G+球菌的鑒定

1、革蘭氏陽性球菌的種類革蘭氏陽性球菌的種類v1、葡萄球菌屬 2、鏈球菌屬v3、微球菌屬 4、腸球菌屬v5、氣球菌屬 6、孿生球菌屬v7、創(chuàng)傷球菌屬 8、乏養(yǎng)球菌屬一、革蘭氏陽性球菌的基本特征一、革蘭氏陽性球菌的基本特征： 在血平板上生長，但在中國籃、麥康凱平在血平板上生長，但在中國籃、麥康凱平板上不生長，提示為革蘭氏陽性球菌。板上不生長，提示為革蘭氏陽性球菌。二、革蘭氏陽性球菌的基本鑒定試驗(yàn)二、革蘭氏陽性球菌的基本鑒定試驗(yàn)： 1.觸酶試驗(yàn)是鑒定革蘭氏陽性球菌的重要試觸酶試驗(yàn)是鑒定革蘭氏陽性球菌的重要試驗(yàn)，任何驗(yàn)，任何G+球菌必須先做觸酶試驗(yàn)，是鑒別葡球菌必須先做觸酶試驗(yàn)，是鑒別葡萄球菌與鏈球菌的

2、初步依據(jù)萄球菌與鏈球菌的初步依據(jù) 2.凝固酶試驗(yàn)是鑒定葡萄球菌的重要試驗(yàn)?zāi)堂冈囼?yàn)是鑒定葡萄球菌的重要試驗(yàn)三、作為推測(cè)性鑒定的重要試驗(yàn)三、作為推測(cè)性鑒定的重要試驗(yàn)v1、菌落特征、菌落特征v溶血：溶血：血平板上菌落周圍的溶血有助于一些血平板上菌落周圍的溶血有助于一些 細(xì)菌的初步鑒定細(xì)菌的初步鑒定v溶血溶血: 菌落周圍有一草綠色的環(huán)，疑似肺菌落周圍有一草綠色的環(huán)，疑似肺 炎鏈球菌和草綠色鏈球菌。炎鏈球菌和草綠色鏈球菌。v溶血溶血：在菌落周圍有一完全溶血環(huán)，疑似：在菌落周圍有一完全溶血環(huán)，疑似金葡菌和溶血性鏈球菌。如化膿性鏈球菌周金葡菌和溶血性鏈球菌。如化膿性鏈球菌周圍產(chǎn)生寬闊清晰的溶血環(huán)，無乳鏈球

3、菌產(chǎn)生圍產(chǎn)生寬闊清晰的溶血環(huán)，無乳鏈球菌產(chǎn)生一個(gè)狹窄的溶血環(huán)。一個(gè)狹窄的溶血環(huán)。2、鏡下形態(tài)、鏡下形態(tài)v（1）G+球菌、葡萄狀、單個(gè)或成雙排列的球菌、葡萄狀、單個(gè)或成雙排列的 疑似葡萄球菌疑似葡萄球菌v（2） G+球菌、球桿狀、鏈狀（長短不一）球菌、球桿狀、鏈狀（長短不一） 排列的疑似鏈球菌排列的疑似鏈球菌v（3） G+球菌、矛頭狀、成雙或短鏈狀排列球菌、矛頭狀、成雙或短鏈狀排列 的疑似肺炎鏈球菌的疑似肺炎鏈球菌v（4） G+球菌、成簇、四聯(lián)狀排列的疑似微球菌、成簇、四聯(lián)狀排列的疑似微 球菌屬等球菌屬等v觸酶試驗(yàn)陽性的觸酶試驗(yàn)陽性的G+球菌：球菌：葡萄球菌屬、微球菌屬葡萄球菌屬、微球菌屬、口腔

