臨床基因擴增檢驗實驗室的設(shè)置、質(zhì)量演示教學

1、臨床基因擴增檢驗實驗室的設(shè)置、質(zhì)量管理題外話：題外話：n不參加實習課不參加實習課？n參加實習課參加實習課？污染的判斷：污染的判斷：n經(jīng)驗：經(jīng)驗： 全陽性，全陽性，CTCT值值3535；標準品的；標準品的CTCT值發(fā)生波動值發(fā)生波動 陰性質(zhì)控陽性陰性質(zhì)控陽性 陽性率異常增高陽性率異常增高n輕微污染和非特異性擴增？輕微污染和非特異性擴增？污染和非特異性擴增污染和非特異性擴增: :n目的基因目的基因n過程控制過程控制n反應(yīng)體系反應(yīng)體系（引物、模版、（引物、模版、酶、鎂離子、退火、循環(huán)）酶、鎂離子、退火、循環(huán)）n條件優(yōu)化條件優(yōu)化控制的手段：控制的手段：n工作區(qū)的嚴格劃分工作區(qū)的嚴格劃分nSOPSOP的

2、制訂和嚴格執(zhí)行的制訂和嚴格執(zhí)行n去污染措施的常規(guī)采用去污染措施的常規(guī)采用污染的監(jiān)測：污染的監(jiān)測：n陰性質(zhì)控的設(shè)置：陰性質(zhì)控的設(shè)置： 陰性血清樣本陰性血清樣本 以水為模擬標本以水為模擬標本 僅含擴增反應(yīng)液僅含擴增反應(yīng)液 （加鑒別實驗室是否污染的空白管（加鑒別實驗室是否污染的空白管) )質(zhì)控品的位置質(zhì)控品的位置標準品空白標準品空白陽性質(zhì)控陰性質(zhì)控陽性質(zhì)控陰性質(zhì)控臨床樣本臨床樣本標準品標準品空白空白陽性質(zhì)控臨床樣本陰性質(zhì)控陽性質(zhì)控臨床樣本陰性質(zhì)控實驗室的設(shè)置實驗室的設(shè)置n管理要求：設(shè)置標準和工作規(guī)范管理要求：設(shè)置標準和工作規(guī)范n具體落實：實事求是、因地制宜具體落實：實事求是、因地制宜設(shè)置標準和工作規(guī)

3、范設(shè)置標準和工作規(guī)范 “原則上分為四個分隔的工作區(qū)；原則上分為四個分隔的工作區(qū)； 各區(qū)必須各區(qū)必須有明確的標記有明確的標記” “ “每一區(qū)域都須有專用的儀器每一區(qū)域都須有專用的儀器；不同的工作；不同的工作區(qū)應(yīng)使用不同顏色或有明顯區(qū)別標志的工作服區(qū)應(yīng)使用不同顏色或有明顯區(qū)別標志的工作服；離開工作區(qū)時，不得將各區(qū)特定的工作服帶出離開工作區(qū)時，不得將各區(qū)特定的工作服帶出” “ “，可在開展臨床標本檢測前對提取方法進，可在開展臨床標本檢測前對提取方法進行評價行評價” “ “，本區(qū)如采用副壓條件或減壓情況下可減，本區(qū)如采用副壓條件或減壓情況下可減少擴增產(chǎn)物從本區(qū)擴散至前區(qū)的可能性。少擴增產(chǎn)物從本區(qū)擴散至

4、前區(qū)的可能性。理想的設(shè)置理想的設(shè)置緩沖間緩沖間擴增區(qū)試劑準備區(qū)樣本制備區(qū)產(chǎn)物分析區(qū)空氣流向空氣流向空氣流向緩沖間專用走廊工作流向磁性連鎖裝置磁性連鎖裝置現(xiàn)實的問題是：現(xiàn)實的問題是：n建筑結(jié)構(gòu)建筑結(jié)構(gòu)n通道、門通道、門n水電供應(yīng)水電供應(yīng)n采光、通風采光、通風基本的要求基本的要求: :n四個區(qū)域必須是相互獨立的四個區(qū)域必須是相互獨立的n各區(qū)的儀器設(shè)備及各種物品必須是專用的各區(qū)的儀器設(shè)備及各種物品必須是專用的n各區(qū)間不能直通，應(yīng)有緩沖間，供換工作各區(qū)間不能直通，應(yīng)有緩沖間，供換工作服及鞋子用服及鞋子用n產(chǎn)物分析區(qū)應(yīng)安裝排風扇或其它抽風裝置。產(chǎn)物分析區(qū)應(yīng)安裝排風扇或其它抽風裝置。擴增區(qū)試劑準備區(qū)樣本制

