腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定課件

1、-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定腸道致病菌的檢驗(yàn)?zāi)c道致病菌的檢驗(yàn)(jinyn)(jinyn)與鑒定與鑒定 腸道致病菌的檢驗(yàn)?zāi)c道致病菌的檢驗(yàn)(jinyn)(jinyn)與鑒定與鑒定 第一頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定第一節(jié)第一節(jié) 概述概述(i sh)一、食品中常見(jiàn)的腸道致病菌一、食品中常見(jiàn)的腸道致病菌 沙門(mén)氏菌沙門(mén)氏菌(sh mn sh jn) 志賀氏菌志賀氏菌 大腸艾希氏菌大腸艾希氏菌 變形桿菌變形桿菌 耶爾森菌耶爾森菌第二頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定二、生物學(xué)特性二、生物學(xué)特性(txng)1、形態(tài)與染色、形態(tài)與染色均為革蘭氏陰性桿菌，中等大小，無(wú)芽胞，多數(shù)具有周身鞭毛能運(yùn)均為革

2、蘭氏陰性桿菌，中等大小，無(wú)芽胞，多數(shù)具有周身鞭毛能運(yùn)動(dòng)，志賀氏菌屬無(wú)鞭毛無(wú)動(dòng)力。動(dòng)，志賀氏菌屬無(wú)鞭毛無(wú)動(dòng)力。2、培養(yǎng)、培養(yǎng)(piyng)和生化反應(yīng)和生化反應(yīng)（1）、需氧或兼性厭氧，菌落中等大小，表面光滑，液體培養(yǎng)基混濁）、需氧或兼性厭氧，菌落中等大小，表面光滑，液體培養(yǎng)基混濁生長(zhǎng)。生長(zhǎng)。（2）、腸道致病菌一般不分解乳糖，而非致病菌多能分解乳糖、）、腸道致病菌一般不分解乳糖，而非致病菌多能分解乳糖、葡萄糖產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣。葡萄糖產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣。（3）、可還原硝酸鹽為亞硝酸鹽。）、可還原硝酸鹽為亞硝酸鹽。 第三頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定 三、抗原三、抗原(kngyun)(kngyun)

3、類(lèi)型類(lèi)型 O抗原抗原也稱(chēng)菌體抗原，細(xì)胞壁脂肪糖，耐熱也稱(chēng)菌體抗原，細(xì)胞壁脂肪糖，耐熱100不不被破壞被破壞H抗原抗原也稱(chēng)鞭毛抗原，鞭毛蛋白，不耐熱，也稱(chēng)鞭毛抗原，鞭毛蛋白，不耐熱，60 30可破壞可破壞K抗原抗原也稱(chēng)表面抗原（莢膜抗原），多糖，具有阻抑也稱(chēng)表面抗原（莢膜抗原），多糖，具有阻抑O抗原發(fā)生凝集的現(xiàn)象，加熱抗原發(fā)生凝集的現(xiàn)象，加熱6030可消除可消除抑阻作用抑阻作用菌毛抗原菌毛抗原第四頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定四、四、 致病性致病性（一）、致病物質(zhì)（一）、致病物質(zhì)1、內(nèi)毒素：能引起機(jī)體發(fā)熱，白細(xì)胞減少、內(nèi)毒素：能引起機(jī)體發(fā)熱，白細(xì)胞減少(jinsho)，低血糖，血壓，低

4、血糖，血壓降低，嚴(yán)重者休克。降低，嚴(yán)重者休克。2、外毒素、外毒素：對(duì)小腸粘膜細(xì)胞具有物殊毒害作用，引起腹瀉。：對(duì)小腸粘膜細(xì)胞具有物殊毒害作用，引起腹瀉。第五頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定（二）、所致病疾（二）、所致病疾 1、傷寒、傷寒(shnghn)和副傷寒和副傷寒(shnghn) 2、食物中毒、食物中毒 3、細(xì)菌性痢疾、細(xì)菌性痢疾第六頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定 五、微生物檢驗(yàn)的基本五、微生物檢驗(yàn)的基本(jbn)程序程序 檢樣檢樣處理處理(chl)(chl)增菌培養(yǎng)增菌培養(yǎng)分離培養(yǎng)分離培養(yǎng)生化試驗(yàn)生化試驗(yàn)血清學(xué)鑒定血清學(xué)鑒定報(bào)告報(bào)告 第七頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢

5、驗(yàn)與鑒定思考題1 1、腸道致病菌具有、腸道致病菌具有(jyu)(jyu)哪些生物學(xué)特性哪些生物學(xué)特性? ?2 2、腸道致病菌具有哪些抗原？又稱(chēng)為什么？有、腸道致病菌具有哪些抗原？又稱(chēng)為什么？有什么特點(diǎn)？什么特點(diǎn)？3 3、寫(xiě)出腸道致病菌檢驗(yàn)的基本程序、寫(xiě)出腸道致病菌檢驗(yàn)的基本程序第八頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定第二節(jié)、沙門(mén)氏菌第二節(jié)、沙門(mén)氏菌(sh mn sh jn)檢驗(yàn)檢驗(yàn)一、概況一、概況（一）沙門(mén)氏菌的發(fā)現(xiàn)（一）沙門(mén)氏菌的發(fā)現(xiàn)(fxin)與食物中毒與食物中毒（二）沙門(mén)氏菌的命名（二）沙門(mén)氏菌的命名 根據(jù)所致疾病命名根據(jù)所致疾病命名 根據(jù)菌的發(fā)現(xiàn)地區(qū)命名根據(jù)菌的發(fā)現(xiàn)地區(qū)命名 以發(fā)現(xiàn)

