腸道致病菌的檢驗與鑒定課件

1、-腸道致病菌的檢驗與鑒定腸道致病菌的檢驗腸道致病菌的檢驗(jinyn)(jinyn)與鑒定與鑒定 腸道致病菌的檢驗腸道致病菌的檢驗(jinyn)(jinyn)與鑒定與鑒定 第一頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定第一節(jié)第一節(jié) 概述概述(i sh)一、食品中常見的腸道致病菌一、食品中常見的腸道致病菌 沙門氏菌沙門氏菌(sh mn sh jn) 志賀氏菌志賀氏菌 大腸艾希氏菌大腸艾希氏菌 變形桿菌變形桿菌 耶爾森菌耶爾森菌第二頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定二、生物學特性二、生物學特性(txng)1、形態(tài)與染色、形態(tài)與染色均為革蘭氏陰性桿菌，中等大小，無芽胞，多數(shù)具有周身鞭毛能運均為革

2、蘭氏陰性桿菌，中等大小，無芽胞，多數(shù)具有周身鞭毛能運動，志賀氏菌屬無鞭毛無動力。動，志賀氏菌屬無鞭毛無動力。2、培養(yǎng)、培養(yǎng)(piyng)和生化反應和生化反應（1）、需氧或兼性厭氧，菌落中等大小，表面光滑，液體培養(yǎng)基混濁）、需氧或兼性厭氧，菌落中等大小，表面光滑，液體培養(yǎng)基混濁生長。生長。（2）、腸道致病菌一般不分解乳糖，而非致病菌多能分解乳糖、）、腸道致病菌一般不分解乳糖，而非致病菌多能分解乳糖、葡萄糖產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣。葡萄糖產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣。（3）、可還原硝酸鹽為亞硝酸鹽。）、可還原硝酸鹽為亞硝酸鹽。 第三頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定 三、抗原三、抗原(kngyun)(kngyun)

3、類型類型 O抗原抗原也稱菌體抗原，細胞壁脂肪糖，耐熱也稱菌體抗原，細胞壁脂肪糖，耐熱100不不被破壞被破壞H抗原抗原也稱鞭毛抗原，鞭毛蛋白，不耐熱，也稱鞭毛抗原，鞭毛蛋白，不耐熱，60 30可破壞可破壞K抗原抗原也稱表面抗原（莢膜抗原），多糖，具有阻抑也稱表面抗原（莢膜抗原），多糖，具有阻抑O抗原發(fā)生凝集的現(xiàn)象，加熱抗原發(fā)生凝集的現(xiàn)象，加熱6030可消除可消除抑阻作用抑阻作用菌毛抗原菌毛抗原第四頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定四、四、 致病性致病性（一）、致病物質（一）、致病物質1、內毒素：能引起機體發(fā)熱，白細胞減少、內毒素：能引起機體發(fā)熱，白細胞減少(jinsho)，低血糖，血壓，低

4、血糖，血壓降低，嚴重者休克。降低，嚴重者休克。2、外毒素、外毒素：對小腸粘膜細胞具有物殊毒害作用，引起腹瀉。：對小腸粘膜細胞具有物殊毒害作用，引起腹瀉。第五頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定（二）、所致病疾（二）、所致病疾 1、傷寒、傷寒(shnghn)和副傷寒和副傷寒(shnghn) 2、食物中毒、食物中毒 3、細菌性痢疾、細菌性痢疾第六頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定 五、微生物檢驗的基本五、微生物檢驗的基本(jbn)程序程序 檢樣檢樣處理處理(chl)(chl)增菌培養(yǎng)增菌培養(yǎng)分離培養(yǎng)分離培養(yǎng)生化試驗生化試驗血清學鑒定血清學鑒定報告報告 第七頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢

5、驗與鑒定思考題1 1、腸道致病菌具有、腸道致病菌具有(jyu)(jyu)哪些生物學特性哪些生物學特性? ?2 2、腸道致病菌具有哪些抗原？又稱為什么？有、腸道致病菌具有哪些抗原？又稱為什么？有什么特點？什么特點？3 3、寫出腸道致病菌檢驗的基本程序、寫出腸道致病菌檢驗的基本程序第八頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定第二節(jié)、沙門氏菌第二節(jié)、沙門氏菌(sh mn sh jn)檢驗檢驗一、概況一、概況（一）沙門氏菌的發(fā)現(xiàn)（一）沙門氏菌的發(fā)現(xiàn)(fxin)與食物中毒與食物中毒（二）沙門氏菌的命名（二）沙門氏菌的命名 根據(jù)所致疾病命名根據(jù)所致疾病命名 根據(jù)菌的發(fā)現(xiàn)地區(qū)命名根據(jù)菌的發(fā)現(xiàn)地區(qū)命名 以發(fā)現(xiàn)

