第八章液相色譜法ppt課件

1、第八章第八章 液相色譜分析液相色譜分析 n第一節(jié)第一節(jié) 概述概述n第二節(jié)第二節(jié) 柱色譜法柱色譜法n第三節(jié)第三節(jié) 薄層色譜法薄層色譜法n第四節(jié)第四節(jié) 紙色譜法紙色譜法色譜法色譜法(chromatography)概述概述歷史：歷史：1903年，俄國植物學(xué)家年，俄國植物學(xué)家Mikhail Tswett 最先最先發(fā)明。他采用填充有固體發(fā)明。他采用填充有固體CaCO3細(xì)粒子的玻細(xì)粒子的玻璃柱，將植物色素的混合物璃柱，將植物色素的混合物(葉綠素和葉黃葉綠素和葉黃素素 chlorophylls & xanthophylls)加于柱頂端加于柱頂端，然后以石油醚淋洗，被分別的組份在柱中，然后以石油醚淋洗

2、，被分別的組份在柱中顯示了不同的色帶，他稱之為色譜顯示了不同的色帶，他稱之為色譜 (希臘語希臘語 “chroma=color; “graphein=write) 。概述概述 在色譜法中，將填入玻璃管或不銹鋼管內(nèi)靜止不動(dòng)的一相固體或液體稱為固定相 ；自上而下運(yùn)動(dòng)的一相普通是氣體或液體稱為流動(dòng)相；裝有固定相的管子玻璃管或不銹鋼管稱為色譜柱 。當(dāng)流動(dòng)相中樣品混合物經(jīng)過固定相時(shí)，就會(huì)與固定相發(fā)生作用，由于各組分在性質(zhì)和構(gòu)造上的差別，與固定相互相作用的類型、強(qiáng)弱也有差別，因此在同一推進(jìn)力的作用下，不同組分在固定相滯留時(shí)間長短不同，從而按先后不同的次序從固定相中流出。色譜法的分類色譜法的分類n按兩相形狀分

3、類按兩相形狀分類n 固定相固定相 流動(dòng)相流動(dòng)相n 1. 氣體為流動(dòng)相的色譜稱氣相色譜氣體為流動(dòng)相的色譜稱氣相色譜n gas chromatography , GC固體固體液體液體液體液體氣體氣體氣相色譜氣相色譜氣氣-固色譜固色譜GSC氣氣-液色譜液色譜GLC色譜法的分類色譜法的分類2. 液體為流動(dòng)相的色譜稱液相色譜液體為流動(dòng)相的色譜稱液相色譜 liqud chromatography, LC 液相色譜液相色譜液液-固色譜固色譜LSC液液-液色譜液色譜LLC色譜法的分類色譜法的分類n按分別機(jī)理分類按分別機(jī)理分類n 1. 1. 利用組分在吸附劑固定相上的吸附利用組分在吸附劑固定相上的吸附才干強(qiáng)弱不

4、同而得以分別的方法，稱為吸附色譜才干強(qiáng)弱不同而得以分別的方法，稱為吸附色譜法。法。n 2. 2. 利用組分在固定液固定相中溶利用組分在固定液固定相中溶解度不同而到達(dá)分別的方法稱為分配色譜法。解度不同而到達(dá)分別的方法稱為分配色譜法。n 3. 3. 利用組分在離子交換劑固定相利用組分在離子交換劑固定相上的親和力大小不同而到達(dá)分別的方法，稱為離上的親和力大小不同而到達(dá)分別的方法，稱為離子交換色譜法。子交換色譜法。色譜法的分類色譜法的分類 4. 利用大小不同的分子在多孔固定相中的選利用大小不同的分子在多孔固定相中的選擇浸透而到達(dá)分別的方法，稱為凝膠色譜法或分擇浸透而到達(dá)分別的方法，稱為凝膠色譜法或分子

5、排阻色譜法。子排阻色譜法。 最近，又有一種新分別技術(shù)，利用不同組分最近，又有一種新分別技術(shù)，利用不同組分與固定相固定化分子的高專屬性親和力進(jìn)展與固定相固定化分子的高專屬性親和力進(jìn)展分別的技術(shù)稱為親和色譜法，常用于蛋白質(zhì)的分分別的技術(shù)稱為親和色譜法，常用于蛋白質(zhì)的分別。別。色譜法的分類色譜法的分類吸附色譜：不同組份在固定相的吸附作用不同；吸附色譜：不同組份在固定相的吸附作用不同；分配色譜：不同組份在固定相上的溶解才干不同；分配色譜：不同組份在固定相上的溶解才干不同；離子交換色譜：不同組份在固定相離子交換劑上的離子交換色譜：不同組份在固定相離子交換劑上的親和力不同；親和力不同；凝膠色譜尺寸排阻色譜