6、者的名字命名以發(fā)現(xiàn)者的名字命名（三）沙門(mén)氏菌的抵抗力（三）沙門(mén)氏菌的抵抗力 60 30可殺死可殺死第九頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定 （四）沙門(mén)氏菌的分類(lèi)地位（四）沙門(mén)氏菌的分類(lèi)地位(dwi)及定及定義義1、地位：是腸桿菌科、埃希氏菌族、沙門(mén)氏菌、地位：是腸桿菌科、埃希氏菌族、沙門(mén)氏菌(sh mn sh jn)屬中的細(xì)菌屬中的細(xì)菌2、定義、定義 是腸桿菌科中形態(tài)和培養(yǎng)特征，生化反應(yīng)及是腸桿菌科中形態(tài)和培養(yǎng)特征，生化反應(yīng)及抗原結(jié)構(gòu)相似，被抗原結(jié)構(gòu)相似，被O1噬菌體裂解的一群革蘭噬菌體裂解的一群革蘭氏陰性桿菌。氏陰性桿菌。第十頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定二、生物學(xué)特性二、生物

7、學(xué)特性(txng)(txng) （一）、形態(tài)與染色：（一）、形態(tài)與染色： 革蘭氏染色陰性，無(wú)莢膜，無(wú)芽胞，多數(shù)革蘭氏染色陰性，無(wú)莢膜，無(wú)芽胞，多數(shù)有鞭毛，有動(dòng)力，短小桿菌。有鞭毛，有動(dòng)力，短小桿菌。 （二）、培養(yǎng)（二）、培養(yǎng)(piyng)特性特性 1、需氧或兼性厭氧，最適溫度、需氧或兼性厭氧，最適溫度37，PH7.27.4。第十一頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定(沙門(mén)氏菌（紅色(hngs)）侵入人體細(xì)胞 第十二頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定2、對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求不高，在普通、對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求不高，在普通(ptng)(ptng)培養(yǎng)基生長(zhǎng)良培養(yǎng)基生長(zhǎng)良好，好，37 ，24h，能形成菌落中等大

8、小，直，能形成菌落中等大小，直徑徑2 23mm3mm，圓形或卵形，表面光滑濕潤(rùn)，無(wú)，圓形或卵形，表面光滑濕潤(rùn)，無(wú)色半透明，邊緣整齊的菌落色半透明，邊緣整齊的菌落3 3、在液體培養(yǎng)基中，呈均勻混濁性生長(zhǎng)，無(wú)、在液體培養(yǎng)基中，呈均勻混濁性生長(zhǎng)，無(wú)菌膜。菌膜。第十三頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定（三）、生化特性（三）、生化特性1、發(fā)酵、發(fā)酵GLU，甘露醇，山梨醇產(chǎn)酸產(chǎn)氣（傷寒雞傷寒沙，甘露醇，山梨醇產(chǎn)酸產(chǎn)氣（傷寒雞傷寒沙門(mén)氏菌少數(shù)不產(chǎn)氣）門(mén)氏菌少數(shù)不產(chǎn)氣）2、不發(fā)酵乳糖，蔗糖，側(cè)金黃花醇、不發(fā)酵乳糖，蔗糖，側(cè)金黃花醇3、多數(shù)產(chǎn)生、多數(shù)產(chǎn)生(chnshng)H2S（+），不產(chǎn)靛基質(zhì)（），不產(chǎn)

9、靛基質(zhì)（-），不分解），不分解尿素（尿素（-），不產(chǎn)生乙酰甲基甲醇（），不產(chǎn)生乙酰甲基甲醇（VP）（）（-），），4、能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽（、能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽（+）5、在、在KCN培養(yǎng)基中生長(zhǎng)（培養(yǎng)基中生長(zhǎng)（-），苯丙氨酸脫氨酸（），苯丙氨酸脫氨酸（-）第十四頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定（四）、抗原（四）、抗原(kngyun)結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)主要兩種：主要兩種：A、O抗原抗原 B、H抗原抗原C、表面抗原（、表面抗原（K抗原）抗原） D、菌毛抗原、菌毛抗原第十五頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定2 、O抗原抗原(kngyun) （1） O抗原的表示方法抗原的表示方法共有共有58

10、種，用字母種，用字母O和阿拉伯?dāng)?shù)字標(biāo)記：和阿拉伯?dāng)?shù)字標(biāo)記：O1 、O2 、O3、 O4如：傷寒桿菌： O9 、O12第十六頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定（2）沙門(mén)氏菌的分群及表示）沙門(mén)氏菌的分群及表示(biosh)方法方法用大寫(xiě)字母及相關(guān)符號(hào)表示：用大寫(xiě)字母及相關(guān)符號(hào)表示： A、B、C、D、E、F Z、 O51 O63、 O65 O67第十七頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定（3）沙門(mén)氏菌）沙門(mén)氏菌(sh mn sh jn)中的主要菌群及其群特異性抗原中的主要菌群及其群特異性抗原 A群群-O2 B群群-O4 C群群-O6 C1群群-O7、 C2群群- O6 O8 、 C3群群-