4、球菌屬、動(dòng)球菌屬、克氏考克菌屬、差異球口腔球菌屬、動(dòng)球菌屬、克氏考克菌屬、差異球菌屬等菌屬等v觸酶試驗(yàn)陰性的觸酶試驗(yàn)陰性的G+球菌：球菌：鏈球菌屬、腸球?qū)?、鏈球菌屬、腸球?qū)佟⒎Ψ︷B(yǎng)菌屬、氣球菌屬、狡詐球菌屬、費(fèi)克籃姆菌屬、養(yǎng)菌屬、氣球菌屬、狡詐球菌屬、費(fèi)克籃姆菌屬、孿生球菌屬、戈魯畢卡菌屬、創(chuàng)傷球菌屬、乳球?qū)\生球菌屬、戈魯畢卡菌屬、創(chuàng)傷球菌屬、乳球菌屬、明串珠菌屬、足球菌屬等菌屬、明串珠菌屬、足球菌屬等3、觸酶試驗(yàn)、觸酶試驗(yàn)3、觸酶試驗(yàn)、觸酶試驗(yàn)v（1）原理：具有觸酶（過氧化氫酶）的細(xì)菌，能催化過氧化氫，放出新生態(tài)氧，繼而形成分子氧，出現(xiàn)氣泡。v（2）方法：用接種環(huán)挑取固體培養(yǎng)基上的菌落置于潔

5、凈的玻片上，然后滴加3%過氧化氫溶液一滴，觀察結(jié)果。v（3）結(jié)果判斷：在5秒內(nèi)釋放大量的氣泡為陽性。4、血漿凝固酶試驗(yàn)、血漿凝固酶試驗(yàn)v（1）原理：金葡菌可產(chǎn)生兩種凝固酶。一種是結(jié)合凝固酶，結(jié)合在細(xì)胞壁上，使血漿中纖維蛋白原變成纖維蛋白附著于細(xì)菌表面上，發(fā)生凝集，用玻片法測(cè)出。另一種是菌體生成后釋放于培養(yǎng)基中的游離凝固酶，能使凝固酶原變成凝血酶類物質(zhì)，從而使血漿凝固，可用試管法測(cè)出。v（2）方法： a.玻片法：取血漿和生理鹽水各一滴分別滴到清潔玻片上，挑去待檢菌落分別與血漿及鹽水混合，如血漿中出現(xiàn)明顯凝集顆粒而鹽水中無自凝現(xiàn)象者為陽性。 b.試管法：取試管兩支，分別加入0.5ml（經(jīng)生理鹽水1

6、：4稀釋）的血漿，挑取菌落數(shù)個(gè)加入測(cè)定管充分研磨混勻，用一只陽性菌株加入對(duì)照管，37水浴3-4小時(shí)。血漿凝固者為陽性。血漿凝固酶試驗(yàn)血漿凝固酶試驗(yàn)-玻片法玻片法血漿凝固酶試驗(yàn)-試管法(3)意義v凝固酶試驗(yàn)陽性的葡萄球菌：金黃色葡萄球菌、中間葡萄球菌、施氏葡萄球菌聚集亞種、豬葡萄球菌（1189%陽性）v凝固酶試驗(yàn)陰性的葡萄球菌：表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、溶血葡萄球菌、木糖葡萄球菌、頭狀葡萄球菌、沃氏葡萄球菌等10余種。5、CAMP試驗(yàn)試驗(yàn)v原理：B群鏈球菌在血平板上能產(chǎn)生CAMP因子，可促使金葡菌 溶血素的活性，故在血平板上兩種細(xì)菌交界處溶血能力增強(qiáng)，形成箭頭狀透明溶血區(qū)。其他鏈球菌一般不產(chǎn)生

7、CAMP因子，無此現(xiàn)象。v方法：在血平板上，用金黃色葡萄球菌劃種一條橫線，再于該直線的垂直平分線處用被檢菌接種一條垂直短線，兩線相距3-5mm左右，3524小時(shí)觀察結(jié)果。v結(jié)果觀察：在被檢菌接種線與金葡接種線之間有一個(gè)箭頭形或半月形透明溶血區(qū)為陽性，可推斷為B群鏈球菌。無溶血區(qū)為陰性。v意義：作為B群鏈球菌的鑒定指標(biāo)之一6、桿菌肽敏感試驗(yàn)、桿菌肽敏感試驗(yàn)v原理：A群鏈球菌對(duì)桿菌肽非常敏感，而其他鏈球菌對(duì)桿菌肽通常耐藥，故此試驗(yàn)可鑒別A群鏈球菌。v方法：將被檢鏈球菌，密涂于血平板上，將桿菌肽紙片貼于血平板表面，3524小時(shí)觀察結(jié)果v結(jié)果判斷：在桿菌肽周圍出現(xiàn)明顯抑菌環(huán) 10mm為陽性，則被推斷為