5、備區(qū)產(chǎn)物檢測區(qū)其它實驗室走 廊實例：實例：其它實驗室樣本制備區(qū)擴增區(qū)試劑準備區(qū)產(chǎn)品檢測區(qū)走廊實例：實例：實例：實例：產(chǎn)物檢測區(qū)擴增區(qū)樣本制備區(qū)其它實驗室休息區(qū)試劑準備區(qū)擴 增區(qū)產(chǎn)物檢測區(qū)走廊模板加樣區(qū)實例：實例：樣本處理區(qū)實例：實例：小結(jié)：小結(jié)：n處理原則的核心是通過合理的設(shè)置處理原則的核心是通過合理的設(shè)置解決好臨床解決好臨床PCRPCR檢測實際運作檢測實際運作動態(tài)過動態(tài)過程程中可能發(fā)生的污染的預(yù)防問題中可能發(fā)生的污染的預(yù)防問題n因此，實驗室的設(shè)計必須充分考慮因此，實驗室的設(shè)計必須充分考慮到對污染來源和污染途徑的預(yù)防和到對污染來源和污染途徑的預(yù)防和控制控制實驗室各區(qū)的功能和配置：實驗室各區(qū)的功

6、能和配置：試劑儲存和準備區(qū)試劑儲存和準備區(qū)n儲存試劑的制備儲存試劑的制備n試劑的分裝試劑的分裝n主反應(yīng)混合液的制備主反應(yīng)混合液的制備n冰箱冰箱n混勻器混勻器n微量加樣器微量加樣器n可移動紫外燈可移動紫外燈n專用工作服和工作鞋專用工作服和工作鞋n消耗品（帶濾心吸頭、離消耗品（帶濾心吸頭、離心管、一次性手套等）心管、一次性手套等）n專用辦公用品等。專用辦公用品等。標本制備區(qū)：標本制備區(qū)：n臨床標本的保存臨床標本的保存 n核酸提取、儲存核酸提取、儲存及其及其加入至擴增加入至擴增反應(yīng)管反應(yīng)管n測定測定RNARNA時時cDNAcDNA的的合成合成n不得在本區(qū)對樣不得在本區(qū)對樣本進行本進行PCRPCR擴增

7、擴增n冰箱冰箱 (28(28和和-20-20或或-80)-80)n高速臺式冷凍離心機高速臺式冷凍離心機n水浴箱和水浴箱和/ /或加熱模塊或加熱模塊n生物安全柜生物安全柜n混勻器混勻器n微量加樣器微量加樣器n可移動紫外燈可移動紫外燈n專用工作服和工作鞋專用工作服和工作鞋n專用專用消耗品消耗品n專用辦公用品等專用辦公用品等擴增區(qū)：擴增區(qū)：nDNA DNA 或或cDNAcDNA擴增擴增n已制備的已制備的DNADNA模板和合模板和合成的成的cDNAcDNA的加入的加入n主反應(yīng)混合液制備成反主反應(yīng)混合液制備成反應(yīng)混合液應(yīng)混合液n如果空間允許的話，模如果空間允許的話，模板的加入也可以在一個板的加入也可以在

8、一個獨立的空間內(nèi)完成獨立的空間內(nèi)完成n核酸擴增儀核酸擴增儀n微量加樣器微量加樣器( (視情況視情況定定) )n可移動紫外燈可移動紫外燈n專用工作服和工作鞋專用工作服和工作鞋n專用消耗品專用消耗品n專用辦公用品等專用辦公用品等產(chǎn)物分析區(qū)：產(chǎn)物分析區(qū)：n擴增片段的測定擴增片段的測定n最主要的擴增產(chǎn)物污最主要的擴增產(chǎn)物污染來源染來源n有可能使用致突變和有可能使用致突變和有毒物質(zhì)有毒物質(zhì)n微量加樣器微量加樣器n可移動紫外燈可移動紫外燈n專用工作服和工作鞋專用工作服和工作鞋n專用消耗品專用消耗品n專用辦公用品等專用辦公用品等輔助用房：輔助用房：n清潔區(qū)清潔區(qū)n標本接受區(qū)：標本接受區(qū)：靈活設(shè)置靈活設(shè)置 不