6、凝膠色譜尺寸排阻色譜: :不同尺寸分子在固定相上不同尺寸分子在固定相上的浸透作用。的浸透作用。色譜法的分類色譜法的分類n 按操作方式分類按操作方式分類n 1. 固定相裝于柱內(nèi)的色譜法，稱為柱色譜。固定相裝于柱內(nèi)的色譜法，稱為柱色譜。n 2. 固定相呈平板狀的色譜，稱為平板色譜，固定相呈平板狀的色譜，稱為平板色譜，它又可分為薄層色譜和紙色譜。它又可分為薄層色譜和紙色譜。色譜法根本原理色譜法根本原理分配系數(shù)分配系數(shù)K 在一定溫度和壓力下，組分在固定相在一定溫度和壓力下，組分在固定相和流動(dòng)相之間分配達(dá)平衡時(shí)的濃度和流動(dòng)相之間分配達(dá)平衡時(shí)的濃度(或溶解或溶解度度)之比值，即之比值，即 msCCK溶溶質(zhì)

7、質(zhì)在在流流動(dòng)動(dòng)相相中中的的濃濃度度溶溶質(zhì)質(zhì)在在固固定定相相中中的的濃濃度度分分配配系系數(shù)數(shù) 色譜法根本原理色譜法根本原理色譜機(jī)理不同，分配系數(shù)的含義不同：色譜機(jī)理不同，分配系數(shù)的含義不同： 吸附色譜吸附色譜 K為吸附平衡常數(shù)為吸附平衡常數(shù) 分配色譜分配色譜 K為分配系數(shù)為分配系數(shù) 離子交換色譜離子交換色譜 K為交換系數(shù)為交換系數(shù) 分子排阻色譜分子排阻色譜 K為浸透系數(shù)為浸透系數(shù)色譜法根本原理色譜法根本原理色譜分別過程的特點(diǎn)色譜分別過程的特點(diǎn): 1. 差速遷移差速遷移; 2. 譜帶擴(kuò)展譜帶擴(kuò)展.色譜法的定義色譜法的定義: 色譜法是利用混合物各組分在兩相色譜法是利用混合物各組分在兩相(固定相固定相

8、和流動(dòng)相和流動(dòng)相) 中分布的差別，使固定相對(duì)各組分的中分布的差別，使固定相對(duì)各組分的保管作用不同產(chǎn)生差速遷移而得到分別的一種物保管作用不同產(chǎn)生差速遷移而得到分別的一種物理化學(xué)分別分析方法。理化學(xué)分別分析方法。色譜法根本原理色譜法根本原理分配系數(shù)與保管行為的關(guān)系分配系數(shù)與保管行為的關(guān)系 溶質(zhì)在色譜柱中被保管的程度常用保管比溶質(zhì)在色譜柱中被保管的程度常用保管比retention ratioR 表示。表示。 R 1 RmttR的的時(shí)時(shí)間間溶溶質(zhì)質(zhì)通通過過色色譜譜柱柱所所需需要要的的時(shí)時(shí)間間溶溶劑劑通通過過色色譜譜柱柱所所需需要要保保留留比比 第二節(jié)第二節(jié) 柱色譜法柱色譜法一、液固吸附柱色譜法一、液固

9、吸附柱色譜法二、液液分配柱色譜法二、液液分配柱色譜法三、離子交換柱色譜法三、離子交換柱色譜法四、凝膠柱色譜法四、凝膠柱色譜法五、柱色譜法的運(yùn)用五、柱色譜法的運(yùn)用第二節(jié)第二節(jié) 柱色譜法柱色譜法 將固定相均勻填在金屬或玻璃制成的管中做將固定相均勻填在金屬或玻璃制成的管中做成層析柱，并以此進(jìn)展分別的方法叫柱色譜法。成層析柱，并以此進(jìn)展分別的方法叫柱色譜法。根據(jù)作用原理，可分為：根據(jù)作用原理，可分為：吸附柱色譜法吸附柱色譜法分配柱色譜法分配柱色譜法離子交換柱色譜法離子交換柱色譜法凝膠柱色譜法凝膠柱色譜法第二節(jié)第二節(jié) 柱色譜法柱色譜法一、液固吸附色譜法一、液固吸附色譜法liquid-solid adso