8、A群鏈球菌 10mm為陰性，為其他群的鏈球菌。7、奧普妥辛實(shí)驗(yàn)（、奧普妥辛實(shí)驗(yàn)（OP試驗(yàn)）試驗(yàn)）v原理：Optochin（乙基氫化去甲奎寧）干擾肺炎鏈球菌葉酸的合成，可抑制其生長，其他鏈球菌如草綠色鏈球菌對(duì)其不敏感。v方法：將待檢的a溶血的鏈球菌均勻的涂布于血平板上，貼放Optochin紙片（含藥5mg)35孵育18-24小時(shí)，觀察抑菌圈的大小。v結(jié)果判斷：抑菌圈14mm為肺炎鏈球菌，無或見很窄的抑菌圈為草綠色鏈球菌。v意義；鑒別肺炎鏈球菌與草綠色鏈球菌。主要的主要的G+球菌球菌鑒別要點(diǎn)鑒別要點(diǎn)金黃色葡萄球菌鑒別要點(diǎn)金黃色葡萄球菌鑒別要點(diǎn)v1、鏡下形態(tài)：、鏡下形態(tài)： G+球菌，單個(gè)，成簇或葡球

9、菌，單個(gè)，成簇或葡萄狀排列萄狀排列v2、菌落特征：在血平板上菌落圓形凸起，、菌落特征：在血平板上菌落圓形凸起，邊緣清楚，表面光滑，金黃色或白色，周邊緣清楚，表面光滑，金黃色或白色，周圍有圍有溶血環(huán)溶血環(huán)v3、主要生化反應(yīng)：觸酶、主要生化反應(yīng)：觸酶、DNA酶和血漿凝酶和血漿凝固酶試驗(yàn)陽性，發(fā)酵甘露醇。固酶試驗(yàn)陽性，發(fā)酵甘露醇。葡萄球菌的鏡下形態(tài)葡萄球菌的鏡下形態(tài)金黃色葡萄球菌的菌落形態(tài)檢查方法檢查方法幼貓?jiān)囼?yàn)幼貓?jiān)囼?yàn)標(biāo)本標(biāo)本膿汁，血液，分泌物等膿汁，血液，分泌物等分離培養(yǎng)分離培養(yǎng)觸酶試驗(yàn)觸酶試驗(yàn)血漿凝固酶血漿凝固酶發(fā)酵甘露醇發(fā)酵甘露醇直接涂片鏡檢直接涂片鏡檢革蘭陽性葡萄球菌革蘭陽性葡萄球菌生長現(xiàn)

10、象生長現(xiàn)象色素，溶血，色素，溶血，生化反應(yīng)生化反應(yīng)腸毒素檢查腸毒素檢查臨床意義臨床意義1.1.化膿性感染：化膿性感染： （1 1）皮膚及軟組織感染）皮膚及軟組織感染 （2 2）內(nèi)臟器官感染：肺炎、關(guān)節(jié)炎、骨髓炎）內(nèi)臟器官感染：肺炎、關(guān)節(jié)炎、骨髓炎 （3 3）全身性感染）全身性感染 ：敗血癥、心內(nèi)膜炎等：敗血癥、心內(nèi)膜炎等 致病性與免疫性致病性與免疫性 （1 1）食物中毒）食物中毒 進(jìn)食含腸毒素食物后進(jìn)食含腸毒素食物后1 16h6h潛伏期，潛伏期，出現(xiàn)惡心、嘔吐、上腹痛、腹瀉等癥出現(xiàn)惡心、嘔吐、上腹痛、腹瀉等癥狀。嘔吐最為突出。大多數(shù)病人于狀。嘔吐最為突出。大多數(shù)病人于1 12d2d內(nèi)可自行恢復(fù)