9、干擾四區(qū)不干擾四區(qū) 規(guī)范的保存和傳遞規(guī)范的保存和傳遞實驗室使用和管理：實驗室使用和管理：標本接受區(qū)標本接受區(qū)樣本制備區(qū)樣本制備區(qū)擴增區(qū)擴增區(qū)產(chǎn)物分析區(qū)產(chǎn)物分析區(qū)試劑準備區(qū)試劑準備區(qū)區(qū)域的適當合并：區(qū)域的適當合并： “由于測定技術(shù)總是在發(fā)展之中，由于測定技術(shù)總是在發(fā)展之中，區(qū)域的合并應(yīng)根據(jù)儀器的特點而定區(qū)域的合并應(yīng)根據(jù)儀器的特點而定”小結(jié)：小結(jié)：n從核心儀器特點、實驗室的現(xiàn)狀出發(fā)，從核心儀器特點、實驗室的現(xiàn)狀出發(fā)，綜合考慮管理要求綜合考慮管理要求n盡可能在現(xiàn)有條件下滿足管理要求盡可能在現(xiàn)有條件下滿足管理要求n以管理措施彌補硬件的不足以管理措施彌補硬件的不足n有條件，留有余地有條件，留有余地n再好

10、的分區(qū)設(shè)置，如果不輔之與認真執(zhí)再好的分區(qū)設(shè)置，如果不輔之與認真執(zhí)行的相應(yīng)的管理制度，等同于無。行的相應(yīng)的管理制度，等同于無。實驗室質(zhì)量體系的建立實驗室質(zhì)量體系的建立：n管理要求管理要求n體系建立體系建立管理要求：管理要求：1 1 實驗室設(shè)置和設(shè)備實驗室設(shè)置和設(shè)備1.1 1.1 實驗室原則上應(yīng)分為四個區(qū)，但如使實驗室原則上應(yīng)分為四個區(qū)，但如使 用全自動擴增檢測儀，區(qū)域可適當合用全自動擴增檢測儀，區(qū)域可適當合 并。并。1.2 1.2 各工作區(qū)的明確標記各工作區(qū)的明確標記1.3 1.3 實驗室設(shè)置應(yīng)能有效地防止實驗室設(shè)置應(yīng)能有效地防止PCRPCR后區(qū)產(chǎn)后區(qū)產(chǎn) 物的污染。物的污染。 管理要求：管理要求

11、：2 2 設(shè)施和環(huán)境設(shè)施和環(huán)境2.1 2.1 實驗室的設(shè)施、工作區(qū)域、能源、照明、實驗室的設(shè)施、工作區(qū)域、能源、照明、 溫控、通風等。應(yīng)便于檢測工作的正常進行。溫控、通風等。應(yīng)便于檢測工作的正常進行。2.2 2.2 實驗室應(yīng)配備溫度濕度計、穩(wěn)壓電源等。實驗室應(yīng)配備溫度濕度計、穩(wěn)壓電源等。2.3 2.3 進入和使用實驗室各區(qū)域應(yīng)有明確的限制和進入和使用實驗室各區(qū)域應(yīng)有明確的限制和 控制?？刂啤?.4 2.4 應(yīng)有實驗室清潔、消毒制度及相應(yīng)用具；應(yīng)有實驗室清潔、消毒制度及相應(yīng)用具；2.5 2.5 實驗室應(yīng)有有關(guān)生物污染物處理、生物防護實驗室應(yīng)有有關(guān)生物污染物處理、生物防護 等措施及相應(yīng)用具；等措施

12、及相應(yīng)用具；管理要求：管理要求：3 3 人員人員3.1 3.1 實驗室應(yīng)配備足夠數(shù)量的人員；實驗室應(yīng)配備足夠數(shù)量的人員； 這些人這些人 員必須經(jīng)過培訓，并取得上崗證；員必須經(jīng)過培訓，并取得上崗證；3.2 3.2 實驗室應(yīng)有培訓計劃和措施，保證其技術(shù)實驗室應(yīng)有培訓計劃和措施，保證其技術(shù) 人員得到及時培訓。人員得到及時培訓。3.3 3.3 實驗室應(yīng)保存其技術(shù)人員有關(guān)資格證書實驗室應(yīng)保存其技術(shù)人員有關(guān)資格證書 （如上崗證）、培訓、技能和經(jīng)歷等技術(shù)檔案。（如上崗證）、培訓、技能和經(jīng)歷等技術(shù)檔案。管理要求：管理要求：4 4 設(shè)備管理設(shè)備管理4.1 4.1 主要設(shè)備應(yīng)有維護程序文件及維護記錄；主要設(shè)備應(yīng)有