10、rption chromatography 固定相固定相固體吸附劑固體吸附劑 流動(dòng)相流動(dòng)相液體液體原理：原理： 利用吸附劑對(duì)不同組分的吸附才利用吸附劑對(duì)不同組分的吸附才干的差別而實(shí)行分別。干的差別而實(shí)行分別。第二節(jié)第二節(jié) 柱色譜法柱色譜法n吸附作用吸附作用n 固體吸附劑是一些多孔性物質(zhì)，外表上有固體吸附劑是一些多孔性物質(zhì)，外表上有許多吸附點(diǎn)或稱吸附中心。吸附劑之所以具有吸許多吸附點(diǎn)或稱吸附中心。吸附劑之所以具有吸附作用，主要靠吸附劑外表的吸附點(diǎn)位。附作用，主要靠吸附劑外表的吸附點(diǎn)位。n硅膠吸附劑：硅膠吸附劑：SiOH第二節(jié)第二節(jié) 柱色譜法柱色譜法n吸附平衡吸附平衡n Xm+nYa Xa+nYm

11、n吸附平衡常數(shù)吸附平衡常數(shù)n式中：式中：n X溶質(zhì)分子；溶質(zhì)分子；Y流動(dòng)相分子流動(dòng)相分子n m流動(dòng)相；流動(dòng)相；n流動(dòng)相分子系數(shù)；流動(dòng)相分子系數(shù)；a吸吸附劑外表附劑外表n 組分的吸附系數(shù)組分的吸附系數(shù)Ka越大，越容易被吸附，越大，越容易被吸附，保管時(shí)間越長，流出色譜柱就越慢。保管時(shí)間越長，流出色譜柱就越慢。 namnmaYXYX aK第二節(jié)第二節(jié) 柱色譜法柱色譜法吸附劑極其選擇吸附劑極其選擇對(duì)吸附劑的要求：對(duì)吸附劑的要求： 1. 具有較大的外表積與適宜的活性。具有較大的外表積與適宜的活性。 2. 與流動(dòng)相極其樣品中各組分不發(fā)生與流動(dòng)相極其樣品中各組分不發(fā)生化學(xué)反響，在流動(dòng)相中不溶解?；瘜W(xué)反響，在

12、流動(dòng)相中不溶解。 3. 吸附劑顆粒應(yīng)有一定的細(xì)度，并且吸附劑顆粒應(yīng)有一定的細(xì)度，并且顆粒要均勻。顆粒要均勻。第二節(jié)第二節(jié) 柱色譜法柱色譜法常用的吸附劑有：常用的吸附劑有： 氧化鋁、硅膠、聚酰胺氧化鋁、硅膠、聚酰胺硅膠：硅膠： 呈微酸性呈微酸性 適用于分別酸性和中性物質(zhì)，如：有機(jī)酸、適用于分別酸性和中性物質(zhì)，如：有機(jī)酸、氨基酸、萜類、甾類等的分別。氨基酸、萜類、甾類等的分別。SiSiOSiOHSiOH H2O硅膠具有多孔性的硅氧交聯(lián)構(gòu)造硅膠具有多孔性的硅氧交聯(lián)構(gòu)造硅膠骨架外表有許多硅醇基硅膠骨架外表有許多硅醇基硅膠骨架外表的羥基與水硅膠骨架外表的羥基與水結(jié)合構(gòu)成水合硅醇基結(jié)合構(gòu)成水合硅醇基第二節(jié)

13、第二節(jié) 柱色譜法柱色譜法硅膠構(gòu)造硅膠構(gòu)造SiOHSiOHSiSiOH2O 加熱加熱500oC時(shí)，交聯(lián)內(nèi)部的構(gòu)造水不可逆的失去，時(shí)，交聯(lián)內(nèi)部的構(gòu)造水不可逆的失去，硅醇構(gòu)造變?yōu)楣柩跬闃?gòu)造。硅醇構(gòu)造變?yōu)楣柩跬闃?gòu)造。硅膠構(gòu)造硅膠構(gòu)造第二節(jié)第二節(jié) 柱色譜法柱色譜法氧化鋁氧化鋁 堿性堿性pH = 9 10 中性中性pH 7.5 酸性酸性pH = 5 4 堿性氧化鋁適用于分堿性和中性物質(zhì)分別，如堿性氧化鋁適用于分堿性和中性物質(zhì)分別，如生物堿。生物堿。中性氧化鋁適用于分別生物堿、揮發(fā)油、萜類、中性氧化鋁適用于分別生物堿、揮發(fā)油、萜類、甾類、酯類等。甾類、酯類等。 酸性氧化鋁適用于分別酸性氧化物，如氨基酸、酸性

14、氧化鋁適用于分別酸性氧化物，如氨基酸、酸性色素等。酸性色素等。第二節(jié)第二節(jié) 柱色譜法柱色譜法氧化鋁的分別機(jī)理氧化鋁的分別機(jī)理OHAl第二節(jié)第二節(jié) 柱色譜法柱色譜法流動(dòng)相的選擇流動(dòng)相的選擇應(yīng)思索以下三個(gè)方面：應(yīng)思索以下三個(gè)方面： 1. 被分別物質(zhì)的構(gòu)造與性質(zhì)被分別物質(zhì)的構(gòu)造與性質(zhì) 2. 吸附劑的性能吸附劑的性能 3. 流動(dòng)相的極性流動(dòng)相的極性選擇的規(guī)律選擇的規(guī)律: 試樣組分的極性大，應(yīng)選用吸附活性試樣組分的極性大，應(yīng)選用吸附活性較弱的吸附劑，極性較大的流動(dòng)相；試樣較弱的吸附劑，極性較大的流動(dòng)相；試樣組分的極性較小，應(yīng)選用吸附活性較強(qiáng)的組分的極性較小，應(yīng)選用吸附活性較強(qiáng)的吸附劑，極性較小的流動(dòng)相；