11、O8 、 C4群群-O6 O7 O14 D群群-O9 F群群-O11 E群群-O3 E2群群-O3、 O10族族 E3群群-O3、 O15 E4群群-O1 、O3 、O19第十八頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定3、H抗原抗原(kngyun)(kngyun)（鞭毛抗原（鞭毛抗原(kngyun)(kngyun)） 耐熱性差：耐熱性差：6015或酒精處理可破壞或酒精處理可破壞沙門(mén)沙門(mén)(shmn)氏氏H抗原有兩種：抗原有兩種：第第1相：特異相，用英文小寫(xiě)字母表示相：特異相，用英文小寫(xiě)字母表示a、b、cz z1z55第第2相相：非特異相，用阿拉伯?dāng)?shù)字表示：非特異相，用阿拉伯?dāng)?shù)字表示1、2、3其中

12、也有用其中也有用小寫(xiě)字母小寫(xiě)字母a、n、x等表示。等表示。 第十九頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定4 4、表面抗原：、表面抗原： 沙門(mén)氏菌有三種：沙門(mén)氏菌有三種：Vi、M、5抗原、抗原、K抗原抗原Vi抗原位于菌體的最表層，包圍了抗原位于菌體的最表層，包圍了O抗原，可阻礙抗原，可阻礙O抗原的血清學(xué)凝集抗原的血清學(xué)凝集試驗(yàn)。破壞試驗(yàn)。破壞Vi抗原：抗原：60 30，100 5含有含有Vi Vi 抗原的抗原的沙門(mén)沙門(mén)(shmn)(shmn)氏氏菌：菌： 傷寒沙門(mén)氏菌、丙型副傷寒沙門(mén)氏菌、都柏林沙門(mén)氏菌傷寒沙門(mén)氏菌、丙型副傷寒沙門(mén)氏菌、都柏林沙門(mén)氏菌 第二十頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與

13、鑒定三、沙門(mén)氏菌三、沙門(mén)氏菌(sh mn sh jn)(sh mn sh jn)食物中毒食物中毒 （一）、引起食物中毒最常見(jiàn)的沙門(mén)氏菌：一）、引起食物中毒最常見(jiàn)的沙門(mén)氏菌： 鼠傷寒鼠傷寒(shnghn)(shnghn)沙門(mén)氏菌、腸炎沙門(mén)氏菌、豬霍亂沙門(mén)氏菌沙門(mén)氏菌、腸炎沙門(mén)氏菌、豬霍亂沙門(mén)氏菌（二）、易引起沙門(mén)氏菌中毒的食品（二）、易引起沙門(mén)氏菌中毒的食品 肉、蛋、乳類(lèi)食品肉、蛋、乳類(lèi)食品行業(yè)關(guān)注：美國(guó)(mi u)兩種花生醬含沙門(mén)氏菌 第二十一頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定(三三)、中毒、中毒(zhng d)(zhng d)原因原因 1、食用病畜禽的肉制品食品、食用病畜禽的肉制品食品

14、(shpn) 2、病畜禽、帶菌人和動(dòng)物使食品受污染、病畜禽、帶菌人和動(dòng)物使食品受污染 3、用不潔凈水外理食品、用不潔凈水外理食品 第二十二頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定（四）、臨床（四）、臨床(ln chun)(ln chun)病狀（所致病病狀（所致病菌）菌） 1、腸熱?。簜c副傷寒病，為慢性發(fā)熱的菌血病。、腸熱?。簜c副傷寒病，為慢性發(fā)熱的菌血病。 由傷寒與副傷寒菌引起，潛伏期由傷寒與副傷寒菌引起，潛伏期720天天2、急性腸胃、急性腸胃(chn wi)類(lèi)：主要癥狀：頭痛、發(fā)熱、惡心、嘔吐、類(lèi)：主要癥狀：頭痛、發(fā)熱、惡心、嘔吐、腹瀉、出冷汗、及全身不適，病程腹瀉、出冷汗、及全身不

15、適，病程23天天3、敗血病、敗血病：高燒、寒戰(zhàn)、厭食、局部發(fā)炎、由豬霍亂沙門(mén)氏菌等：高燒、寒戰(zhàn)、厭食、局部發(fā)炎、由豬霍亂沙門(mén)氏菌等引起引起 第二十三頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定四、微生物檢驗(yàn)四、微生物檢驗(yàn)(jinyn)(jinyn) （一）、基本步驟（程序）（一）、基本步驟（程序） 檢樣檢樣增菌（前增菌）增菌（前增菌）分離培養(yǎng)分離培養(yǎng)生化生化試驗(yàn)初步試驗(yàn)初步(chb)(chb)鑒定鑒定血清學(xué)反應(yīng)最后鑒定血清學(xué)反應(yīng)最后鑒定報(bào)報(bào)告告 第二十四頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定1、前增菌：用無(wú)選擇性的培養(yǎng)基使處于、前增菌：用無(wú)選擇性的培養(yǎng)基使處于(chy)瀕死狀態(tài)的瀕死狀態(tài)的M恢復(fù)