6、者的名字命名以發(fā)現(xiàn)者的名字命名（三）沙門氏菌的抵抗力（三）沙門氏菌的抵抗力 60 30可殺死可殺死第九頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定 （四）沙門氏菌的分類地位（四）沙門氏菌的分類地位(dwi)及定及定義義1、地位：是腸桿菌科、埃希氏菌族、沙門氏菌、地位：是腸桿菌科、埃希氏菌族、沙門氏菌(sh mn sh jn)屬中的細菌屬中的細菌2、定義、定義 是腸桿菌科中形態(tài)和培養(yǎng)特征，生化反應及是腸桿菌科中形態(tài)和培養(yǎng)特征，生化反應及抗原結構相似，被抗原結構相似，被O1噬菌體裂解的一群革蘭噬菌體裂解的一群革蘭氏陰性桿菌。氏陰性桿菌。第十頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定二、生物學特性二、生物

7、學特性(txng)(txng) （一）、形態(tài)與染色：（一）、形態(tài)與染色： 革蘭氏染色陰性，無莢膜，無芽胞，多數(shù)革蘭氏染色陰性，無莢膜，無芽胞，多數(shù)有鞭毛，有動力，短小桿菌。有鞭毛，有動力，短小桿菌。 （二）、培養(yǎng)（二）、培養(yǎng)(piyng)特性特性 1、需氧或兼性厭氧，最適溫度、需氧或兼性厭氧，最適溫度37，PH7.27.4。第十一頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定(沙門氏菌（紅色(hngs)）侵入人體細胞 第十二頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定2、對營養(yǎng)要求不高，在普通、對營養(yǎng)要求不高，在普通(ptng)(ptng)培養(yǎng)基生長良培養(yǎng)基生長良好，好，37 ，24h，能形成菌落中等大

8、小，直，能形成菌落中等大小，直徑徑2 23mm3mm，圓形或卵形，表面光滑濕潤，無，圓形或卵形，表面光滑濕潤，無色半透明，邊緣整齊的菌落色半透明，邊緣整齊的菌落3 3、在液體培養(yǎng)基中，呈均勻混濁性生長，無、在液體培養(yǎng)基中，呈均勻混濁性生長，無菌膜。菌膜。第十三頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定（三）、生化特性（三）、生化特性1、發(fā)酵、發(fā)酵GLU，甘露醇，山梨醇產(chǎn)酸產(chǎn)氣（傷寒雞傷寒沙，甘露醇，山梨醇產(chǎn)酸產(chǎn)氣（傷寒雞傷寒沙門氏菌少數(shù)不產(chǎn)氣）門氏菌少數(shù)不產(chǎn)氣）2、不發(fā)酵乳糖，蔗糖，側金黃花醇、不發(fā)酵乳糖，蔗糖，側金黃花醇3、多數(shù)產(chǎn)生、多數(shù)產(chǎn)生(chnshng)H2S（+），不產(chǎn)靛基質（），不產(chǎn)

9、靛基質（-），不分解），不分解尿素（尿素（-），不產(chǎn)生乙酰甲基甲醇（），不產(chǎn)生乙酰甲基甲醇（VP）（）（-），），4、能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽（、能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽（+）5、在、在KCN培養(yǎng)基中生長（培養(yǎng)基中生長（-），苯丙氨酸脫氨酸（），苯丙氨酸脫氨酸（-）第十四頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定（四）、抗原（四）、抗原(kngyun)結構結構主要兩種：主要兩種：A、O抗原抗原 B、H抗原抗原C、表面抗原（、表面抗原（K抗原）抗原） D、菌毛抗原、菌毛抗原第十五頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定2 、O抗原抗原(kngyun) （1） O抗原的表示方法抗原的表示方法共有共有58