11、，預(yù)后良好。內(nèi)可自行恢復(fù)，預(yù)后良好。2.毒素性疾?。憾舅匦约膊。簐（2 2）假膜性腸炎：）假膜性腸炎： 實(shí)質(zhì)為菌群失調(diào)性腸炎，多為耐藥金葡實(shí)質(zhì)為菌群失調(diào)性腸炎，多為耐藥金葡菌感染產(chǎn)生腸毒素所致。菌感染產(chǎn)生腸毒素所致。v（3 3）毒素休克綜合征）毒素休克綜合征 多見于月經(jīng)期女性，表現(xiàn)為急性高熱，多見于月經(jīng)期女性，表現(xiàn)為急性高熱，低血壓，猩紅熱樣皮疹伴脫屑，嚴(yán)重出現(xiàn)低血壓，猩紅熱樣皮疹伴脫屑，嚴(yán)重出現(xiàn)休克。休克。（4 4）燙傷樣皮膚綜合征）燙傷樣皮膚綜合征紅斑紅斑 起皺起皺 大皰大皰 脫落脫落v腐生葡萄球菌：腐生葡萄球菌：引起尿路感染、前列腺炎、引起尿路感染、前列腺炎、外傷和敗血癥外傷和敗血癥v溶

12、血性葡萄球菌：溶血性葡萄球菌：引起心內(nèi)膜炎、敗血癥、引起心內(nèi)膜炎、敗血癥、腹膜炎、尿道感染、外傷感染等。腹膜炎、尿道感染、外傷感染等。鏈球菌的鑒別要點(diǎn)鏈球菌的鑒別要點(diǎn)v1、形態(tài)：G+球菌，單個(gè)、成雙或呈鏈狀排列。v2、菌落特征：血平板上，菌落較小，灰白色，圓形凸起，周圍有不同溶血現(xiàn)象。v3、溶血現(xiàn)象：溶血溶血 溶血v4、草綠色鏈球菌的鑒定：人體上呼吸道的正常菌群，通常不致病。如果在血液和無菌體液中檢出草綠色鏈球菌，有臨床意義v4、推測(cè)性鑒定： 根據(jù)溶血及關(guān)鍵性試驗(yàn)，對(duì)鏈球菌進(jìn)行推測(cè)性鑒定分群.A群鏈球菌：溶血，桿菌肽敏感.B群鏈球菌：溶血，CAMP試驗(yàn)陽性.C群鏈球菌：溶血，CAMP試驗(yàn)陰性、

13、桿菌肽耐藥、6.5%NaCl耐鹽試驗(yàn)陰性.D群鏈球菌： 溶血， 6.5%NaCl耐鹽試驗(yàn)、膽汁七葉苷陽性，45生長鏈球菌的鏡下形態(tài)所致疾病所致疾?。? 1）化膿性感染：引起皮膚、皮下組織感染）化膿性感染：引起皮膚、皮下組織感染 丹毒、膿胞瘡、癰、淋巴管炎，敗血癥等丹毒、膿胞瘡、癰、淋巴管炎，敗血癥等 網(wǎng)狀淋巴結(jié)炎網(wǎng)狀淋巴結(jié)炎丹毒丹毒管狀淋巴管炎管狀淋巴管炎2.猩紅熱猩紅熱 (scarlet fever) 由產(chǎn)生致熱外毒素的化膿性鏈球菌由產(chǎn)生致熱外毒素的化膿性鏈球菌所致。細(xì)菌經(jīng)咽喉粘膜侵入機(jī)體，增殖所致。細(xì)菌經(jīng)咽喉粘膜侵入機(jī)體，增殖并產(chǎn)生毒素引起高熱、全身紅疹等癥狀，并產(chǎn)生毒素引起高熱、全身紅疹