16、活力恢復(fù)活力;2、選擇性增菌：使沙門(mén)氏菌優(yōu)勢(shì)繁殖，基它細(xì)菌變到抑制、選擇性增菌：使沙門(mén)氏菌優(yōu)勢(shì)繁殖，基它細(xì)菌變到抑制;3、選擇性平板分離培養(yǎng)：分離出所需的細(xì)菌、選擇性平板分離培養(yǎng)：分離出所需的細(xì)菌;4、生化試驗(yàn)：鑒定分離出來(lái)的細(xì)菌是否符合所檢項(xiàng)目的、生化試驗(yàn)：鑒定分離出來(lái)的細(xì)菌是否符合所檢項(xiàng)目的細(xì)菌細(xì)菌;5、血清學(xué)鑒定：進(jìn)一步鑒定。、血清學(xué)鑒定：進(jìn)一步鑒定。第二十五頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定（二）、檢驗(yàn)（二）、檢驗(yàn)(jinyn)(jinyn)操作關(guān)鍵點(diǎn)操作關(guān)鍵點(diǎn) 1、增菌：使待檢菌復(fù)壯，抑制雜菌生長(zhǎng)，提高檢出率。、增菌：使待檢菌復(fù)壯，抑制雜菌生長(zhǎng)，提高檢出率。 前增菌：用于加工過(guò)

17、的食品，前增菌：用于加工過(guò)的食品，37，48h 或或1824h，長(zhǎng)有雜菌。，長(zhǎng)有雜菌。 增菌培養(yǎng)基：增菌液一般用增菌培養(yǎng)基：增菌液一般用MM和和SC兩種，如可能是傷寒沙門(mén)氏菌兩種，如可能是傷寒沙門(mén)氏菌(sh mn sh jn)用用TTB，用，用42培養(yǎng)。培養(yǎng)。第二十六頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定2、平板、平板(pngbn)(pngbn)分離分離 選擇性培養(yǎng)基：選擇性培養(yǎng)基：BS、DHL、HE、WS、SSBS中最好，中最好，DHL、HE、WS很好，很好，SS最差最差一般一般(ybn)(ybn)要用：要用：BS和和WS/SS兩個(gè)平板，兩個(gè)平板，BS主要主要用于傷寒沙門(mén)氏菌的分離用于傷寒

18、沙門(mén)氏菌的分離第二十七頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定BS上的菌落上的菌落(jnlu)DHL上的菌落上的菌落(jnlu)SS上的菌落上的菌落(jnlu)第二十八頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定3、五項(xiàng)生化、五項(xiàng)生化(shn hu)(shn hu)試驗(yàn)試驗(yàn) H H2 2S S、靛基質(zhì)、靛基質(zhì)(j zh)(j zh) 、 PH7.2尿素酶、尿素酶、KCN 、 賴(lài)氨酸脫羧酶賴(lài)氨酸脫羧酶 第二十九頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定（1）三糖鐵培養(yǎng)）三糖鐵培養(yǎng)(piyng)的培養(yǎng)的培養(yǎng)(piyng)典型沙門(mén)氏菌在三糖鐵培養(yǎng)上的特征：典型沙門(mén)氏菌在三糖鐵培養(yǎng)上的特征：表面（表面（-）

19、粉紅色、底層）粉紅色、底層(d cn)（+）黃色、）黃色、 H H2 2S S （+）底層有黑色、有動(dòng)力。）底層有黑色、有動(dòng)力。在在TSI培養(yǎng)基中培養(yǎng)基中：表面（：表面（+）黃色、）黃色、 H H2 2S S （-）的培養(yǎng)物可）的培養(yǎng)物可排除排除，其它培養(yǎng)物，其它培養(yǎng)物均有可能是沙門(mén)氏菌。均有可能是沙門(mén)氏菌。第三十頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定 （2）其余）其余(qy)四項(xiàng)生化實(shí)驗(yàn)四項(xiàng)生化實(shí)驗(yàn)靛基質(zhì)靛基質(zhì)(j zh) PH7.2尿素酶尿素酶 KCN 賴(lài)氨酸脫羧酶賴(lài)氨酸脫羧酶 反應(yīng)序號(hào)：反應(yīng)序號(hào)：A1、A2多見(jiàn)，多見(jiàn)，B1少見(jiàn)少見(jiàn) 第三十一頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定（3）

20、、典型沙門(mén)氏菌的五項(xiàng)生化反應(yīng)）、典型沙門(mén)氏菌的五項(xiàng)生化反應(yīng)(fnyng)及其檢驗(yàn)的利用及其檢驗(yàn)的利用 A、典型五項(xiàng)生化反應(yīng)、典型五項(xiàng)生化反應(yīng)(fnyng)：A1 H2S（+） 靛基質(zhì)（靛基質(zhì)（-） PH7.2尿素酶（尿素酶（-） KCN（-） 賴(lài)氨酸脫羧賴(lài)氨酸脫羧E（+）第三十二頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定B、利用五項(xiàng)生化反應(yīng)鑒定沙門(mén)氏菌的最簡(jiǎn)單、利用五項(xiàng)生化反應(yīng)鑒定沙門(mén)氏菌的最簡(jiǎn)單(jindn)(jindn)方案方案 a、對(duì)于、對(duì)于H2S陽(yáng)性菌，利用五項(xiàng)生化反應(yīng)試驗(yàn)可判別沙門(mén)氏陽(yáng)性菌，利用五項(xiàng)生化反應(yīng)試驗(yàn)可判別沙門(mén)氏菌和檸檬酸桿菌。菌和檸檬酸桿菌。b、對(duì)于、對(duì)于H2S陰性菌，查到