13、維護程序文件及維護記錄；4.2 (a)4.2 (a)有問題的設(shè)備應(yīng)立即停止使用，并加上明顯標識，如可有問題的設(shè)備應(yīng)立即停止使用，并加上明顯標識，如可 能應(yīng)將其貯存在規(guī)定的地方直至修復(fù)；能應(yīng)將其貯存在規(guī)定的地方直至修復(fù)；(b)(b)修復(fù)的設(shè)備必須修復(fù)的設(shè)備必須 經(jīng)校準、檢定（驗證）或檢測滿足要求后方能再次投入使經(jīng)校準、檢定（驗證）或檢測滿足要求后方能再次投入使 用；用；(c)(c)實驗室應(yīng)檢查由于上述缺陷對以前所進行的檢測工實驗室應(yīng)檢查由于上述缺陷對以前所進行的檢測工 作的影響。作的影響。4.3 4.3 加樣器、溫度計、擴增儀和酶標儀等應(yīng)有校準程序并進行加樣器、溫度計、擴增儀和酶標儀等應(yīng)有校準程

14、序并進行 校準，擴增儀和酶標儀應(yīng)有明顯的標識表明其校準狀態(tài)。校準，擴增儀和酶標儀應(yīng)有明顯的標識表明其校準狀態(tài)。4.4 4.4 應(yīng)保存擴增儀、酶標儀、生物安全柜、加樣器等設(shè)備的檔應(yīng)保存擴增儀、酶標儀、生物安全柜、加樣器等設(shè)備的檔 案案管理要求：管理要求：5 5 檢測方法檢測方法5.1 5.1 實驗室應(yīng)制定：實驗室應(yīng)制定：有關(guān)儀器設(shè)備操作程有關(guān)儀器設(shè)備操作程 序；序；有關(guān)擴增檢測的工作程序。有關(guān)擴增檢測的工作程序。5.2 5.2 所有上述標準操作程序都應(yīng)現(xiàn)行有效并便所有上述標準操作程序都應(yīng)現(xiàn)行有效并便 于工作人員使用。于工作人員使用。5.3 5.3 實驗室應(yīng)有儀器、試劑、消耗品的選購、實驗室應(yīng)有儀

15、器、試劑、消耗品的選購、 驗收、貯存和質(zhì)檢程序；驗收、貯存和質(zhì)檢程序； 必須使用經(jīng)國必須使用經(jīng)國 家有關(guān)部門批準的試劑和儀器。家有關(guān)部門批準的試劑和儀器。管理要求：管理要求：6 6 標本管理標本管理6.1 6.1 實驗室應(yīng)建立對擬檢測標本的唯一編號識別系統(tǒng)。實驗室應(yīng)建立對擬檢測標本的唯一編號識別系統(tǒng)。6.2 6.2 實驗室應(yīng)制定有關(guān)標本收集、處理、運送、貯存實驗室應(yīng)制定有關(guān)標本收集、處理、運送、貯存 程序。程序。6.3 6.3 在接收標本時應(yīng)有其狀態(tài)的詳細記錄。在接收標本時應(yīng)有其狀態(tài)的詳細記錄。6.4 6.4 實驗室應(yīng)確定標本是否符合檢測要求實驗室應(yīng)確定標本是否符合檢測要求, , 拒收標本拒收

16、標本 原因要明確。原因要明確。6.5 6.5 如果標本必須在特定的環(huán)境條件下（如如果標本必須在特定的環(huán)境條件下（如2-82-8、 -20-20和和-70-70低溫）貯存，則應(yīng)對這些條件加以低溫）貯存，則應(yīng)對這些條件加以 維持、監(jiān)控和記錄；維持、監(jiān)控和記錄；管理要求：管理要求：7 7 記錄記錄7.1 7.1 實驗室應(yīng)有適合自身實際情況又符合現(xiàn)實驗室應(yīng)有適合自身實際情況又符合現(xiàn) 行規(guī)章制度的記錄管理制度；行規(guī)章制度的記錄管理制度；7.2 7.2 記錄應(yīng)有參與標本收集、標本準備和處記錄應(yīng)有參與標本收集、標本準備和處 理、檢測的人員簽字。理、檢測的人員簽字。7.3 7.3 所有記錄和報告都應(yīng)安全貯存、

