實驗3 環(huán)境和人體微生物的檢驗及無菌操作技術(shù)__

1、實驗三實驗三 環(huán)境和人體微生物的檢驗及無環(huán)境和人體微生物的檢驗及無菌操作技術(shù)菌操作技術(shù)目目 的的 要要 求求n掌握從土壤中分離微生物的方法，通過檢掌握從土壤中分離微生物的方法，通過檢測環(huán)境和人體中微生物的存在，體會微生測環(huán)境和人體中微生物的存在，體會微生物分布的廣泛性。物分布的廣泛性。 n學(xué)習(xí)無菌操作的技術(shù)，掌握平板劃線分離學(xué)習(xí)無菌操作的技術(shù)，掌握平板劃線分離微生物的方法。微生物的方法。 實實 驗驗 原原 理理n 自然環(huán)境中和人及動物的體表、體內(nèi)都存在大量的自然環(huán)境中和人及動物的體表、體內(nèi)都存在大量的微生物，它們一遇到適合的條件就會大量繁殖。當(dāng)把微生物，它們一遇到適合的條件就會大量繁殖。當(dāng)把取

2、自不同來源的含菌樣品接種于含有生長發(fā)育需要的取自不同來源的含菌樣品接種于含有生長發(fā)育需要的各種營養(yǎng)成分的固體培養(yǎng)基時，就會形成肉眼可見的各種營養(yǎng)成分的固體培養(yǎng)基時，就會形成肉眼可見的微生物集體群落。微生物集體群落。 n 每種微生物群落都有其獨有的特點，如大小、顏色、每種微生物群落都有其獨有的特點，如大小、顏色、表面干燥或濕潤、隆起或扁平、粗糙或光滑、邊緣整表面干燥或濕潤、隆起或扁平、粗糙或光滑、邊緣整齊或不整齊等。因此，可以通過平板培養(yǎng)來檢測不同齊或不整齊等。因此，可以通過平板培養(yǎng)來檢測不同環(huán)境下微生物的數(shù)量、種類和特點。環(huán)境下微生物的數(shù)量、種類和特點。 實實 驗驗 材材 料料n培養(yǎng)基：培養(yǎng)基

3、：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基(PCA)、馬鈴薯葡萄馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基（糖培養(yǎng)基（PDA ）、改良高氏）、改良高氏1號培養(yǎng)基號培養(yǎng)基；n土土 樣樣：地面以下地面以下5-10cm的土壤；的土壤；n其其 他他：酒精燈、無菌棉棒、無菌生理鹽水、涂布酒精燈、無菌棉棒、無菌生理鹽水、涂布棒、記號筆、培養(yǎng)皿、吸管、磁力攪拌器；棒、記號筆、培養(yǎng)皿、吸管、磁力攪拌器；實實 驗驗 程程 序序 （無菌操作技術(shù)（無菌操作技術(shù) ） 在酒精燈火焰旁操作，將融化并冷卻至不燙手的滅菌固體在酒精燈火焰旁操作，將融化并冷卻至不燙手的滅菌固體培養(yǎng)基倒入無菌的培養(yǎng)皿，倒量為容積的培養(yǎng)基倒入無菌的培養(yǎng)皿，倒量為容積的1/31

4、/3或者覆蓋皿底或者覆蓋皿底5 5毫毫米左右米左右，然后平放到桌面待其凝固即為無菌平板。，然后平放到桌面待其凝固即為無菌平板。 倒平板倒平板稀釋涂布平板法（移液槍稀釋）稀釋涂布平板法（移液槍稀釋）實實 驗驗 程程 序序 （土樣的稀釋分離土樣的稀釋分離 ）n制備土樣懸濁液：制備土樣懸濁液：稱取土樣稱取土樣1g，迅速倒入盛有，迅速倒入盛有99ml無菌水和玻璃無菌水和玻璃球的三角瓶中，置球的三角瓶中，置入磁力棒，攪拌入磁力棒，攪拌10-15min，使土樣充分打散，使土樣充分打散，即成即成10-2的土壤懸濁液。的土壤懸濁液。n稀釋：稀釋：用無菌移液管吸用無菌移液管吸10-2的土壤懸液的土壤懸液1mL，

