微生物知識和環(huán)境控制要求

1、微生物知識微生物知識 &環(huán)境控制要求環(huán)境控制要求孫青2014.10.21 第一部分第一部分微生物知識微生物知識 什么是微生物？什么是微生物？l定義：微生物是定義：微生物是一切肉眼一切肉眼看不見看不見或或看不清楚的看不清楚的微小微小生物的總稱。生物的總稱。l必須借助必須借助光學顯微鏡光學顯微鏡或或電電子顯微鏡子顯微鏡放大數百倍、數放大數百倍、數千倍，甚至數萬倍才能觀千倍，甚至數萬倍才能觀察到的微小生物。察到的微小生物。微微生生物物的的分分類類具有細胞結具有細胞結構構的微生物的微生物沒有細胞結構沒有細胞結構的的微生物：病毒微生物：病毒 原核生物原核生物（由原核細胞構成的）（由原核細胞構成的） 真核

2、生物真核生物（由真核細胞構成的）（由真核細胞構成的）真菌真菌顯微藻類顯微藻類原生動物原生動物細菌細菌放線菌放線菌 細菌細菌：肺炎球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌：肺炎球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌真菌真菌：蘑菇、霉菌、酵母菌、念珠菌（濕疹）：蘑菇、霉菌、酵母菌、念珠菌（濕疹）放線菌放線菌：從放線菌中發(fā)現鏈霉素、土霉素從放線菌中發(fā)現鏈霉素、土霉素支原體支原體：肺炎支原體：肺炎支原體衣原體衣原體：沙眼：沙眼立克次體立克次體：斑疹傷寒：斑疹傷寒螺旋體螺旋體：梅毒：梅毒病毒病毒：甲、乙肝病毒，麻疹病毒，流感病毒。：甲、乙肝病毒，麻疹病毒，流感病毒。微生物微生物種類種類八大類八大類 細菌細菌：是一類：是一類細胞細而短

3、、直徑一般為細胞細而短、直徑一般為0.55.0mm，結構簡單、細胞壁堅韌，以結構簡單、細胞壁堅韌，以二分裂二分裂方式無性繁殖的原核微生方式無性繁殖的原核微生物，分布廣泛。生長最適溫度為物，分布廣泛。生長最適溫度為3035，主要去除方法有，主要去除方法有紫外殺菌法、濾膜過濾法及高溫殺滅法等。紫外殺菌法、濾膜過濾法及高溫殺滅法等。個別細菌如：個別細菌如：嗜熱脂肪芽孢桿菌嗜熱脂肪芽孢桿菌，能在，能在121條件，可耐受條件，可耐受45min。滅菌柜驗證中作為生物指示劑滅菌柜驗證中作為生物指示劑最適合生長條件為最適合生長條件為5560微生物微生物種類種類 真菌真菌：包包括單細胞與多細胞兩類括單細胞與多細

4、胞兩類，單，單細胞真菌呈圓細胞真菌呈圓形形或或卵圓形卵圓形稱為稱為酵母菌酵母菌；多細胞真菌由菌；多細胞真菌由菌絲和絲和孢子組成，孢子組成，稱稱為為絲絲狀菌或狀菌或霉菌霉菌。 真真菌生長的最適的溫度菌生長的最適的溫度為為2328，一般，一般加熱加熱6070 1小時小時即被殺死即被殺死，用一定濃，用一定濃度的度的酒精及甲醛也可殺死。酒精及甲醛也可殺死。 病毒病毒：屬非細胞型微生物，在自然界分布非常廣泛，：屬非細胞型微生物，在自然界分布非常廣泛，可在人、動物、植物、真菌和細菌中寄居并引起感染。病毒可在人、動物、植物、真菌和細菌中寄居并引起感染。病毒是是體積最小、結構最簡單體積最小、結構最簡單的微生物