17、妥善保所有記錄和報告都應(yīng)安全貯存、妥善保 管并保密。管并保密。管理要求：管理要求：8 8 報告報告8.1 8.1 檢測結(jié)果的報告應(yīng)準確、清晰和客觀。定性測定報告檢測結(jié)果的報告應(yīng)準確、清晰和客觀。定性測定報告“陰陰 性性”或或“陽性陽性”；定量測定則以拷貝數(shù)；定量測定則以拷貝數(shù)/ml/ml或或IU/mlIU/ml報告。報告。8.2 8.2 每份報告應(yīng)包括以下信息：（每份報告應(yīng)包括以下信息：（a a）標題，例如）標題，例如“檢測報告檢測報告” （b b）報告的唯一性標識（如序號）；（）報告的唯一性標識（如序號）；（c c）檢測標本的特性）檢測標本的特性 和狀態(tài)；（和狀態(tài)；（d d）檢測標本的接收時

18、間和進行檢測的時間；）檢測標本的接收時間和進行檢測的時間； （f f）采用的檢測方法；（）采用的檢測方法；（g g）實驗操作及校核人員的簽字，）實驗操作及校核人員的簽字， 以及簽發(fā)日期；（以及簽發(fā)日期；（h h）檢測報告中應(yīng)給出參考結(jié)果或范圍；）檢測報告中應(yīng)給出參考結(jié)果或范圍；8.3 8.3 當報告的有效性發(fā)生疑問時，實驗室應(yīng)立即通知臨床相關(guān)當報告的有效性發(fā)生疑問時，實驗室應(yīng)立即通知臨床相關(guān) 科室予以改正?？剖矣枰愿恼?。8.4 8.4 當臨床科室或患者要求用電話、圖文傳真或其它電子和電當臨床科室或患者要求用電話、圖文傳真或其它電子和電 磁設(shè)備傳送結(jié)果時，實驗室應(yīng)保證工作人員遵循文件化的磁設(shè)備傳

19、送結(jié)果時，實驗室應(yīng)保證工作人員遵循文件化的 程序，并為對方保密。程序，并為對方保密。管理要求：管理要求：9 9 質(zhì)量控制質(zhì)量控制9.1 9.1 實驗室應(yīng)有室內(nèi)質(zhì)量控制標準操作程序?qū)嶒炇覒?yīng)有室內(nèi)質(zhì)量控制標準操作程序 文件：（文件：（a a）質(zhì)控物的合理性；）質(zhì)控物的合理性； （b b）質(zhì)控方法（圖）的有效性；）質(zhì)控方法（圖）的有效性； （c c）失控的判斷；）失控的判斷； （d d）失控的措施。）失控的措施。9.2 9.2 實驗室應(yīng)參加室間質(zhì)量評價實驗室應(yīng)參加室間質(zhì)量評價管理要求：管理要求：10 10 抱怨抱怨10.1 10.1 實驗室應(yīng)制定抱怨及其處理的標準操作程序；應(yīng)實驗室應(yīng)制定抱怨及其處理

20、的標準操作程序；應(yīng) 將抱怨資料及處理抱怨所采取的措施及結(jié)果記錄將抱怨資料及處理抱怨所采取的措施及結(jié)果記錄 歸檔保存。歸檔保存。10.2 10.2 當抱怨或其它任何事項是對實驗室是否符合其現(xiàn)當抱怨或其它任何事項是對實驗室是否符合其現(xiàn) 行程序、或者是否符合行程序、或者是否符合臨床基因擴增實驗室管臨床基因擴增實驗室管 理暫行辦法理暫行辦法和和臨床基因擴增實驗室工作規(guī)臨床基因擴增實驗室工作規(guī) 范范、或是對其它有關(guān)實驗室校準或檢測質(zhì)量提、或是對其它有關(guān)實驗室校準或檢測質(zhì)量提 出疑問時，則實驗室應(yīng)立即對這些范圍的工作和出疑問時，則實驗室應(yīng)立即對這些范圍的工作和 有關(guān)職責進行審核。有關(guān)職責進行審核。管理要求

21、（現(xiàn)場考核）：管理要求（現(xiàn)場考核）：n送審的文件描述與實驗室實際情況的一送審的文件描述與實驗室實際情況的一致性致性n實際運行與文件規(guī)定的一致性實際運行與文件規(guī)定的一致性n人員素質(zhì)：對文件的認知、熟悉、靈活人員素質(zhì)：對文件的認知、熟悉、靈活運用程度運用程度現(xiàn)場考核的實際內(nèi)涵：現(xiàn)場考核的實際內(nèi)涵：n認識到不到位認識到不到位n落實到不到位落實到不到位n符合性檢查加指導(dǎo)性檢查符合性檢查加指導(dǎo)性檢查n有重點的全面檢查有重點的全面檢查建立質(zhì)量管理體系首先要解決的問題：建立質(zhì)量管理體系首先要解決的問題：n第一個問題：質(zhì)量體系建立的核心問題第一個問題：質(zhì)量體系建立的核心問題是什么？是什么？n第二個問題：質(zhì)量體