15、吸附劑，極性較小的流動(dòng)相；第二節(jié)第二節(jié) 柱色譜法柱色譜法常見取代基的極性猶大到小的順序是：常見取代基的極性猶大到小的順序是：烷烴烷烴 烯烴烯烴 醚類醚類 硝基化合物硝基化合物 二甲胺二甲胺 酯類酯類 酮類酮類 醛類醛類 硫醇硫醇 胺類胺類 酰胺酰胺 醇類醇類 酚類酚類 羧酸類羧酸類第二節(jié)第二節(jié) 柱色譜法柱色譜法常用流動(dòng)相的極性由強(qiáng)到弱的順序?yàn)椋撼Ｓ昧鲃?dòng)相的極性由強(qiáng)到弱的順序?yàn)椋菏兔咽兔?環(huán)己烷環(huán)己烷 四氯化碳四氯化碳 苯苯 甲苯甲苯 乙醚乙醚 氯仿氯仿 醋酸乙酯醋酸乙酯 正丁醇正丁醇 丙酮丙酮 乙醇乙醇 甲醇甲醇 水水第二節(jié)第二節(jié) 柱色譜法柱色譜法二、液液分配色譜二、液液分配色譜liqui

16、d- liquid partition chromatography 固定相固定相液體液體 流動(dòng)相流動(dòng)相液體液體原理：原理： 利用混合物中不同的組分在兩相利用混合物中不同的組分在兩相中有著不同的分配系數(shù)溶解度而中有著不同的分配系數(shù)溶解度而實(shí)行分別的。實(shí)行分別的。第二節(jié)第二節(jié) 柱色譜法柱色譜法固定相固定相 分配柱色譜法的固定相由擔(dān)體和固定分配柱色譜法的固定相由擔(dān)體和固定液組成。液組成。擔(dān)體載體：擔(dān)體載體： 是一種惰性物質(zhì)，不具吸附作用，只是一種惰性物質(zhì)，不具吸附作用，只起負(fù)載固定液的作用。起負(fù)載固定液的作用。常用的擔(dān)體有：多孔硅藻土、纖維素、硅常用的擔(dān)體有：多孔硅藻土、纖維素、硅膠等。膠等。第二

17、節(jié)第二節(jié) 柱色譜法柱色譜法流動(dòng)相流動(dòng)相 分配色譜中的流動(dòng)相與固定相的分配色譜中的流動(dòng)相與固定相的極性應(yīng)相差很大，才干互不相溶。極性應(yīng)相差很大，才干互不相溶。常用的流動(dòng)相：常用的流動(dòng)相： 石油醚、醇類、酮類、酯類、鹵石油醚、醇類、酮類、酯類、鹵代烷及苯或它們的混合物。代烷及苯或它們的混合物。第二節(jié)第二節(jié) 柱色譜法柱色譜法三、離子交換色譜法三、離子交換色譜法 ion-exchange chromatography 固定相固定相離子交換樹脂離子交換樹脂 流動(dòng)相流動(dòng)相水溶液水溶液分別對(duì)象：分別對(duì)象： 離子型化合物離子型化合物原理：原理： 利用各種離子對(duì)交樹脂的競爭交換利用各種離子對(duì)交樹脂的競爭交換才干

18、不同才干不同 而實(shí)行分別的。而實(shí)行分別的。第二節(jié)第二節(jié) 柱色譜法柱色譜法n離子交換樹脂的分類離子交換樹脂的分類陽離子交換樹脂陽離子交換樹脂陰離子交換樹脂陰離子交換樹脂離子交換樹脂離子交換樹脂第二節(jié)第二節(jié) 柱色譜法柱色譜法陽離子交換樹脂陽離子交換樹脂 在樹脂骨架構(gòu)造上引入的是酸性基團(tuán)，如磺在樹脂骨架構(gòu)造上引入的是酸性基團(tuán)，如磺酸基酸基SO3H，羧基，羧基COOH和酚羥基和酚羥基OH等。等。這些酸性基團(tuán)上的這些酸性基團(tuán)上的H+可以和溶液中陽離子發(fā)生可以和溶液中陽離子發(fā)生交換反響，故有陽離子交換樹脂之稱。交換反響，故有陽離子交換樹脂之稱。陽離子交換反響為：陽離子交換反響為： nRSO3H+Mn+ (