5、，它僅有一種核酸（的微生物，它僅有一種核酸（DNA或或RNA）作其遺傳物質。）作其遺傳物質。微生物微生物種類種類 微生物微生物體積小、面積大體積小、面積大適應強、變異頻適應強、變異頻生長旺、繁殖快生長旺、繁殖快吸收多、轉化快吸收多、轉化快分布廣、種類多分布廣、種類多微生物五大共性微生物五大共性個體極其微小，必須借助顯微鏡放大幾倍、幾百倍、上千倍，乃至數萬倍才能看清。食譜廣泛，凡是動植物能利用的營養(yǎng)，微生物都能利用，大量的動植物不能利用的物質，甚至劇毒的物質，微生物照樣可以視為美味佳肴。二分裂是細菌最普遍、最主要的繁殖方式。能耐0196的低溫，可在250300的高溫條件下正常生長。耐藥性產生的原

6、耐藥性產生的原因。因。微生物幾乎無處不有，無孔不入，地球上有200萬生物，其中微生物有20萬種之多。微生物的營養(yǎng)微生物的營養(yǎng)營養(yǎng)營養(yǎng)元素元素碳源是構成碳源是構成細胞的重要細胞的重要物質。物質。氮是組成氮是組成蛋白質和蛋白質和核酸的重核酸的重要元素。要元素。細菌所需無機鹽細菌所需無機鹽包括磷、硫、鎂、包括磷、硫、鎂、鐵、鉀、鈉、鈣、鐵、鉀、鈉、鈣、氯、錳、鋅、鈷、氯、錳、鋅、鈷、銅等。銅等。生長因子是某些微生長因子是某些微生物生長發(fā)育所必生物生長發(fā)育所必需，而其自身又不需，而其自身又不能合成的一類營養(yǎng)能合成的一類營養(yǎng)物質。包括維生素、物質。包括維生素、嘌呤和嘧啶。嘌呤和嘧啶。水占細胞漿的水占細胞

7、漿的70%70%90%90%，是，是細胞的重要組細胞的重要組成成分。成成分。培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：人們提供微生物生長繁殖和生物合成各人們提供微生物生長繁殖和生物合成各 種代謝產物所需要的按一定比例配制的種代謝產物所需要的按一定比例配制的 多種營養(yǎng)物質的混合體多種營養(yǎng)物質的混合體。培養(yǎng)基中主要包含了微生物生長所需要的培養(yǎng)基中主要包含了微生物生長所需要的碳源、氮碳源、氮源、無機鹽及微量元素源、無機鹽及微量元素。 影響微生物生長繁殖的因素影響微生物生長繁殖的因素因素因素營養(yǎng)營養(yǎng)溫度溫度pH滲透壓滲透壓其他其他水份水份微生物存在微生物存在l水l空氣l衣服l地面l廢水l排水口l洗手池l嘴l頭發(fā)l皮膚l鼻子l腸

8、道l食物l昆蟲l動物l等等桿菌桿菌(大腸桿菌大腸桿菌)大腸桿菌大腸桿菌(帶鞭毛帶鞭毛)微生物的主要類群微生物的主要類群桿菌桿菌(碳疽碳疽)沙門氏菌沙門氏菌葡萄球菌葡萄球菌微生物的主要類群微生物的主要類群鏈球菌鏈球菌弧狀菌弧狀菌四疊球菌四疊球菌黑曲霉菌黑曲霉菌微生物的主要類群微生物的主要類群絲狀真菌絲狀真菌真菌的繁殖：分生孢子真菌的繁殖：分生孢子微生物數量 時間衰亡期衰亡期穩(wěn)定期穩(wěn)定期對對數數生生長長期期延緩期延緩期細菌能否無限繁殖下去？微生物的生長規(guī)律微生物的生長規(guī)律延滯期延滯期：細胞變大，細胞內細胞變大，細胞內RNA含量增高，含量增高，培養(yǎng)基不豐富培養(yǎng)基不豐富 時延滯期較長。時延滯期較長。對

