須立即對(duì)各工作區(qū)進(jìn)行清潔工作結(jié)束后，必須立即對(duì)各工作區(qū)進(jìn)行清潔在判斷結(jié)果時(shí)，應(yīng)先對(duì)擴(kuò)增的熒光信號(hào)作出定性判斷，然后再在判斷結(jié)果時(shí)，應(yīng)先對(duì)擴(kuò)增的熒光信號(hào)作出定性判斷，然后再進(jìn)行定量分析，避免一些非特異熒光信號(hào)對(duì)結(jié)果分析的干擾。進(jìn)行定量分析，避免一些非特異熒光信號(hào)對(duì)結(jié)果分析的干擾。基線值（閾值）設(shè)定：遵從廠商規(guī)定基線值（閾值）設(shè)定：遵從廠商規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)曲線平滑均勻，斜率、截距和相關(guān)系數(shù)等參數(shù)的數(shù)

39、值標(biāo)準(zhǔn)曲線平滑均勻，斜率、截距和相關(guān)系數(shù)等參數(shù)的數(shù)值允許變化范圍均應(yīng)在試劑制造商推薦的范圍內(nèi)。允許變化范圍均應(yīng)在試劑制造商推薦的范圍內(nèi)。陰、陽室內(nèi)質(zhì)控檢測結(jié)果均處于在控狀態(tài)。陰、陽室內(nèi)質(zhì)控檢測結(jié)果均處于在控狀態(tài)。 以上幾項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)均達(dá)到要求后，當(dāng)日實(shí)驗(yàn)有效，可以發(fā)以上幾項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)均達(dá)到要求后，當(dāng)日實(shí)驗(yàn)有效，可以發(fā)放報(bào)告。否則，本次實(shí)驗(yàn)無效，全部標(biāo)本應(yīng)重新檢測。放報(bào)告。否則，本次實(shí)驗(yàn)無效，全部標(biāo)本應(yīng)重新檢測。定性測定中處于實(shí)驗(yàn)灰區(qū)的標(biāo)本應(yīng)重復(fù)檢測一次，灰區(qū)范定性測定中處于實(shí)驗(yàn)灰區(qū)的標(biāo)本應(yīng)重復(fù)檢測一次，灰區(qū)范圍的確定及結(jié)果報(bào)告應(yīng)遵從各試劑制造商推薦的要求。圍的確定及結(jié)果報(bào)告應(yīng)遵從各試劑制造商推薦的要求。復(fù)

40、星復(fù)星CTCT：38Ct38Ct值值4040為檢測灰區(qū)，建議重復(fù)檢測為檢測灰區(qū)，建議重復(fù)檢測2 2次。如次。如果檢測結(jié)果至少果檢測結(jié)果至少1 1次為次為Ct40Ct40判斷為陽性，否則判為陰性。判斷為陽性，否則判為陰性。達(dá)安達(dá)安CT:CT:ABI7000ABI7000：27Ct27Ct值值3030為檢測灰區(qū)，重復(fù)檢測為檢測灰區(qū)，重復(fù)檢測1 1次。如重次。如重復(fù)試驗(yàn)復(fù)試驗(yàn)CtCt值值3030判為陽性，否則判為陰性。判為陽性，否則判為陰性。Roche LightCyclerRoche LightCycler：37Ct4037Ct40為檢測灰區(qū)，重復(fù)檢測為檢測灰區(qū)，重復(fù)檢測1 1次。如重復(fù)試驗(yàn)次。如

41、重復(fù)試驗(yàn)CtCt值值4040判為陽性，否則判為陰性判為陽性，否則判為陰性定性檢測定性檢測 定性檢測的結(jié)果報(bào)定性檢測的結(jié)果報(bào)“陰性陰性”或或“陽性陽性”。但由于目。但由于目前國內(nèi)商品試劑盒的靈敏度多為前國內(nèi)商品試劑盒的靈敏度多為500-1000IU/ml500-1000IU/ml，在報(bào)告結(jié)果，在報(bào)告結(jié)果時(shí)應(yīng)告知臨床醫(yī)生方法的局限性。時(shí)應(yīng)告知臨床醫(yī)生方法的局限性。定量檢測定量檢測 1 1）結(jié)果在檢測范圍內(nèi)，則按檢測的結(jié)果直接發(fā)報(bào)告。）結(jié)果在檢測范圍內(nèi)，則按檢測的結(jié)果直接發(fā)報(bào)告。 2 2）樣本未出現(xiàn)擴(kuò)增曲線，則報(bào)告為）樣本未出現(xiàn)擴(kuò)增曲線，則報(bào)告為“低于檢測下限低于檢測下限”，不能，不能報(bào)告為報(bào)告為“0”0”或或“陰性陰性”。如果低于檢測下限，但又有擴(kuò)增曲。如果低于檢測下限，但又有擴(kuò)增曲線，則應(yīng)重新檢測，仍低于檢測下限，則報(bào)告為線，則應(yīng)重新檢測，仍低于檢測下限，則報(bào)告為“低于檢測低于檢測下限下限”。 3 3）結(jié)果高于檢測上限，則報(bào)告）結(jié)果高于檢測上限，則報(bào)告“高于檢測上限高于檢測上限”，如果需要，如果需要精確定量結(jié)果，則應(yīng)用陰性血清（漿）將樣本進(jìn)行精確定量結(jié)果，則應(yīng)用陰性血清（漿）將樣本進(jìn)行100-1000100-1000倍稀釋后再重新進(jìn)行檢測，結(jié)