22、系模式要達到的管第二個問題：質(zhì)量體系模式要達到的管理目的是什么？理目的是什么？n第三個問題：達到目的的方法（途徑、第三個問題：達到目的的方法（途徑、手段）是什么？手段）是什么？質(zhì)量體系的定義質(zhì)量體系的定義 為實施質(zhì)量管理所需的組織結(jié)為實施質(zhì)量管理所需的組織結(jié)構(gòu)、程序、過程和資源。構(gòu)、程序、過程和資源。n要點：定義涵蓋了實驗室管理的每一個要點：定義涵蓋了實驗室管理的每一個 方面。方面。 n組織結(jié)構(gòu)：一個組織為行使其職能，按某組織結(jié)構(gòu)：一個組織為行使其職能，按某種方式建立的職責、權(quán)限及其相互關(guān)系。種方式建立的職責、權(quán)限及其相互關(guān)系。n程序：為進行某項活動所規(guī)定的途徑。程序：為進行某項活動所規(guī)定的途

23、徑。n過程：將輸入轉(zhuǎn)化為輸出的一組彼此相關(guān)過程：將輸入轉(zhuǎn)化為輸出的一組彼此相關(guān)的資源和活動。的資源和活動。四個組成部分的關(guān)系：四個組成部分的關(guān)系：n關(guān)鍵：核心關(guān)鍵：核心過程（活動）過程（活動） 紐帶紐帶程序程序 組織結(jié)構(gòu)組織結(jié)構(gòu) 程序程序 資源資源 過程過程理解理解n“過程過程”的重要性的重要性 1 1、工作是通過過程來完成的。、工作是通過過程來完成的。 2 2、質(zhì)量管理是通過對各種過程的控制、質(zhì)量管理是通過對各種過程的控制 來實現(xiàn)的。來實現(xiàn)的。 3 3、質(zhì)量管理本身也是一系列的過程、質(zhì)量管理本身也是一系列的過程n過程的分解、控制過程的分解、控制n過程的有機組合過程的有機組合過程過程前處理前處

24、理檢測檢測樣本采集樣本采集和接受和接受編制報告編制報告審核審核報告發(fā)放報告發(fā)放記錄保存記錄保存登記登記編號編號質(zhì)控質(zhì)控咨詢咨詢質(zhì)量體系運行的目的質(zhì)量體系運行的目的方針方針目標目標質(zhì)量環(huán)質(zhì)量環(huán)及要素及要素QS結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)QS文件文件QS運行運行QS審核審核QS評審評審質(zhì)量改進質(zhì)量改進報告報告 證書證書主要手段：質(zhì)量體系文件主要手段：質(zhì)量體系文件n質(zhì)量方針：質(zhì)量方針：n質(zhì)量手冊：闡明實驗室的質(zhì)量方針，各質(zhì)量手冊：闡明實驗室的質(zhì)量方針，各方面質(zhì)量管理的一般性描述方面質(zhì)量管理的一般性描述n程序性文件：程序性文件：對通用于整個實驗室的某對通用于整個實驗室的某些方面工作的文件化描述些方面工作的文件化描述n標準

25、操作程序（標準操作程序（SOPSOP文件）：文件）：是實驗室最是實驗室最為具體、最具有可操作性、也是使用頻為具體、最具有可操作性、也是使用頻率最高的文件率最高的文件PCRPCR實驗室技術(shù)驗收對文件的要求實驗室技術(shù)驗收對文件的要求：n儀器設(shè)備的維護保養(yǎng)程序；儀器設(shè)備的維護保養(yǎng)程序；n儀器設(shè)備的校準程序；儀器設(shè)備的校準程序；n儀器設(shè)備的操作程序；儀器設(shè)備的操作程序；n臨床標本的收集程序；臨床標本的收集程序；n臨床標本的處理（核酸純化）程序；臨床標本的處理（核酸純化）程序；n臨床標本的保存程序；臨床標本的保存程序；n核酸擴增及產(chǎn)物分析檢測的操作程序；核酸擴增及產(chǎn)物分析檢測的操作程序；n試劑的質(zhì)檢操作