9、數期對數期：細胞分裂最快，代謝旺盛，生長速率由營養(yǎng)成分決定。：細胞分裂最快，代謝旺盛，生長速率由營養(yǎng)成分決定。穩(wěn)定期穩(wěn)定期：總體數量保持不變，開始產生代謝產物或開始形成芽孢。：總體數量保持不變，開始產生代謝產物或開始形成芽孢。衰亡期衰亡期：由于代謝毒素的積累，死亡數超過新生數。：由于代謝毒素的積累，死亡數超過新生數。微生物的益處微生物的益處l啤酒，葡萄酒的生產l面包酵母的生產l奶酪的生產l醋的生產l酸奶的生產l維生素的生產l類固醇的生產l抗菌素、干擾素的生產l分解廢物，循環(huán)利用l幫助腸道中的食物消化l除蟲& 微生物的害處微生物的害處l導致傷口感染l導致胃腸不適l引起感冒，咳嗽l尿道感染l敗血癥

10、l癌癥l腦脊膜炎l破傷風l艾滋病許多細菌、病毒和真菌（如酵母菌）都能產生熱原。許多細菌、病毒和真菌（如酵母菌）都能產生熱原。熱原熱原：是微量即可引起恒溫動物體溫異常升高的物質的總稱：是微量即可引起恒溫動物體溫異常升高的物質的總稱 主要物質為細菌內毒素、胞壁酰二肽及其他抗原抗主要物質為細菌內毒素、胞壁酰二肽及其他抗原抗 體復合物等。（體復合物等。（家兔法進行檢查家兔法進行檢查）細菌內毒素細菌內毒素：一般指革蘭陰性細菌細胞壁的結構成分，主要一般指革蘭陰性細菌細胞壁的結構成分，主要 是脂多糖。（是脂多糖。（鱟試劑法進行檢查鱟試劑法進行檢查） 耐熱性：耐熱性：250加熱加熱30min，才可徹底破壞；，

11、才可徹底破壞； 濾過性：其體積小，約在濾過性：其體積小，約在15nm之間；之間； 具有水溶性及不揮發(fā)性，可被活性碳吸附；具有水溶性及不揮發(fā)性，可被活性碳吸附； 能被強酸、強堿及氧化劑破壞。能被強酸、強堿及氧化劑破壞。消毒、滅菌概念消毒、滅菌概念概念概念殺死所有微生物包括芽孢和繁殖體殺死病原微生物阻止或抑制微 生物生長繁殖無活的微生物1.滅菌滅菌2.消毒消毒3.防腐防腐4.無菌無菌消毒和滅菌前提條件：消毒和滅菌前提條件： 清洗干凈清洗干凈!滅菌（消毒）類型滅菌（消毒）類型溫度與時間溫度與時間殺菌范圍殺菌范圍滅菌物品滅菌物品干干熱熱滅滅菌菌火焰滅菌火焰滅菌火焰灼燒火焰灼燒 全部全部微生物微生物耐熱

12、物品、接種環(huán)、耐熱物品、接種環(huán)、試管口等試管口等熱空氣滅菌熱空氣滅菌160 2 h160 2 h玻璃器皿、金屬用具、玻璃器皿、金屬用具、等耐熱物品等耐熱物品濕濕熱熱滅滅菌菌高壓高壓蒸汽蒸汽滅菌滅菌法法121 15-30min121 15-30min培養(yǎng)基、生理鹽水、培養(yǎng)基、生理鹽水、玻璃器皿等玻璃器皿等115 15-20min115 15-20min濕熱滅菌濕熱滅菌比干熱效比干熱效果好果好水蒸汽穿透力強蒸汽凝結成水，放出潛熱，提高物體溫度菌體蛋白質吸收水分易凝固熱力滅菌熱力滅菌化學消毒化學消毒類別類別名稱名稱常用濃度常用濃度應用范圍應用范圍作用機理作用機理醇類醇類乙醇乙醇70-7570-75皮

13、膚、體溫計、器械消毒皮膚、體溫計、器械消毒脫水、蛋白質變性脫水、蛋白質變性表面活表面活性劑性劑新潔爾滅新潔爾滅0.05-10.05-1皮膚、器械消毒皮膚、器械消毒破壞細胞膜、改變破壞細胞膜、改變通透性通透性酸類酸類乳酸乳酸0.33-1mol/L0.33-1mol/L空氣消毒空氣消毒 / /氧化劑氧化劑過氧乙酸過氧乙酸0.2-0.5%0.2-0.5%（需嚴格控（需嚴格控制濃度）制濃度）塑料、玻璃、紡織原料及人造塑料、玻璃、紡織原料及人造纖維制品；也適用于食品表面纖維制品；也適用于食品表面消毒（水果、蔬菜、蛋類）和消毒（水果、蔬菜、蛋類）和環(huán)境地面消毒環(huán)境地面消毒與蛋白質活性基團與蛋白質活性基團反