19、RSO3)nM+nH+交交換換洗洗脫脫第二節(jié)第二節(jié) 柱色譜法柱色譜法陰離子交換樹脂陰離子交換樹脂 在樹脂骨架構(gòu)造上引入的是堿性基團(tuán)，如在樹脂骨架構(gòu)造上引入的是堿性基團(tuán)，如季胺基季胺基N(CH3)3+，伯胺基，伯胺基NH2和仲胺基和仲胺基NHCH3等。那么這些堿性基團(tuán)上的等。那么這些堿性基團(tuán)上的OH-可以和可以和溶液中陰離子發(fā)生交換反響，故有陰離子交換樹溶液中陰離子發(fā)生交換反響，故有陰離子交換樹脂之稱。脂之稱。陰離子交換反響為：陰離子交換反響為：RN(CH3)3OH+Cl RN(CH3)3Cl+OH交交換換洗洗脫脫第二節(jié)第二節(jié) 柱色譜法柱色譜法離子交換平衡離子交換平衡離子交換反響用下面通式表示離

20、子交換反響用下面通式表示:當(dāng)反響到達(dá)平衡時(shí)當(dāng)反響到達(dá)平衡時(shí),可用交換平衡常數(shù)可用交換平衡常數(shù) 表示表示:R-A+B+R-B+A+ BAABrrABKBAKA+r、B+r分別分別表示樹脂中表示樹脂中A+、B+離子濃度離子濃度A+、B+分別表分別表示水溶液中示水溶液中A+、B+離子濃度離子濃度第二節(jié)第二節(jié) 柱色譜法柱色譜法選擇系數(shù)與分配系數(shù)的關(guān)系可表示如下：選擇系數(shù)與分配系數(shù)的關(guān)系可表示如下： KB/A大；大；KB大；大； A+先出先出 KB/A??；??；KA大；大； B+先出先出 ABrrrrABAABBBAABKKK 第二節(jié)第二節(jié) 柱色譜法柱色譜法四、凝膠柱色譜法四、凝膠柱色譜法size- ex

21、clusion chromatography 固定相固定相交換樹脂交換樹脂 流動(dòng)相流動(dòng)相水溶液水溶液分別對(duì)象：分別對(duì)象： 蛋白質(zhì)及其它大分子化合物蛋白質(zhì)及其它大分子化合物原理：原理： 按分子大小分別。小分子可以分散到凝按分子大小分別。小分子可以分散到凝膠空隙，由其中經(jīng)過，出峰最慢；中等分膠空隙，由其中經(jīng)過，出峰最慢；中等分子只能經(jīng)過部分凝膠空隙，中速經(jīng)過；而子只能經(jīng)過部分凝膠空隙，中速經(jīng)過；而大分子被排斥在外，出峰最快；溶劑分子大分子被排斥在外，出峰最快；溶劑分子小，故在最后出峰。小，故在最后出峰。親和色譜親和色譜ACAffinity chromatograph了解了解 原理：利用生物大分子和

22、固定相外表存在的某種特異性原理：利用生物大分子和固定相外表存在的某種特異性親和力，進(jìn)展選擇性分別。親和力，進(jìn)展選擇性分別。 先在載體外表鍵合上一先在載體外表鍵合上一種具有普通反響性能的所種具有普通反響性能的所謂間隔臂謂間隔臂(環(huán)氧、聯(lián)胺等環(huán)氧、聯(lián)胺等)，再銜接上配基再銜接上配基(酶、抗原等酶、抗原等)，這種固載化的配基將只，這種固載化的配基將只能和具有親和力特性吸附能和具有親和力特性吸附的生物大分子作用而被保的生物大分子作用而被保管。改動(dòng)淋洗液后洗脫。管。改動(dòng)淋洗液后洗脫。第二節(jié)第二節(jié) 柱色譜法柱色譜法柱色譜法的運(yùn)用柱色譜法的運(yùn)用 1. 分別純制分別純制 2. 鹽類的測定鹽類的測定第三節(jié)第三節(jié)

23、 薄層色譜法薄層色譜法n根本原理根本原理n吸附劑的選擇吸附劑的選擇n展開劑的選擇展開劑的選擇n操作的方法操作的方法n定性和定量分析定性和定量分析第三節(jié)第三節(jié) 薄層色譜法薄層色譜法 將固定相均勻地鋪在具有光潔外表的玻璃、將固定相均勻地鋪在具有光潔外表的玻璃、塑料或金屬薄片外表上構(gòu)成薄層，在此薄層上進(jìn)塑料或金屬薄片外表上構(gòu)成薄層，在此薄層上進(jìn)展色譜分別的方法稱為薄層色譜法。展色譜分別的方法稱為薄層色譜法。根據(jù)作用原理，可分為：根據(jù)作用原理，可分為：吸附柱色譜法吸附柱色譜法分配柱色譜法分配柱色譜法離子交換柱色譜法離子交換柱色譜法凝膠柱色譜法凝膠柱色譜法第三節(jié)第三節(jié) 薄層色譜法薄層色譜法薄層色譜法的特