14、等癥狀，病后獲得較強(qiáng)的免疫力。病后獲得較強(qiáng)的免疫力。 猩猩紅紅熱熱皮皮疹疹3.3.超敏反應(yīng)性疾?。撼舴磻?yīng)性疾?。?A.A.急性腎小球腎炎急性腎小球腎炎: : 多見于兒童和青少年，多見于兒童和青少年，大多數(shù)由大多數(shù)由A A群群M12M12型鏈球菌引起。臨床表現(xiàn)型鏈球菌引起。臨床表現(xiàn)為蛋白尿、浮腫和高血壓。為蛋白尿、浮腫和高血壓。 B.B.風(fēng)濕熱風(fēng)濕熱: :主要在咽炎后有可能發(fā)生，由主要在咽炎后有可能發(fā)生，由A A族族鏈球菌的多種型別引起。臨床表現(xiàn)以關(guān)節(jié)鏈球菌的多種型別引起。臨床表現(xiàn)以關(guān)節(jié)炎、心肌炎為主。炎、心肌炎為主。其他鏈球菌引起的疾病其他鏈球菌引起的疾病vB B群鏈球菌群鏈球菌人類呼吸道、

15、陰道、直腸正常菌群人類呼吸道、陰道、直腸正常菌群 - -新生兒：敗血癥、腦膜炎新生兒：敗血癥、腦膜炎 - -嬰幼兒：敗血癥、化膿性關(guān)節(jié)炎、肺炎嬰幼兒：敗血癥、化膿性關(guān)節(jié)炎、肺炎 - -成年人：腎盂腎炎、肺炎、子宮內(nèi)膜炎成年人：腎盂腎炎、肺炎、子宮內(nèi)膜炎v甲型溶血性鏈球菌甲型溶血性鏈球菌口腔、鼻咽腔正常菌群口腔、鼻咽腔正常菌群 - -亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎 - -齲齒齲齒vD D族鏈球菌族鏈球菌呼吸道、泌尿生殖道的正常菌群呼吸道、泌尿生殖道的正常菌群 可引起泌尿道感染、敗血癥和心內(nèi)膜炎?？梢鹈谀虻栏腥尽⊙Y和心內(nèi)膜炎。肺炎鏈球菌的菌落及菌體形態(tài)肺炎鏈球菌的鑒別肺炎鏈球菌的鑒

16、別v 1、形態(tài)：、形態(tài)：G+球菌，矛頭狀，成雙或短鏈狀球菌，矛頭狀，成雙或短鏈狀排列排列v2、菌落特征：在血平板上，菌落細(xì)小，中央、菌落特征：在血平板上，菌落細(xì)小，中央凹陷，周圍有草綠色溶血環(huán)凹陷，周圍有草綠色溶血環(huán)v3、主要生化反應(yīng)：分解菊糖，膽鹽溶菌試驗(yàn)、主要生化反應(yīng)：分解菊糖，膽鹽溶菌試驗(yàn)陽性，陽性，OP試驗(yàn)陽性試驗(yàn)陽性v4 4、肺炎鏈球菌與甲型溶血性鏈球菌菌落相似，、肺炎鏈球菌與甲型溶血性鏈球菌菌落相似，應(yīng)加以鑒別：應(yīng)加以鑒別：OPOP試驗(yàn)；試驗(yàn)；膽汁溶菌試驗(yàn)?zāi)懼芫囼?yàn)4、意義：正常存在人的口腔及鼻咽部，抵抗力降、意義：正常存在人的口腔及鼻咽部，抵抗力降低時(shí)，引起大葉性肺炎、支氣管肺炎?；撔阅X低時(shí)，引起大葉性肺炎、支氣管肺炎?；撔阅X膜炎、中耳炎、乳突炎、鼻竇炎、腦膿腫、菌血膜炎、中耳炎、乳突炎、鼻竇炎、腦膿腫、菌血癥和心內(nèi)膜炎等。癥和心內(nèi)膜炎等。腸球菌的鑒別腸球菌的鑒別v1、形態(tài)：、形態(tài)：G+球菌，單個(gè)、成雙或短鏈狀排球菌，單個(gè)、成雙或短鏈狀排列。列。v2、菌落特征：血平板上，較小、灰白色，濕、菌落特征：血平板上，較小、灰白色，濕潤，凸起、有潤，凸起、有或無溶血環(huán)的菌落?；驘o溶血環(huán)的菌落。v3、生化反應(yīng)、生化反應(yīng) 腸球菌種間鑒別腸球菌種間鑒別種名種名甘露醇甘露醇 山梨醇山梨醇