10、種，用字母種，用字母O和阿拉伯數(shù)字標記：和阿拉伯數(shù)字標記：O1 、O2 、O3、 O4如：傷寒桿菌： O9 、O12第十六頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定（2）沙門氏菌的分群及表示）沙門氏菌的分群及表示(biosh)方法方法用大寫字母及相關符號表示：用大寫字母及相關符號表示： A、B、C、D、E、F Z、 O51 O63、 O65 O67第十七頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定（3）沙門氏菌）沙門氏菌(sh mn sh jn)中的主要菌群及其群特異性抗原中的主要菌群及其群特異性抗原 A群群-O2 B群群-O4 C群群-O6 C1群群-O7、 C2群群- O6 O8 、 C3群群-

11、O8 、 C4群群-O6 O7 O14 D群群-O9 F群群-O11 E群群-O3 E2群群-O3、 O10族族 E3群群-O3、 O15 E4群群-O1 、O3 、O19第十八頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定3、H抗原抗原(kngyun)(kngyun)（鞭毛抗原（鞭毛抗原(kngyun)(kngyun)） 耐熱性差：耐熱性差：6015或酒精處理可破壞或酒精處理可破壞沙門沙門(shmn)氏氏H抗原有兩種：抗原有兩種：第第1相：特異相，用英文小寫字母表示相：特異相，用英文小寫字母表示a、b、cz z1z55第第2相相：非特異相，用阿拉伯數(shù)字表示：非特異相，用阿拉伯數(shù)字表示1、2、3其中

12、也有用其中也有用小寫字母小寫字母a、n、x等表示。等表示。 第十九頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定4 4、表面抗原：、表面抗原： 沙門氏菌有三種：沙門氏菌有三種：Vi、M、5抗原、抗原、K抗原抗原Vi抗原位于菌體的最表層，包圍了抗原位于菌體的最表層，包圍了O抗原，可阻礙抗原，可阻礙O抗原的血清學凝集抗原的血清學凝集試驗。破壞試驗。破壞Vi抗原：抗原：60 30，100 5含有含有Vi Vi 抗原的抗原的沙門沙門(shmn)(shmn)氏氏菌：菌： 傷寒沙門氏菌、丙型副傷寒沙門氏菌、都柏林沙門氏菌傷寒沙門氏菌、丙型副傷寒沙門氏菌、都柏林沙門氏菌 第二十頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與

13、鑒定三、沙門氏菌三、沙門氏菌(sh mn sh jn)(sh mn sh jn)食物中毒食物中毒 （一）、引起食物中毒最常見的沙門氏菌：一）、引起食物中毒最常見的沙門氏菌： 鼠傷寒鼠傷寒(shnghn)(shnghn)沙門氏菌、腸炎沙門氏菌、豬霍亂沙門氏菌沙門氏菌、腸炎沙門氏菌、豬霍亂沙門氏菌（二）、易引起沙門氏菌中毒的食品（二）、易引起沙門氏菌中毒的食品 肉、蛋、乳類食品肉、蛋、乳類食品行業(yè)關注：美國(mi u)兩種花生醬含沙門氏菌 第二十一頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定(三三)、中毒、中毒(zhng d)(zhng d)原因原因 1、食用病畜禽的肉制品食品、食用病畜禽的肉制品食品

14、(shpn) 2、病畜禽、帶菌人和動物使食品受污染、病畜禽、帶菌人和動物使食品受污染 3、用不潔凈水外理食品、用不潔凈水外理食品 第二十二頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定（四）、臨床（四）、臨床(ln chun)(ln chun)病狀（所致病病狀（所致病菌）菌） 1、腸熱?。簜c副傷寒病，為慢性發(fā)熱的菌血病。、腸熱?。簜c副傷寒病，為慢性發(fā)熱的菌血病。 由傷寒與副傷寒菌引起，潛伏期由傷寒與副傷寒菌引起，潛伏期720天天2、急性腸胃、急性腸胃(chn wi)類：主要癥狀：頭痛、發(fā)熱、惡心、嘔吐、類：主要癥狀：頭痛、發(fā)熱、惡心、嘔吐、腹瀉、出冷汗、及全身不適，病程腹瀉、出冷汗、及全身不

15、適，病程23天天3、敗血病、敗血?。焊邿⒑畱?zhàn)、厭食、局部發(fā)炎、由豬霍亂沙門氏菌等：高燒、寒戰(zhàn)、厭食、局部發(fā)炎、由豬霍亂沙門氏菌等引起引起 第二十三頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定四、微生物檢驗四、微生物檢驗(jinyn)(jinyn) （一）、基本步驟（程序）（一）、基本步驟（程序） 檢樣檢樣增菌（前增菌）增菌（前增菌）分離培養(yǎng)分離培養(yǎng)生化生化試驗初步試驗初步(chb)(chb)鑒定鑒定血清學反應最后鑒定血清學反應最后鑒定報報告告 第二十四頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定1、前增菌：用無選擇性的培養(yǎng)基使處于、前增菌：用無選擇性的培養(yǎng)基使處于(chy)瀕死狀態(tài)的瀕死狀態(tài)的M恢復