14、應，酶失活反應，酶失活氯制劑氯制劑漂白粉漂白粉（次氯酸（次氯酸鈣）鈣）0.5-1.2%0.5-1.2%飲用水、廠房和用具，飲用水、廠房和用具，澄清溶液可用水果和蔬菜消毒澄清溶液可用水果和蔬菜消毒殺死細菌芽孢殺死細菌芽孢鹵素鹵素氯氣氯氣0.2-1ppm0.2-1ppm飲用水消毒飲用水消毒同上同上酚類酚類來蘇爾來蘇爾1-21-2手、皮膚消毒手、皮膚消毒同上同上3-53-5器械、地面消毒器械、地面消毒 第二部分第二部分環(huán)境控制要求環(huán)境控制要求藥品生產中微生物控制藥品生產中微生物控制l 為什么要對藥品生產進行微生為什么要對藥品生產進行微生物控制？物控制？ 微生物可以致病微生物可以致病甚至致命甚至致命。

15、特別是注。特別是注射劑的危害射劑的危害（乙肝疫苗，刺五加）（乙肝疫苗，刺五加）。l如果細菌得到了如果細菌得到了必要的養(yǎng)料、一定量必要的養(yǎng)料、一定量的水份和合適的溫度，的水份和合適的溫度，它們就能迅速它們就能迅速繁殖，它們繁殖的速度快得驚人。通繁殖，它們繁殖的速度快得驚人。通常一個細菌在僅僅常一個細菌在僅僅24小時后可產生出小時后可產生出281兆兆(百萬百萬)個個的細菌。的細菌。 主要的微生物污染源主要的微生物污染源l人員l 設備l 原輔料l 法l環(huán)人員是潔凈室中的最大污染源。人員是潔凈室中的最大污染源。人在代謝過程中會釋放和分泌污染物，人體表面、衣服能沾人在代謝過程中會釋放和分泌污染物，人體表

16、面、衣服能沾染、攜帶污染物，在潔凈室內的各種動作也會產生微粒和微染、攜帶污染物，在潔凈室內的各種動作也會產生微粒和微生物。生物。GMPGMP對人員有著嚴格的要求。對人員有著嚴格的要求。防范措施：防范措施：1.建立個人健康檔案建立個人健康檔案 新員工入廠全面體檢，直接接觸藥品的生產人員每年至少體檢一次，新員工入廠全面體檢，直接接觸藥品的生產人員每年至少體檢一次， 如發(fā)現有傳染疾病應立即隔離。如發(fā)現有傳染疾病應立即隔離。2.清潔的個人衛(wèi)生清潔的個人衛(wèi)生 勤洗澡、理發(fā)、剪指甲勤洗澡、理發(fā)、剪指甲 正確的洗手、更衣流程及防護方式正確的洗手、更衣流程及防護方式3.潔凈區(qū)內的自我約束潔凈區(qū)內的自我約束 不

17、佩帶首飾，不化妝不佩帶首飾，不化妝 進出次數應可能地少，在操作過程中應減小動作幅度進出次數應可能地少，在操作過程中應減小動作幅度 規(guī)范各類操作及避免違規(guī)行為規(guī)范各類操作及避免違規(guī)行為人員需要規(guī)范或注意的部分人員需要規(guī)范或注意的部分凈化工作服穿戴凈化工作服穿戴一次更鞋一次更鞋：阻斷外界粘在鞋底的垃圾、顆粒及微生物。相對而言，阻斷外界粘在鞋底的垃圾、顆粒及微生物。相對而言， 腳底是最臟的部分。腳底是最臟的部分。脫去外套脫去外套：阻斷外界沉降在外套上的顆粒和微生物。阻斷外界沉降在外套上的顆粒和微生物。一更洗手一更洗手：規(guī)范的洗手能消除手部皮膚的污垢和大部分的微生物。洗規(guī)范的洗手能消除手部皮膚的污垢和