21、陰性菌，查到B1時(shí)即：時(shí)即：H2S（-） 靛基質(zhì)（靛基質(zhì)（-） PH7.2尿素尿素(nio s)酶（酶（-） KCN（-） 賴(lài)氨酸脫羧賴(lài)氨酸脫羧E（+），補(bǔ)做），補(bǔ)做ONPE試驗(yàn)，可判定沙門(mén)氏菌屬和試驗(yàn)，可判定沙門(mén)氏菌屬和埃希氏菌屬（埃希氏菌屬（ONPE（-）為沙門(mén)氏菌，）為沙門(mén)氏菌，ONPE（+）大腸艾）大腸艾希氏菌希氏菌第三十三頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定5、血清學(xué)試驗(yàn)、血清學(xué)試驗(yàn)(shyn)（最后鑒定）（最后鑒定） （1）、沙門(mén)氏菌診斷血清的種類(lèi)：）、沙門(mén)氏菌診斷血清的種類(lèi)： 10種組合種組合(zh)血清：主要用于傷寒和副傷寒沙門(mén)氏菌鑒定血清：主要用于傷寒和副傷寒沙門(mén)氏菌鑒定

22、 26種組合血清：常見(jiàn)致病菌的定群與分型種組合血清：常見(jiàn)致病菌的定群與分型 57種組合血清：常見(jiàn)定型，初步鑒定種組合血清：常見(jiàn)定型，初步鑒定AF群以外的菌型群以外的菌型144種組合血清種組合血清：全套裝：全套裝 第三十四頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定（2）、血清學(xué)檢驗(yàn)、血清學(xué)檢驗(yàn)(jinyn)(jinyn)步驟步驟 抗原準(zhǔn)備抗原準(zhǔn)備 AF多價(jià)血清檢驗(yàn)多價(jià)血清檢驗(yàn)(jinyn)（判定是否是（判定是否是沙門(mén)氏菌）沙門(mén)氏菌） 群特異性抗體血清（如群特異性抗體血清（如O2、O4、O3、O7、O8、O9、O10、O11（判定（判定O群別）群別） O單因子血單因子血清檢查清檢查 H因子血清檢查（

23、分型）因子血清檢查（分型） 報(bào)告報(bào)告 第三十五頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定五、檢驗(yàn)結(jié)果五、檢驗(yàn)結(jié)果(ji gu)的報(bào)告的報(bào)告1、凡血清學(xué)鑒定、凡血清學(xué)鑒定(jindng)與生化反應(yīng)均符合者，與生化反應(yīng)均符合者，報(bào)告發(fā)現(xiàn)沙門(mén)氏菌。報(bào)告發(fā)現(xiàn)沙門(mén)氏菌。 經(jīng)檢驗(yàn)，經(jīng)檢驗(yàn)，食品發(fā)現(xiàn)有沙門(mén)氏菌食品發(fā)現(xiàn)有沙門(mén)氏菌 2、凡血清學(xué)鑒定與生化反應(yīng)均不符合者，、凡血清學(xué)鑒定與生化反應(yīng)均不符合者，報(bào)告未發(fā)現(xiàn)沙門(mén)氏菌。報(bào)告未發(fā)現(xiàn)沙門(mén)氏菌。 第三十六頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定思考題：思考題：1、典型沙門(mén)氏菌的五項(xiàng)生化試驗(yàn)結(jié)果如何？、典型沙門(mén)氏菌的五項(xiàng)生化試驗(yàn)結(jié)果如何？2、沙門(mén)氏菌的形態(tài)特征，培養(yǎng)

24、特性是什么？、沙門(mén)氏菌的形態(tài)特征，培養(yǎng)特性是什么？3、沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)時(shí)為什么要進(jìn)行前增菌和增菌？、沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)時(shí)為什么要進(jìn)行前增菌和增菌？4、沙門(mén)氏菌有哪些抗原？各有何特點(diǎn)？、沙門(mén)氏菌有哪些抗原？各有何特點(diǎn)？O、H抗原如抗原如何表示何表示(biosh)，AF群沙門(mén)氏菌中，代表每群群沙門(mén)氏菌中，代表每群O特異特異性抗原的獨(dú)特因子是什么？性抗原的獨(dú)特因子是什么？ 第三十七頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定5、沙門(mén)氏菌哪幾個(gè)菌型具有、沙門(mén)氏菌哪幾個(gè)菌型具有Vi抗原，抗原，Vi抗原對(duì)抗原對(duì)O抗原血清抗原血清漣試驗(yàn)有何影響，對(duì)含漣試驗(yàn)有何影響，對(duì)含Vi抗原菌，如何做抗原菌，如何做O抗原血清學(xué)抗原血清

