第五章經(jīng)典免疫學技術(shù)

1、 第五章第五章經(jīng)典免疫學技術(shù)經(jīng)典免疫學技術(shù) 第一節(jié)第一節(jié) 沉淀反應沉淀反應 第二節(jié)第二節(jié) 凝集反應凝集反應第三節(jié)第三節(jié) 補體參與的抗原補體參與的抗原 抗體反應抗體反應第四節(jié)第四節(jié) 中和反應中和反應 第五章第五章經(jīng)典免疫學技術(shù)經(jīng)典免疫學技術(shù) 第一節(jié)第一節(jié) 沉淀反應沉淀反應 第二節(jié)第二節(jié) 凝集反應凝集反應第三節(jié)第三節(jié) 補體參與的抗原補體參與的抗原 抗體反應抗體反應第四節(jié)第四節(jié) 中和反應中和反應 第五章第五章經(jīng)典免疫學技術(shù)經(jīng)典免疫學技術(shù) 第一節(jié)第一節(jié) 沉淀反應沉淀反應 根據(jù)抗原與抗體反應的條件及附加因素，沉淀反應可分為兩種主要形式： 1溶液中沉淀反應 2凝膠中沉淀反應 第一節(jié)第一節(jié) 沉淀反應沉淀反應

2、 根據(jù)抗原與抗體反應的條件及附加因素，沉淀反應可分為兩種主要形式： 1溶液中沉淀反應 2凝膠中沉淀反應 1 1溶液中沉淀反應溶液中沉淀反應（Precipitation reaction in solution） 是指在清徹透明的液體中，呈溶解狀態(tài)的抗原與抗體在試管內(nèi)或凹玻片上混勻，可凝聚成為肉眼可見的絮狀或顆粒狀的不溶性沉淀物。溶液中沉淀反應溶液中沉淀反應 鹽溶液抗原抗原 + + 抗體抗體 沉淀沉淀 2056、pH68 抗原：沉淀原 抗體：沉淀素1 1溶液中沉淀反應溶液中沉淀反應（Precipitation reaction in solution） （1）環(huán)狀沉淀試驗（2）免疫比濁法（3）免

3、疫沉淀技術(shù)（1 1）環(huán)狀沉淀試驗）環(huán)狀沉淀試驗環(huán)狀沉淀試驗 （ring precipitation test） 或毛細管內(nèi)沉淀反應（precipitation in capillary tube）（2 2）免疫比濁法）免疫比濁法(immunonephelomytry）可溶性的抗原、抗體在液相中特異結(jié)合，形成一定大小的抗原抗體復合物，使反應液出現(xiàn)渾濁。復合物的量與濁度成正比。 與標準品比較即可計算出樣品中的抗原或抗體含量。免免疫疫沉沉淀淀技技術(shù)術(shù)免疫共沉淀免疫共沉淀GST pull-downGST pull-down技術(shù)技術(shù) 第一節(jié)第一節(jié) 沉淀反應沉淀反應 根據(jù)抗原與抗體反應的條件及附加因素，沉

4、淀反應可分為兩種主要形式： 1溶液中沉淀反應 2凝膠中沉淀反應 2 2凝膠中沉淀反應凝膠中沉淀反應（Precipitation reaction in gel） 1968年Ouchterlong發(fā)明的。即將抗原抗體溶液放在瓊脂凝膠板上的小孔中，使它們彼此對向擴散，在抗原抗體相遇的地方形成沉淀線。2 2凝膠中沉淀反應凝膠中沉淀反應 此沉淀線的突出性質(zhì)性質(zhì)是：特異性抗原抗體不能通過；與沉淀線無關(guān)的抗原和抗體分子則可自由通過此沉淀線。2 2凝膠中沉淀反應凝膠中沉淀反應（1）單相免疫擴散試驗（2）雙相免疫擴散試驗（3）免疫電泳（4）火箭電泳試驗（5）免疫印跡技術(shù)單相免疫擴散試驗雙相免疫擴散試驗（3 3

5、）免疫電泳）免疫電泳（immunoelectrophoresis）（4 4）火箭電泳試驗）火箭電泳試驗又稱Western blotting電泳印漬及檢測（5 5）免疫印漬技術(shù)）免疫印漬技術(shù)（immunoblottingimmunoblotting）免疫印漬第一節(jié)第一節(jié) 沉淀反應沉淀反應 第二節(jié)第二節(jié) 凝集反應凝集反應第三節(jié)第三節(jié) 補體參與的抗原補體參與的抗原 抗體反應抗體反應第四節(jié)第四節(jié) 中和反應中和反應 第五章第五章經(jīng)典免疫學技術(shù)經(jīng)典免疫學技術(shù) 第二節(jié)第二節(jié) 凝集反應凝集反應 1直接凝集反應 2間接凝集反應3橋梁凝集反應 4共同凝集反應 第二節(jié)第二節(jié) 凝集反應凝集反應 1直接凝集反應 2間接