16、活力恢復活力;2、選擇性增菌：使沙門氏菌優(yōu)勢繁殖，基它細菌變到抑制、選擇性增菌：使沙門氏菌優(yōu)勢繁殖，基它細菌變到抑制;3、選擇性平板分離培養(yǎng)：分離出所需的細菌、選擇性平板分離培養(yǎng)：分離出所需的細菌;4、生化試驗：鑒定分離出來的細菌是否符合所檢項目的、生化試驗：鑒定分離出來的細菌是否符合所檢項目的細菌細菌;5、血清學鑒定：進一步鑒定。、血清學鑒定：進一步鑒定。第二十五頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定（二）、檢驗（二）、檢驗(jinyn)(jinyn)操作關鍵點操作關鍵點 1、增菌：使待檢菌復壯，抑制雜菌生長，提高檢出率。、增菌：使待檢菌復壯，抑制雜菌生長，提高檢出率。 前增菌：用于加工過

17、的食品，前增菌：用于加工過的食品，37，48h 或或1824h，長有雜菌。，長有雜菌。 增菌培養(yǎng)基：增菌液一般用增菌培養(yǎng)基：增菌液一般用MM和和SC兩種，如可能是傷寒沙門氏菌兩種，如可能是傷寒沙門氏菌(sh mn sh jn)用用TTB，用，用42培養(yǎng)。培養(yǎng)。第二十六頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定2、平板、平板(pngbn)(pngbn)分離分離 選擇性培養(yǎng)基：選擇性培養(yǎng)基：BS、DHL、HE、WS、SSBS中最好，中最好，DHL、HE、WS很好，很好，SS最差最差一般一般(ybn)(ybn)要用：要用：BS和和WS/SS兩個平板，兩個平板，BS主要主要用于傷寒沙門氏菌的分離用于傷寒

18、沙門氏菌的分離第二十七頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定BS上的菌落上的菌落(jnlu)DHL上的菌落上的菌落(jnlu)SS上的菌落上的菌落(jnlu)第二十八頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定3、五項生化、五項生化(shn hu)(shn hu)試驗試驗 H H2 2S S、靛基質、靛基質(j zh)(j zh) 、 PH7.2尿素酶、尿素酶、KCN 、 賴氨酸脫羧酶賴氨酸脫羧酶 第二十九頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定（1）三糖鐵培養(yǎng)）三糖鐵培養(yǎng)(piyng)的培養(yǎng)的培養(yǎng)(piyng)典型沙門氏菌在三糖鐵培養(yǎng)上的特征：典型沙門氏菌在三糖鐵培養(yǎng)上的特征：表面（表面（-）

19、粉紅色、底層）粉紅色、底層(d cn)（+）黃色、）黃色、 H H2 2S S （+）底層有黑色、有動力。）底層有黑色、有動力。在在TSI培養(yǎng)基中培養(yǎng)基中：表面（：表面（+）黃色、）黃色、 H H2 2S S （-）的培養(yǎng)物可）的培養(yǎng)物可排除排除，其它培養(yǎng)物，其它培養(yǎng)物均有可能是沙門氏菌。均有可能是沙門氏菌。第三十頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定 （2）其余）其余(qy)四項生化實驗四項生化實驗靛基質靛基質(j zh) PH7.2尿素酶尿素酶 KCN 賴氨酸脫羧酶賴氨酸脫羧酶 反應序號：反應序號：A1、A2多見，多見，B1少見少見 第三十一頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定（3）

20、、典型沙門氏菌的五項生化反應）、典型沙門氏菌的五項生化反應(fnyng)及其檢驗的利用及其檢驗的利用 A、典型五項生化反應、典型五項生化反應(fnyng)：A1 H2S（+） 靛基質（靛基質（-） PH7.2尿素酶（尿素酶（-） KCN（-） 賴氨酸脫羧賴氨酸脫羧E（+）第三十二頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定B、利用五項生化反應鑒定沙門氏菌的最簡單、利用五項生化反應鑒定沙門氏菌的最簡單(jindn)(jindn)方案方案 a、對于、對于H2S陽性菌，利用五項生化反應試驗可判別沙門氏陽性菌，利用五項生化反應試驗可判別沙門氏菌和檸檬酸桿菌。菌和檸檬酸桿菌。b、對于、對于H2S陰性菌，查到