26、程序；試劑的質(zhì)檢操作程序；n實驗室消耗品購買、驗收和貯存程序；實驗室消耗品購買、驗收和貯存程序；n實驗室廢棄物的處理程序；實驗室廢棄物的處理程序；n實驗室的清潔程序；實驗室的清潔程序；n室內(nèi)質(zhì)量控制程序；室內(nèi)質(zhì)量控制程序；n抱怨處理程序。抱怨處理程序。n申請表的附錄申請表的附錄5“5“需準備的標準操作程序需準備的標準操作程序（最低要求）（最低要求）”n對實驗室的質(zhì)量手冊和程序文件沒作要求對實驗室的質(zhì)量手冊和程序文件沒作要求n對必須具備的對必須具備的SOPSOP文件的編撰格式?jīng)]作具體文件的編撰格式?jīng)]作具體要求要求SOPSOP：實驗室最具個性的文件：實驗室最具個性的文件n不夠嚴謹準確不夠嚴謹準確n

27、不夠連貫不夠連貫n不夠嚴密不夠嚴密例：例：n用加樣槍取用加樣槍取100l100l樣品加入提取液樣品加入提取液n用加樣器（移液器）以前進式移液法吸用加樣器（移液器）以前進式移液法吸取取100l100l樣品加入提取液樣品加入提取液例：例： 向一新的經(jīng)高壓滅菌處理過的向一新的經(jīng)高壓滅菌處理過的0.5ml0.5ml離心管中加入離心管中加入10l10l充分混勻的充分混勻的RNARNA提取液提取液A A（RNARNA提取液提取液A A易沉淀，取易沉淀，取樣前需用移液器反復(fù)吸打混勻后吸?。忧靶栌靡埔浩鞣磸?fù)吸打混勻后吸?。?。加人。加人50l50l血血清標本或陰陽性標準品，再加人清標本或陰陽性標準品，再加人2

28、00l200l的的RNARNA提取液提取液B B充分混勻。室溫放置充分混勻。室溫放置5 5分鐘。分鐘。6000rpm6000rpm離心離心1 1分鐘，小心分鐘，小心吸去上清，用吸去上清，用7575的預(yù)冷乙醇（的預(yù)冷乙醇（DEPCDEPC水配制）洗沉淀水配制）洗沉淀兩次。（取兩次。（取7575乙醇乙醇450l450l洗沉淀，充分震蕩混勻，洗沉淀，充分震蕩混勻，6000rpm6000rpm，離心，離心1 1分鐘，然后去上清，再用分鐘，然后去上清，再用7575的乙醇的乙醇450l450l洗一次），洗一次），6565干燥沉淀干燥沉淀1010分鐘。（注：分鐘。（注： 75%75%乙醇配制時須用試劑盒中提

29、供的乙醇配制時須用試劑盒中提供的DEPC H2ODEPC H2O）。）。 機械地抄書、說明書、其它實驗機械地抄書、說明書、其它實驗室的文件。室的文件。撰寫撰寫SOPSOP文件要做到：文件要做到：n具有專業(yè)知識的人，按文件就能順利完具有專業(yè)知識的人，按文件就能順利完成實驗成實驗n忠實而且連貫地反映實驗過程忠實而且連貫地反映實驗過程n對文件表述的理解無歧義對文件表述的理解無歧義n嚴謹、嚴密嚴謹、嚴密n準確和簡練準確和簡練文件的文字組織：簡練明確文件的文字組織：簡練明確n向一新的經(jīng)高壓滅菌處理過的向一新的經(jīng)高壓滅菌處理過的0.5ml0.5ml離心管中加入離心管中加入10l10l充分混勻的充分混勻的R

30、NARNA提取液提取液A A（RNARNA提取液提取液A A易沉淀，取易沉淀，取樣前需用移液器反復(fù)吸打混勻后吸取樣前需用移液器反復(fù)吸打混勻后吸?。?。）。加人加人50l50l血血清標本或陰陽性標準品，再加人清標本或陰陽性標準品，再加人200l200l的的RNARNA提取液提取液B B充分混勻。室溫放置充分混勻。室溫放置5 5分鐘。分鐘。6000rpm6000rpm離心離心1 1分鐘，小心分鐘，小心吸去上清，用吸去上清，用7575的預(yù)冷乙醇（的預(yù)冷乙醇（DEPCDEPC水配制水配制）洗沉淀洗沉淀兩次。（取兩次。（取7575乙醇乙醇450l450l洗沉淀，充分震蕩混勻，洗沉淀，充分震蕩混勻，6000