25、學(xué)試驗(yàn)。試驗(yàn)。6、沙門(mén)氏菌在、沙門(mén)氏菌在SS平板平板(pngbn)，TSI培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的現(xiàn)象如培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的現(xiàn)象如何，說(shuō)明其原理。何，說(shuō)明其原理。7、分離純化后怎樣選用最少的生化試驗(yàn)方法初步鑒定檢驗(yàn)、分離純化后怎樣選用最少的生化試驗(yàn)方法初步鑒定檢驗(yàn)菌是否是沙門(mén)氏菌屬的細(xì)菌。菌是否是沙門(mén)氏菌屬的細(xì)菌。8、如何進(jìn)行沙門(mén)氏菌的血清學(xué)試驗(yàn)。、如何進(jìn)行沙門(mén)氏菌的血清學(xué)試驗(yàn)。第三十八頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定第三節(jié)、志賀氏菌的檢驗(yàn)第三節(jié)、志賀氏菌的檢驗(yàn)(jinyn) 一、生物學(xué)特性一、生物學(xué)特性 （一）、形態(tài)與染色（一）、形態(tài)與染色 革蘭氏陰性短桿菌革蘭氏陰性短桿菌(gnjn)、無(wú)莢膜，無(wú)芽

26、胞，無(wú)鞭、無(wú)莢膜，無(wú)芽胞，無(wú)鞭毛毛 23um*0.50.7um 第三十九頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定（二）、培養(yǎng)（二）、培養(yǎng)(piyng)特性特性1、需氧或兼氧性厭氧，最適溫度、需氧或兼氧性厭氧，最適溫度37，PH7.27.42、在普通瓊脂和、在普通瓊脂和SS平板上，能形成圓形、微凸、光滑濕潤(rùn)、平板上，能形成圓形、微凸、光滑濕潤(rùn)、無(wú)色半透明、邊緣整齊、在中等無(wú)色半透明、邊緣整齊、在中等(zhngdng)大小的菌落大小的菌落3、宋氏志賀氏菌菌落較大，較不透明，粗糙而扁平，在、宋氏志賀氏菌菌落較大，較不透明，粗糙而扁平，在SS平板上可遲發(fā)酵乳糖，菌落呈玫瑰紅色。平板上可遲發(fā)酵乳糖，菌落

27、呈玫瑰紅色。4、在肉湯中呈均勻混濁生長(zhǎng)，無(wú)菌膜。、在肉湯中呈均勻混濁生長(zhǎng)，無(wú)菌膜。 第四十頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定（三）、生化（三）、生化(shn hu)反應(yīng)反應(yīng)1、發(fā)酵葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，除宋氏志賀氏、發(fā)酵葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，除宋氏志賀氏菌外，均不發(fā)酵乳糖。菌外，均不發(fā)酵乳糖。2、不發(fā)酵側(cè)金盞花醇、肌醇、水楊苷。、不發(fā)酵側(cè)金盞花醇、肌醇、水楊苷。3、不產(chǎn)生、不產(chǎn)生H2S，不分解尿素，不分解尿素，V-P試驗(yàn)陰性，試驗(yàn)陰性，不能利用不能利用(lyng)檸檬酸鹽。檸檬酸鹽。4、甲基紅陽(yáng)性。、甲基紅陽(yáng)性。第四十一頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定（四）、抗原（四）、抗原(kng

28、yun)結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)1、抗原、抗原(kngyun)構(gòu)成：構(gòu)成：O抗原：抗原： 群特異性抗原：群特異性抗原：A、B、C、D K抗原：除抗原：除B群外，一般有群外，一般有K抗原抗原第四十二頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定2、志賀氏菌的分群、志賀氏菌的分群(fn qn)與血清與血清型型志賀氏菌分為志賀氏菌分為(fn wi)四群：四群：A群（痢疾志賀氏菌）：群（痢疾志賀氏菌）：110型型 B群（福氏志賀氏菌）：群（福氏志賀氏菌）：16型型+X、Y兩個(gè)變種，兩個(gè)變種，C群（鮑氏志賀氏菌群（鮑氏志賀氏菌 ）：）：115型型D群（宋內(nèi)氏志賀氏菌）群（宋內(nèi)氏志賀氏菌） ：1個(gè)型個(gè)型第四十三頁(yè)，共七十一頁(yè)。

29、-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定志賀氏菌屬抗原志賀氏菌屬抗原(kngyun)(kngyun)的分類(lèi)的分類(lèi)菌 名 血 清 分 類(lèi) 生 化 特 性 群 型 亞 型 甘露醇 鳥(niǎo)氨酸脫羧酶 志賀氏菌 A 1 10 - 福 氏 菌 B 16x、y變種 1a、1b、2a、2b、3a、3b3c、4a、4b + - 鮑 氏 菌 C 1 15 + - 宋內(nèi)氏菌 D 1 + 第四十四頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定葡萄糖葡萄糖+乳糖(r tn)- 甘露醇甘露醇- 痢疾痢疾(l ji)(l ji)志賀氏菌志賀氏菌1 1、3 3、4 4、5 5、6 6、9 9、1010型型 痢疾痢疾(l (l ji)ji)志賀志賀氏