21、陰性菌，查到B1時即：時即：H2S（-） 靛基質（靛基質（-） PH7.2尿素尿素(nio s)酶（酶（-） KCN（-） 賴氨酸脫羧賴氨酸脫羧E（+），補做），補做ONPE試驗，可判定沙門氏菌屬和試驗，可判定沙門氏菌屬和埃希氏菌屬（埃希氏菌屬（ONPE（-）為沙門氏菌，）為沙門氏菌，ONPE（+）大腸艾）大腸艾希氏菌希氏菌第三十三頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定5、血清學試驗、血清學試驗(shyn)（最后鑒定）（最后鑒定） （1）、沙門氏菌診斷血清的種類：）、沙門氏菌診斷血清的種類： 10種組合種組合(zh)血清：主要用于傷寒和副傷寒沙門氏菌鑒定血清：主要用于傷寒和副傷寒沙門氏菌鑒定

22、 26種組合血清：常見致病菌的定群與分型種組合血清：常見致病菌的定群與分型 57種組合血清：常見定型，初步鑒定種組合血清：常見定型，初步鑒定AF群以外的菌型群以外的菌型144種組合血清種組合血清：全套裝：全套裝 第三十四頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定（2）、血清學檢驗、血清學檢驗(jinyn)(jinyn)步驟步驟 抗原準備抗原準備 AF多價血清檢驗多價血清檢驗(jinyn)（判定是否是（判定是否是沙門氏菌）沙門氏菌） 群特異性抗體血清（如群特異性抗體血清（如O2、O4、O3、O7、O8、O9、O10、O11（判定（判定O群別）群別） O單因子血單因子血清檢查清檢查 H因子血清檢查（

23、分型）因子血清檢查（分型） 報告報告 第三十五頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定五、檢驗結果五、檢驗結果(ji gu)的報告的報告1、凡血清學鑒定、凡血清學鑒定(jindng)與生化反應均符合者，與生化反應均符合者，報告發(fā)現(xiàn)沙門氏菌。報告發(fā)現(xiàn)沙門氏菌。 經(jīng)檢驗，經(jīng)檢驗，食品發(fā)現(xiàn)有沙門氏菌食品發(fā)現(xiàn)有沙門氏菌 2、凡血清學鑒定與生化反應均不符合者，、凡血清學鑒定與生化反應均不符合者，報告未發(fā)現(xiàn)沙門氏菌。報告未發(fā)現(xiàn)沙門氏菌。 第三十六頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定思考題：思考題：1、典型沙門氏菌的五項生化試驗結果如何？、典型沙門氏菌的五項生化試驗結果如何？2、沙門氏菌的形態(tài)特征，培養(yǎng)

24、特性是什么？、沙門氏菌的形態(tài)特征，培養(yǎng)特性是什么？3、沙門氏菌檢驗時為什么要進行前增菌和增菌？、沙門氏菌檢驗時為什么要進行前增菌和增菌？4、沙門氏菌有哪些抗原？各有何特點？、沙門氏菌有哪些抗原？各有何特點？O、H抗原如抗原如何表示何表示(biosh)，AF群沙門氏菌中，代表每群群沙門氏菌中，代表每群O特異特異性抗原的獨特因子是什么？性抗原的獨特因子是什么？ 第三十七頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定5、沙門氏菌哪幾個菌型具有、沙門氏菌哪幾個菌型具有Vi抗原，抗原，Vi抗原對抗原對O抗原血清抗原血清漣試驗有何影響，對含漣試驗有何影響，對含Vi抗原菌，如何做抗原菌，如何做O抗原血清學抗原血清

25、學試驗。試驗。6、沙門氏菌在、沙門氏菌在SS平板平板(pngbn)，TSI培養(yǎng)基上生長的現(xiàn)象如培養(yǎng)基上生長的現(xiàn)象如何，說明其原理。何，說明其原理。7、分離純化后怎樣選用最少的生化試驗方法初步鑒定檢驗、分離純化后怎樣選用最少的生化試驗方法初步鑒定檢驗菌是否是沙門氏菌屬的細菌。菌是否是沙門氏菌屬的細菌。8、如何進行沙門氏菌的血清學試驗。、如何進行沙門氏菌的血清學試驗。第三十八頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定第三節(jié)、志賀氏菌的檢驗第三節(jié)、志賀氏菌的檢驗(jinyn) 一、生物學特性一、生物學特性 （一）、形態(tài)與染色（一）、形態(tài)與染色 革蘭氏陰性短桿菌革蘭氏陰性短桿菌(gnjn)、無莢膜，無芽