31、rpm6000rpm，離心，離心1 1分鐘，然后去上清，再用分鐘，然后去上清，再用7575的乙醇的乙醇450l450l洗一次），洗一次），6565干燥沉淀干燥沉淀1010分鐘。分鐘。（注：（注： 75%75%乙醇配制時須用試劑盒中提供的乙醇配制時須用試劑盒中提供的DEPC H2ODEPC H2O）。質(zhì)量體系文件的構(gòu)成：質(zhì)量體系文件的構(gòu)成： 質(zhì)量質(zhì)量 手冊手冊 程序性程序性 文文 件件質(zhì)量文件質(zhì)量文件 質(zhì)量文件（作業(yè)指質(zhì)量文件（作業(yè)指 導(dǎo)書、表格、報告等）導(dǎo)書、表格、報告等）程序文件和程序文件和SOPSOP的關(guān)系的關(guān)系n對通用于整個實驗對通用于整個實驗室的某些方面工作室的某些方面工作的文件化描述

32、的文件化描述n具體操作的標準化具體操作的標準化文件文件程序文件等同于以往的管理制度程序文件等同于以往的管理制度SOPSOP等同于以往的操作卡或操作說明書等同于以往的操作卡或操作說明書nWhatWhatnWhoWhonWhereWherenWhenWhennWhyWhynHowHow寫合乎管理要求的寫合乎管理要求的 ，寫你做得到的，寫你做得到的難點難點：n寫你所做的寫你所做的n做你所寫的做你所寫的n記錄你所做的記錄你所做的關(guān)鍵：關(guān)鍵：SOPSOP和記錄的必要性和重要性和記錄的必要性和重要性儀器設(shè)備的校準程序儀器設(shè)備的校準程序目的：保證檢驗的有效性，準確性。目的：保證檢驗的有效性，準確性。范圍：本

33、程序適用于滿足范圍：本程序適用于滿足PCR實驗室檢測需要并可能對檢驗結(jié)果造成誤差的儀器設(shè)備。主要有：實驗室檢測需要并可能對檢驗結(jié)果造成誤差的儀器設(shè)備。主要有：職責：校準由職責：校準由PCR實驗室主任負責組織執(zhí)行。實驗室主任負責組織執(zhí)行。工作流程：工作流程：4.1 校準方法：校準方法： Finpipette可調(diào)式移液器校準采用廠家推薦方法。校準主要使用設(shè)備為可調(diào)式移液器校準采用廠家推薦方法。校準主要使用設(shè)備為BS110S電子電子天平（天平（Max 110g, d=0.1mg）。）。4.2 校準計劃：校準計劃：4.2.1 啟用校準：設(shè)備在投入使用時實施啟用校準。啟用校準：設(shè)備在投入使用時實施啟用校

34、準。4.2.2 周期校準：設(shè)備在投入使用后，每半年實施一次校準。周期校準：設(shè)備在投入使用后，每半年實施一次校準。4.2.3 維修后校準：設(shè)備在維修后須經(jīng)校準方可重新投入使用。維修后校準：設(shè)備在維修后須經(jīng)校準方可重新投入使用。4.2.4 校準計劃外的校準：如在檢測及校準計劃外的校準：如在檢測及EQA，IQC活動中發(fā)現(xiàn)存在結(jié)果漂移或偏差及其它可疑情況時，通活動中發(fā)現(xiàn)存在結(jié)果漂移或偏差及其它可疑情況時，通 過分析對可疑設(shè)備實施校準。過分析對可疑設(shè)備實施校準。4.2.5 Finpipette可調(diào)式移液器的校準順序：按照單一流向規(guī)定，對可調(diào)式移液器的校準順序：按照單一流向規(guī)定，對Finpipette可調(diào)

35、式移液器的校準首先可調(diào)式移液器的校準首先 校準試劑準備區(qū)，然后依次為樣本處理區(qū)和校準試劑準備區(qū)，然后依次為樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)。每校準完一個區(qū)的移擴增區(qū)。每校準完一個區(qū)的移 液器，將其放回原處后，再取下一個區(qū)的移液器進行校準。液器，將其放回原處后，再取下一個區(qū)的移液器進行校準。4.2.6 校準安排在不進行樣本檢測的日期完成。校準安排在不進行樣本檢測的日期完成。4.3 校準的有效標識：經(jīng)校準的設(shè)備加貼綠色標簽，標簽上應(yīng)標明本次校準的日期和結(jié)果及下次校準的計校準的有效標識：經(jīng)校準的設(shè)備加貼綠色標簽，標簽上應(yīng)標明本次校準的日期和結(jié)果及下次校準的計劃劃 預(yù)定日期。預(yù)定日期。4.4 校準結(jié)果的審批及記錄保存：每次校準的結(jié)果須