24、點(diǎn)：薄層色譜法的特點(diǎn)： 1. 展開時(shí)間短；展開時(shí)間短； 2. 分別才干強(qiáng)；分別才干強(qiáng)； 3. 靈敏度高；靈敏度高； 4. 顯色方便；顯色方便； 5. 設(shè)備簡單，操作方便。設(shè)備簡單，操作方便。第三節(jié)第三節(jié) 薄層色譜法薄層色譜法薄層色譜法的特點(diǎn)薄層色譜法的特點(diǎn) 設(shè)備簡單，操作方便。只須一塊玻璃板和一個(gè)層析設(shè)備簡單，操作方便。只須一塊玻璃板和一個(gè)層析缸。分析原理與經(jīng)典柱上色譜一樣、但是在敞開的薄層缸。分析原理與經(jīng)典柱上色譜一樣、但是在敞開的薄層上可以檢查混合物的成分能否分開可察看?？焖?，展開上可以檢查混合物的成分能否分開可察看。快速，展開的時(shí)間短。比紙上色譜快速。普通紙上色譜需求幾小時(shí)的時(shí)間短。比紙

25、上色譜快速。普通紙上色譜需求幾小時(shí)至幾十小時(shí)薄層色譜普通只需十幾分鐘或幾非常鐘。運(yùn)至幾十小時(shí)薄層色譜普通只需十幾分鐘或幾非常鐘。運(yùn)用無機(jī)吸附劑，薄層色譜可以采用腐蝕性的顯色劑，如用無機(jī)吸附劑，薄層色譜可以采用腐蝕性的顯色劑，如濃硫酸、濃鹽酸和濃磷酸。對(duì)于特別難以檢出的化合物，濃硫酸、濃鹽酸和濃磷酸。對(duì)于特別難以檢出的化合物，可以噴以濃硫酸，然后小心加熱，使有機(jī)物碳化，顯棕可以噴以濃硫酸，然后小心加熱，使有機(jī)物碳化，顯棕斑點(diǎn)，紙紙上色譜那么無法檢出。廣泛地選用各種固定斑點(diǎn)，紙紙上色譜那么無法檢出。廣泛地選用各種固定相，比紙上色譜有顯著的靈敏性。廣泛地選用各流動(dòng)相，相，比紙上色譜有顯著的靈敏性。廣

26、泛地選用各流動(dòng)相，比氣相色譜靈敏。比氣相色譜靈敏。第三節(jié)第三節(jié) 薄層色譜法薄層色譜法n紙上色譜法斑點(diǎn)的分散作用嚴(yán)重，降低了單位面積小樣紙上色譜法斑點(diǎn)的分散作用嚴(yán)重，降低了單位面積小樣品的濃度，降低檢出靈敏度。薄層色譜法分散作用較少，品的濃度，降低檢出靈敏度。薄層色譜法分散作用較少，斑點(diǎn)比較密集，檢以靈敏度較高。薄層色譜法適于分析斑點(diǎn)比較密集，檢以靈敏度較高。薄層色譜法適于分析小量樣品小量樣品(普通兒到幾十微克，甚至小到上述的普通兒到幾十微克，甚至小到上述的l-11)，也，也適于大量樣品的分別可以分別出幾毫克甚至幾十毫克適于大量樣品的分別可以分別出幾毫克甚至幾十毫克組分。可以采用多種展開方式：如

27、，雙向展開，多次組分?？梢圆捎枚喾N展開方式：如，雙向展開，多次展開，分步展開，延續(xù)展開；分別原理是的物理化學(xué)原展開，分步展開，延續(xù)展開；分別原理是的物理化學(xué)原理，例如，吸附色譜，分配色譜，離于交換，薄層電泳，理，例如，吸附色譜，分配色譜，離于交換，薄層電泳，薄層等電聚焦。適于分析熱不穩(wěn)定，難揮發(fā)的樣品。薄層等電聚焦。適于分析熱不穩(wěn)定，難揮發(fā)的樣品。 第三節(jié)第三節(jié) 薄層色譜法薄層色譜法薄層色譜法分別原理薄層色譜法分別原理 薄層色譜分別法是將薄層色譜分別法是將固定相吸附劑均勻地涂在固定相吸附劑均勻地涂在玻璃上制成薄層板，試樣玻璃上制成薄層板，試樣中的各組分在固定相和作中的各組分在固定相和作為展開劑