30、菌氏菌2 2、7 7、8 8型型 福氏福氏6型，型，鮑氏鮑氏1、2 2、3 3、4 4、5 5、6 6、8 8、1010、1212、1414型型 福氏痢疾菌（福氏痢疾菌（1、2 2、3 3、4 4、5 5型）型）鮑氏鮑氏5 5、7 7、9 9、1111、1313、1515型型靛基質(zhì)靛基質(zhì)- 乳糖乳糖+ 宋氏志賀宋氏志賀氏菌氏菌 靛基質(zhì)靛基質(zhì)- 靛基質(zhì)靛基質(zhì)+ 靛基質(zhì)靛基質(zhì)- 靛基質(zhì)靛基質(zhì)+ 甘露醇甘露醇+ 第四十五頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定3、屬內(nèi)外抗原、屬內(nèi)外抗原(kngyun)關(guān)系關(guān)系（1）群內(nèi)抗原關(guān)系：）群內(nèi)抗原關(guān)系： A群：群：2與與10型，具有型，具有(jyu)密切關(guān)系

31、密切關(guān)系 C群：群：1與與4和和11型，型，10與與11相關(guān)相關(guān) B群：群抗原是群：群抗原是B群各型之間的共同抗原群各型之間的共同抗原（2）群間抗原關(guān)系：）群間抗原關(guān)系： C群群17型與型與A群群3型相關(guān)型相關(guān) C群群18型與型與A群群11型相關(guān)型相關(guān)第四十六頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定（3）屬外抗原關(guān)系：）屬外抗原關(guān)系： 志賀氏菌與艾希氏菌屬的志賀氏菌與艾希氏菌屬的O抗原關(guān)系抗原關(guān)系非常密切，除非常密切，除A群群9型和型和D群宋氏菌與埃氏群宋氏菌與埃氏希菌的希菌的O抗原關(guān)系未見(jiàn)報(bào)道外，每一個(gè)型抗原關(guān)系未見(jiàn)報(bào)道外，每一個(gè)型都與一定都與一定(ydng)(ydng)的艾希氏菌的的艾希氏

32、菌的O抗原有關(guān)抗原有關(guān)。第四十七頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定4、K抗原對(duì)抗原對(duì)O抗原血清學(xué)試驗(yàn)的影響抗原血清學(xué)試驗(yàn)的影響 可可阻礙阻礙(z i)(z i)O抗原抗原的血清學(xué)凝集試驗(yàn)，的血清學(xué)凝集試驗(yàn)，煮沸處理即可。煮沸處理即可。 第四十八頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定（五）志賀氏菌的抵抗力（五）志賀氏菌的抵抗力志賀氏菌屬在外界(wiji)環(huán)境中的生存力，以宋內(nèi)氏最強(qiáng)，福氏菌次之，志賀氏菌最弱。一般在潮濕土壤中能存活34天，37水中存活20天，在糞便內(nèi)（室溫）存活11天。日光直接照射30分鐘，56-6010分即被殺死，對(duì)高溫和化學(xué)消毒劑很敏感，1%石炭酸中15-30分鐘即被

33、殺死，對(duì)氯霉素、磺胺類(lèi)、鏈霉素敏感，但易產(chǎn)生耐藥性。第四十九頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定二、志賀氏菌的致病性與食物中毒二、志賀氏菌的致病性與食物中毒(shwzhngd)(shwzhngd)（一）流行病學(xué)（一）流行病學(xué)(li xn bn xu)第五十頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定傳染源 食物、病人食物、病人(bngrn)、糞便、蒼蠅等、糞便、蒼蠅等第五十一頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定（二）志賀氏菌的致病性（二）志賀氏菌的致病性致病因素致病因素(yn s)：侵襲力、菌體內(nèi)毒素、外毒素侵襲力、菌體內(nèi)毒素、外毒素第五十二頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定（二）臨

34、床（二）臨床(ln chun)癥狀癥狀A(yù)、急性細(xì)菌性痢疾：、急性細(xì)菌性痢疾： 急性典型、急性非典型、急性中毒性菌痢。急性典型、急性非典型、急性中毒性菌痢。 B、慢性、慢性(mn xng)細(xì)菌性痢疾：細(xì)菌性痢疾： 慢性遷延型、慢性隱伏型、慢性急性發(fā)作型慢性遷延型、慢性隱伏型、慢性急性發(fā)作型。第五十三頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定三、微生物檢驗(yàn)三、微生物檢驗(yàn)(jinyn)(jinyn) （一）檢驗(yàn)（一）檢驗(yàn)(jinyn)步驟（程序）步驟（程序） 檢樣檢樣樣品樣品處理處理增菌培養(yǎng)增菌培養(yǎng)SS、EMB平板分離培養(yǎng)平板分離培養(yǎng)初步生化鑒定初步生化鑒定最后血清最后血清學(xué)鑒定學(xué)鑒定報(bào)告報(bào)告第五十四

35、頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定（二）檢驗(yàn)操作（二）檢驗(yàn)操作(cozu)要點(diǎn)要點(diǎn)志賀氏菌在常溫中生存志賀氏菌在常溫中生存(shngcn)的時(shí)間較短，應(yīng)盡的時(shí)間較短，應(yīng)盡快進(jìn)行試驗(yàn)。快進(jìn)行試驗(yàn)。 如如24h內(nèi)不能檢驗(yàn)，樣品應(yīng)在冰箱內(nèi)內(nèi)不能檢驗(yàn)，樣品應(yīng)在冰箱內(nèi) 長(zhǎng)時(shí)間不能檢驗(yàn)，放在低溫冰箱內(nèi)。長(zhǎng)時(shí)間不能檢驗(yàn)，放在低溫冰箱內(nèi)。 第五十五頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定1、增菌培養(yǎng)、增菌培養(yǎng)(piyng)培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：GN增菌液增菌液在在361 68h1 68h，當(dāng)培養(yǎng)液出現(xiàn)，當(dāng)培養(yǎng)液出現(xiàn)輕微混濁即中止輕微混濁即中止(zhngzh)(zhngzh)培養(yǎng)。培養(yǎng)。第五十六頁(yè)，共七十一頁(yè)。