26、胞，無鞭、無莢膜，無芽胞，無鞭毛毛 23um*0.50.7um 第三十九頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定（二）、培養(yǎng)（二）、培養(yǎng)(piyng)特性特性1、需氧或兼氧性厭氧，最適溫度、需氧或兼氧性厭氧，最適溫度37，PH7.27.42、在普通瓊脂和、在普通瓊脂和SS平板上，能形成圓形、微凸、光滑濕潤、平板上，能形成圓形、微凸、光滑濕潤、無色半透明、邊緣整齊、在中等無色半透明、邊緣整齊、在中等(zhngdng)大小的菌落大小的菌落3、宋氏志賀氏菌菌落較大，較不透明，粗糙而扁平，在、宋氏志賀氏菌菌落較大，較不透明，粗糙而扁平，在SS平板上可遲發(fā)酵乳糖，菌落呈玫瑰紅色。平板上可遲發(fā)酵乳糖，菌落

27、呈玫瑰紅色。4、在肉湯中呈均勻混濁生長，無菌膜。、在肉湯中呈均勻混濁生長，無菌膜。 第四十頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定（三）、生化（三）、生化(shn hu)反應反應1、發(fā)酵葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，除宋氏志賀氏、發(fā)酵葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，除宋氏志賀氏菌外，均不發(fā)酵乳糖。菌外，均不發(fā)酵乳糖。2、不發(fā)酵側金盞花醇、肌醇、水楊苷。、不發(fā)酵側金盞花醇、肌醇、水楊苷。3、不產(chǎn)生、不產(chǎn)生H2S，不分解尿素，不分解尿素，V-P試驗陰性，試驗陰性，不能利用不能利用(lyng)檸檬酸鹽。檸檬酸鹽。4、甲基紅陽性。、甲基紅陽性。第四十一頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定（四）、抗原（四）、抗原(kng

28、yun)結構結構1、抗原、抗原(kngyun)構成：構成：O抗原：抗原： 群特異性抗原：群特異性抗原：A、B、C、D K抗原：除抗原：除B群外，一般有群外，一般有K抗原抗原第四十二頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定2、志賀氏菌的分群、志賀氏菌的分群(fn qn)與血清與血清型型志賀氏菌分為志賀氏菌分為(fn wi)四群：四群：A群（痢疾志賀氏菌）：群（痢疾志賀氏菌）：110型型 B群（福氏志賀氏菌）：群（福氏志賀氏菌）：16型型+X、Y兩個變種，兩個變種，C群（鮑氏志賀氏菌群（鮑氏志賀氏菌 ）：）：115型型D群（宋內氏志賀氏菌）群（宋內氏志賀氏菌） ：1個型個型第四十三頁，共七十一頁。

29、-腸道致病菌的檢驗與鑒定志賀氏菌屬抗原志賀氏菌屬抗原(kngyun)(kngyun)的分類的分類菌 名 血 清 分 類 生 化 特 性 群 型 亞 型 甘露醇 鳥氨酸脫羧酶 志賀氏菌 A 1 10 - 福 氏 菌 B 16x、y變種 1a、1b、2a、2b、3a、3b3c、4a、4b + - 鮑 氏 菌 C 1 15 + - 宋內氏菌 D 1 + 第四十四頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定葡萄糖葡萄糖+乳糖(r tn)- 甘露醇甘露醇- 痢疾痢疾(l ji)(l ji)志賀氏菌志賀氏菌1 1、3 3、4 4、5 5、6 6、9 9、1010型型 痢疾痢疾(l (l ji)ji)志賀志賀氏

30、菌氏菌2 2、7 7、8 8型型 福氏福氏6型，型，鮑氏鮑氏1、2 2、3 3、4 4、5 5、6 6、8 8、1010、1212、1414型型 福氏痢疾菌（福氏痢疾菌（1、2 2、3 3、4 4、5 5型）型）鮑氏鮑氏5 5、7 7、9 9、1111、1313、1515型型靛基質靛基質- 乳糖乳糖+ 宋氏志賀宋氏志賀氏菌氏菌 靛基質靛基質- 靛基質靛基質+ 靛基質靛基質- 靛基質靛基質+ 甘露醇甘露醇+ 第四十五頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定3、屬內外抗原、屬內外抗原(kngyun)關系關系（1）群內抗原關系：）群內抗原關系： A群：群：2與與10型，具有型，具有(jyu)密切關系