18、大部分的微生物。洗 手一定要用洗手液和充足的流水。手一定要用洗手液和充足的流水。二更二更帶口罩帶口罩：阻斷鼻腔、呼吸道的微生物發(fā)散，潔凈區(qū)內不能脫下口罩。阻斷鼻腔、呼吸道的微生物發(fā)散，潔凈區(qū)內不能脫下口罩。帶發(fā)套帶發(fā)套：阻斷頭發(fā)、頭皮表面的微生物發(fā)散。保證發(fā)套完整的包裹頭發(fā)。阻斷頭發(fā)、頭皮表面的微生物發(fā)散。保證發(fā)套完整的包裹頭發(fā)。穿連體服穿連體服：阻斷體表皮膚的微生物發(fā)散。潔凈區(qū)內不能解開連體服。阻斷體表皮膚的微生物發(fā)散。潔凈區(qū)內不能解開連體服。手消毒手消毒：再次消除手部的細菌和微生物。再次消除手部的細菌和微生物。75%75%的酒精能殺滅手部的酒精能殺滅手部95%95%以上的以上的 微生物。微

19、生物。人員進入潔凈區(qū)的程序人員進入潔凈區(qū)的程序 NoYes大家來找茬大家來找茬-1頭發(fā)應完全包在帽子內36大家來找茬大家來找茬-2不能配戴手表、首飾大家來找茬大家來找茬-3定時或在任何關鍵操作前，應消毒手套填寫批記錄后，手套應消毒2022-5-3039手的衛(wèi)生手的衛(wèi)生l每只手可攜帶40萬個細菌；剛洗過的手，每平方厘米也可檢驗出3200個細菌 。l110萬個細菌/1cm2皮膚表面!l用流水（如自來水）洗手，能使手上的致病微生物減少80%；l用皂液充分洗手，再用自來水沖洗能使致病微生物減少95%。l洗手后正確使用消毒劑能使致病微生物減少到99%。洗手的重要性洗手的重要性:洗手的正確方法洗手的正確方

20、法1.用清水潤濕雙手及手腕以用清水潤濕雙手及手腕以上上10厘米厘米2.均勻涂上均勻涂上 洗手液洗手液 3.掌心相對，掌心相對， 手指并攏手指并攏 相互摩擦相互摩擦 4.手心對手背沿指縫相手心對手背沿指縫相 互摩擦交換進行互摩擦交換進行 5.掌心相對，雙手交叉，掌心相對，雙手交叉， 沿指縫相互摩擦沿指縫相互摩擦 6.彎曲各手指關節(jié)，彎曲各手指關節(jié)，在另一手掌旋轉搓在另一手掌旋轉搓擦，交換進行擦，交換進行 7.一手握另一手大拇指旋一手握另一手大拇指旋轉搓擦，交換進行轉搓擦，交換進行8.搓洗手腕，交換搓洗手腕，交換 進行。進行。 9.將手及手腕用水沖洗將手及手腕用水沖洗干凈，最后才可以用干干凈，最后

21、才可以用干凈的手將干凈的水龍頭凈的手將干凈的水龍頭關掉。關掉。10.然后在烘手然后在烘手器下吹干器下吹干洗手手的細菌對照實驗洗手手的細菌對照實驗 未洗的手未洗的手 漂洗的手漂洗的手 ( (只用清水只用清水) ) 洗凈的手洗凈的手 洗凈的手洗凈的手( (用皂液用皂液) () (用消毒劑用消毒劑) ) 設備的衛(wèi)生應從設備的設計開始，要求設備的衛(wèi)生應從設備的設計開始，要求產塵少、脫落粒產塵少、脫落粒子少、易清洗、消毒和滅菌子少、易清洗、消毒和滅菌。設備與物料的接觸面不得與物。設備與物料的接觸面不得與物料反應，不得吸附物料，設備的內表面材質要料反應，不得吸附物料，設備的內表面材質要平整、光滑平整、光滑