6、凝集反應3橋梁凝集反應 4共同凝集反應 1 1直接凝集反應直接凝集反應（direct agglutinationdirect agglutination） 是將細菌或紅細胞與其相應抗體結(jié)合產(chǎn)生的細菌凝集或紅細胞凝集現(xiàn)象。1 1直接凝集反應直接凝集反應（1）微生物凝集反應如診斷傷寒病的肥達氏 （Widal reaction）反應（2）同種紅細胞凝集反應 如檢查血型的血細胞凝集現(xiàn)象第二節(jié)第二節(jié) 凝集反應凝集反應 1直接凝集反應 2間接凝集反應3橋梁凝集反應 4共同凝集反應 2 2間接凝集反應間接凝集反應（indirect agglutination） 用可溶性抗原（或抗體）包被在一種與免疫無關(guān)的、

7、具一定大小的不溶性顆粒（即載體顆粒，如：乳膠顆?；蚣t細胞）的表面，然后與相應抗體（或抗原）作用，在有適宜電解質(zhì)存在的條件下，結(jié)合產(chǎn)生的凝集現(xiàn)象。2 2間接凝集反應間接凝集反應正向間接凝集反應：將抗原先吸附在載體表面，然后與相應抗體結(jié)合產(chǎn)生的凝集反應。 反向間接凝集反應：將特異性抗體先吸附在載體表面，然后與相應抗原結(jié)合產(chǎn)生的凝集反應。 既可檢測抗原，也可檢測抗體； 方法簡便、敏感。正向間接凝集反應正向間接凝集反應 此方法對檢測微量抗原具有較高的敏感性。而且由于相關(guān)病原體的抗原成分一般情況下比血清抗體出現(xiàn)早，所以可用于某些傳染病如鉤端螺旋體抗原和乙型肝炎表面抗原(HBsAg)或原發(fā)性肝癌AFP的檢

8、測等。反向間接凝集反應反向間接凝集反應第二節(jié)第二節(jié) 凝集反應凝集反應 1直接凝集反應 2間接凝集反應3橋梁凝集反應 4共同凝集反應 3 3橋梁凝集反應橋梁凝集反應 又稱Coombs抗球蛋白試驗。此試驗用于檢測不完全抗體。第二節(jié)第二節(jié) 凝集反應凝集反應 1直接凝集反應 2間接凝集反應3橋梁凝集反應 4共同凝集反應 4 4共同凝集反應共同凝集反應 又稱協(xié)同凝集反應。指由兩種顆粒成分相互作用而發(fā)生的凝集反應。 4 4共同凝集反應共同凝集反應（1）細菌抗體與攜帶蛋白A的金黃色葡萄球菌Cowan 系致敏，即通過其IgG的Fc段與蛋白A結(jié)合，再與相應細菌發(fā)生凝集反應。（2）玫瑰花結(jié)試驗：主要用于研究各種淋

9、巴細胞特性。 E花環(huán)形成示意圖 B細胞EA、EAC玫瑰花環(huán)形成示意圖 淋巴細胞的分離玫瑰花結(jié)淋巴細胞與紅細胞形成玫瑰花結(jié)的主要模式 玫瑰花結(jié)玫瑰花結(jié)的類型的類型 紅細胞的類紅細胞的類型及處理型及處理 淋巴細胞類型淋巴細胞類型 E花結(jié)花結(jié) 綿羊紅細胞 T、50%NK EA花結(jié)花結(jié) 抗體致敏的紅細胞 B、T、NK、粒細胞、單核細胞及巨噬細胞 EAC花結(jié)花結(jié) 補體致敏的紅細胞 B 第一節(jié)第一節(jié) 沉淀反應沉淀反應 第二節(jié)第二節(jié) 凝集反應凝集反應第三節(jié)第三節(jié) 補體參與的抗原補體參與的抗原 抗體反應抗體反應第四節(jié)第四節(jié) 中和反應中和反應 第五章第五章經(jīng)典免疫學技術(shù)經(jīng)典免疫學技術(shù) 第三節(jié)第三節(jié)補體參與的抗原