28、的流動(dòng)相之間不為展開劑的流動(dòng)相之間不斷地發(fā)生溶解、吸附、再斷地發(fā)生溶解、吸附、再溶解、再吸附的分配過程。溶解、再吸附的分配過程。不同物質(zhì)上升的間隔不一不同物質(zhì)上升的間隔不一樣而構(gòu)成相互分開的斑點(diǎn)樣而構(gòu)成相互分開的斑點(diǎn)從而到達(dá)分別。從而到達(dá)分別。BAabcRf值的丈量表示圖值的丈量表示圖n比移值與相對(duì)比移值比移值與相對(duì)比移值n比移值比移值n 試樣展開后各組分斑試樣展開后各組分斑點(diǎn)在薄板上的位置可用比點(diǎn)在薄板上的位置可用比移值移值Rf來表示。來表示。原點(diǎn)至溶劑前沿的距離原點(diǎn)至溶劑前沿的距離原點(diǎn)至斑點(diǎn)中心的距離原點(diǎn)至斑點(diǎn)中心的距離 fRcbRcaR ffBA組組分分的的組組分分的的第三節(jié)第三節(jié) 薄層

29、色譜法薄層色譜法第三節(jié)第三節(jié) 薄層色譜法薄層色譜法Rf 取值范圍取值范圍: 0 1Rf 可用范圍可用范圍: 0.2 0.8Rf 最正確范圍最正確范圍: 0.3 0.5第三節(jié)第三節(jié) 薄層色譜法薄層色譜法n相對(duì)比移值相對(duì)比移值11ststst RRR或或心的距離心的距離原點(diǎn)到參考物質(zhì)斑點(diǎn)中原點(diǎn)到參考物質(zhì)斑點(diǎn)中心的距離心的距離原點(diǎn)到試樣組分斑點(diǎn)中原點(diǎn)到試樣組分斑點(diǎn)中第三節(jié)第三節(jié) 薄層色譜法薄層色譜法吸附劑的選擇吸附劑的選擇硅膠：微酸性極性固定相，常用吸附劑，硅膠：微酸性極性固定相，常用吸附劑，其活度與含水量有關(guān)，適用于酸性、中性其活度與含水量有關(guān)，適用于酸性、中性物質(zhì)分別。物質(zhì)分別。氧化鋁：堿性極性

30、固定相，適用于堿性、氧化鋁：堿性極性固定相，適用于堿性、中性物質(zhì)分別，根據(jù)制備時(shí)的中性物質(zhì)分別，根據(jù)制備時(shí)的pH不同，又不同，又分為堿性、中性和酸性。分為堿性、中性和酸性。聚酰胺：含有酰胺基極性固定相，適用于聚酰胺：含有酰胺基極性固定相，適用于酚類、醇類化合物的分別酚類、醇類化合物的分別 (分別易生成氫鍵分別易生成氫鍵的極性化合物的極性化合物)。纖維素：含有羥基的極性固定相，適用于纖維素：含有羥基的極性固定相，適用于分別親水性物質(zhì)分別親水性物質(zhì) (極性有機(jī)化合物及金屬陽極性有機(jī)化合物及金屬陽離子、陰離子分別離子、陰離子分別)。第三節(jié)第三節(jié) 薄層色譜法薄層色譜法展開劑的選擇展開劑的選擇 在吸附薄

31、層色譜中，在吸附薄層色譜中，選擇展開劑的普通原那選擇展開劑的普通原那么和吸附柱色譜中選那么和吸附柱色譜中選那么流動(dòng)相的原那么類似。么流動(dòng)相的原那么類似。即極性大的組分需用極即極性大的組分需用極性大展開劑，極性小的性大展開劑，極性小的組分需用極性小展開劑。組分需用極性小展開劑。第三節(jié)第三節(jié) 薄層色譜法薄層色譜法吸附劑和展開劑的普通選擇原那么是：非極吸附劑和展開劑的普通選擇原那么是：非極性組分的分別選用活性強(qiáng)的吸附劑，用非極性展性組分的分別選用活性強(qiáng)的吸附劑，用非極性展開劑；極性組分的分別，選用活性弱的吸附劑，開劑；極性組分的分別，選用活性弱的吸附劑，用極性展開劑。實(shí)踐任務(wù)中要經(jīng)過多次實(shí)驗(yàn)來確用極