22、，凹凸不平的區(qū)域不僅不易清洗，而且易存留殘液等，它將成凹凸不平的區(qū)域不僅不易清洗，而且易存留殘液等，它將成為微生物繁殖滋生的場所。管道的安裝要避免批與批之間的為微生物繁殖滋生的場所。管道的安裝要避免批與批之間的交叉污染交叉污染，管道要能定期清洗消毒。，管道要能定期清洗消毒。防范措施：防范措施：建立相應的設備清潔保養(yǎng)制度及規(guī)程建立相應的設備清潔保養(yǎng)制度及規(guī)程保持一貫的清潔狀態(tài)，發(fā)現污漬、污水、殘余物等應立即清除保持一貫的清潔狀態(tài)，發(fā)現污漬、污水、殘余物等應立即清除機修人員在線維修設備時，應注意操作盡量減少對藥品產生污染機修人員在線維修設備時，應注意操作盡量減少對藥品產生污染對直接接觸藥品的設備進

23、行清潔驗證對直接接觸藥品的設備進行清潔驗證 對于物料衛(wèi)生的問題，從對于物料衛(wèi)生的問題，從供應商的審計、物料進廠后的檢供應商的審計、物料進廠后的檢驗、使用全過程驗、使用全過程，均要嚴格按照，均要嚴格按照GMP規(guī)定的衛(wèi)生要求進行。規(guī)定的衛(wèi)生要求進行。我公司物料主要包括：原輔料、接口、蓋子及工藝用水。我公司物料主要包括：原輔料、接口、蓋子及工藝用水。防范措施：防范措施：正確的原輔料的正確的原輔料的脫包、消毒、運送脫包、消毒、運送(容器容器)及投加操作及投加操作。正確的膠塞清洗流程。正確的膠塞清洗流程。對精洗殘余水、膠塞清洗水及工藝用水的定期監(jiān)測。對精洗殘余水、膠塞清洗水及工藝用水的定期監(jiān)測。原輔料使

24、用前的抽檢。原輔料使用前的抽檢。 潔凈區(qū)人員的操作是否規(guī)范，潔凈區(qū)人員的操作是否規(guī)范，影響藥品滅菌前的微生物影響藥品滅菌前的微生物負荷，最終將影響產品的無菌保證值負荷，最終將影響產品的無菌保證值(SAL)。F06D121+D121lgN0 F0 :標準滅菌時間標準滅菌時間; N0：產品滅菌前的帶菌量；：產品滅菌前的帶菌量；D121：在：在121下殺滅下殺滅90%微生物所需時間。微生物所需時間。 防范措施：防范措施：制定日常操作的規(guī)范并嚴格執(zhí)行。制定日常操作的規(guī)范并嚴格執(zhí)行。直接與藥品有接觸的操作應帶無菌手套并頻繁沖洗，操作過程中動作不宜過大。直接與藥品有接觸的操作應帶無菌手套并頻繁沖洗，操作過

25、程中動作不宜過大。加強對微生物知識的了解，增強無菌操作意識。加強對微生物知識的了解，增強無菌操作意識。 環(huán)境中的微生物種類繁多環(huán)境中的微生物種類繁多，主要有附著于塵埃上的從地面飛起的，主要有附著于塵埃上的從地面飛起的球菌屬（包括八疊球菌屬在內的好氧菌）；形成孢子的好氧性桿菌球菌屬（包括八疊球菌屬在內的好氧菌）；形成孢子的好氧性桿菌（如枯草芽孢桿菌）；青霉等霉菌的孢子等。微生物的存在嚴重影響（如枯草芽孢桿菌）；青霉等霉菌的孢子等。微生物的存在嚴重影響著藥品生產的安全，依次必須加以嚴格控制。著藥品生產的安全，依次必須加以嚴格控制。 防范措施：防范措施：1.合理的廠房布局及高效的空氣過濾系統(tǒng)合理的廠