10、抗體反應補體參與的抗原抗體反應 1補體參與直接的抗原抗體反應 2補體參與間接的抗原抗體反應 第三節(jié)第三節(jié)補體參與的抗原抗體反應補體參與的抗原抗體反應 1補體參與直接的抗原抗體反應 2補體參與間接的抗原抗體反應 1 1補體參與直接的補體參與直接的抗原抗體反應抗原抗體反應 （1）溶血反應 （2）溶菌反應（1 1）溶血反應）溶血反應（hemolytic assay） 溶血反應常作為是否存在游離補體的指示系統(tǒng)。（1 1）溶血反應）溶血反應 1942年Rutstein和Walker根據(jù)補體能使兔抗羊紅細胞抗體致敏的羊紅細胞發(fā)生溶血的特點，建立了測定血清中總補體活性的方法（即50%溶血反應CH50 測定方

11、法）（2 2）溶菌反應）溶菌反應 溶菌反應常作為某血清中是否存在相應抗體的檢測方法。 第三節(jié)第三節(jié)補體參與的抗原抗體反應補體參與的抗原抗體反應 1補體參與直接的抗原抗體反應 2補體參與間接的抗原抗體反應 2 2補體參與間接的補體參與間接的抗原抗體反應抗原抗體反應 （1）補體結(jié)合試驗（2）被動紅細胞溶解試驗 （3）溶血空斑試驗 （1 1）補體結(jié)合試驗）補體結(jié)合試驗（complement fixation test） 1901年由Bordet和Gengou首先應用溶血反應作為指示系統(tǒng)，建立的檢測抗原抗體反應的方法。補補體體結(jié)結(jié)合合試試驗驗原原理理（2 2）被動紅細胞溶解試驗）被動紅細胞溶解試驗 即

12、吸附抗原的紅細胞在有相應抗體和補體存在時，出現(xiàn)紅細胞溶解反應。 抗原致敏紅細胞加入待測血清和補體判斷結(jié)果（陽性對照：加入相應抗體和補體） （3 3）溶血空斑試驗）溶血空斑試驗 是測定B淋巴細胞產(chǎn)生和分泌抗體功能的一種體外試驗方法。溶血空斑試驗第一節(jié)第一節(jié) 沉淀反應沉淀反應 第二節(jié)第二節(jié) 凝集反應凝集反應第三節(jié)第三節(jié) 補體參與的抗原補體參與的抗原 抗體反應抗體反應第四節(jié)第四節(jié) 中和反應中和反應 第五章第五章經(jīng)典免疫學技術(shù)經(jīng)典免疫學技術(shù) 第四節(jié)第四節(jié) 中和反應中和反應 中和反應（neutralization）： 是免疫學和病毒學中常用于檢測中和抗體是否存在及其效價的試驗，反映抗體中和病毒感染性或細

13、菌毒素的生物學效應。 中和抗體：病原微生物侵入機體后，使之產(chǎn)生能中和相應微生物及其毒性產(chǎn)物（毒素），從而使病原微生物喪失感染能力或毒力的抗體。 （中和抗體：能與病毒結(jié)合，使其失去感染力的抗體。 抗毒素：能與細菌外毒素結(jié)合，中和其毒性作用的抗體。） 中和反應的原理中和反應的原理 即將被檢血清與病原微生物混合，經(jīng)適當時間作用后，接種于宿主系統(tǒng)（包括動物、雞胚或培養(yǎng)細胞），按照對其產(chǎn)生的保護效果的差異，可判斷該微生物或毒素是否已被中和，并計算出中和的程度（中和指數(shù)），即代表中和抗體效價。 中和反應的特點：中和反應的特點： （1）檢測機體內(nèi)是否存在中和抗體以及中和抗體的效價，直接反應機體抗病毒的能力，

14、有利于臨床診斷；（2）中和抗體在體內(nèi)存留時間一般較長，可用于流行病學調(diào)查；（3）中和反應有嚴格的種、型特異性，可對分離的病毒進行準確的分類鑒定。 缺點缺點：操作麻煩，試驗時間較長。中和反應的類型：中和反應的類型： 1終點法中和反應 2蝕斑減少法中和反應 1 1終點法中和反應終點法中和反應 根據(jù)滴定被血清中和后的殘余毒力，來判斷血清中中和抗體的效價。 （1）固定病毒稀釋血清法 （2）固定血清稀釋病毒法 （1 1）固定病毒稀釋血清法）固定病毒稀釋血清法 先固定病毒的毒價，再與等量的遞進稀釋的待測血清混合，置37 1小時，每一稀釋度接種36只動物（或雞胚、培養(yǎng)細胞），接種后記錄每組動物（或雞胚）的存活數(shù)和死亡數(shù)（或培養(yǎng)細胞破壞程度），然后計算其半數(shù)保護率（PD50），即該血清的中和效價。 （2 2）固定血清稀釋病毒法）固定血清稀釋病毒法 將病毒原液作10倍遞進稀釋，分別與等量正常血清（對照組）、待測血清（試驗組）混合，置37 1小時，每一稀釋度接種3