5、放入，放入9mL無菌水中無菌水中即為即為10-3稀釋液，如此重復(fù)，可依次制成稀釋液，如此重復(fù)，可依次制成10-310-6的稀釋液。的稀釋液。q (注意：操作時每一個稀釋度換用一支移液管，每次吸入土注意：操作時每一個稀釋度換用一支移液管，每次吸入土液后，要將移液管插入液面，吹吸液后，要將移液管插入液面，吹吸3次，每次吸上的液面要高次，每次吸上的液面要高于前一次，以減少稀釋中的誤差。于前一次，以減少稀釋中的誤差。) 土樣的稀釋方法示意圖土樣的稀釋方法示意圖圖圖1 1 從土壤中分離微生物操作過程從土壤中分離微生物操作過程實實 驗驗 程程 序序 （環(huán)境及人體各部位取菌樣（環(huán)境及人體各部位取菌樣 ） 共

6、取六個菌樣，分別為：共取六個菌樣，分別為：口腔、鼻腔、頭發(fā)、口腔、鼻腔、頭發(fā)、空氣空氣和土壤稀釋液中的和土壤稀釋液中的1010-5-5、1010-6-6兩個稀釋濃（無兩個稀釋濃（無菌吸管分別取菌吸管分別取0.2ml0.2ml，無菌操作加到平板上），無菌操作加到平板上） 口腔口腔: : 將無菌平板打開適度開口，嘴對著開口咳嗽將無菌平板打開適度開口，嘴對著開口咳嗽3-5次，使口次，使口 腔中的微生物接種到平板中，將皿蓋合上，放在桌面即可。腔中的微生物接種到平板中，將皿蓋合上，放在桌面即可。 鼻腔：鼻腔：取一支無菌棉棒，放入無菌生理鹽水中沾濕后，插入到鼻取一支無菌棉棒，放入無菌生理鹽水中沾濕后，插入

7、到鼻孔中轉(zhuǎn)動一周，取出，在無菌平板上劃線接種，取出棉棒，合上孔中轉(zhuǎn)動一周，取出，在無菌平板上劃線接種，取出棉棒，合上皿蓋。皿蓋。 頭發(fā)：頭發(fā)：將皿蓋打開，輕拍頭發(fā)，使頭發(fā)中的微生物降落到平板表將皿蓋打開，輕拍頭發(fā)，使頭發(fā)中的微生物降落到平板表面，合上皿蓋。面，合上皿蓋。 空氣：空氣：選好地點后，打開皿蓋，手托住平板，選好地點后，打開皿蓋，手托住平板，靜止靜止3-5分鐘分鐘，使，使空氣中的微生物自然降落到平板表面，合上皿蓋。空氣中的微生物自然降落到平板表面，合上皿蓋。 1010-5-5 、1010-6-6的土壤稀釋液的土壤稀釋液：無菌移液槍：無菌移液槍或吸管或吸管分別取分別取0.2ml，無，無菌

8、操作加到兩種平板上，每個稀釋度做兩套平板）。菌操作加到兩種平板上，每個稀釋度做兩套平板）。 實實 驗驗 程程 序序 （標(biāo)記、培養(yǎng)（標(biāo)記、培養(yǎng) ） n標(biāo)記：標(biāo)記： 培養(yǎng)類別培養(yǎng)類別- -組別組別- - 樣品類別樣品類別- -姓名姓名 1、按培養(yǎng)基類別：按培養(yǎng)基類別：細菌培養(yǎng)基細菌培養(yǎng)基-A-A，霉菌培養(yǎng)基，霉菌培養(yǎng)基-B-B，放線菌，放線菌培養(yǎng)基培養(yǎng)基-C C 2、按按3 3個大組：個大組：、 、 3、按樣品類別：按樣品類別：1010-5-5、1010-6-6、口腔、口腔-a-a、鼻腔、鼻腔-b-b、 頭發(fā)頭發(fā)-c-c、空氣空氣-d-d 4、按個人標(biāo)記：按個人標(biāo)記：姓名姓名n培養(yǎng)：培養(yǎng)：將接種的平板分別放入細菌和霉菌培養(yǎng)箱中培將接種的平板分別放入細菌和霉菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。養(yǎng)。25-25-3030下下霉菌霉菌培養(yǎng)培養(yǎng)3-53-5天天、放線菌培養(yǎng)、放線菌培養(yǎng)5-75-7天天，；35-3735-37下下細菌細菌