26、房布局及高效的空氣過濾系統(tǒng)2.完善的潔凈區(qū)日常衛(wèi)生管理完善的潔凈區(qū)日常衛(wèi)生管理3.每周進行空氣消毒每周進行空氣消毒(臭氧熏蒸臭氧熏蒸)4.定期對潔凈環(huán)境進行監(jiān)測定期對潔凈環(huán)境進行監(jiān)測潔凈度測定包括： 微生物 - 浮游菌 懸浮粒子 - 沉降菌 新版新版GMP對潔凈區(qū)微生物的動態(tài)要求對潔凈區(qū)微生物的動態(tài)要求潔凈潔凈級別級別懸浮粒子最大允許數懸浮粒子最大允許數/米米3 At rest / 靜態(tài)靜態(tài)In operation / 動態(tài)動態(tài)Grade 0.5m 5.0m 0.5m 5.0mA3 520203 52020B3 52029 352 0002 900 C352 0002 9003 520 000

27、29 000D3520 00029 000不作規(guī)定不作規(guī)定Not defined我國我國-WHO潔凈級別標準潔凈級別標準級級別別b浮游菌浮游菌CFU/m3沉降碟沉降碟（ 90mm）CFU/4小時小時c接觸碟接觸碟（ 55mm）CFU/碟碟5指手套指手套CFU/手套手套A 1 1 1 1B10555C1005025D20010050無菌產品潔凈級別的確定無菌產品潔凈級別的確定lA A級級：高風險操作區(qū)，如：無菌灌裝區(qū)，滅菌后的內包裝容器暴露的高風險操作區(qū)，如：無菌灌裝區(qū)，滅菌后的內包裝容器暴露的區(qū)域及無菌裝配區(qū)域及無菌裝配/ /連接操作的區(qū)域。連接操作的區(qū)域。 通常用層流操作來維護該區(qū)的環(huán)境狀態(tài)

28、。層流系統(tǒng)在其工作區(qū)域必須通常用層流操作來維護該區(qū)的環(huán)境狀態(tài)。層流系統(tǒng)在其工作區(qū)域必須均勻送風，風速為均勻送風，風速為0.36-0.54m/s0.36-0.54m/s（指導值）。（指導值）。lB B級級：指指A A 級區(qū)所處的背景區(qū)域。級區(qū)所處的背景區(qū)域。lC C級和級和D D級級：指生產無菌產品過程中重要程度較次的輔助操作區(qū)，除指生產無菌產品過程中重要程度較次的輔助操作區(qū)，除菌前藥液的配制，容器具處理、包裝材料清洗等區(qū)域。菌前藥液的配制，容器具處理、包裝材料清洗等區(qū)域。懸浮粒子的要求：附錄懸浮粒子的要求：附錄11 第九、十條第九、十條1、A級區(qū)確認時的采樣量不少于1m32、潔凈區(qū)的動態(tài)監(jiān)測懸

29、浮粒子的動態(tài)監(jiān)測關鍵操作的全過程，對A級區(qū)進行粒子監(jiān)測A級區(qū)的監(jiān)測頻率、取樣量，及時發(fā)現人為干預、偶發(fā)事件及任何系統(tǒng)的破壞B級區(qū)：類似于A級區(qū)，采樣頻率、采樣量可以調整C級區(qū)：質量風險管理原則確定D級區(qū)：一般不作要求，（法規(guī)：必要時）（法規(guī)：必要時）對于C/D級區(qū)的自凈時間應達到規(guī)定要求控制微生物污染途徑控制微生物污染途徑環(huán)境控制環(huán)境控制控制微生物污染途徑控制微生物污染途徑環(huán)境控制環(huán)境控制微生物的要求：附錄1 第十一條監(jiān)測方法有：1.空氣浮游菌監(jiān)測沉降菌法-被動法定量空氣浮游菌采樣法-主動法2.環(huán)境表面監(jiān)測表面取樣法（如棉簽擦拭法和接觸碟法）3.人員監(jiān)測表面取樣法（接觸碟法）1.空氣浮游菌監(jiān)測