32、性展開劑。實(shí)踐任務(wù)中要經(jīng)過多次實(shí)驗(yàn)來確定。定。第三節(jié)第三節(jié) 薄層色譜法薄層色譜法薄層色譜法中常用的溶劑，按由弱薄層色譜法中常用的溶劑，按由弱到強(qiáng)的極性順序陳列是：到強(qiáng)的極性順序陳列是：石油醚石油醚 環(huán)己烷環(huán)己烷 二硫化碳二硫化碳 四四氯化碳氯化碳 三氯乙烷三氯乙烷 苯苯 甲苯甲苯 二氯甲烷二氯甲烷 氯仿氯仿 乙醚乙醚 乙酸乙乙酸乙酯酯 丙酮丙酮 正丙醇正丙醇 乙醇乙醇 甲醇甲醇 吡啶吡啶 酸酸 水水第三節(jié)第三節(jié) 薄層色譜法薄層色譜法操作方法操作方法薄層色譜法的普通操作程薄層色譜法的普通操作程序序: 1. 制板制板 2. 點(diǎn)樣點(diǎn)樣 定性分析用玻璃定性分析用玻璃毛細(xì)管點(diǎn)樣毛細(xì)管點(diǎn)樣 定量用微量注射

33、定量用微量注射器器 3. 展開展開 4. 顯色顯色第三節(jié)第三節(jié) 薄層色譜法薄層色譜法n展開方式展開方式上行法：展開速度慢、容易上行法：展開速度慢、容易到達(dá)平衡，分別效果好到達(dá)平衡，分別效果好n下行法：展開速度快、適用下行法：展開速度快、適用于易分別的組分分別于易分別的組分分別雙向法：運(yùn)用兩種展開劑、雙向法：運(yùn)用兩種展開劑、90度展開、適用于難分別的度展開、適用于難分別的混合物的分別混合物的分別 第三節(jié)第三節(jié) 薄層色譜法薄層色譜法定性和定量的分析定性和定量的分析定性分析定性分析定量分析定量分析 1. 目視比較法目視比較法 2. 斑點(diǎn)洗脫法斑點(diǎn)洗脫法 3. 薄層掃描法薄層掃描法第四節(jié)第四節(jié) 紙色譜

34、法紙色譜法紙色譜分別法紙色譜分別法 1方法原理方法原理 原理：紙上色譜分別法是根據(jù)不同物原理：紙上色譜分別法是根據(jù)不同物質(zhì)在固定相和流動(dòng)相間的分配比不同而進(jìn)質(zhì)在固定相和流動(dòng)相間的分配比不同而進(jìn)展分別的。展分別的。 固定相：濾紙固定相：濾紙利用紙上吸著的水利用紙上吸著的水分分(普通的紙吸著約等于本身質(zhì)量普通的紙吸著約等于本身質(zhì)量20的水的水分分) 流動(dòng)相：有機(jī)溶劑流動(dòng)相：有機(jī)溶劑 操作：點(diǎn)樣、展開、枯燥、顯色、測操作：點(diǎn)樣、展開、枯燥、顯色、測定定性和定量定定性和定量 第四節(jié)第四節(jié) 紙色譜法紙色譜法n. 運(yùn)用運(yùn)用甘氨酸、丙氨酸和谷氨酸混合氨基酸的分別甘氨酸、丙氨酸和谷氨酸混合氨基酸的分別展開劑：

35、正丁醇：冰醋酸：水展開劑：正丁醇：冰醋酸：水4：1：2顯色：茚三酮顯色：茚三酮葡萄糖、麥芽糖和木糖混合糖類的分別葡萄糖、麥芽糖和木糖混合糖類的分別展開劑：正丁醇：冰醋酸：水展開劑：正丁醇：冰醋酸：水4：1：5顯色：用硝酸銀氨溶液噴灑，即出現(xiàn)顯色：用硝酸銀氨溶液噴灑，即出現(xiàn)Ag的褐色斑的褐色斑點(diǎn)。點(diǎn)。定性：由定性：由Rf值可判別是哪種糖；葡萄糖的值可判別是哪種糖；葡萄糖的Rf為為0.16，麥芽糖的，麥芽糖的Rf為為0.11木糖的木糖的Rf是是0.2 第四節(jié)第四節(jié) 紙色譜法紙色譜法習(xí)題習(xí)題 6. 在吸附色譜中，以硅膠為固定相，當(dāng)用在吸附色譜中，以硅膠為固定相，當(dāng)用氯仿為固定相時(shí)，樣品中某些組分保管時(shí)間太短，氯仿為固定相時(shí)，樣品中某些組分保管時(shí)間太短，假設(shè)改用氯仿假設(shè)改用氯仿-甲醇甲醇1:1時(shí)，那么樣品中各組時(shí)，那么樣品中各組分的保管時(shí)間是變長，還是變得更短？為什么？分的保管時(shí)間是變長，還是變得更短？為什么？ 解：變得更短，由于流動(dòng)相的極性增大。解：變得更短，由于流動(dòng)相的極性增大。習(xí)題習(xí)題 7. 知某混合物中知某混合物中A、B、C三組分的分配系三組分的分配系數(shù)分別