31、密切關系 C群：群：1與與4和和11型，型，10與與11相關相關 B群：群抗原是群：群抗原是B群各型之間的共同抗原群各型之間的共同抗原（2）群間抗原關系：）群間抗原關系： C群群17型與型與A群群3型相關型相關 C群群18型與型與A群群11型相關型相關第四十六頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定（3）屬外抗原關系：）屬外抗原關系： 志賀氏菌與艾希氏菌屬的志賀氏菌與艾希氏菌屬的O抗原關系抗原關系非常密切，除非常密切，除A群群9型和型和D群宋氏菌與埃氏群宋氏菌與埃氏希菌的希菌的O抗原關系未見報道外，每一個型抗原關系未見報道外，每一個型都與一定都與一定(ydng)(ydng)的艾希氏菌的的艾希氏

32、菌的O抗原有關抗原有關。第四十七頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定4、K抗原對抗原對O抗原血清學試驗的影響抗原血清學試驗的影響 可可阻礙阻礙(z i)(z i)O抗原抗原的血清學凝集試驗，的血清學凝集試驗，煮沸處理即可。煮沸處理即可。 第四十八頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定（五）志賀氏菌的抵抗力（五）志賀氏菌的抵抗力志賀氏菌屬在外界(wiji)環(huán)境中的生存力，以宋內氏最強，福氏菌次之，志賀氏菌最弱。一般在潮濕土壤中能存活34天，37水中存活20天，在糞便內（室溫）存活11天。日光直接照射30分鐘，56-6010分即被殺死，對高溫和化學消毒劑很敏感，1%石炭酸中15-30分鐘即被

33、殺死，對氯霉素、磺胺類、鏈霉素敏感，但易產(chǎn)生耐藥性。第四十九頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定二、志賀氏菌的致病性與食物中毒二、志賀氏菌的致病性與食物中毒(shwzhngd)(shwzhngd)（一）流行病學（一）流行病學(li xn bn xu)第五十頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定傳染源 食物、病人食物、病人(bngrn)、糞便、蒼蠅等、糞便、蒼蠅等第五十一頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定（二）志賀氏菌的致病性（二）志賀氏菌的致病性致病因素致病因素(yn s)：侵襲力、菌體內毒素、外毒素侵襲力、菌體內毒素、外毒素第五十二頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定（二）臨

34、床（二）臨床(ln chun)癥狀癥狀A、急性細菌性痢疾：、急性細菌性痢疾： 急性典型、急性非典型、急性中毒性菌痢。急性典型、急性非典型、急性中毒性菌痢。 B、慢性、慢性(mn xng)細菌性痢疾：細菌性痢疾： 慢性遷延型、慢性隱伏型、慢性急性發(fā)作型慢性遷延型、慢性隱伏型、慢性急性發(fā)作型。第五十三頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定三、微生物檢驗三、微生物檢驗(jinyn)(jinyn) （一）檢驗（一）檢驗(jinyn)步驟（程序）步驟（程序） 檢樣檢樣樣品樣品處理處理增菌培養(yǎng)增菌培養(yǎng)SS、EMB平板分離培養(yǎng)平板分離培養(yǎng)初步生化鑒定初步生化鑒定最后血清最后血清學鑒定學鑒定報告報告第五十四

35、頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定（二）檢驗操作（二）檢驗操作(cozu)要點要點志賀氏菌在常溫中生存志賀氏菌在常溫中生存(shngcn)的時間較短，應盡的時間較短，應盡快進行試驗?？爝M行試驗。 如如24h內不能檢驗，樣品應在冰箱內內不能檢驗，樣品應在冰箱內 長時間不能檢驗，放在低溫冰箱內。長時間不能檢驗，放在低溫冰箱內。 第五十五頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定1、增菌培養(yǎng)、增菌培養(yǎng)(piyng)培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：GN增菌液增菌液在在361 68h1 68h，當培養(yǎng)液出現(xiàn)，當培養(yǎng)液出現(xiàn)輕微混濁即中止輕微混濁即中止(zhngzh)(zhngzh)培養(yǎng)。培養(yǎng)。第五十六頁，共七十一頁。