30、空氣浮游菌監(jiān)測沉降菌法沉降菌法-被動法被動法l沉降碟在空氣中的暴露時間沉降碟在空氣中的暴露時間 4小時小時l監(jiān)控整個灌裝過程監(jiān)控整個灌裝過程l只能給出定性和半定量的數據只能給出定性和半定量的數據l應結合空氣浮游菌的數據，對沉降碟的結果進行評價應結合空氣浮游菌的數據，對沉降碟的結果進行評價定量空氣浮游菌采樣法定量空氣浮游菌采樣法-主動法主動法l撞擊式，離心式和膜過濾（明膠）取樣儀撞擊式，離心式和膜過濾（明膠）取樣儀l應取一定體積的空氣（取樣體積應有代表性）應取一定體積的空氣（取樣體積應有代表性）l儀器應經過校驗儀器應經過校驗522，潔凈區(qū)的驗證和監(jiān)測2.環(huán)境表面監(jiān)測：環(huán)境表面監(jiān)測：表面取樣法表面

31、取樣法應對接觸產品表面、設備、地面、墻面等定期監(jiān)測接觸蝶法：適用于平整表面l取樣面積25cm2 l培養(yǎng)基略有凸起，高于碟子邊緣，便于取樣 l培養(yǎng)基中應含有中和劑/保護劑棉簽擦拭法：適用于不規(guī)則表面l取樣面積25cm2 l定性或定量表面樣應在無菌操作結束時取l以最大限度地降低無菌制造過程中關鍵表面污染的風險532，潔凈區(qū)的驗證和監(jiān)測3.人員監(jiān)測人員監(jiān)測表面取樣法（接觸碟法），取樣時間一般為：l工作結束，離開潔凈區(qū)前取樣l處理異常情況后（取樣后重新更衣或更換手套）l生產過程中隨時監(jiān)測特別注意：特別注意：l不得在剛消毒過后取樣不得在剛消毒過后取樣54每個手套(5只手指) 胸口處衣帽結合處帽兜額頭處靴

32、子與工作褲接口處 前臂55無菌區(qū)人員更衣無菌區(qū)人員更衣確認和監(jiān)測確認和監(jiān)測-手和操作服手和操作服環(huán)境監(jiān)控整體要求環(huán)境監(jiān)控整體要求潔潔凈凈區(qū)區(qū)監(jiān)監(jiān)測測年度潔凈級別確認年度潔凈級別確認日常環(huán)境監(jiān)測日常環(huán)境監(jiān)測動態(tài)監(jiān)測動態(tài)監(jiān)測靜態(tài)監(jiān)測靜態(tài)監(jiān)測無菌生產區(qū)無菌生產區(qū)A/B最終滅菌最終滅菌C級的級的主要功能間主要功能間C級區(qū)域級區(qū)域D級區(qū)域級區(qū)域潔潔凈凈區(qū)年度級別確認區(qū)年度級別確認測試測試項目項目空氣潔凈度測試空氣潔凈度測試靜壓差測試靜壓差測試風速或風量測試風速或風量測試換氣次數換氣次數溫度溫度相對濕度相對濕度照度照度噪聲噪聲日常環(huán)境監(jiān)測頻次日常環(huán)境監(jiān)測頻次測試項目測試項目環(huán)境級別環(huán)境級別測試頻次測試頻次

33、A級兩周一次沉降菌/浮游菌C級一個月一次D級兩個月A級/B級兩周一次懸浮粒子C級一個月一次D級兩個月A/C級每班生產結束手和操作服C級一個月一次D級三個月潔凈區(qū)監(jiān)測的位置潔凈區(qū)監(jiān)測的位置取樣位置選擇時考慮因素：l哪些部位的微生物污染最可能對產品質量造成不良影響？哪些部位的微生物污染最可能對產品質量造成不良影響？l在生產過程中，什么地點最容易長菌？在生產過程中，什么地點最容易長菌？l哪些地方是清潔、消毒或滅菌時最難覆蓋哪些地方是清潔、消毒或滅菌時最難覆蓋/接觸或最難奏接觸或最難奏效的部位？效的部位？l什么活動會導致污染的擴散？什么活動會導致污染的擴散？l在某一部位的取樣操作，足以導致測試數據的差錯或污染在某一部位的取樣操作，足以導致測試數據的差錯或污染產品？取樣只應在生產結尾換班時進行嗎？產品？取樣只應在生產結尾換班時進行嗎？應符合“GB16292-2010” “GB16294-2010”的要求基于風險的設計監(jiān)測點設置在潛在風險最大的位置