36、-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定2 2、分離、分離(fnl)(fnl)培養(yǎng)培養(yǎng) 強(qiáng)選擇性平板：強(qiáng)選擇性平板：SSSS或或HEHE、WS WS 弱選擇性平板：弱選擇性平板：EMB或麥康數(shù)或麥康數(shù) 在工作中在工作中363611培養(yǎng)培養(yǎng) 1824h1824h，菌落特征菌落特征(tzhng)：無(wú)色透明，中等大小，光滑圓形菌落。無(wú)色透明，中等大小，光滑圓形菌落。第五十七頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定HE平板原理平板原理(yunl)及及反應(yīng)反應(yīng) 發(fā)酵乳糖(r tn)的某種腸桿菌 不發(fā)酵乳糖的某種腸道菌，而且(r qi)產(chǎn)生硫化氫，可能是沙門(mén)氏菌 不發(fā)酵乳糖的腸道菌，可能就是志賀氏菌 第五十八頁(yè)，共七十一

37、頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定SS平板原理平板原理(yunl)及反應(yīng)及反應(yīng)SS Agar (Salmonella Shigella Agar)大腸桿菌或者別的發(fā)酵乳糖(r tn)的腸桿菌 是沙門(mén)氏菌。有黑色中心。如果(rgu)沒(méi)有黑色中心，就很可能是志賀氏菌了第五十九頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定麥康凱瓊脂麥康凱瓊脂(qingzh)平板平板 第六十頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定EMB平板照片平板照片(zhopin)及原理及原理 第六十一頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定3、初步、初步(chb)(chb)生化鑒定生化鑒定 從平板從平板(pngbn)上挑取上挑取34個(gè)可疑菌

38、落，接種于個(gè)可疑菌落，接種于TSI和葡萄糖半固體培養(yǎng)基各一管，和葡萄糖半固體培養(yǎng)基各一管，36， 1824h，第六十二頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定三糖鐵（三糖鐵（TSI）瓊脂）瓊脂(qingzh)試驗(yàn)的原理試驗(yàn)的原理2志賀氏菌志賀氏菌3沙門(mén)氏菌沙門(mén)氏菌(sh mn sh jn)4大大腸桿菌腸桿菌 葡萄糖半固體葡萄糖半固體(gt)原理及結(jié)果原理及結(jié)果。 Organism Test Result 1. Pseudomonas aeruginosa（銅綠假單胞菌）：Motile 2. Staphylococcus aureus：Non-motile 3. Bacillus subtili

39、s：Motile 第六十三頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定志賀氏菌在志賀氏菌在TSI生長(zhǎng)的結(jié)果（現(xiàn)象）：生長(zhǎng)的結(jié)果（現(xiàn)象）：（1 1）斜面產(chǎn)堿仍為紅色）斜面產(chǎn)堿仍為紅色(hngs)(hngs)或粉紅色或粉紅色(hngs)(hngs)；（2 2）底層產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，變黃色；）底層產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，變黃色；（3 3）不產(chǎn)）不產(chǎn)H2S，不出現(xiàn)黑色。，不出現(xiàn)黑色。志賀氏菌在志賀氏菌在半固體培養(yǎng)基生長(zhǎng)：沿線生長(zhǎng)，無(wú)半固體培養(yǎng)基生長(zhǎng)：沿線生長(zhǎng)，無(wú)動(dòng)力。動(dòng)力。 第六十四頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定在志賀氏菌檢驗(yàn)在志賀氏菌檢驗(yàn)(jinyn)中可棄去的培養(yǎng)物：中可棄去的培養(yǎng)物：（1）在）在TSI表面上呈現(xiàn)蔓延生長(zhǎng)的培養(yǎng)物表面上呈現(xiàn)蔓延生長(zhǎng)的培養(yǎng)物（2）在）在1824h發(fā)酵乳糖發(fā)酵乳糖(r tn)、蔗糖的培養(yǎng)物、蔗糖的培養(yǎng)物（3）不分解葡萄糖，只在半固體培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的培養(yǎng)）不分解葡萄糖，只在半固體培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的培養(yǎng)物。物。（4）產(chǎn)氣的培養(yǎng)物）產(chǎn)氣的培養(yǎng)物（5）有動(dòng)力的培養(yǎng)物）有動(dòng)力的培養(yǎng)物（6）產(chǎn)）產(chǎn)H2S的培養(yǎng)物的培養(yǎng)物第六十五頁(yè)，共七十一頁(yè)。-腸道致病菌的檢驗(yàn)與鑒定 4、血清學(xué)試驗(yàn)和生化、血清學(xué)試驗(yàn)和生化(shn hu)(shn hu)鑒定試驗(yàn)鑒定試驗(yàn) （1）血清學(xué)分型：）血清學(xué)分型：凡凝為志賀氏菌，挑取三糖鐵瓊脂上的培養(yǎng)物，做玻片凝集試驗(yàn)。先用先用4種志賀氏