36、-腸道致病菌的檢驗與鑒定2 2、分離、分離(fnl)(fnl)培養(yǎng)培養(yǎng) 強選擇性平板：強選擇性平板：SSSS或或HEHE、WS WS 弱選擇性平板：弱選擇性平板：EMB或麥康數(shù)或麥康數(shù) 在工作中在工作中363611培養(yǎng)培養(yǎng) 1824h1824h，菌落特征菌落特征(tzhng)：無色透明，中等大小，光滑圓形菌落。無色透明，中等大小，光滑圓形菌落。第五十七頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定HE平板原理平板原理(yunl)及及反應反應 發(fā)酵乳糖(r tn)的某種腸桿菌 不發(fā)酵乳糖的某種腸道菌，而且(r qi)產(chǎn)生硫化氫，可能是沙門氏菌 不發(fā)酵乳糖的腸道菌，可能就是志賀氏菌 第五十八頁，共七十一

37、頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定SS平板原理平板原理(yunl)及反應及反應SS Agar (Salmonella Shigella Agar)大腸桿菌或者別的發(fā)酵乳糖(r tn)的腸桿菌 是沙門氏菌。有黑色中心。如果(rgu)沒有黑色中心，就很可能是志賀氏菌了第五十九頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定麥康凱瓊脂麥康凱瓊脂(qingzh)平板平板 第六十頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定EMB平板照片平板照片(zhopin)及原理及原理 第六十一頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定3、初步、初步(chb)(chb)生化鑒定生化鑒定 從平板從平板(pngbn)上挑取上挑取34個可疑菌

38、落，接種于個可疑菌落，接種于TSI和葡萄糖半固體培養(yǎng)基各一管，和葡萄糖半固體培養(yǎng)基各一管，36， 1824h，第六十二頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定三糖鐵（三糖鐵（TSI）瓊脂）瓊脂(qingzh)試驗的原理試驗的原理2志賀氏菌志賀氏菌3沙門氏菌沙門氏菌(sh mn sh jn)4大大腸桿菌腸桿菌 葡萄糖半固體葡萄糖半固體(gt)原理及結果原理及結果。 Organism Test Result 1. Pseudomonas aeruginosa（銅綠假單胞菌）：Motile 2. Staphylococcus aureus：Non-motile 3. Bacillus subtili

39、s：Motile 第六十三頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定志賀氏菌在志賀氏菌在TSI生長的結果（現(xiàn)象）：生長的結果（現(xiàn)象）：（1 1）斜面產(chǎn)堿仍為紅色）斜面產(chǎn)堿仍為紅色(hngs)(hngs)或粉紅色或粉紅色(hngs)(hngs)；（2 2）底層產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，變黃色；）底層產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，變黃色；（3 3）不產(chǎn)）不產(chǎn)H2S，不出現(xiàn)黑色。，不出現(xiàn)黑色。志賀氏菌在志賀氏菌在半固體培養(yǎng)基生長：沿線生長，無半固體培養(yǎng)基生長：沿線生長，無動力。動力。 第六十四頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定在志賀氏菌檢驗在志賀氏菌檢驗(jinyn)中可棄去的培養(yǎng)物：中可棄去的培養(yǎng)物：（1）在）在TSI表面上呈現(xiàn)蔓延生長的培養(yǎng)物表面上呈現(xiàn)蔓延生長的培養(yǎng)物（2）在）在1824h發(fā)酵乳糖發(fā)酵乳糖(r tn)、蔗糖的培養(yǎng)物、蔗糖的培養(yǎng)物（3）不分解葡萄糖，只在半固體培養(yǎng)基表面生長的培養(yǎng)）不分解葡萄糖，只在半固體培養(yǎng)基表面生長的培養(yǎng)物。物。（4）產(chǎn)氣的培養(yǎng)物）產(chǎn)氣的培養(yǎng)物（5）有動力的培養(yǎng)物）有動力的培養(yǎng)物（6）產(chǎn)）產(chǎn)H2S的培養(yǎng)物的培養(yǎng)物第六十五頁，共七十一頁。-腸道致病菌的檢驗與鑒定 4、血清學試驗和生化、血清學試驗和生化(shn hu)(shn hu)鑒定試驗鑒定試驗 （1）血清學分型：）血清學分型：凡凝為志賀氏菌，挑取三糖鐵瓊脂上的培養(yǎng)物，做玻片凝集試驗。先用先用4種志賀氏